UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID 
 

FACULTAD DE MEDICINA 
 

Departamento de Farmacología 
 

 
 
 

NUEVAS APORTACIONES AL ESTUDIO DE LOS 
CANNABINOIDES: 

1) EFECTOS VASCULARES 
2) CARACTERIZACIÓN DE NUEVOS COMPUESTOS 

 
 

MEMORIA PRESENTADA PARA OPTAR AL GRADO DE     
DOCTOR POR  

 
María Teresa Dannert Alsasua 

 
 

Bajo la dirección de las Doctoras: 
 

Ángela Alsasua del Valle 
María Isabel Martín Fontelles 

 
 

Madrid, 2004 
 
 
ISBN:  84-669-2603-8



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

        A mi Beli 

        A Julián 

        A mi Familia 

 

 

 

 

 

 

 

 



En estas páginas quisiera expresar mi agradecimiento a todas las 

personas que de una u otra manera han contribuido a la conclusión de 

esta Tesis Doctoral. 

 

En primer lugar quiero agradecer a la Dra. Angela Alsasua, 

directora de esta tesis doctoral, el haberme abierto la puerta del 

mundo de la investigación y por haber sido, no solo una gran directora, 

sino una gran amiga. Durante estos cuatro años hemos pasado buenos y 

malos momentos pero siempre contando la una con la otra. Gracias por 

haber estado siempre ahí. 

 

Quiero agradecer a la Dra. Maria Isabel Martín Fontelles por 

haber co-dirigido esta tesis doctoral, por toda la ayuda y el tiempo que 

me ha dedicado y por no perder nunca el sentido del humor. Además 

quiero agradecer a todo el equipo de la Universidad Rey Juan Carlos: 

Raquel Abalo, Carlos Goicoechea, David Pascual, Eva Maria Sánchez, 

Rocío Girón, Gema Vera, Antonio José Rivera y, en especial, a 

Esperanza Herradón y a la Dra. Visitación López-Miranda por ser el 

mejor equipo de trabajo, y a Margarita Suardíaz García por haber sido 

además de una gran compañera, una amiga, con la que siempre he 

podido contar, muchas gracias.  

 

 

 



Agradecer también a mis compañeros de la Universidad 

Complutense Maria José Borrego y Pablo Reina por haber sufrido y 

reído conmigo día tras día en el laboratorio y por las horas de 

conversaciones en las que intentamos arreglar el mundo. 

 

Al equipo de química médica del CSIC dirigido por el Dr. Elguero 

y la Dra. Pilar Goya responsables de la síntesis de nuestros productos 

LHs, a Nadine Jagerovich, Laura Hernandez, Cristina Cano y al resto 

del equipo por toda su colaboración. 

A la directora del animalario, la Dra. Pilar Bringas, y a todo el 

personal del mismo, por la labor prestada. 

A la secretaria del departamento Maria Elena Vicente, por todos 

los papeleos. 

 

A los técnicos Maria Luisa, Manolo y Fernando por su trabajo y 

por ser tan atentos siempre. 

 

Quiero agradecer a toda mi familia, a mis padres por haber 

confiado siempre en mí y por haberme querido siempre 

incondicionalmente, sin ellos nunca habría podido realizar esta tesis 

doctoral. A mis hermanos, Ana y Jorge, por haberme aguantado todo 

este tiempo y a Ana además por haberme ayudado con “Vord”, gracias 

por haberte preocupado tanto. A mis tías, Tita y Pilu, por estar ahí 

para tranquilizarme y animarme, y por mantenernos siempre unidos, y a 

mi Oma. Sois la mejor familia que se puede tener. 



 

En especial me gustaría agradecer a toda la familia Ruperez-

Arroyo, Consuelo, Maripi, Juanjo, Nena, Juanan, Seve, Yeye y Marta 

del Hierro por todo el apoyo y cariño que me han dado en estos últimos 

diez años, por haberme hecho sentir como una más de la familia, 

muchas gracias. 

 

Agradecer sobre todo a la persona que más me ha ayudado, 

querido, apoyado, que me ha hecho la persona más feliz del mundo, que 

siempre me ha animado a seguir y me ha obligado cuando ya había 

tirado la toalla, Julián, sin ti nunca habría podido llegar hasta aquí, 

gracias por todo. 

 

Quiero agradecer su apoyo a todos mis amigos, Paqui, Rafa, 

Isabel, Carlos, Arturo, Iñaki, Ricardo, Rosa, Tati y en especial a 

Carmen María Álvarez Sancho, su amistad ha sido para mí un salvavidas 

en muchas ocasiones y nunca me ha fallado. Gracia Mary. 

 

Por último querría dar las gracias a mi abuela, Beli, porque 

aunque no ha estado aquí para animarme yo sé que estaría muy 

orgullosa de esta tesis doctoral.  











-Ach: Acetilcolina 

-AEA: Anandamida 
-AMPc: Adenil monofosfato cíclico 

-ANOVA: Análisis de la varianza 

-ANUC: Animalario de la Universidad Complutense 

-ARNm: Ácido ribonucleico mensajero 

-ATP: Adenin trifosfato 

-CB1: Receptor de Cannabinoides 1 

-CB2: Receptor de Cannabinoides 2 

-CGRP: Péptido relacionado con el gen de la calcitonina 

-EEM: Error estándar de la media 

-ED50:Dosis eficaz 50 

-EDHF: Factor hiperpolarizante derivado del endotelio 

-FAAH: Amidohidrolasa de ácido grasos 

-GMPc: Guanosin monofosfato cíclico 

-HETE: ácidos hidroxi-epoxi-eicosa-tri-enoicos . 

-Hz: Herzio 

-IQM: Instituto de Química Médica 

-L-NAME: N-nitro-L-arginina metil ester 

-M: Molar 

-MAPK: protein-kinasas activadas por mitógenos  

-NAPE:N-araquidonil-fosfatidil-etanolamina 

-NKA: Neurokinina A 

-NO: Óxido Nítrico 

-PIO: Presión intraocular 

-PLC: Fosfolipasa C 

-PMSF: Fenilmetilsulfonilfluoride 

-SNC: Sistema Nervioso Central 

-SNP: Sistema Nervioso Periférico 

- VR1:Receptor vanilloide 1 

-∆9 Tetrahidrocannabinol: ∆9THC 

-2AG: 2-araquidonilglicerol 

 



  Introducción 
 

 0 

INTRODUCCIÓN 
 
1 HISTORIA 

 
El origen de la planta Cannabis sativa, cuyos componentes se 

denominan cannabinoides, se sitúa por algunos autores en el Asia Central. La 

utilización de los preparados de esta planta a lo largo de la historia ha 

presentado aspectos muy variables. 

 

El Cannabis tiene una larga historia médica que va desde su uso 

empírico y/o anecdótico en la antigüedad, hasta las prescripciones médicas del 

siglo XIX y principios del XX. En la actualidad hay una gran controversia sobre 

su utilidad clínica, y  generalmente  el uso que se hace de los derivados de la 

planta es ilícito o empleado como automedicación.  

 

Uno de los principales inconvenientes de su uso son los efectos 

psíquicos que producen y que fueron utilizados en ocasiones como 

complemento en prácticas religiosas, o simplemente para la búsqueda de 

placer. A lo largo del tiempo, los cannabinoides han pasado por etapas de uso 

generalizado, por otras de un uso más restringido o incluso por largas etapas 

de prohibición.  

 

La Cannabis sativa fue utilizada en China hace unos cinco mil años. Su 

cultivo en este pais estuvo generalmente relacionado con la obtención de fibra 

de tallos y hojas, así como del aceite de sus semillas. Existen diversos escritos, 

procedentes de aquella época, en los que se indica la relación que tuvo esta 

planta con la medicina en aquel país. En estos libros, el Cannabis era 

recomendado para tratar la malaria, el beri-beri, el estreñimiento o las 

alteraciones menstruales. Sin embargo, también se indicaba que la ingestión 

excesiva de los frutos del cañamo podía producir “visiones diabólicas”. 

 



  Introducción 
 

 1 

En la India la planta es descrita como una hierba sagrada. Es de 

destacar el grado de conocimiento que alcanzaron los hindúes sobre las 

propiedades curativas de los componentes de la Cannabis sativa. Las drogas 

derivadas del cannabis  fueron usadas como tónico general y en el tratamiento 

de calambres, convulsiones infantiles, para calmar el dolor (especialmente de 

cabeza entre los que se incluye la migraña), histeria, neuralgia, ciática, tétanos, 

fiebre, para aliviar la fatiga, actuar como diurético, reducir el delirium tremens, 

disminuir la hinchazón de los testículos o actuar como afrodisiaco. El uso del 

Cannabis se extendió desde la India a Persia y Asiria ocho siglos antes de 

Cristo, y existen evidencias de que su uso tanto médico como religioso fue 

considerable. 

 

En el antiguo Egipto, aunque algunos autores consideran que el 

Cannabis no era conocido, otros han indicado su utilización en el incienso y 

como medicina administrada por vía oral.  

 

Sin embargo, aunque tanto los griegos como los romanos cultivaron el 

cañamo por su fibra, que era utilizada para la fabricación de cuerdas y de 

velas, los textos clásicos no contienen ningún dato significativo sobre sus 

efectos farmacológicos. 

 

Al principio de la era cristiana se indican sus usos medicinales. Varios 

autores, como Plinio “el viejo” y Dioscórides, describieron su uso en sus obras, 

“Nature historiarum Libri XXXVII” y “De Materia Médica” respectivamente. 

 

En relación con el Islam, el profeta Mahoma, que había prohibido el vino, 

no dijo nada sobre los derivados de Cannabis, lo que permitió la expansión de 

su consumo en los territorios conquistados desde Persia hasta la península 

Ibérica. “Hashish”, que significa hierba en árabe, fue el nombre utilizado para 

designar al extracto resinoso de esas variedades. 

 



  Introducción 
 

 2 

En el siglo XIX aparecen los primeros datos contrastados sobre el 

Cannabis. Su uso se popularizó en Gran Bretaña por sus propiedades 

curativas. El divulgador de su aplicación terapéutica fue O’Shaughnessy que 

había residido en la India como médico del ejercito colonial inglés. Sus estudios 

facilitaron la incorporación del cañamo hindú a la farmacopea inglesa y 

posteriormente, aunque en menor extensión a la de los Estados Unidos. Los 

médicos norteamericanos imitaron a sus colegas ingleses en la prescripción de 

Cannabis en el tratamiento de diversas enfermedades como cólera, epilepsia, 

convulsiones, coreas, histeria, depresión, demencia, neuralgias, reumatismo, 

tétanos, gota, calambres menstruales y hemorragia uterina. En el “Index Merck” 

de 1896 aparecían 6 tipos de preparaciones diferentes que lo contenían. 

 

Durante las primeras décadas del siglo XX empezó a declinar el uso 

médico de las preparaciones de Cannabis. Hacia 1932 fue eliminada de la 

Farmacopea Británica y diez años después, lo fue de la de los Estados Unidos 

y posteriormente de la Farmacopea India. 

 

Esto pudo ser debido a que, al no haberse conseguido el aislamiento de 

los principales componentes, había que usar preparaciones de la planta natural 

o de sus extractos. Una de las consecuencias de la utilización de este tipo de 

preparados era el que no siempre se podían obtener resultados clínicos 

reproducibles, por la gran cantidad de compuestos presentes en la planta , su 

diferente composición química y sus diversos efectos farmacológicos, así como 

su rápido deterioro. La controversia sobre sus acciones alucinógenas había 

eclipsado sus posibles usos médicos (Evans, 1997). 

 

Desde 1971, el uso del Cannabis fue controlado por la denominada 

“Acta de drogas de abuso”, que prohibía la utilización médica tanto de la hierba 

como de sus constituyentes activos, los cannabinoides. A pesar de ello esta 

especie ha sido ampliamente estudiada hasta la actualidad y se han realizado 



  Introducción 
 

 3 

importantes avances en el conocimiento de sus compuestos activos y actividad 

farmacológica. 

 

Los compuestos químicos identificados en la Cannabis sativa son más 

de cuatrocientos. Todos ellos varían en número y en cantidad  dependiendo de 

la variedad cultivada, clima, tipo de suelo, e incluso de la forma en que se haya 

realizado su cultivo. Aproximadamente sesenta de estos compuestos, 

presentan unas características estructurales comunes y han sido identificados 

como pertenecientes al grupo de los cannabinoides. 

 

En el año 1964 fue caracterizada la estructura química del principal 

componente psicoactivo del cannabis, el ∆9 Tetrahidrocannabinol (∆9THC) por 

Mechoulam y Gaoni.  

 

Este descubrimiento abrió las puertas a la investigación científica y al 

desarrollo de derivados con capacidad terapéutica, en los que se trata de 

separar las propiedades farmacológicas de los efectos psicoactivos.  

 
Transcurrieron casi 30 años hasta la caracterización y clonación de un 

receptor cerebral para cannabinoides que se denominó CB1 (Devane y cols., 

1988). Tres años más tarde fue clonado un segundo receptor para 

cannabinoides denominado CB2, relacionado con el sistema inmune (Munro y 

cols., 1993). No se puede excluir la existencia de otros subtipos de receptores 

para cannabinoides que pudieran explicar algunos de los efectos producidos 

por estos compuestos y para los que todavía no se ha encontrado una 

explicación a nivel molecular (Pertwee, 1999). 

 

Estos dos receptores se diferencian tanto en su secuencia de 

aminoácidos como en sus mecanismos de transducción de señales y su 

distribución tisular. 

 



  Introducción 
 

 4 

La existencia de agonistas endógenos de estos receptores se demostró 

en 1992 y 1995. Estos agonistas que reciben el nombre de 

endocannabinoides son la anandamida (araquidoniletanolamida) (Devane y 

cols., 1992) y el 2-araquidonilglicerol (Mechoulam y cols., 1995; Stella y cols., 

1997). En la actualidad se conocen algunos compuestos más con estas 

características aunque estos son los mejor estudiados. 

 

La síntesis en 1994 de un antagonista para el receptor CB1, denominado 

SR 141716A, (Rinaldi-Carmona y cols.,1995) y para el CB2, denominado SR 

144825 (Rinaldi-Carmona y cols.,1998), abrió una nueva página en la 

investigación sobre estos receptores.  

 

Aunque la Cannabis sativa ha sido utilizada en el siglo XX mas por sus 

efectos psicotrópicos que los medicinales, sus derivados pueden tener un papel 

en la medicina moderna, aunque su utilidad está aun sin establecer, pero la 

evidencia que tenemos hasta el momento sugiere que tanto sus agonistas 

como sus antagonistas, podrían ser valiosos agentes terapeúticos, 

particularmente como coadyuvantes, para controlar síntomas para los cuales 

los fármacos estándar no son completamente efectivos (Ashton, 1999) 



  Introducción 
 

 5 

 
2 SISTEMA CANNABINOIDE ENDÓGENO 

 

El sistema cannabinoide endógeno está formado por ligandos endógenos 

(endocannabinoides) y receptores que median su acción biológica y que están 

acoplados a mecanismos extra e intracelulares.  

 

Los receptores de cannabinoides caracterizados hasta el momento son 

dos, CB1 y CB2, y los ligandos endógenos son: Araquidoniletanolamida 

(anandamida) y 2 araquidonilglicerol. Se han descrito otros compuestos 

endógenos de naturaleza cannabinoide: palmitoiletanolamida, noladin eter, 

homo-γ-linolenoiletanolamida, docosatetraenoiletanolamida, virodhamina, N-

araquidonil-dopamina (NADA) y oleamida (Howlett y cols., 2002; Di Marzo, 

2003).  

 

2.1 RECEPTORES 

 
2.1.1 Receptores cannabinoides 

 

Los receptores de cannabinoides más conocidos son dos, CB1 y CB2, 

aunque se postula la existencia de un posible nuevo receptor cannabinoide no 

CB1/CB2, cuya caracterización podría explicar algunos de los efectos 

producidos por estos compuestos (Zygmunt y cols., 1999; Jarai y cols., 1999; 

Bukoski y cols , 2002; Zygmunt  y cols.,2002; Ho,W-s.V y Hiley, 2003; Offertaler 

y cols., 2003). 

 

El receptor CB1 es un polipéptido de 476 aminoácidos que fué 

caracterizado farmacológicamente utilizando el cannabinoide sintético (-)-CP-

55.940. Este receptor media, entre otros, los efectos psicoactivos de los 



  Introducción 
 

 6 

cannabinoides (Devane y cols., 1988). En humanos, su gen se encuentra 

localizado en la región q14-q15 del cromosoma 6. 

 

Localización: Es un miembro de la superfamilia de receptores acoplados 

a proteínas Gi/o que se inserta en la membrana plasmática, donde se une tanto 

al ∆9THC como a los endocannabinoides (Matsuda y cols., 1990). Ha sido 

localizado en hipocampo, corteza, ganglios basales y cerebelo a muy altas 

concentraciones (Fig. 1), siendo el receptor más abundante de los acoplados a 

proteínas G en el cerebro de los mamíferos. En menor concentración, se 

encuentra en hipotálamo y médula espinal. También se expresa en sistema 

nervioso periférico, testículos, sistema inmune, glándula adrenal, médula ósea, 

corazón, vasos sanguíneos, pulmón, próstata, timo, amígdalas y bazo. (Ramos 

Atance y Fernandez Ruiz, 2000; Howlett y cols., 2002).  
 

El receptor CB1 se expresa principalmente como receptor presináptico, y 

su efecto fundamental es modificar la liberación de algunos neurotransmisores, 

como dopamina, noradrenalina, glutamato, y serotonina. (Ishac y cols., 1996; 

Khatmann y cols., 1999; Nakazi y cols., 2000; Shen y cols., 1996; Szabo y 

cols., 1999 

 
 
Fig. 1: Núcleos con mayor densidad de receptores CB1 en cerebro 



  Introducción 
 

 7 

 

El receptor CB2 es un polipéptido de 360 aminoácidos que también 

pertenece al grupo de receptores unidos a proteínas Gi/o (Munro y cols., 1993).  

 

Localización: Ha sido localizado en órganos linfoides como: bazo, timo, 

amigdalas, medula osea y páncreas, en células mieloides, macrófagos y 

monocitos de bazo, en leucocitos de sangre circulante y en una gran variedad 

de lineas de células inmunes en cultivo (células mieloides y eritroides, 

macrófagos, mastocitos y linfocitos T y B). (Pertwee, 1997,1998; Howlett y 

cols., 2002). También ha sido propuesta su presencia en microglia (Carlisle y 

cols., 2002) y corazón (Joyeux y cols., 2002; Bouchard y cols., 2003; Lepicier y 

cols., 2003). Además ha sido detectado por secuenciado molecular en células 

endoteliales aisladas de arterias pulmonares de carnero (Zoratti y cols., 2003). 

Al contrario que el receptor CB1 su activación no modifica la liberación de 

neurotransmisores. 

 

Mecanismos moleculares: La investigación biológica ha demostrado una 

serie de vías celulares a través de las cuales pueden actuar los cannabinoides 

(Fig 2).  

 

Tanto el receptor CB1 como el CB2 son receptores acoplados a proteínas 

G (Gi/o), que actúan inhibiendo al enzima adenilato ciclasa y que conducen a la 

disminución de los niveles de AMPc y las actividades celulares dependientes 

de este, como apertura de canales de potasio, y bloqueo de canales de Ca++ 

del tipo N (Mackie y Hille,1992) y P/Q (Twichel y cols., 1997; Devane y cols., 

1988). 

 

En algunos casos, se ha visto que los agonistas endógenos del receptor 

de cannabinoides estimulan la formación de AMPc posiblemente activando 

proteínas Gs (Glass y Felder,1997) 

 



  Introducción 
 

 8 

 

Recientemente se ha demostrado que los cannabinoides pueden inhibir 

también los canales de Ca++ tipo L en la musculatura lisa de arterias, lo que se 

correlaciona con el papel vasodilatador que pueden tener estos compuestos 

(Howlett y Mukhopadhyay, 2000).  

 

Los cannabinoides, tanto a través de las proteinas G, como de segundos 

mensajeros como ceramidas, pueden actuar también sobre la cascada de 

protein-kinasas activadas por mitógenos (MAPK), activada por señales 

extracelulares o por estrés y mediante este mecanismo controlar la 

supervivencia o muerte celular (Guzmán y cols., 2001).  

El receptor CB1 puede inactivarse por fosforilación. Este podría ser el 

mecanismo utilizado por las neuronas para revertir la inhibición producida por 

los cannabinoides sobre la liberación de neurotransmisores.  

Además, los cannabinoides inducen la expresión de genes tales como 

KroX-24, a través de una vía no dependiente de AMPc (Rinaldi-Carmona y 

cols.,1998) 

 
Fig.2 Mecanismos celulares de la activación de receptores cannabinoides  



  Introducción 
 

 9 

 

A pesar de que los cannabinoides median sus efectos actuando sobre 

receptores cannabinoides, también son capaces de activar receptores 

vanilloides. 

 

2.1.2 Receptores vanilloides 

 

Hasta el momento solo un receptor vanilloide ha sido clonado (VR1), 

aunque hay evidencias farmacologicas y bioquímicas de la existencia de otros 

receptores de esta familia que se denominan VRs (Szallasi y Blumberg, 1999). 

 

Localización: el receptor VR1 ha sido clonado (Caterina, 1999) y se 

encuentra principalmente en neuronas sensoriales, diversos núcleos cerebrales 

(Acs y cols., 1996; Sasamura y cols., 1998), tejidos no neuronales (como 

mastocitos), células gliales (Biró y cols., 1998) y en fibras aferentes primarias 

de pequeño diámetro.  

 

También se encuentra en el aparato cardiovascular, tanto en el corazón 

como en la adventicia de los vasos sanguíneos. Es estimulado por calor, 

protones, capsaicina y anandamida, y al activarse libera: péptido relacionado 

con el gen de la calcitonina (CGRP), sustancia P, neurokinina A (NKA) y ATP. 

Estas sustancias producen taquicardia, vasodilatación y extravasación de 

proteínas plasmáticas. 

 

Mecanismo: VR1 forma parte de una familia de receptores acoplados a 

canales iónicos y su activación puede desencadenar una serie de respuestas 

como la liberación de NO (Deutsch y cols., 1997), excitación de neuronas 

perivasculares sensoriales en la pared de los vasos que liberan CGRP. 

(Zygmunt y cols 1999; Smart y cols., 2000; Ross, 2001;Mukhopadhyay y cols., 

2002;Ralevic y cols., 2002) y efectos cardiovasculares (ver mas adelante), 



  Introducción 
 

 10 

sobre el sistema inmunológico y modulación de la sensación dolorosa (Li y 

cols., 1999).  
 

El receptor de vanilloides VR1 posee una estructura tridimensional donde 

se observan seis segmentos transmembrana completos y otro parcial, que es el 

que se supone está asociado a un canal de Ca++. En el extremo N-terminal 

existen tres zonas sensibles a la fosforilación por protein-kinasa A. 

 

La incubación prolongada con capsaicina produce un fenómeno de 

desensibilización in vitro, debido a depleción de neurotrasmisores, que consiste 

en una  pérdida de actividad de los agonistas, seguida de un prolongado 

periodo refractario. No es un proceso bioquímico sencillo, sino más bien una 

cascada de eventos que probablemente inducen cambios conformacionales en 

el receptor, lo que trae como consecuencia el cierre del canal de Ca++. Otro 

mecanismo que puede jugar un papel en la desensibilización  es la fosforilación 

de protein kinasa A. 

 

Agonistas vanilloides: La capsaicina, el ingrediente activo de la guindilla 

(Hot pepper), es el principal agonista de receptores vanilloides VR. Fue aislada 

por primera vez por Thersh en 1846, en 1919 Nelson determinó su estructura 

química, y en 1930 se consiguió su síntesis completa. En la actualidad se 

dispone de análogos sintéticos extraordinariamente potentes de capsaicina 

(Szallasi y Blumberg, 1990) y de antagonistas competitivos del receptor 

vanilloide VR1 como la capsazepina (Bevan y cols., 1991). 

 

La anandamida se comporta también como un agonista vanilloide. La  

similitud funcional entre capsaicina y anandamida para activar los receptores 

VR ha abierto un gran debate y múltiples ensayos farmacológicos para dilucidar 

esta controversia (Melck y cols., 1999; Zygmunt y cols., 1999; Smart y cols., 

2000); Ross, 2003). 

 



  Introducción 
 

 11 

Este receptor es también activado por otros vanilloides, por R(+)-

metanandamida y otros compuestos cannabinoides. También se ha sugerido 

que uno de los productos de la degradación de anandamida, el ácido 

araquidónico, al ser metabolizado por la enzima lipooxigenasa da lugar a 

metabolitos como el 12-hidroxi-peroxi-eicosa-tetra-enoicos (12-HPETE) que 

podrían activar el receptor VR1(Di Marzo, 2001; Ralevic y cols.,2002; Szallasi, 

2002). 

 

Antagonistas vanilloides: La capsazepina es el más conocido antagonista 

competitivo del receptor VR1. Su uso está limitado por su potencia moderada, 

ya que a concentraciones micromolares (las necesarias para inhibir las 

respuestas de capsaicina) también bloquea canales de Ca++ y receptores 

nicotínicos (Liu y Simon, 1997). 

 

El antagonista SR141716A, a concentraciones superiores a 10 µM, de 

una manera inespecífica, inhibe la respuesta vasodilatadora a capsaicina 

mediada por VR1 (Zygmunt y cols 1999; Hillard, 2000; Smart y cols., 2000; 

Malinowska y cols., 2001; Ralevic y cols., 2002; Ross, 2003).  

 

Algunos estudios sugieren que existen receptores VR insensibles a 

capsazepina (Liu y cols., 1998), y otros sugieren la existencia de un receptor de 

naturaleza vanilloide, sensible a capsazepina y a SR141716A, que sería 

activado tanto por capsaicina como por los cannabinoides Win55,212-2 y  

CP 55940. (Pertwee, 2003). 



  Introducción 
 

 12 

 

2.1.3 Cannabinoides endógenos 

 
Los ligandos endógenos más conocidos y estudiados hasta el momento 

son: anandamida (AEA) y 2-araquidonilglicerol (2-AG). Son sintetizados, 

liberados, recaptados y degradados en las células nerviosas, lo que confirma 

su posible función como neuromoduladores y producen efectos farmacológicos 

similares a los del ∆9THC pero con una duración de acción mucho más corta. 

 

En 1992 se caracterizó, a partir de cerebro de cerdo, la 

araquidoniletanolamida, que se denominó anandamida. Este compuesto está 

formado por ácido araquidónico unido por un enlace amida a etanolamina 

(Devane y cols., 1992).El estimulo fisiológico para la producción y liberación de 

anandamida no está del todo establecido. 

 

Ha sido identificada en cerebro y en tejidos periféricos humanos y de rata. 

En ambas especies se ha detectado en hipocampo, estriado y cerebelo, 

regiones ricas en receptores CB1, así como en tálamo, donde la expresión de 

este receptor es mucho más baja. Cantidades importantes de anandamida 

también se han localizado en el bazo, donde hay altos niveles de receptores 

CB2. Hay pequeñas cantidades en corazón humano y aparecen trazas en 

suero, plasma y líquido cefalorraquídeo humanos. Produce una serie de 

efectos fisiológicos, tanto centrales como periféricos, por su efecto agonista 

parcial de receptores CB1 aunque también tiene afinidad por el receptor CB2 

(Lake y cols., 1997). 

 

El 2-AG, está formado por ácido araquidónico unido por un enlace ester a 

glicerol. Inicialmente fue aislado en intestino de perro y posteriormente en bazo 

y páncreas, lo que hizo pensar que se trataba de un ligando periférico 

(Mechoulam y cols., 1995; Martin y cols., 1999). Más tarde fue identificado en 

cerebro (Sugiura y cols., 1995), donde se encuentra a las máximas 



  Introducción 
 

 13 

concentraciones en tronco cerebral, estriado e hipocampo y las más bajas en 

corteza, diencéfalo y cerebelo (Bisogno y cols., 1999). El 2-AG tiene efecto 

hipotensor que no es mediado por receptores CB1. Este efecto es atenuado 

por los inhibidores de la ciclooxigenasa, indicando que puede ser mediado por 

ácido araquidónico u otros metabolitos (Jarai y cols., 2000).También está 

implicado en diversos procesos fisiopatológicos como activación de la 

agregación plaquetaria (Macarrone y cols., 2003). 



  Introducción 
 

 14 

2.1.4 Síntesis, liberación recaptación y degradación de anandamida 

 

 

Fig. 3 Esquema de la síntesis, recaptación y degradación de la Anandamida (1) 

Hidrólisis de NAPE por la PLD (2) Síntesis de AEA por una N-aciltransferasa. (3) 

Interacción con el receptor CB (4) Recaptación por el transportador de Anandamida 

(AT) (5) Degradación por la amidohidrolasa de ácidos grasos (FAAH) (Piomelli y cols., 

2000). 

 



  Introducción 
 

 15 

Síntesis: La anandamida se sintetiza y libera en la neurona por un 

mecanismo Ca++-dependiente. La síntesis de anandamida se produce mediante 

la hidrólisis de un precursor fosfolipídico presente en la membrana celular, la N-

acil-fosfatidiletanolamina (NAPE), por efecto del enzima fosfolipasa D que 

libera ácido fosfatídico y los correspondientes tipos de N-aciletanolaminas, una 

de las cuales es la anandamida (Fig.3). La síntesis de anandamida se produce 

a demanda en el organismo, es decir, que al contrario de los neurotransmisores 

clásicos que se almacenan en vesículas, la anandamida es sintetizada “en el 

momento” en el que se va a liberar. 

 

Almacenamiento: Los endocannabinoides no se almacenan en el interior 

de vesículas como ocurre con los neurotrasmisores clásicos, probablemente 

por su naturaleza hidrófoba. Su almacenamiento se produce en forma de un 

precursor (fosfolípido de membrana) que es acilado e hidrolizado 

posteriormente y se sintetiza cuando su acción es necesaria. 

 

Los endocannabinoides podrían ser otro tipo de intermediario metabólico 

lipídico, que, como los eicosanoides y el factor activador de plaquetas, se 

sintetizan por la hidrólisis de un fosfolípido, actuando cerca del sitio de 

producción, donde también se degradan rápidamente. Su solubilidad en lípidos 

les permitiría difundir libremente a través de las membranas y actuar como 

moduladores de diversas actividades biológicas. 

 

Liberación: La anandamida podría ser liberada al espacio intersináptico, 

por un mecanismo de difusión facilitada bidireccional, realizada a favor de un 

gradiente de concentración (Hillard y cols., 1997). 

 

Recaptación: La anandamida es recaptada de forma selectiva tanto por 

neuronas como por células gliales, donde es degradada a etanolamina y el 

correspondiente ácido graso (acido araquidónico). Existe una gran controversia 



  Introducción 
 

 16 

sobre si este proceso de recaptación es mediado por un transportador 

específico o no. (Beltramo y cols., 1997; Glaser y cols., 2003).  

 

La existencia del transportador ha sido y sigue siendo cuestionada por 

numerosos autores, puesto que aún no ha sido clonado ni ha sido aislada su 

proteína constituyente, por lo que no se puede asegurar que este transportador 

exista (Glasser y cols., 2003). 

 

Este mecanismo de recaptación es rápido, temperatura-dependiente, 

saturable y con selectividad por el sustrato. Incluso se han sintetizado 

sustancias con posible efecto inhibidor de la recaptación en neuronas y 

astrocitos como un derivado fenólico, N(4-hidroxifenil)araquidonamida  

(AM404), que inhibiría la recaptación de anandamida, lo que hace pensar en la 

existencia de un transportador específico. 

 

Metabolismo: La anandamida es metabolizada muy rápidamente por lo 

que la duración de su efecto es muy corta. La utilización de inhibidores de su 

degradación puede prolongar la duración de su efecto farmacológico.  

 
Fig.4. Principales rutas metabólicas de anandamida (Watanabe y cols., 2003) 



  Introducción 
 

 17 

 

 

 

La anandamida se metaboliza por tres mecanismos principales: 

 

1) Hidrólisis producida por la amidohidrolasa de ácidos grasos 

(FAAH) que transforma la anandamida en ácido araquidónico (AA) y 

etanolamina (Fig.4) y además cataliza el proceso inverso transformando el 

AA+etanolamina en anandamida. La FAAH ha sido purificada, clonada y 

secuenciada (Cravatt y cols., 1996). 

 

Esta enzima actúa también sobre análogos de anandamida como 2AG, 

palmitoiletanolamida y oleamida y sobre la R(+)-metanandamida (Lang y cols., 

1999; Fowler y cols., 2001), aunque la afinidad del enzima FAAH por R(+)-

metanandamida es menor que la de anandamida (Lang y cols., 1999). 

  

El ácido araquidónico resultante de esta reacción, puede ser 

metabolizado por la COX a PGs. 

 

2) Citocromo P450 (CYP450): La anandamida puede ser oxidada en el 

hígado por el CYP450 3A transformándose en unos veinte metabolitos activos. 

Además el CYP450 es capaz de metabolizar el ácido araquidónico formado por 

la FAAH al hidrolizar la anandamida, dando lugar a un gran número de 

compuestos como los ácidos hidroxi-epoxi-eicosa-tri-enoicos (HETE) 

(Bornheim y cols., 1995). 

 

3) Oxidación por Ciclooxigenasa 2 (COX2): Recientemente se ha 

demostrado que la anandamida puede ser sustrato de la COX2 que la 

transforma en prostaglandina E2-etanolamida y D2-etanolamida (Kozak y cols., 

2002; Ross y cols., 2002). Estos productos han sido denominados 

“prostamidas” (Chen y cols., 2001). La prostamidaE2 tiene un perfil de acción 



  Introducción 
 

 18 

parecido a la PGE2 ya que se une a los cuatro receptores EP solo que de 

manera menos potente, no se une al receptor CB1 y se une al CB2 con muy 

baja afinidad (Ross y cols., 2002). 

 

Mas interesante es el hecho de que el 2AG puede ser transformado por 

acción de la COX2 en PGH2-G, compuesto inestable, que sería transformado 

en diferentes PGs (F2alfa, E2, I2 D2) y tromboxanos, siguiendo la cascada de la 

síntesis de PGs. (Kozak y cols., 2002). 

 

4) Lipooxigenasa (LOX): La lipooxigenasa puede actuar directamente 

sobre la anandamida produciendo 5/11/12/15-H(P)-anandamida (Watanabe y 

cols., 2003): Asimismo puede metabolizar el ácido araquidónico producto de la 

hidrólisis de anandamida. 



  Introducción 
 

 19 

3 TERMINOLOGÍA Y CLASIFICACIÓN DE LOS 
CANNABINOIDES 

Los cannabinoides son un grupo de sustancias con estructuras químicas 

diferentes que tienen en común sus efectos sobre alguno de los elementos 

constituyentes del sistema endocannabinoide. 

Cannabinoides vegetales (derivados de la Cannabis Sativa):  

delta9-tetrahidrocannabinol 

cannabidiol 

cannabinol 

Cannabinoides sintéticos:  

análogos de los cannabinoides clásicos: CP55,940 y HU-210 

análogos de la pravadolina (aminoalquilindoles): WIN-55,212-2 

agonistas selectivos CB1: ACEA y ACPA 

agonistas selectivos CB2: HU-308 y JWH-133 

Cannabinoides endógenos (eicosanoides):  

Araquidoniletanolamida (anandamida) 

2-araquidonilglicerol 

Antagonistas de los receptores de cannabinoides:  

SR141716, LY320135 y AM251 (antagonistas selectivos del receptor CB1) 

SR144528 (antagonista selectivo del receptor CB2) 

Inhibidores del proceso de terminación de la actividad biológica de los 
endocannabinoides:  

inhibidores de la recaptación: AM404 y VDM11 

inhibidores de la degradación (actividad FAAH): PMSF y AM374 

 
Tabla 1.Clasificación de compuestos activos sobre el sistema endocannabinoide 

 

El conocimiento de las relaciones existentes entre la estructura y la 

actividad de los cannabinoides ha permitido el diseño de análogos sintéticos 

que han sido de gran utilidad en el estudio farmacológico y fisiológico de estos 

compuestos. 
 
 
 
 



  Introducción 
 

 20 

 
3.1 AGONISTAS CANNABINOIDES  

 
En cuanto a su estructura química hay cuatro grupos principales de 

agonistas cannabinoides: 

 

3.1.1 Clásicos:  

Este grupo de cannabinoides lo forman derivados de dibenzopiranos 

ABC-triciclicos , los cuales son compuestos obtenidos de la planta Cannabis 

sativa, productos procedentes de su biotransformación, o derivados sintéticos 

de los mismos. Todos estos compuestos tienen actividad cannabimimética 

tanto in vivo como in vitro ( Howlett y cols., 2002). 

 
 
Fig.5: Estructura química de cannabinoides clásicos 



  Introducción 
 

 21 

El ∆9 Tetrahidrocannabinol (∆9THC) es el principal componente 

psicoactivo del Cannabis, cuya estructura química fue caracterizada en el año 

1964, por  Mechoulam y Gaoni. Este compuesto tiene una afinidad semejante 

por los dos receptores de cannabinoides CB1 y CB2. 

 

Los compuestos ∆8 Tetrahidrocannabinol (∆8THC), Cannabinol y 

Cannabidiol son también  componentes psicoactivos del Cannabis, mientras 

que HU-210 ( y su enantiómero (+) HU-211) y Desacetil-L-nantradol son 

cannabinoides sintéticos. 

 

La afinidad del ∆8THC por los receptores cannabinoides es muy parecida 

a la del ∆9THC, mientras que su análogo sintético HU-210 tiene una afinidad y 

una actividad intrínseca mucho más alta que el ∆9THC Por lo tanto se trata de 

un agonista particularmente potente de los receptores cannabinoides y además 

sus efectos “in vivo” son especialmente duraderos. 

 

3.1.2 No clásicos:  

El representante principal de este grupo es el (-)-CP-55,940, que permitió 

el descubrimiento y la caracterización del receptor de cannabinoides CB1 

(Devane y cols., 1988). El CP55,940 es un compuesto con una afinidad similar 

por los dos subtipos de receptores de cannabinoides, menos lipófilo y de 10 a 

50 veces mas potente in vivo que el ∆9THC. 

 

 
Fig. 6: Estructura química de CP55940 



  Introducción 
 

 22 

 

 

3.1.3 Aminoalquilindoles: 
 

Esta nueva familia de compuestos con actividad cannabimimética fue 

descubierta por los investigadores de Sterling Winthrop al desarrollar análogos 

estructurales de pravadolina. El compuesto mas estudiado de esta familia es el 

R-(+)-Win 55,212-2. El cual tiene una afinidad ligeramente superior por el 

receptor CB2. In vivo produce los mismos efectos farmacológicos que el 

∆9THC.  

 

 

 
Fig.7: Estructura química de R-(+)-Win 55,212-2 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



  Introducción 
 

 23 

 

3.1.4 Eicosanoides:  
 

Son derivados de ácidos grasos, cuyo representante principal es el 

endocannabinoide Anandamida. La R(+)-metanandamida es un análogo 

sintético de la anandamida resistente  a la degradación enzimática. Estos dos 

compuestos son agonistas de receptores CB1, CB2 y VR1. El 2 

araquidonilglicerol se comporta como agonista de receptores, CB1 y CB2.  

 
 

Fig.8: Estructura química de anandamida, R(+)-metanandamida y 2-araquidonil 

glicerol 



  Introducción 
 

 24 

 

3.2 ANTAGONISTAS CANNABINOIDES  

 
3.2.1 Diarilpirazoles: 

 

Los representantes más característicos de este grupo son los compuestos 

de Sanofi Research: SR141716A, un potente antagonista del receptor CB1, y 

SR144528, un potente antagonista del receptor CB2.  

 

 
Fig.9: Estructura química de SR141716A y SR144528 

 

Pueden comportarse como agonistas inversos cuando se administran en 

ausencia de agonistas, (Bouaboula y cols., 1998; Portier y cols., 1998; Rhee 

and Kim, 2002).y SR144528 autoactiva receptores CB2 e inhibe la actividad de 

proteínas Gi (Bouaboula y cols., 1998).  

 

En cuanto a su especificidad, esta es dosis-dependiente: el SR141716A a 

altas concentraciones es capaz de bloquear el receptor de vanilloides VR1 

(Zygmunt.y cols., 1999; Bouaboula y cols., 1998; Portier y cols., 1998; Rhee y 

Kim, 2002), activar directamente canales de K+ e inhibir de manera no selectiva 

la movilización de Ca++ en arteriolas cerebrales de conejo (Ellis y cols., 1995). 

Existen otros antagonistas del receptor CB1 como AM251, que también se 

comporta como un agonista inverso cuando se administra solo. (Izzo y cols., 

2000). 



  Introducción 
 

 25 

 
Fig.10: Estructura química de AM251 

 

 

3.3 INHIBIDORES DE RECAPTACIÓN Y DEGRADACIÓN DE 

ENDOCANNABINOIDES 

 

• Inhibidor del transportador de anandamida: Es el compuesto N(4-

hidroxifenil)araquidonamida (AM 404) que bloquea la entrada de anandamida a 

la célula aumentando la concentración en el espacio intersináptico. Además de 

este efecto es capaz de bloquear el receptor de vanilloides VR1. 

 
Fig.11: Estructura química de AM404 

 

• Inhibidores de la degradación de anandamida: 

 

I. Inhibidores de la FAAH: como el compuesto fenil-metil-sulfonil-fluoruro 

(PMSF) o los antiinflamatorios no esteroideos como ibuprofeno, aspirina 

e indometacina. Estos compuestos inhibirían la rápida degradación de la 

anandamida en el interior de la célula (Compton y Martin, 1997) y 

podrían emplearse en terapéutica para potenciar los efectos de los 

cannabinoides endógenos. 

 



  Introducción 
 

 26 

II. Inhibidores de CYP450: Se utilizan como herramientas farmacológicas 

para el estudio del metabolismo de los endocannabinoides. Los más 

utilizados son: 17-ODYA (inhibidor de CYP450 epooxigenasa y CYP450 

ω/ ω-1- hidroxilasa responsables de la producción de ácidos          

19/20-HETEs y 5,6/8,9/11,12/14,15-epoxi-eicosa-tri-enoicos 

(5,6/8,9/11,12/14,15-EET) y miconazol (Zygmunt y cols., 1996; Ishioka y 

Bukoski, 1999; Watanabe y cols., 2003). 

 

III. Inhibidores de la COX2: Los inhibidores de la ciclooxigenana 2 

(rofecoxib, celecoxib) inhiben la COX2 de manera específica, mientras 

que los antiinflamatorios no esteroideos como ibuprofeno, aspirina e 

indometacina producen una inhibición inespecífica de ambas 

ciclooxigenasas. Al ser también inhibidores de la FAAH, serían de gran 

utilidad en el tratamiento del dolor. (Fowler y cols., 2001). 



  Introducción 
 

 27 

 

4 EFECTOS DE LOS CANNABINOIDES 
 

4.1 EFECTOS FISIOLÓGICOS Y FARMACOLÓGICOS 

 
Las bases moleculares de los efectos fisiológicos de cannabinoides 

endógenos y exógenos han comenzando a conocerse recientemente. En el 

SNC, los endocannabinoides participan en la regulación de la sensación 

dolorosa (cerebro y médula espinal), actividad motora, aprendizaje y memoria, 

y desempeñan un papel notable durante el desarrollo cerebral. Además están 

implicados en la regulación del vómito, apoptosis neuronal y neuroprotección. 

Periféricamente disminuyen la presión intraocular y regulan la ingesta de 

comida.  

 

Los dos mecanismos más estudiados son la interacción con sus 

receptores y la modulación de otros sistemas neurotransmisores. Pueden 

regular sistemas dopaminérgicos, serotoninérgicos y noradrenérgicos, 

relacionados con el control de la actividad motora, la secreción de hormonas 

adenohipofisarias y mecanismos de recompensa cerebral. También 

interaccionan con aminoácidos neurotransmisores, relacionados tanto con el 

control de la actividad motora y de la secreción de hormonas adenohipofisarias 

(GABA), como con la memoria y el aprendizaje (GABA y glutamato).Su 

interacción con el sistema opioide, contribuye al control de la nocicepción y ha 

sido ampliamente estudiado. 

 

4.1.1 Sensación dolorosa 

 
Probablemente, una de las funciones del sistema cannabinoide endógeno 

sea la de modular la transmisión dolorosa por disminución de la respuesta 

sensorial de las neuronas en el tracto espinotalámico (Martin y cols., 1996; 



  Introducción 
 

 28 

Monhenius y cols., 2001). Asismismo suprimen la hiperexcitabilidad neuronal, 

hiperalgesia y alodinia a través de receptores CB1 y CB2. 

 

En modelos experimentales los cannabinoides son analgésicos tanto en 

dolores agudos inflamatorios como neuropáticos (Campbell y cols., 2001). 

 

Se postulan 4 mecanismos de acción mediante los cuales los 

cannabinoides producen su efecto antinociceptivo:  
 

1) Efectos mediados a través de receptores cannabinoides:  

 

a) CB1: Se ha demostrado que la administración a ratones del antagonista 

cannabinoide SR 141716A produce hiperalgesia, lo que sugiere la existencia 

de un tono cannabinoide basal, cuya inhibición sería la responsable de esta 

hiperalgesia. (Richardson y cols., 1998). 

 

b) CB2: La estimulación de estos receptores inhibe las respuestas 

dolorosas. (Malan y cols., 2002; Clayton y cols., 2002) por lo que el uso de 

agonistas CB2 puede ser una posibilidad para el tratamiento de dolores tanto 

agudos como crónicos sin efectos psicoactivos. Esto sería especialmente 

relevante para el tratamiento de dolores neuropáticos (Malan y cols., 2003)   

 

2) Efectos mediados a través de receptores vanilloides VR1. Los 

receptores vanilloides están involucrados en dolores agudos y crónicos tanto a 

nivel espinal como periférico. Hay evidencia de interacción entre receptores 

CB1 y VR1. 

 

3)  Por interacción con el sistema opioide. El ∆9-THC libera dinorfina A 

y Leu-ENK e interacciona con canales de K+ liberando endorfinas. (Mason y 

cols 1999).Además, los cannabinoides actuan sobre receptores k opioides, ya 

que tanto la naloxona como la norbinaltorfimina, (antagonista opioide kappa) 



  Introducción 
 

 29 

bloquean la antinocicepción producida por  ∆9-THC de forma dosis-dependiente 

(Smith y cols., 1994 ).  

 

4) Modulando la liberación y actividad de neurotrasmisores especialmente 

noradrenérgicos y glutamatérgicos, alterando la percepción del estímulo 

doloroso ( Litchtman y Martin, 1991; Pertwee, 2001).  

 

4.1.2 Actividad locomotora 

 

La alta densidad de receptores CB1 en los ganglios basales y cerebelo, y 

la presencia en grandes cantidades de anandamida y 2-araquidonilglicerol, 

sugieren un papel importante del sistema endocannabinoide en el control de los 

movimientos voluntarios y por tanto en los trastornos motores. 

 

Los receptores CB1 se localizan presinápticamente en neuronas estriadas, 

subtalámiconigrales, cerebelo y corteza cerebral. Los endocannabinoides 

modulan la liberación y recaptación de GABA y glutamato (Maneuf y cols., 

1996; Romero y cols., 1998; Szabo y cols., 2000) y producen efectos indirectos 

sobre dopamina, afectando sobre todo a la síntesis de este neurotransmisor 

(Romero y cols., 1995). 

 

4.1.3 Emesis 

 
Controlan el vómito actuando sobre receptores CB1 localizados en el 

centro del vómito del tronco cerebral en el SNC, y en las terminaciones 

nerviosas de los plexos mientérico y submucoso del estómago, duodeno y 

colon, disminuyendo la motilidad por bloqueo de la liberación de acetilcolina en 

esas áreas (Croxford, 2003; DiCarlo e Izzo, 2003). 

 

 



  Introducción 
 

 30 

4.1.4 Proliferación celular 

 

Tanto la anandamida como el 2-araquidonilglicerol ejercen acciones 

antiproliferativas en cultivos celulares de células tumorales (Guzman, y cols 

2002).Modulan varias vías de crecimiento celular como protein-kinasas 

activadas por agentes mitógenos y las kinasas activadas por estrés, que tienen 

un papel importante en el control del crecimiento celular y su diferenciación. En 

células de glioma C6 los cannabinoides producen apoptosis a través de los dos 

tipos de receptores cannabinoides. El efecto parece estar mediado en parte por 

ceramidas, con implicación especial del receptor CB2 de cannabinoides y del 

receptor vanilloide VR1. (Williamson y Evans, 2000).  

 

4.1.5 Efectos neuroprotectores 
 

Los agonistas cannabinoides son capaces de reducir la excitotoxicidad 

tanto in vitro como in vivo, siendo por tanto, potenciales agentes 

neuroprotectores. La capacidad de los cannabinoides de inhibir la 

neurotransmisión glutamatérgica, permitiría  asegurar que el sistema 

endocannabinoide juega un papel fundamental en la regulación de la 

neurotransmisión excitadora y por tanto, también, de la excitotoxicidad. 
 

El efecto neuroprotector de los cannabinoides se ha demostrado con dos 

agonistas cannaninoides WIN55212-2 y CP55940. Ambos protegen de la 

muerte neuronal inducida por glutamato en cultivos celulares de neuronas de 

hipocampo. Aunque este efecto es bloqueado por SR141716A, no ha sido 

demostrado que el receptor implicado sea el CB1, lo que sugiere la presencia 

de otro subtipo de receptor de naturaleza cannabinoide y sensible a 

SR141716A. (Shen y cols.,1996; Shen y Thayer 1998). También se ha 

propuesto que los agonistas CB1 sean neuroprotectores por su capacidad 

antioxidante. 



  Introducción 
 

 31 

 

4.1.6 Otros efectos  
 

A Regulación de la ingesta 
 

El sistema endocannabinoide puede formar parte de los mecanismos que 

regulan la conducta alimentaria, a través de su interacción con el sistema de 

señalización nutricional hipotalámico mediado por la leptina. Esta hormona 

secretada por el tejido adiposo tiene un papel clave en el mantenimiento del 

peso corporal. Un incremento de la masa grasa aumenta los niveles de leptina, 

y ésta disminuye los niveles hipotalámicos de los endocannabinoides 

Anandamida y 2-Araquidonilglicerol.  

 

Por otro lado, la oleamida, un análogo natural de la anandamida que no 

activa receptores CB1, es sintetizada en el intestino delgado en respuesta a la 

ingesta y parece causar en modelos animales un efecto anorexígeno mediado 

por fibras vagales que estimulan áreas del SNC como el núcleo paraventricular 

o el núcleo del tracto solitario.  

 

Así pues, el sistema endocannabinoide participa en la regulación de la 

conducta alimentaria y del peso corporal formando parte de una compleja serie 

de señales periféricas y centrales, orexígenas y anorexígenas. 

 

B Presión intraocular 

 
Análisis inmunohistoquímicos han demostrado la presencia de receptores 

de cannabinoides CB1 en el polo anterior del ojo en el epitelio pigmentado ciliar. 

Los cannabinoides podrían actuar sobre la producción del humor acuoso, y 

sobre el drenaje en el sistema trabecular y el canal de Schlemm, disminuyendo 

la presión intraocular (PIO) (Straiker y cols., 1999). 

Además de la presencia de receptores cannabinoides, también se ha 

detectado en el ojo la existencia de las fosfodiesterasas necesarias para la 



  Introducción 
 

 32 

síntesis de anandamida a partir de su precursor la NAPE (Matsuda y cols, 

1997). 

 

C Función inmunológica 

 

No es del todo conocida, pero a dosis altas pueden actuar por varias vías 

inhibiendo o estimulando las respuestas inmunológicas. El receptor CB2 se 

encuentra en tejidos inmunes como bazo, timo, médula osea, amígdalas y 

células circulantes (monocitos, leucocitos polimorfonucleares y linfocitos T y B. 

El contenido de mRNA para CB2 en estas células, es equivalente al de CB1 en 

cerebro. Los cannabinoides disminuyen el AMPc intracelular que normalmente 

está aumentado cuando se activan los linfocitos y de esta manera producen 

efectos inmunosupresores. Además activan otras vías moleculares como el 

factor kB nuclear. 

 
 

4.2 EFECTOS ADVERSOS  

 
La principal dificultad técnica para el uso de cannabinoides en terapeútica 

es la incapacidad de separar los efectos colaterales psicotrópicos indeseables 

de los efectos terapeúticos beneficiosos, especialmente la tolerancia y la 

dependencia. Solo muy recientemente se ha avanzado en el estudio de los 

mecanismos moleculares y farmacológicos de los compuestos activos 

cannabinoides encontrados en la marihuana.  

 

Los efectos secundarios más importantes de los cannabinoides son sus 

efectos psicotrópicos como euforia, bienestar, desinhibición, locuacidad, 

sedación, pérdida de memoria, alucinaciones, distorsión de la imagen corporal 

y de la percepción sensorial. A veces pueden producir ataques de pánico, ideas 

paranoides, y exacerbación de los síntomas de la esquizofrenia. No aparecen 



  Introducción 
 

 33 

siempre, y su presentación depende de muchos factores, entre los que se 

encuentran la personalidad previa del individuo y el ambiente. 

 

Hay muchos problemas para medir la contribución de cada uno de los 

constituyentes de los extractos de Cannabis sativa. Además, el efecto placebo 

es difícil de medir, y si la persona está informada de lo que va a ingerir, 

presenta mas respuestas agradables, pero también una taquicardia mas 

pronunciada, comparándolos con el grupo de pacientes no informados. Si se 

consigue aliviar el dolor crónico, aunque la administración sea inhalatoria y las 

personas conozcan los peligros, se tolera relativamente bien (Williamson y 

Evans, 2000). 

 

Otros efectos secundarios no relacionados con el sistema nervioso 

incluyen: taquicardia, hipotensión postural, sequedad de boca, ataxia e 

inmunosupresión.  

 

Los efectos secundarios de los antagonistas cannabinoides son mucho 

menos conocidos. 

 

Sería posible evitar la mayoría de estos efectos, tanto de los agonistas 

como de los antagonistas, con nuevos compuestos que actuasen 

selectivamente sobre un solo subtipo de receptor cannabinoide o bien sobre la 

liberación, recaptación o degradación de los cannabinoides endógenos. 



  Introducción 
 

 34 

 

5 POSIBILIDADES DE APLICACIÓN TERAPEÚTICA 
 

Existe un gran debate sobre los usos terapéuticos del Cannabis, y no 

debe generalizarse la idea de que su uso es inofensivo. Se debería emplear 

para determinados pacientes y bajo control médico.  

 

En la actualidad se están llevando a cabo algunos ensayos clínicos con 

derivados sintéticos de cannabinoides. En algunos tratamientos muy concretos: 

como antiproliferativos, antiglaucomatosos o el empleo de Rimonabant® contra 

la obesidad y el tabaquismo. 

 

5.1 ANTIEMÉTICOS: 

 

Este es el efecto terapéutico para el cual los cannabinoides se utilizan con 

más frecuencia. Las nauseas y vómitos producidos por la quimioterapia, 

rebeldes a otros tratamientos, como, los antagonistas del receptor 5HT3 de 

serotonina (ondansetron, granisetrosn, tropisetrón) que son el tratamiento de 

elección en la actualidad; entre un 10-30% de los pacientes no mejoran con 

ellos. Por lo tanto, los cannabinoides podrían ofrecer algún beneficio, 

especialmente en determinados grupos de pacientes, como mujeres jóvenes 

con cáncer de mama, a pesar de que los efectos adversos que producen son 

más frecuentes que los producidos por los antagonistas del receptor 5HT3 de 

serotonina. 

 

Numerosos estudios realizados con ∆9-THC (Dronabinol®, Marinol®) y su 

análogo sintético Nabilona ( Cesamet®) y con marihuana inhalada (fumada), en 

la decada de los 70 y 80, demostraron la efectividad de estos compuestos 

como agentes antieméticos. La Nabilona, lleva 20 años siendo utilizada 

satisfactoriamente como antiemético en pacientes sometidos a quimioterapia 



  Introducción 
 

 35 

en el Reino Unido. (Lemberger, 1999) y tiene una potencia similar a la de 

antagonistas dopaminérgicos como metoclopramida y domperidona. 

 

5.2 ANALGESIA: 

 

El uso clínico de cannabinoides en el tratamiento del dolor se ha 

propuesto para el tratamiento de cefaleas, migrañas, dolores menstruales, 

dentales, neuropáticos, postquirúrgicos y dolor severo de espalda. 

 

En general el efecto analgésico de los cannabinoides es irregular, 

existiendo variaciones importantes según el tipo de dolor y la receptividad del 

paciente. Ensayos llevados a cabo en humanos para comparar el efecto de ∆9-

THC (20 mg) con el de Codeina (60-120 mg) en dolores crónicos asociados a 

neoplasias, han dado como resultado una actividad analgésica similar. 

También potencian los efectos de otros analgésicos y pueden ser asociados 

con opiáceos. 

 

5.3 PATOLOGÍAS MOTORAS 

 
Se consideran candidatos para ser tratados con agonistas cannabinoides: 

disquinesias, distonias, corea de Huntington (Glass y cols., 1993; Richfield y 

Herkenham, 1994), síndrome de Tourette (Muller-Vahl y cols., 1998) y 

esclerosis múltiple (Baker y cols., 2000), y con antagonistas la enfermedad de 

Parkinson (Sañudo-Peña y cols., 1998). 

 
D Enfermedad de Parkinson 

 

La enfermedad de Parkinson se caracteriza por una degeneración de la 

vía nigro-estriada que produce, entre otras alteraciones, un aumento del 

número de receptores CB1 y una afectación del movimiento. El sistema 

endocannabinoide se vuelve, por lo tanto, hiperactivo. La L-dopa, tratamiento 



  Introducción 
 

 36 

de elección en esta patología, es capaz de revertir el incremento de los 

receptores CB1, lo que indicaría que estos están bajo influencia inhibitoria de 

las neuronas dopaminérgicas.  

 

Se podrían utilizar agonistas cannabinoides por su actividad 

neuroprotectora y antioxidante. Sin embargo los ensayos clínicos realizados 

hasta ahora con antagonistas no han sido concluyentes, y necesitarán ser 

ampliados en los próximos años (Fernández-Ruiz y cols., 2003) 

 

Los antagonistas del receptor CB1, que disminuirían esta hiperactividad, 

pueden ser beneficiosos sobre la aquinesia, uno de los síntomas 

característicos de esta enfermedad neurológica (Lastres-Becker y cols., 2001)  

 

E Corea de Huntington 

 

Estudios recientes han demostrado que hay una reducción marcada de 

receptores CB1 en los ganglios de la base en esta enfermedad (Glass y cols., 

2000), además, en los diferentes modelos animales de corea de Huntington se 

ha observado una hipofuncionalidad del sistema endocannabinoide (Lastres-

Becker y cols., 2001). Diferentes estudios llevan a plantear que esta pérdida de 

los receptores CB1 podría estar implicada en la propia patogénesis de la 

enfermedad. 

 

En el tratamiento de esta enfermedad se podrían utilizar, tanto agonistas 

de receptores CB1, como inhibidores de la recaptación, ya que son capaces de 

reducir la hiperquinesia y mejorar los déficits GABAérgicos en un modelo de 

ratas con enfermedad de Huntington. Nuevas hipótesis sugieren que, dada la 

posible alteración de los receptores CB1 en etapas previas a la aparición de los 

síntomas, el tratamiento con cannabinoides podría ser utilizado como terapia 

protectora de la muerte neuronal que se produce en esta enfermedad 

(Fernández-Ruiz y cols., 2003). 



  Introducción 
 

 37 

 

5.4 EFECTOS ANTIPROLIFERATIVOS  

 

En animales de experimentación tratados con dosis altas de ∆9-THC se ha 

comprobado que desaparecían tumores de mama, próstata, gliomas, 

epiteliomas tiroideos y linfomas. Este  efecto parece estar mediado por 

receptores CB1, CB2, y VR1. Los cannabinoides estimulan las cascadas de 

MAPKs, ERK, kinasas activadas por estrés (JNK) y MAPK p38 (Rueda y cols., 

2000; Derkinderen y cols., 2001). Actualmente se está investigando (ensayos 

en fase II) el efecto de la administración local de ∆9-THC sobre el crecimiento 

de glioblastoma multiforme en humanos (Guzman, 2003) 

 
 

5.5 REGULACIÓN DE LA INGESTA 

 
Aumentar la ingesta es deseable en determinadas situaciones clínicas 

entre las que se encuentran las inmunodeficiencias. Se ha llegado a sugerir 

que los agonistas cannabinoides en estas inmunodeficiencias no solo estimulan 

la sensación de apetito (Mechoulam, 1999) sino que además son efectivos para 

el tratamiento del dolor y la ansiedad que acompañan a estas patologías. 

(Watson y cols., 2000). 

 

Los antagonistas cannabinoides podrían utilizarse para el tratamiento de 

la obesidad. Se ha demostrado que el agonista inverso del receptor CB1, 

SR141716A, inhibe el aumento de la ingesta producido por la administración de 

anandamida (Williams y Kirkham, 1999). Es capaz de producir supresión del 

apetito y perdida de peso al ser administrado a animales, y aunque se 

desarrolla tolerancia a la disminución del apetito, el peso de los animales 

tratados fue menor que el de los animales control durante todo el tiempo que 

duró el estudio (Colombo y cols., 1998). En el momento actual se encuentran 



  Introducción 
 

 38 

en marcha ensayos clínicos en humanos obesos con el antagonista selectivo 

rimonabant ® (SR 141716A). 

 

5.6 GLAUCOMA 

 
La aplicación tópica de agonistas cannabinoides produce una disminución 

de la PIO. La administración sistémica de ∆9-THC no ha dado buenos 

resultados, pero actualmente se están desarrollando nuevos compuestos 

cannabinoides y profármacos, sin efectos sistémicos, para su aplicación tópica 

en el tratamiento del glaucoma (Buchwald y cols., 2000). 

Los cannabinoides controlan la PIO en distintos tipos de glaucoma pero 

no son un tratamiento etiológico y han demostrado ser eficaces en glaucomas 

resisitentes a tratamiento convencinales. 



  Introducción 
 

 39 

 

6 EFECTOS VASCULARES DE LOS CANNABINOIDES  
 

Los efectos cardiovasculares de los cannabinoides y los mecanismos por 

los que se producen son numerosos y complejos. Entre todos los mecanismos 

postulados por la mayoría de los autores los principales son dependientes del 

endotelio. Debido a esto, se describen a continuación los más importantes 

mecanismos vasodilatadores producidos por factores derivados del endotelio. 

 

6.1 FARMACOLOGÍA VASCULAR  

 
La sangre es transportada desde el corazón a los tejidos a través de las 

arterias y las redes de capilares. Estas forman un amplio sistema de vasos que 

comienza con las arterias aorta y pulmonar, las cuales salen respectivamente 

del ventrículo izquierdo y derecho del corazón. Al irse alejando del corazón 

estos vasos se ramifican repetidamente dando con ello lugar a un gran número 

de arterias de calibre progresivamente decreciente. 

 

La organización básica de la pared de todas las arterias es similar en 

cuanto a que se pueden distinguir tres capas concéntricas: 1) una capa interna, 

la túnica íntima, que consiste en un tubo endotelial cuyas células escamosas 

tienen su eje mayor orientado longitudinalmente.; 2) una capa intermedia, la 

túnica media, compuesta principalmente por células musculares lisas 

dispuestas circularmente; y 3) una capa externa, la túnica adventicia, 

constituida por fibroblastos y fibras colágenas asociadas que están orientadas 

en su mayor parte longitudinalmente. Esta capa externa se funde gradualmente 

con el tejido laxo alrededor de los vasos. El límite entre la túnica íntima y la 

túnica media está marcado por la lámina elástica interna (elástica interna), la 

cual está especialmente bien desarrollada en las arterias de mediano calibre. 

Entre la túnica media y la túnica adventicia se puede distinguir en muchas 

arterias una más fina lámina elástica externa (elástica externa). 



  Introducción 
 

 40 

 

Desde las arterias más grandes hasta los capilares existe una continua 

gradación en cuanto al diámetro y a las características de la pared vascular, 

pero las arterias generalmente se clasifican según su tamaño, el componente 

predominante de la túnica media y su función principal en 1) arterias elásticas 

(de conductancia), 2) arterias musculares (de distribución), y arteriolas. 

 

La túnica adventicia de las grandes arterias elásticas, como la aorta, es 

relativamente fina y está constituida por fibroblastos, haces longitudinales de 

fibras colágenas y una red laxa de fibras elásticas finas. En su túnica media 

tienen paredes que poseen muchas capas fenestradas de elastina, mientras 

que la túnica íntima de estas arterias está formada por el endotelio, un epitelio 

fino escamoso separado de la elástica interna por un tejido conectivo laxo que 

contiene escasos fibroblastos, raras células musculares lisas y fibras finas de 

colágeno. El endotelio proporciona al vaso una capa de revestimiento lisa y una 

barrera parcialmente selectiva de difusión entre la sangre y las capas más 

externas de la pared vascular. Pero el endotelio no es solo una simple barrera 

o membrana de diálisis entre la sangre y los tejidos vecinos.  

 

Si bien el endotelio actúa como una membrana semipermeable y además 

permite el transporte de macromoléculas desde la sangre al espacio intersticial, 

hoy día se lo reconoce como un sensor de los cambios de las fuerzas 

hemodinámicas y de los cambios de la concentración de hormonas circulantes 

o de sustancias locales vasoactivas. En respuesta a estos estímulos, las 

células endoteliales sintetizan y liberan diversas sustancias biológicamente 

activas. Los productos de secreción endotelial actúan como señales químicas 

que comunican a las células endoteliales no solo entre sí, sino con otras 

células de la pared vascular y con células de la sangre, y establecen una 

importante interrelación funcional. 

 



  Introducción 
 

 41 

Por medio de sus productos de secreción el endotelio vascular participa 

en la regulación del tono y la permeabilidad vascular, en la hemostasia, en 

respuestas proliferativas celulares y en mecanismos de defensa como las 

respuestas inflamatoria e inmune.  

 

Todas estas propiedades funcionales convierten al endotelio vascular en 

un órgano regionalmente diferenciado del sistema cardiovascular. Este 

importante concepto obliga a considerar a las alteraciones funcionales del 

endotelio (disfunción endotelial) como mecanismos fisiopatológicos cruciales en 

el desarrollo de las enfermedades de dicho sistema. 

 

6.1.1 Regulación endotelial del tono vascular 

 
Una de las principales funciones del endotelio es mantener el tono 

vascular controlando la contracción y relajación del músculo liso subyacente. El 

endotelio vascular produce sustancias que al actuar sobre el músculo liso lo 

relajan (vasodilatadores) o lo contraen (vasoconstrictores).  

 

6.1.2 Sustancias vasodilatadoras derivadas del endotelio 

 
Las células endoteliales producen una serie de sustancias, algunas de 

ellas no del todo conocidas, que causan relajación del músculo liso vascular. 

Las más importantes son: óxido nítrico (NO), factor hiperpolarizante derivado 

del endotelio (EDHF) y prostaciclina (PGI2). 

 

A) Óxido nítrico: Las células endoteliales, en respuesta a diferentes 

estímulos, producen una sustancia gaseosa que difunde y, al actuar sobre las 

células musculares lisas, causa su relajación. 

 

Esta sustancia fue denominada por sus descubridores factor relajante 

derivado del endotelio (EDRF). La búsqueda de la identidad química del EDRF 



  Introducción 
 

 42 

se intensificó durante la década de los 80. Finalmente, los datos 

experimentales acumulados demostraron que el EDRF es el óxido nítrico (NO). 

El NO es sintetizado en la célula endotelial y difunde al músculo liso, al cual 

relaja. El efecto vasodilatador del NO es mediado por incremento de los niveles 

de GMPc que  relaja al músculo liso al disminuir la concentración de Ca 2+ en el 

citosol.  

 

El NO se forma a partir de L-arginina por la acción de una enzima 

denominada NO-sintasa (NOS). La célula endotelial puede presentar dos 

isoformas de NOS:  

 

1) NOS-constitutiva (cNOS), de la cual existen dos tipos: eNOS (NO-

sintasa endotelial) y nNOS (NO-sintasa neuronal) ubicadas en la membrana 

celular y activadas por el complejo Ca2+-calmodulina. Las cNOS transforman la 

L-arginina en L-citrulina liberando a su vez NO. Las cNOS son responsables de 

dos tipos de liberación de NO, una basal continua, que mantiene localmente el 

tono cuando los niveles del Ca 2+ libre citosólico son bajos (50-140nM), y otra 

liberación estimulada, que ocurre en respuesta a estímulos fisiológicos que 

aumentan el Ca 2+ libre citosólico. El NO formado disminuye la actividad de la 

enzima por un mecanismo de retroalimentación negativa, de modo que se 

convierte en un modulador de su propia síntesis. Diversas sustancias 

endógenas producen aumento del Ca 2+ citosólico y conducen así a la 

liberación de NO. 

 

1. NOS-inducible (iNOS), citosólica e independiente de Ca 2+. La 

síntesis de iNOS es inducida cuando actúan endotoxinas (lipopolisacáridos 

bacterianos) y citocinas sobre la célula endotelial. Esta síntesis es inhibida por 

los glucocorticoides. Una vez expresada, la enzima produce NO en forma 

sostenida. 

 

 



  Introducción 
 

 43 

 

 

B) Factor Hiperpolarizante derivado del endotelio: 
 

Este factor que es liberado por el endotelio, hiperpolariza al músculo liso 

vascular y lo relaja. Aunque la identidad química del EDHF no está aún definida 

con exactitud, (Triggle y Ding, 2002) se sugiere que puede ser un metabolito 

del ácido araquidónico. No existe una liberación basal y continua de EDHF.  

 

El EDHF abre canales de K+ en la célula muscular lisa, lo que hace que 

ésta se hiperpolarice. Esta hiperpolarización cierra los canales de Ca 2+.tipo L y 

disminuye la entrada de Ca 2+.en la célula. Por tanto, la concentración de 

Ca2+.citosólico disminuye y esto provoca la relajación del músculo. Este efecto 

puede ser inhibido por distintas toxinas como charibdotoxina (bloqueante de 

canales de K+-voltaje dependientes y de Ca++ de alta conductancia activados 

por K+), apamina (bloqueante de canales de Ca++ de baja conductancia 

activados por K+), ouabaina, etc… 

 
 Fig. 12. Esquema del mecanismo de acción de bloqueantes de canales de K+. 

(Triggle y Ding, 2002) 

 
 
 



  Introducción 
 

 44 

 
 
 
C) Prostaciclina: 

 

La prostaglandina I2 (PGI2), también llamada prostaciclina, fue el primer 

factor vasoactivo endotelial aislado e identificado por Moncada y colaboradores 

en 1976. La PGI2 se sintetiza a partir del ácido araquidónico por medio de la 

acción de dos enzimas, primero la ciclooxigenasa y luego la PGI2-sintasa. Al 

igual que el NO y el EDHF, la prostaciclina se sintetiza y libera en respuesta a 

estímulos fisiológicos que elevan el Ca2+ citosólico. El efecto vasodilatador de 

la PGI2 es mediado por el aumento del AMPc en el músculo liso vascular. El 

AMPc relaja al músculo porque disminuye la concentració de Ca 2+.en el citosol 

así como la afinidad de las proteinas contráctiles por el Ca 2+. 



  Introducción 
 

 45 

 

7 EFECTOS DE CANNABINOIDES SOBRE EL APARATO 
CARDIOVASCULAR 

 
En el aparato cardiovascular se han descrito varios tipos de células como 

fuente de endocannabinoides: células endoteliales, neuronas perivasculares, y 

células sanguíneas circulantes como plaquetas, leucocitos polimorfonucleares 

y macrófagos (Hillard, 2000). 

 

Los macrófagos circulantes y las plaquetas activadas por hemorragias o 

endotoxinas sintetizan anandamida y otros cannabinoides que contribuyen a la 

producción de  hipotensión (Varga y cols., 1998), especialmente en condiciones 

patológicas, como inflamación, shock séptico o migraña. En plaquetas la 

anandamida estimula la agregación plaquetaria. 

 

7.1 EFECTOS CARDIOVASCULARES DE LOS ENDOCANNABINOIDES  

 

Estos mecanismos han sido dilucidados al estudiar los efectos de 

cannabinoides, tanto endógenos como exógenos, en humanos, animales de 

experimentación, órganos aislados y cultivos celulares. 

 

Múltiples estudios implican a los cannabinoides endógenos en la 

regulación cardiovascular. Sus efectos dependen del lecho vascular y de la 

especie animal y no pueden ser explicados por un mecanismo simple o por un 

solo lugar de acción. Hay evidencias farmacológicas, fisiológicas y bioquímicas 

de que los cannabinoides regulan el tono vascular dependiente e 

independientemente del SNC. Recientemente se ha descrito que los 

endocannabinoides pueden proteger al corazón frente a la isquemia y 

reperfusión, reduciendo el tamaño de la zona infartada. Este efecto parece 

estar mediado a través de receptores CB2 (Joyeux y cols., 2002; Bouchard y 

cols., 2003; Lepicier y cols., 2003).  



  Introducción 
 

 46 

 

El conocimiento del perfil fundamentalmente vasodilatador de los 

agonistas de receptores cannabinoides, y su potencial efecto cardioprotector, 

podría servir para establecer las bases de la función reguladora cardiovascular 

de estos compuestos y para desarrollar nuevos agentes terapéuticos útiles en 

patologías del aparato cardiovascular. 

 

Aunque el mecanismo por el cual los cannabinoides atenúan o inhiben las 

contracciones producidas por varios agonistas vasoconstrictores 

(noradrenalina, fenilefrina, serotonina) no está del todo aclarado, mecanismos 

dependientes e independientes de receptores cannabinoides pueden estar 

implicados. Entre estos últimos se incluye hiperpolarización de la membrana, 

bloqueo de canales de Ca++ voltaje-dependientes (Gebremedhin y cols., 1999), 

e inhibición de la movilización del Ca++ de los depósitos intracelulares (Zygmunt 

y cols., 1997; White y Hiley, 1998). 

 

Mecanismos dependientes de receptores cannabinoides 
 

Se han propuesto varias localizaciones para los receptores: 

 

1) Músculo liso vascular. Se ha descrito su presencia en el músculo liso 

vascular por ensayos de unión a receptores (Wagner y cols., 2001; Ho y Hiley, 

2003; Sugiura y cols., 1998; Bilfinger y cols., 1998; Liu y cols 2000). En arterias 

cerebrales y mesentéricas de animales de experimentación, los cannabinoides 

estimulan directamente receptores CB1 del músculo liso vascular reduciendo 

los flujos de Ca++ intracelulares y causando vasodilatación (Ellis y cols., 1995; 

Gebremedhin y cols., 1999; Ho y Hiley, 2003; Zoratti y cols., 2003). Esto 

concuerda con la evidencia de que la marihuana produce un aumento del flujo 

sanguíneo cerebral. Hay varios papeles fisiológicos posibles para este receptor, 

en arterias cerebrales que podría actuar como intermediario, acoplando la 

actividad metabólica de las neuronas al flujo sanguíneo cerebral (Hillard, 2000). 



  Introducción 
 

 47 

Este efecto podría ser de utilidad terapéutica para el tratamiento del 

vasoespasmo cerebral. 

 

2) Terminaciones nerviosas perivasculares. La presencia de estos 

receptores en las terminaciones nerviosas perivasculares del lecho 

mesentérico ha sido descrita por muchos autores (Ellis y cols., 1995; Zygmunt y 

cols., 1999; Ishioka y Bukoski, 1999; Högestätt y Zygmunt, 2002). 
 

3) Endotelio Vascular. Finalmente, los receptores cannabinoides han 

sido identificados en las células del endotelio vascular: Esta localización es la 

más comúnmente aceptada y su estimulación el mecanismo mediador más 

probable de los efectos vasorrelajantes atribuidos a los cannabinoides (Deutsch 

y cols., 1997, Gebremedhin y cols., 1999; Sugiura y cols., 1998; Liu y cols., 

2000; Wagner y cols., 2001). 

 

Los receptores CB1 han sido identificados en el endotelio por técnicas de 

RT-PCR en la vena umbilical humana (Sugiura y cols., 1998; Liu y cols., 2000) 

y por ensayos de unión a receptores (Sugiura y cols., 1998; Bilfinger y cols., 

1998; Liu y cols 2000). 

 

Asimismo la presencia de receptores CB2 ha sido confirmada por 

secuenciado molecular en células endoteliales aisladas de arteria pulmonar de 

carnero (Zoratti y cols., 2003).  

 

También se ha sugerido la presencia en estas células de un receptor 

para cannabinoides no CB1/ no CB2, llamado "receptor endotelial de 

anandamida" (Jarai y cols., 1999; Bukoski y cols., 2002, Offertaler y cols., 

2003).  

 

En 1999 Jarai y cols., propusieron la existencia de un receptor endotelial 

de anandamida diferente de CB1 y CB2, basándose en el hecho de que tanto la 



  Introducción 
 

 48 

anandamida como la metanandamida no producían hipotensión en ratones 

knock-out, pero si vasodilatación en arterias mesentéricas aisladas de esos 

mismos ratones, efecto bloqueado por el antagonista CB1, SR1417161A.  

 

Utilizando un cannabinoide sintético denominado “cannabidiol anormal” 

(abn-cbd) que no se une al receptor CB1 y carece de efectos psicotrópicos, 

pero que produce hipotensión en perros (Adams y cols., 1977), observaron que 

producía hipotensión dosis dependiente, sin afectar a la frecuencia cardiaca, 

tanto en ratones normales como en los carentes del gen del receptor CB1, que 

también es bloqueada con SR1417161A.  

 

Posteriormente se ensayó el abn-cbd en el lecho mesentérico perfundido 

de ratones carentes del receptor CB1 y del CB2 comprobando que producían 

vasodilatación, bloqueada también por SR1417161A.  

 

En el lecho mesentérico perfundido de ratas normales con endotelio 

intacto obtuvieron los mismos resultados, llegando a la conclusión de la 

existencia de un receptor cannabinoide no CB1 no CB2 localizado en el 

endotelio ya que al eliminarlo este efecto desapareció. A pesar del tiempo 

transcurrido, aún no se ha llegado a caracterizar este nuevo receptor. 

 

Mecanismos mediados por el receptor CB1: La activación de los 

receptores CB1 puede actuar directamente estimulando la cascada de la tirosin-

kinasa (Liu y cols., 2000), canales de K+ (Randall y cols., 1996, 1997; Maingret 

y cols., 2001) y/o bloqueando canales de Ca++  tipo L/Q (Gebremedhin y cols., 

1999), o indirectamente modificando la liberación de factores derivados del 

endotelio: NO (Deutsch y cols., 1997; Stefano y cols., 1998; Macarrone y cols., 

2000; Mendizabal y cols., 2001; Stefano y cols., 2003; Moezi y cols., 2004), 

prostaglandinas (PGs) (Ellis y cols., 1995; Pratt y cols.,1998), y factor 

hiperpolarizante derivado del endotelio (EDHF) (Randall y cols., 1996; Randall 

y Kendall,1998; Zygmunt y cols., 1998;Chaytor y cols., 1999).  



  Introducción 
 

 49 

 

Mecanismos independientes de receptor 
 

Mecanismos diferentes a la activación de receptores cannabinoides han 

sido propuestos: 

 

a) Activación de receptores VR1. Al activarse este receptor pueden ser 

liberadas sustancias vasodilatadoras como el péptido relacionado con el gen de 

la calcitonina (CGRP), la sustancia P y el ATP, que a su vez estimulan la 

liberación de prostanoides, NO y EDHF a nivel endotelial (Wagner y cols., 

1997; Zygmunt y cols., 1999; Högestätt y Zygmunt, 2002; Ralevic y cols., 

2002). 

 

b) Biotransformación intracelular de anandamida a metabolitos 

vasoactivos por diversos enzimas: FAAH, Citocromo P450, COX2 y 

Lipooxigenasa. 

 

c) Activación de canales de K+. (Randall y cols., 1996; Randall y cols., 

1997). 

 

d) Bloqueo de canales de Ca++ (Gebremedhin y cols., 1999). 

 

7.2 EFECTOS EN HUMANOS.  

 

Los efectos de los cannabinoides en humanos son difíciles de determinar 

debido a su naturaleza subjetiva y a que solamente existen estudios limitados 

por razones éticas. 

 

Los efectos cardiovasculares varían de unos individuos a otros. En 

general producen hipotensión y bradicardia. También dependen de la forma de 

administrarlos (aguda o continuada), de la vía de administración y del tono 



  Introducción 
 

 50 

simpático previo del individuo. La administración aguda, tanto cuando se fuma 

marihuana como cuando se administra ∆9-THC por vía intravenosa, produce 

pequeños aumentos de presión arterial y taquicardia (Dewey, 1986). 

Administrados crónicamente se produce vasodilatación y bradicardia, debido a 

una disminución del tono simpático del organismo por inhibición presináptica de 

la liberación de neurotrasmisores.  

 

7.3 EFECTOS EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN  

 

El mecanismo de activación de los receptores CB1, y su papel en la 

función vascular, ha sido extensamente estudiado mediante ensayos con 

cannabinoides, tanto naturales como sintéticos, en animales de 

experimentación. 

 

I EFECTOS IN VIVO 

 

El efecto común a todas las especies animales producido por la 

administración de cannabinoides es la hipotensión y la bradicardia. Han sido 

administrados en animales conscientes y anestesiados por vía intramuscular, 

intravenosa o intracerebral (Gardiner y cols.,2001). En estos ensayos en 

animales anestesiados, el anestésico empleado puede alterar la intensidad del 

efecto, fundamentalmente el pentobarbital (Vidrio y cols., 1996); también puede 

variar si el animal respira espontáneamente o con respiración asistida 

(Niederhoffer y Szabo, 2003). 

 

Se han hecho estudios en ratas (Varga y cols., 1995; Malinowska y cols., 

2001), ratones (Jarai y cols., 1999), conejos (Ralevic, 2003; Ishac y cols., 1996; 

Niederhoffer y Szabo, 1999; Niederhoffer y cols., 2003; Gardiner y cols., 2002) 

y perros (Lake y cols., 1997) y en todos ellos se produce hipotensión.  

 



  Introducción 
 

 51 

Estos efectos se producen por inhibición del tono simpático, mediados por 

el receptor CB1, aunque no se puede descartar la activación del sistema 

nervioso parasimpático a través del nervio vago. En el ganglio cervical superior 

de la rata ha sido detectado mRNA para el receptor CB1. lo que implicaría a 

estos receptores en la modulación de la presión arterial (Varga y cols., 1995). 

 

Se han ensayado varios grupos de compuestos: cannabinoides clásicos 

(THC, HU-210 y HU-211); no clásicos (WIN55212-2, CP55940, JWH-015) y 

cannabinoides endógenos (anandamida y palmitoiletanolamina). Los resultados 

difieren dependiendo del tipo de cannabinoide usado. El orden de potencia 

hipotensora se correlaciona con la mayor actividad psicotrópica y con la 

afinidad de los ligandos por el receptor CB1 (Lake y cols., 1997). La mayor 

potencia hipotensora (y menos bradicardizante) es la producida por HU-210 

que a su vez es el que produce mas alteraciones de conducta. El enantiómero 

HU-211, carente de efectos psicotrópicos, no produce efectos sobre el aparato 

cardiovascular. (Wagner y cols., 2001). 

 

En algunos casos se presenta una respuesta trifásica como en ratas 

anestesiadas: 1) Bradicardia y una disminución de la presión arterial que dura 

unos segundos. Esta fase es mediada a nivel vagal, via el reflejo de Bezold-

Jarish, y también por los receptores vanilloides presentes en las terminaciones 

nerviosas. 2) Efecto presor transitorio y 3) Una segunda disminución de la 

presión arterial más duradera. Este efecto es mediado por el receptor de 

cannabinoides CB1 y se produce por inhibición presináptica de la liberación de 

neurotransmisores a nivel periférico (Varga y cols., 1995). Malinowska y cols., 

(2001) demostraron que la fase I se debe a activación de receptores vanilloides 

y la fase III a la estimulación del receptor CB1.  

 

En ratas espontáneamente hipertensas (SHR) la activación de receptores 

vanilloides contribuye al efecto hipotensor de anandamida (Kaminsky y Wang, 

2003). Este efecto se produce por liberación de CGRP por las terminaciones 



  Introducción 
 

 52 

nerviosas sensoriales. En SHR se he demostrado un aumento de la expresión 

del receptor del CGRP que aumentaría la sensibilidad de la presión sanguínea 

a anandamida lo que actuaría como un mecanismo compensador neutralizando 

el incremento de la presión arterial que presentan las ratas SHR (Li y cols., 

2003).  

Ensayos en conejos desmedulados han demostrado que el efecto 

hipotensor puede deberse a inhición presináptica de la actividad simpática o a 

efectos colinérgicos. WIN55,212-2 reduce la presión arterial y las 

concentraciones plasmáticas de NA de una manera dosis y SR141716A-

dependiente (Ralevic, 2003). Se propone la existencia de un receptor CB1 

localizado en las terminaciones nerviosas simpáticas cardiacas, cuya 

estimulación inhibe la liberación de NA (Ishac y cols., 1996; Niederhoffer y 

Szabo, 1999; Niederhoffer y cols., 2003; Gardiner y cols., 2002).  

 

Jarai y cols. (1999). propusieron la existencia de un receptor endotelial de 

anandamida diferente de CB1 y CB2. Recientemente se ha sintetizado un 

antagonista selectivo del receptor vascular endotelial, O-1918, que bloquea la 

vasorrelajación de las arterias mesentéricas producida por anandamida, 

interactuando con sitios distintos de los receptores CB1 y CB2, lo que apoya la 

teoría de la implicación de un receptor cannabinoide diferente de los conocidos 

hasta el momento (Offertáler y cols., 2003). 

 

II EFECTOS IN VITRO  

 

Los efectos vasculares dependen del tipo de arteria: en general en 

arterias de conductancia, como es la arteria aorta, se produce vasorrelajación, 

pero en arterias de resistencia como es la mesentérica los efectos son 

variables (O’Sullivan y cols., 2004). 

 

El efecto relajante de los agonistas en la mayoría de los vasos 

sanguíneos se establece lentamente (entre 15-20 min), se completa en una 



  Introducción 
 

 53 

hora aproximadamente, y puede ser endotelio-dependiente e independiente 

(Lake y cols., 1997; Pratt y cols., 1998; Chaytor y cols., 1999; Wagner y cols., 

1999; Gotopoulos y cols., 2001; Grainger y Boachie-Ansah, 2001; Wagner y 

cols., 2001). 

 

En tiras precontraidas de arteria hepática de rata, basilar de cobayo y 

arteria cerebral de gato producen relajación endotelio-dependiente por 

activación de receptores CB1 de la musculatura lisa y por apertura de canales 

de Ca++ tipo L en las mismas células. Este efecto es bloqueado por toxina 

pertussis y por el antagonista del receptor CB1 SR141716A. (Jarai y cols., 

1999; Zygmunt y cols., 1999;). HU-210, anandamida y R(+)-metanandamida, 

producen relajación en arterias coronarias y cerebrales que es bloqueado por 

pretratamiento con SR141716A. Los mismos efectos son de menor intensidad 

en vasos renales (Lake y cols., 1997; Wagner y cols., 2001). 

 

Hasta la fecha solamente se han realizado ensayos en aorta de conejo 

con R(+)-metanandamida, donde se produce relajación, mediada en parte por 

liberación de NO por el endotelio y en parte por activación de receptores 

vanilloides VR1, no dependientes de proteínas G, como demuestra el hecho de 

que son insensibles al tratamiento con toxina pertussis. (Mukhopadhyay y cols. 

2002).  

 

Como prototipo de arterias de resistencia, las arterias mesentéricas 

aisladas y perfundidas de la rata han sido las mas estudiadas, (Wagner y cols., 

1999;Ralevic y cols., 2000; Ralevic y cols., 2001; Ralevic y Kendall, 2001; 

Ralevic y Kendall, 2002). Se ha comprobado que el efecto de anandamida es 

mediado parcialmente por: a) el endotelio, o factores derivados del mismo, y b) 

parcialmente por mecanismos independientes de ambos y que podría ser 

indicativo de la activación de receptores vanilloides VR1 (Zygmunt y cols., 

1999).  

 



  Introducción 
 

 54 

Más recientemente O'Sullivan y cols (2004) han demostrado que el 

cannabinoide N-araquidonil-dopamina (NADA) produce relajación vascular en 

arterias aorta y mesentéricas de la rata. Solamente se estudió el mecanismo 

efector en mesentéricas. El efecto es distinto dependiendo de la rama 

mesentérica estudiada. En las pequeñas ramas de estas arterias el efecto se 

produce a través de receptores VR1 y probablemente del receptor endotelial de 

anandamida, y en la mesentérica superior a través de CB1 y VR1, lo que indica 

que en esta última el efecto es independiente del endotelio.  

 

III EFECTOS EN CULTIVOS CELULARES 

 

En cultivos celulares se han estudiado y propuesto diversos mecanismos 

mediadores de la actividad cannabinoide: 

 

• En células endoteliales pulmonares bovinas se ha demostrado que la 

anandamida produce depleción de Ca++ del retículo sarcoplásmico que 

es prevenida solamente por el antagonista del receptor CB2 SR144528 

(Zoratti y cols., 2003).  

 

• En células endoteliales de vena umbilical humana varios autores 

proponen que, tanto el receptor CB1 como el receptor endotelial de 

anandamida están acoplados a la cascada de MAPKs (Liu y cols., 2000; 

Offertáler y cols., 2003). 

 

• En células de músculo liso vascular se produce bloqueo de canales de 

Ca++ tipo L, canales de K+, producción de AMPc y la liberación de Ca++  

de los depósitos intracelulares (Van der Bossche y Vanheel, 2000). 

 
 
 
 



  Introducción 
 

 55 

 

8 REQUERIMIENTOS ESTRUCTURALES DE LOS ANÁLOGOS 
DE CANNABINOIDES SINTÉTICOS 

 

Desde la caracterización del sistema endocannabinoide, se han realizado 

notables avances en la síntesis de compuestos con una acción selectiva sobre 

las proteínas-claves del funcionamiento de este sistema (receptores, 

transportador, enzimas) y que pudieran ser susceptibles de usarse en algunas 

patologías. Se han desarrollado agonistas: 

(i) con una mayor estabilidad metabólica que la anandamida, 

como la R-R(+)-metanandamida  

(ii) con afinidad selectiva por los diferentes subtipos de receptor 

para cannabinoides, como los compuestos HU-308 o JWH-133, que son los 

primeros agonistas selectivos de los receptores CB2, y que aportan la novedad 

de carecer de efectos psicotrópicos al ser incapaces de unirse al receptor CB1, 

pero ser capaces de producir diversos efectos periféricos como reducción de la 

presión sanguínea o inhibición de la motilidad intestinal, así como tener una 

acción antiinflamatoria y analgésica a nivel periférico  

(iii) que mejoran las condiciones de solubilidad acuosa de los 

cannabinoides, como el O-1057 lo que deberá favorecer las formas de 

administración de estos compuestos cuyo caracter altamente hidrofóbico 

limitaba su uso terapéutico. 

 

Otros compuestos sintetizados recientemente se comportan como 

inhibidores del supuesto transportador de endocannabinoides, como el AM404 

o el VDM11, potenciando la acción de éstos. Se han desarrollado inhibidores 

de la actividad amidohidrolasa, como el AM374 y el PMSF, que también 

prolongan la actividad endocannabinoide. 



  Introducción 
 

 56 

 

Estos compuestos podrían ser útiles en aquellas patologías en las que se 

ha demostrado una pérdida de actividad endocannabinoide, y al actuar 

prolongando la presencia de los ligandos endógenos se minimizan los efectos 

psicotrópicos que se observan con el uso de agonistas directos CB1. También 

se han desarrollado antagonistas selectivos de los receptores CB1 y CB2 

capaces de bloquear las acciones in vivo e in vitro de los cannabinoides y que 

serían útiles en aquellas disfunciones en las que se postula una hiperactividad 

del sistema endocannabinoide. 

 

8.1 DISEÑO DE NUEVOS COMPUESTOS DERIVADOS DE TRIAZOLES 

(LHs) 

 
Los nuevos compuestos cannabinoides estudiados en este trabajo fueron 

sintetizados por el equipo de Química médica del CSIC dirigido por la doctora 

Pilar Goya. Para el diseño de estos compuestos se determinó un modelo de 

farmacóforo de los receptores cannabinoides. 

 

Debido a que no se dispone en la actualidad de la estructura 

cristalográfica de ninguno de los dos receptores cannabinoides conocidos, la 

determinación del modelo de farmacóforo se ha basado en ligandos 

cannabinoides descritos en la bibliografía, y en estudios previos de los 

requisitos estructurales mínimos para la interacción con los receptores CB1 y 

CB2.  

Los ligandos seleccionados pertenecen a distintas familias químicas. 

Concretamente fueron elegidos tres cannabinoides clásicos: el propio ∆9-THC, 

la nabilona y el cannabinol; y tres heterocíclicos: el pirazol SR141716, el 

aminoalquilindol JWH018 y el aminoalquilpirrol JWH030. 
 

Debido a los bajos rendimientos en el caso de estos compuestos, en la 

síntesis de los nuevos 3-alquil-1,5-diaril-1h-1,2,4-triazoles (denominados LHs) 



  Introducción 
 

 57 

se decidió emplear el método sintético descrito por Paulvannan y cols. 

(2000)vía cloruros de hidrazonilo. 

 

9 ENSAYOS CON CANNABINOIDES 
 
Para el estudio del sistema cannabinoide y los efectos de los diferentes 

compuestos cannabinoides existen múltiples ensayos clásicos. La evaluación 

farmacológica de los cannabinoides se inicia con estos ensayos aunque la 

interpretación de los resultados se complica por varios motivos: 

 

1) El mayor problema que se presenta a la hora de estudiar los 

cannabinoides es la dificultad para disolverlos, debido a su gran lipofilia y su 

baja solubilidad en agua. Esto obliga a utilizar vehículos no acuosos como: 

etanol, dimetilsulfóxido (DMSO), polivinilpirrolidona, tween 80, cremophor, 

emulphor y albúmina sérica bovina (BSA) (Lopez-Miranda y cols., 2004). Por lo 

tanto, es indispensable hacer experimentos control con el vehículo para 

descartar efectos debidos a él. 

 

2) La mayoría de los compuestos con actividad cannabinoide producen 

mas de un efecto farmacológico, incluso independientemente de las dosis. 

Como ejemplo, la anandamida estimula tanto receptores cannabinoides como 

vanilloides; el WIN 55212-2 es un agonista de receptores CB1 y CB2 pero 

también se comporta como inhibidor del enzima COX2 responsable de la 

oxidación de anandamida; el AM404, inhibidor del transportador de 

anandamida activa también receptores vanilloides (Zygmunt y cols., 2000). 

 

Tanto el antagonista selectivo de receptores CB1, SR141716A, como el de 

receptores CB2, SR144528, se comportan como agonistas inversos(Bouaboula 

y cols., 1999; Rhee y Kim, 2002).Además a altas dosis el SR141716A inhibe la 

respuesta vasodilatadora a capsaicina mediada por receptores vanilloides VR1 

(Zygmunt y cols., 1999; Hillard, 2000; Ralevic y cols., 2002). 



  Introducción 
 

 58 

 

9.1 ENSAYOS “IN VIVO” 

 
Los cannabinoides producen un amplio rango de efectos farmacológicos 

en el ratón, aunque ninguno de ellos se puede considerar específico de los 

cannabinoides, pero si su aparición conjunta. Este es el primer ensayo que 

debe ser realizado para comprobar la actividad cannabinoide de un compuesto. 

Esta respuesta se conoce como “tetrada de actividad cannabinoide”:  

 

Al administrar a un ratón agonistas cannabinoides el animal presenta un 

cuadro típico, con cuatro efectos, en el mismo espacio de tiempo: reducción de 

la actividad espontánea en el test de campo abierto, hipotermia rectal, 

analgesia en ditintos test ("tail flick, placa caliente)", inmovilidad si se coloca al 

ratón en un anillo (catalepsia) (Martin y cols., 1987; Compton y cols., 1993; 

Pertwee, 1972). Se ha demostrado que el SR141716A es muy efectivo 

bloqueando estos efectos, lo que confirma la implicación del receptor CB1, en la 

producción de los mismos. Además el rango de potencia de los cannabinoides 

se correlaciona con su afinidad por el receptor CB1. 

 

2. Ataxia estática en el perro: Estos fueron los primeros ensayos en 

animales de experimentación con ∆9THC. Los cannabinoides producen en el 

perro la combinación de los siguientes efectos: sedación, catalepsia, 

descoordinación motora e hiperexcitabilidad. Los resultados que se obtienen en 

estos experimentos se correlacionan con la intensidad de los efectos 

psicoactivos de la sustancia administrada (Walton y cols., 1937). 

 

Otros ensayos comprenden: cambios comportamentales en monos, 

autoadministración de drogas en ratas y monos y efectos sobre la memoria. 

(Howlett y cols, 2002)  

 



  Introducción 
 

 59 

9.2 ENSAYOS “IN VITRO" 

 
Hay un gran número de ensayos “in vitro” para estudiar la naturaleza 

cannabinoide de un compuesto. Entre ellos el principal es la inhibición de las 

contracciones inducidas eléctricamente en preparaciones de músculo liso 

aislado. Los dos tejidos mas utilizados son el conducto deferente de ratón y la 

fibra longitudinal-plexo mientérico de íleon de cobayo. 

 

El uso de estas preparaciones se basa en que los cannabinoides son 

capaces de inhibir las contracciones producidas por estimulación eléctrica. Este 

efecto se produce al inhibir la liberación de neurotransmisores por unión al 

receptor presináptico CB1 (Pertwee,1997). Como un gran número de 

sustancias no cannabinoides pueden producir también este efecto, se debe 

asegurar la implicación de receptores cannabinoides bloqueándolos con un 

antagonista. 



  Objetivos 
 

 60 

 

1 ESTUDIAR EL MECANISMO DE ACCIÓN DE LOS 
CANNABINOIDES SOBRE AORTA AISLADA DE RATA. 

 
Los efectos de los cannabinoides sobre vasos sanguíneos han sido 

estudiados principalmente en arterias mesentéricas, como prototipo de vasos 

de resistencia, pero existen pocos trabajos en vasos de conductancia, y 

ninguno en arteria aorta de rata. 

 

El objetivo del presente trabajo ha sido caracterizar el mecanismo de acción 

mediante el cual dos cannabinoides de distinta naturaleza química, R-(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 producen vasorrelajación en aorta de rata 

precontraida con fenilefrina. Se estudiará la implicación del endotelio y de sus 

receptores, además de las principales vías, descritas hasta el momento, como 

mediadoras de la actividad vascular de los cannabinoides. 

 

 

2 VALORACIÓN DE NUEVOS COMPUESTOS CON ACTIVIDAD 
CANNABINOIDE  

 

En la segunda parte se ensayarán nuevos compuestos de naturaleza 

cannabinoide derivados triazoles trisustituidos, sintetizados por un equipo de 

Química Médica del CSIC dirigido por la Dra. Pilar Goya.  

 

Estos compuestos se ensayarán en conducto deferente de ratón con 

objeto de caracterizar el efecto agonista o antagonista. En el caso de que sean 

activos se ensayarán sus efectos in vivo sobre comportamiento y analgesia. 

Los resultados obtenidos se compararán con compuestos de reconocida 

actividad cannabinoide. Esta comparación nos permitirá valorar su posible 

selectividad. 



  Material y Métodos 
 
 

 61 

 

1 EFECTOS VASCULARES DE R(+)-METANANDAMIDA Y 
WIN55,212-2 
  

1.1 MATERIAL 
 

1.1.1 Fármacos y reactivos utilizados. 
 
Los fármacos utilizados fueron los siguientes: 
 

 17-ODYA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Inhibidor de CYP450 
 AM404 (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. España). Inhibidor del 

transportador de anandamida. 
 APAMINA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). bloqueante de canales de 

Ca++ de baja conductancia activados por K+. 
 CAPSAICINA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Agonista VR. 
 CAPSAZEPINA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Antagonista VR. 
 CARBACOL (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Agonista colinérgico 
 CGRP 8-37 (rata): (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. España). 

Peptido antagonista de los receptores CGRP1. 
 CHARIBDOTOXINA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). bloqueante de 

canales de K+-voltaje dependientes y de Ca++ de alta conductancia activados 

por K+. 
 FENILEFRINA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Agonista alfa1 

adrenérgicos 
 INDOMETACINA (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Antagonista de 

Ciclooxigenasa1/Ciclooxigenasa2. 
 L-NAME (Sigma-Aldrich, Madrid. España): Inhibidor de Oxido Nítrico 

Sintasa. 



  Material y Métodos 
 
 

 62 

 METANANDAMIDA (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. España). 

Agonista CB1. 
 PMSF (Sigma-Aldrich, Madrid. España). Inhibidor de FAAH. 
 SR141716A (SANOFI, París. Francia). Antagonista CB1. 
 SR144825 (SANOFI, París. Francia). Antagonista CB2. 
 TOXINA PERTUSSIS (Research Biochemicals International, MA. USA.) 

Bloqueante de proteinas G 
 WIN 55,212-2 (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. España). 

Agonista CB1/CB2. 
 
Reactivos habituales de laboratorio (Solución fisiológica de Krebs). 



  Material y Métodos 
 
 

 63 

 

1.1.2 Preparación de la Solución Fisiológica de Krebs 
 

Para llevar a cabo los experimentos, se utilizó solución de Krebs, 

preparada según las modificaciones de Henseleit (Krebs y Henseleit, 1932), 

que se preparó como se describe a continuación: 

 

- 2 gramos de glucosa 

- 2 gramos de bicarbonato 

- 84 ml de solución Krebs “madre” 

- cantidad suficiente de agua destilada para enrrasar a 1 litro. 

 

Se agita hasta obtener una solución homogénea con la siguiente 

composición: 

 

- Sodio.............143.3 mM 

- Potasio............. 5.9 mM 

- Calcio............... 2.7 mM 

- Magnesio......... 1.2 mM 

- Cloro............ 128.3 mM 

- Fosfato............ 2.2 mM 

- Bicarbonato... 24.9 mM 

- Sulfato............. 1.2 mM 

- Glucosa......... 11.0 mM 

 

 

 

1.1.3 Disolución de los fármacos 
 



  Material y Métodos 
 
 

 64 

A Disolución de cannabinoides 
 

 Debido a la escasa solubilidad de los cannabinoides, la disolución de 

todos los fármacos se realizó, siguiendo la técnica descrita por Pertwee en 

1992. Pero al observar que el Tween 80 a la dosis utilizada dañaba el endotelio 

de las preparaciones de arteria aorta de rata se procedió a disolverlos según la 

siguiente técnica: 

 En primer lugar se prepara una solución madre etanólica que recibe el 

nombre de solución stock y debe mantenerse congelada y protegida de la luz. 

 

Se elimina el etanol por evaporación ( calentando a 37ºC y a vacio) y se 

dispersa en una solución de DMSO al 0,5%, para conseguir una disolución 

madre de molaridad 10-2. Para asegurar que la dispersión sea homogenea, la 

solución de DMSO 0.5% se va añadiendo en una serie de alicuotas de volumen 

creciente, la mezcla se irá agitando en vortex entre cada adición de las 

alicuotas. 

La dispersión se prepara diariamente y se mantiene protegida de la luz. 

Los experimentos control, para comprobar que el vehículo es inerte, se 

hacen con una disolución de DMSO 0,5%. 

 

B Disolución de antagonistas 
Los compuestos L-NAME, CGRP 8-37, fenilefrina, carbacol, toxina 

pertussis, charibdotoxina y apamina se disolvieron en agua. Mientras que los 

compuestos SR141716A, SR144528, indometacina, capsaicina, capsazepina, 

PMSF, AM404 y 17-ODYA se disolvieron en etanol absoluto. 

 
 
 



  Material y Métodos 
 
 

 65 

1.2 APARATOS 
 

1.2.1  Baño de órganos y sistema de registro de contractilidad vascular 
Para realizar el montaje de las preparaciones, se utilizó un baño de 

órganos formado por una copa de vidrio con capacidad para 10 ml, con una 

toma conectada a una bomba de gas carbógeno (95% O2 y 5% CO2) y a un 

termostato que mantiene una temperatura constante, en el baño, de 37 ºC 

(figura 13). 

El sistema se conectó a dos soportes y estos a su vez a un transductor 

isométrico.  

 

1.2.2 Sistema de registro de contractilidad vascular 
 

La actividad contráctil de las preparaciones se registró mediante 

transductores fuerza-desplazamiento (Grass FT03; Yokogana 3021), 

conectados a dos polígrafos de dos canales cada uno (Omniscribe serie D-

5000 y Linseis modelo L 6512). Otro sistema de registro utilizado fue un 

sistema informático acoplado al programa MacLab/4e (paquete informático 

Chart v3.4). 

 

1.3 ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN 
 

Se utilizaron ratas Wistar macho, con peso comprendido entre 250-300g 

procedentes del Animalario de la U.C.M. (ANUC). 



  Material y Métodos 
 
 

 66 

GAS 
CARBÓGENO

PREPARACIÓN  

SOLUCIÓN 
KREBS 

TRANSDUCTOR 
ISOMÉTRICO 

ELECTRODOS 
DE PLATINO 

Figura 13.  Esquema del montaje de las preparaciones en el baño de órganos. 



  Material y Métodos 
 
 

 67 

 

1.4 MÉTODOS 
 

1.4.1  Obtención de las preparaciones 
 

A Aislamiento de anillos de aorta de rata 
 

Después del sacrificio del animal se procedió a la disección y extracción de 

la arteria aorta torácica. Se accedió a ella por disección de la piel y de la 

musculatura torácica. A continuación se identificó la aorta descencente, se limpió 

y se extrajo, introduciéndola inmediatamente en una placa Petri que contiene 

una solución de Krebs bicarbonato frío. 

Se eliminaron tejido conectivo y graso y una vez limpio, se procedió a cortar 

las arterias en anillos de 0,3 cm aproximadamente. En el caso de los 

experimentos sin endotelio, este se eliminó por raspado de la pared interior de la 

arteria. 

Los anillos de aorta se suspendieron entre dos soportes de acero y se 

introdujeron en un baño de órganos sometiéndolas a una tensión de 2 g. Se 

estabilizaron durante 1 h. 

 

1.4.2 Protocolo experimental  
 

A Preparaciones de aorta de rata  
 

Una vez estabilizadas las preparaciones, se comprobó la respuesta al 

efecto vasoconstrictor de fenilefrina.a una dosis de 1 µM, que fue establecida 

previamente en este trabajo y que mantiene la contracción durante todo el 

tiempo que dura el experimento, para comprobar la presencia de endotelio se 

empleó carbacol 10 µM. Se desecharon todas las preparaciones que 



  Material y Métodos 
 
 

 68 

presentaran una relajación menor de 50%. En los experimentos en los cuales 

se eliminó el endotelio se rechazaron aquellas con una relajación ≥10%. 

Una vez que la contracción llegó al acmé, se añadieron al baño dosis 

crecientes de los agonistas (10-9M-10-4M) hasta construir la curva 

concentración-respuesta. Estos experimentos se llevaron a cabo en arterias 

con y sin endotelio.  

Al comprobar que los cannabinoides carecían de efecto en ausencia de 

endotelio, el resto de los experimentos se realizaron en arterias con endotelio 

intacto. 

 

 
 
Fig.16  Representación de un experimento mostrando los pasos seguidos en una 

preparación de aorta de rata. 

 

Cuando las curvas se construyeron en presencia de antagonistas estos se 

añadieron al baño antes que la fenilefrina a distintos tiempos dependiendo del 

compuesto (Tabla 2). 

Los resultados se presentan como % del efecto máximo inducido por R(+)-

metanandamida o WIN 55212-2. 

 

 

 Cannabinoide (10-9-10-4M) 

Fenilefrina 



  Material y Métodos 
 
 

 69 

ANTAGONISTA DOSIS 
TIEMPO 

INCUBACIÓN 
(min) 

AGONISTA 

AM404 10 µM 30 Metanandamida 

CAPSAZEPINA 100 nM 30 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

CAPSAICINA 10 µM 60 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

CHARIBDOTOXINA + 

APAMINA 
100nM 15 

Metanandamida 

Win 55,212-2 

INDOMETACINA 50 µM 15 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

L-NAME 100 µM; 10 µM 30 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

PMSF 200 µM, 100 µM 30 Metanandamida 

PTX 300ng/ml 180 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

SR141716A 
1 µM, 3 µM, 6 

µM 
15 

Metanandamida 

Win 55,212-2 

SR144528 
1 µM, 3 µM, 6 

µM 
15 

Metanandamida 

Win 55,212-2 

SR141716A+SR144528 1 µM 15 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

CGRP 8-37  3 µM 30 
Metanandamida 

Win 55,212-2 

17-ODYA 5 mM 30 Metanandamida 

 

Tabla 2. Grupos experimentales, dosis y tiempo de incubación de los 

antagonistas 



  Material y Métodos 
 
 

 70 

 

2 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA DE NUEVOS 
CANNABINOIDES 
 

2.1 ENSAYOS IN VITRO : CONDUCTO DEFERENTE DE RATÓN 
 

2.1.1 Material 
 

A Fármacos y reactivos utilizados. 
 

 AM 251(TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. España). 

Antagonista CB1. 

 ANANDAMIDA (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. España). 

Agonista CB1. 

 SR141716A (SR) (SANOFI, París. Francia). Antagonista CB1. 
 WIN 55,212-2 (Win) (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. 

España). Agonista CB1/CB2. 

 

Nuevos compuestos cannabinoides sintetizados por el equipo de Química 

Médica del CSIC denominados LHs.:  
LH 1.21 
LH 1.11  
LH 1.20 
LH 304 

LH 1.10a 

LH 1.16 

LH 1.22 

LH 1.29 

LH 214 

LH 39 

LH 36a 

LH 30a 

LH 28a 

LH 25a 

LH 31a 

LH 40 

LH 27 

LH 318 



 
  Material y Métodos 
 

 72 

 

I Disolución de los Fármacos Cannabinoides 
 
 Debido a la escasa solubilidad de los cannabinoides, la disolución de 

todos los fármacos se realizó, siguiendo la técnica descrita por Pertwee en 1992, y 

que a continuación se describe: 

 En primer lugar se prepara una solución madre etanólica de 

molaridad 10-2 que recibe el nombre de solución stock y debe mantenerse 

congelada y protegida de la luz. 

Una alicuota de esta disolución stock alcohólica se mezcla con dos partes 

(peso/peso) de Tween 80, se elimina el etanol por evaporación (calentando a 37ºC 

y sometiendo al vacio) y se dispersa en solución salina para obtener un mililitro de 

la disolución. Para asegurar que la dispersión sea homogenea, la solución salina 

se va añadiendo en una serie de alicuotas de volumen creciente (50 µl x 2, 100 µl 

x 2, 200 µl y 500 µl), la mezcla se irá agitando en vortex entre cada adición de las 

alicuotas. 

Esta dispersión se puede disolver de manera seriada. Estas disoluciónes 

pueden hacerse mezclando como máximo una parte (volumen) de la dispersión 

con nueve partes (volumenes) de solución salina. 

La dispersión se prepara diariamente y se mantiene protegida de la luz. 

Los experimentos control, para comprobar que el vehículo es inerte, se 

hacen con Tween 80. 

 

 

 
 
 



 
  Material y Métodos 
 

 73 

B Aparatos 
 

I Baño de órganos 
Para realizar el montaje de las preparaciones de conducto deferente de 

ratón y el registro de la contractilidad se utilizó el mismo sistema que en los 

ensayos de arterias aortas aisladas de rata.  

Este se conectó a dos electrodos de platino en forma de anillo y este a su 

vez a un transductor isométrico.  

 

C Animales de experimentación 
 

Se utilizaron ratones CD-1 macho, con peso comprendido entre 25-30g 

procedentes del Animalario de la U.C.M. (ANUC). 

 

2.1.2 Métodos 
 

A Obtención de las preparaciones 
 

I Aislamiento de la preparación conducto deferente de ratón 
 

 Se utilizaron ratones CD-1, de 25 a 30 g. de peso, que fueron 

sacrificados mediante sección del paquete vásculo-nervioso del cuello y de la 

columna vertebral. Tras la disección de la piel y de la musculatura de la pared 

anterior del abdomen, se aislaron los conductos deferentes, y se mantuvieron en 

solución Krebs para su conservación. A continuación, se separaron y se retiraron 

los vasos que acompañan a cada deferente, para el mejor funcionamiento 

posterior del mismo, y se ataron los dos extremos con sendos hilos para su 

posterior montaje en un baño de órganos (Hughes y col., 1975). 



 
  Material y Métodos 
 

 74 

II Montaje de las preparaciones 
 

Para realizar el montaje de las preparaciones, se utilizó un baño de órganos 

formado por una copa de vidrio con capacidad para 10 ml., que se llenó con 5 ml. 

de solución Krebs, se burbujeó con gas carbógeno (95% O2 y 5% CO2) y se 

mantuvo a una temperatura en el baño de 37 ºC. 

 

 El sistema de estimulación eléctrica está formado por dos 

electrodos de platino en forma de anillo, conectados a un transductor isométrico y 

a un estimulador. La preparación se fija por un extremo al anillo inferior y se pasa 

por el interior del anillo superior fijando el extremo libre a un transductor 

isométrico, con una tensión basal de 0.5 gr y un tiempo de reposo o estabilización 

para las mismas de 45 min.  

 En la estimulación eléctrica de las preparaciones, se empleó un 

estimulador Cibertec CS-20 acoplado a un MacLab/4e (paquete informático Chart 

v 3.4). Se emplearon trenes de estímulos (frecuencia de 15 Hz., duración de 0.2 

ms. y voltaje supramaximal), de 1 seg. de duración, repetidos a intervalos libres de 

estimulación de 1 min. 



 
  Material y Métodos 
 

 75 

 

B Protocolo experimental 
 
Transcurrido el período de estabilización de las preparaciones, se comprobó la 

funcionalidad de las mismas mediante su estimulación eléctrica. Se desecharon 

aquellas preparaciones cuya respuesta contráctil era menor de 0.25 gr. Cada 

preparación se utilizó para la realización de un sólo experimento. 

 

I Valoración de la actividad farmacológica de los nuevos compuestos. 
 
Para la caracterización in vitro de la actividad farmacológica de los nuevos 

cannabinoides sintetizados, se llevaron a cabo ensayos sobre la preparacion de 

conducto deferente de ratón, que presenta receptores de cannabinoides del 

subtipo CB1. En este tipo de preparaciones las sustancias de naturaleza agonista 

cannabinoide presentan la capacidad de inhibir las contracciones inducidas 

eléctricamente. 

Una vez que las preparaciones presentaron una respuesta contráctil 

estable, se realizaron curvas concentración-respuesta, siguiendo el siguiente 

protocolo: 

Se estimulan las preparaciones durante 5 minutos, se lava la preparación y 

se deja estabilizar 10 minutos, se repite dos veces y se estimulan por tercera vez 

obteniendose la contracción que tomamos como basal. Se lava la preparación y 

se añade el compuesto a estudiar a concentraciones crecientes de 2,7x10-8M a 10-

6M para los agonistas, se deja incubar durante 10 minutos pasados los cuales se 

procede a estimular durante un periodo de 5 minutos, estos periodos de 

incubación, estimulación y lavado se repiten hasta haber terminado de construir la 

curva concentración-respuesta. 



 
  Material y Métodos 
 

 76 

Cuando se utilizaron antagonistas las dosis fueron de 10-6, 10-7 y 10-8 M 

cuando fuera necesario. 

BASAL

5 min 10 min

lavado

Agonista

5 min 10 min

lavado

Agonista

5 min 10 min

lavado

5 min 10 min

lavado

Agonista

BASAL

5 min 10 min

lavado

5 min 10 min

lavado

Agonista
Antagonista

Agonista
Antagonista

5 min 10 min

lavado lavado

5 min 10 min

Agonista
Antagonista

 
Fig.14: Esquema del protocolo experimental  
 

Solo aquellos compuestos LH que fueron capaces de bloquear el efecto de 

una concentración 10-6M de Win 55,212-2 añadida al final de cada curva, fueron 

probados como antagonistas construyendo curvas acumulativas de agonista en 

presencia de una dosis 10-6M de los LHs. Las dosis ensayadas de agonistas y 

antagonistas se recogen en la tabla 3.  



 
  Material y Métodos 
 

 77 

 

GRUPO 
AGONISTA 

(concentración molar) 
ANTAGONISTA 

(concentración molar) 

1 WIN 55,212-2      (2,7x10-8 - 10-6) AM251         (10-6, 10-7, 10-8) 

2 WIN 55,212-2      (2,7x10-8 - 10-6) SR141716A  (10-6, 10-7, 10-8) 

3 WIN 55,212-2      (2,7x10-8 - 10-6) LH 1.21        ( 10-6, 10-7) 

4 WIN 55,212-2      (2,7x10-8 - 10-6) LH1.11         (10-6, 10-7) 

5 WIN 55,212-2      (2,7x10-8 - 10-6) LH 1.20        (10-6, 10-7) 

6 ANANDAMIDA     (2,7x10-8 - 10-6) AM251         (10-6, 10-7) 

7 ANANDAMIDA     (2.7 x 10-8 - 10-6) SR141716A  (10-6, 10-7) 

8 ANANDAMIDA     (2.7 x 10-8 - 10-6) LH 1.21        (10-6, 10-7) 

9 ANANDAMIDA     (2.7 x 10-8 - 10-6)              LH1.11         (10-6) 

10 ANANDAMIDA     (2.7 x 10-8 - 10-6)             LH 1.20        (10-6) 

 



 
  Material y Métodos 
 

 78 

 

2.2 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA (IN VIVO). 
 

2.2.1 Material 
 

A Fármacos y reactivos utilizados. 
 

Los fármacos utilizados fueron los siguientes: 
 

 5-(4-Clorofenil)-1-(2,4-diclorofenil)-3-hexil-1H-1,2,4-triazol (LH 1.21) 
 SR141716A (SR) (SANOFI, París. Francia). Antagonista CB1. 
 WIN 55,212-2 (WIN) (TOCRIS, Biogen Científica S.L. Madrid. 

España). Agonista CB1/CB2. 

 

Estos compuestos fueron disueltos siguiendo el protocolo de disolución de 

cannabinoides descrito por Pertwee (1992), ya explicado en el punto 1.1.3.A. 

 

B Condiciones experimentales. 
 

Para este trabajo se han utilizado ratones CD1 macho con peso 

comprendido entre 25-30g. suministrados por Harlam Ibérica de Barcelona. Los 

animales fueron mantenidos en jaulas, en grupos de 10, disponiendo de comida y 

agua “ad libitum”. Los experimentos se realizaron 3 ó 4 días después de su 

llegada para facilitar la adaptación de los ratones a las condiciones ambientales 

del laboratorio. Se observó el comportamiento espontáneo antes y/o durante la 

realización de los distintos test. Aquellos roedores que mostraban anomalías del 

comportamiento eran descartados. Todos los experimentos se realizaron siempre 

a las mismas horas (entre las 9:00h y las 14h). 



 
  Material y Métodos 
 

 79 

 

2.2.2 Métodos 
 

A Tétrada. 
La clásica tétrada cannabinoide evalúa temperatura, nocicepción, catalepsia 

y actividad locomotora Para determinar estos parámetros, se utilizaron los 

siguientes test: 

 

I TEMPERATURA: 
 

La temperatura corporal del ratón se midió usando un termómetro P6 y una 

sonda rectal lubricada (CIBERTEC, España). La temperatura fue evaluada en 

cada animal antes y después de cada tratamiento. 

 

II NOCICEPCIÓN: 
 

La valoración de la nocicepción fue realizada con el test de la placa 

caliente, cuyo soporte físico lo constituye una placa metálica mantenida a una 

temperatura constante de 55 ºC mediante la circulación de agua caliente por su 

interior. El tiempo (seg) que tarda el animal en lamerse las patas delanteras fue 

tomado como índice de nocicepción. Si transcurridos 30 segundos el animal no se 

había lamido las patas delanteras, era retirado de la placa para evitar daño tisular 

(tiempo de corte). La latencia fue medida antes del tratamiento, (tiempo control, 

TC), y 15 minutos después de cada tratamiento (tiempo latencia, TL), y la 

analgesia fue valorada según la fórmula del máximo efecto posible (M.E.P.).  

 

 

 

TL - TC 

30 - TC 

X 100 
 
         M.E.P.(%)= 



 
  Material y Métodos 
 

 80 

 

III CATALEPSIA: 
 

La catalepsia fue medida realizando el  test del anillo (“ring test”), similar al 

descrito por Pertwee en 1972 . El sistema consiste en un anillo de metal (6 cm de 

diámetro), fijado de forma horizontal y suspendido a una altura de 20 cm del suelo. 

Los agonistas cannabinoides CB1 producen catalepsia al animal. Los ratones 

fueron colocados en el anillo y observados durante un periodo de 5 minutos. Se 

valoró el tiempo total (seg) de inmovilidad. 

 

IV ACTIVIDAD LOCOMOTORA:  
La actividad locomotora espontánea fue evaluada con un actímetro 

(CIBERTEC, España), que consiste en unas cámaras individuales con células 

fotoeléctricas. Los ratones fueron colocados en las cámaras y la movilidad 

espontánea fue medida como el número de cruces o cortes del campo 

fotoeléctrico durante 30 minutos.  



 
  Material y Métodos 
 

 81 

B Protocolo experimental 
 

Los animales fueron separados en grupos de 10 ratones. Los tratamientos 

administrados (vía i.p.) y el protocolo seguido fueron los siguientes: 
 Solución salina o vehículo (grupo control). 

 WIN (1.5 mg/Kg).  

 LH1.21  (0.25, 0.50, 1 y 5 mg/Kg). 

 LH1.21 (0.25, 0.50, 1 mg/Kg) + WIN (1.5 mg/Kg). 

 SR 141716 A (1 y 5 mg/Kg) . 

 SR 141716 A (1mg/Kg) + WIN (1.5 mg/Kg).  

 
 

 

 

 

 

 
 
 
Fig. 15. Protocolo experimental 

25 min. 5 min 15 min. 30 min.5 min 5 min

Tª Tª Agonista/vehíc. Tª Actímetro 

Antagonista/vehíc. Anillo Placa 
caliente 

Placa 
caliente 



 
  Material y Métodos 
 

 82 

1 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS 
 

Los resultados se presentan como la media de los valores obtenidos ± el 

error estándar de la media (E.E.M.) de 5 a 10 resultados para los experimentos in 

vitro y de 8 a 10 animales para los experimentos in vivo. Los datos fueron 

estadísticamente analizados mediante el programa informático Prisma 2.1., 

utilizando un análisis de la varianza (ANOVA) de una o dos vías según se 

considere más adecuado, seguido, cuando es necesario, de un test post Hoc 

(Newman-Keuls o Bonferroni). 

 

Se ha considerado una diferencia estadísticamente significativa a partir de 

una probabilidad de p<0.05. 

 

 



   

1 MECANISMO DE ACCIÓN VASODILATADOR DE R(+)-
METANANDAMIDA Y WIN 55,212-2 EN ANILLOS DE 
ARTERIA AORTA DE RATA. 

1.1 Efecto de DMSO 0.5%  
 

En primer lugar se comprobó que el solvente utilizado para disolver 

los compuestos cannabinoides (DMSO 0,5%) no producía ningún efecto sobre 

las aortas, tanto sobre la basal como precontraídas con fenilefrina 10-6M, ni la 

vasorrelajación inducida por carbacol. (Fig. 17). 

 

-9 -8 -7 -6 -5 -4
0

25

50

75

100
Tiempo   (+E)

DMSO 0,5% (+E)

Log[M]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
Fig. 17. Efecto de DMSO 0,5% y tiempo sobre la contracción inducida por 

fenilefrina 1µM en aorta aislada de rata. 

 

1.2 Efecto de R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 sobre arteria 
aorta de rata precontraída con fenilefrina. 

 

Como muestra la fig 18 (A), la R(+)-metanandamida  produjo una relajación 

concentración-dependiente de los anillos intactos de aorta de rata 

precontraídas con FE, con una respuesta máxima (Rmax) de 71.04% ± 4.7 

(n=6). La figura 18 (B) muestra que el WIN 55,212-2 también produjo una 

relajación concentración-dependiente. Este efecto vasorrelajante fue 

significativamente menor que el producido por R(+)-metanandamida con una 

Rmax de 52,87% ± 6.2% (n=17). En ambos casos la relajación fue gradual y 

alcanzó el acmé a los 7-10 min. En las figuras se observa que tras la 



   

eliminación del endotelio no hay respuesta vasodilatadora a los agonistas 

cannabionoides: R(+)-metanandamida  con una Rmax de 10.94% ± 1.85% (n=6), 

y WIN 55,212-2 con una Rmax de 17.58% ± 1.8% (n=6). Ambas Rmax son 

similares a las obtenidas con el vehículo, DMSO 0.5%, (Rmax de 17.39% ± 

4.98%). 

  A) 
Metanandamida

-9 -8 -7 -6 -5 -4
0

25

50

75

100
Metanandamida(+E)
Metanandamida (-E)

log[Molar]

%
R

el
aj

ac
ió

n ***

 

  B) 
Win 55,212-2

-9 -8 -7 -6 -5 -4
0

25

50

75

100
Win 55,212-2(+E)
Win55,212-2(-E)

log[Molar]

%
R

el
ax

at
io

n

***

 
Fig. 18. Efecto de  R(+)-metanandamida (A) (n = 6) y Win 55,212-2 (n = 17) (B) sobre 

la contracción inducida por fenilefrina 1µM en aorta aislada de rata. (+ E = endotelio 

intacto; - E = sin endotelio). Los datos se presentan como la media ± error estándar de 

la media  *** p<0,001 

 

Con la finalidad de estudiar el mecanismo de acción de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 se procedió a bloquear con inhibidores de los 

diferentes mecanismos vasodilatadores dependientes de endotelio, utilizando 



   

siempre preparaciones con endotelio intacto, obteniéndose los valores de Rmax 

. Para facilitar la comparación entre los dos agonistas los resultados se 

presentan como % de las respectivas Rmax obtenidas en preparaciones control 

(Tabla 4). 

 

Metanandamida Win 55,212-2 
Antagonista 

%R max ± e.e.m. %R max ± e.e.m. 

L-NAME 100 µM 16.21±2.88 26.95±3.88 

L-NAME 10 µM 16.27±1.32 19.16±4.21 

PTX 300 ng/ml 27.43±4.99 48.70±3.64 

Capsaicina 10µM 36.66±5.00 57.69±7.85 

SR141716A 1µM 44.84±6.11 84.08±6.03 

SR141716A 3 µM 43.20±6.44 77.43±2.53 

SR141716A 6 µM 39.19±5.28 81.80±10.91 

SR144528 1 µM 59.25±7.03 98.72±7.56 

SR144528 3 µM 59.10±11.79 101.64±7.59 

SR144528 6 µM 56.25±8.06 75.80±9.07 

SR141716A 1 µM + 
SR144528 1 µM 30.87±1.55 76.46±3.96 

Capsazepina 100 nM 43.97±6.42 49.25±8.27 

CGRP 8-37 3 µM 57.20±7.08 56.99±4.14 

Indometacina 50 µM 66.99±9.29 99.16±9.91 

Charibdotoxina+Apamina
100 nM 98.75±11.68 101.05±7.28 



   

AM404 10 µM 74.24±4.94 --------------- 

PMSF 200 µM 53.65±5.04 --------------- 

PMSF 100 µM 47.01±3.28 --------------- 

17-ODYA 5mM 82.93±7.61 --------------- 

 
Tabla 4. % Rmax de los cannabinoides en presencia de los inhibidores del 

mecanismo de acción 

 

En ausencia de agonistas, ninguno de los inhibidores del mecanismo de 

acción ensayados produjo efectos, ni sobre la basal, ni sobre la contracción 

inducida por fenilefrina 10-6M, ni sobre la vasorrelajación inducida por carbacol.  



   

1.3 Efecto de toxina pertussis  
 

La incubación de los anillos de aorta de rata con toxina pertussis (300 ng/ml) 

durante 3 horas abolió completamente la vasorrelajación causada por R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 (tabla 4) lo que sugiere la implicación de 

receptores acoplados a proteínas Gi/o (Figura 19 ).  

 

  A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
PTX 300ng/ml

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

  B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
PTX 300 ng/ml

***

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 19. Efecto vasorrelajante de R(+)-metanandamida (n = 6) (A) y Win55,212-2 (n = 

6) (B) en arteria aorta de rata en presencia y ausencia de toxina pertussis (300ng/ml). 

Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

 

 

 

 



   

1.4  Efecto de L-NAME  
 

Cuando las arterias fueron pretratadas con el inhibidor de la óxido nítrico 

sintasa NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) (100 y 10 µM), durante 30 

minutos, el efecto de R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 fue completamente 

abolido (tabla 4), indicando la importancia del NO endotelial en la 

vasorrelajación producida por R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2. (figura 

20). 

 

  A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
L-NAME 100 µM
L-NAME 10 µM

******

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

  B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
L-NAME 100 µM
L-NAME 10 µM

***
***

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 20. Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (A) (n = 4-5) y 

Win 55,212-2 (B) (n = 4-6) en presencia de L-NAME (10 y 100 µM). Los datos se 

presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

 



   

1.5  Efecto de INDOMETACINA  
 

La incubación de los anillos de aorta de rata con el inhibidor de la 

ciclooxigenasa Indometacina (50 µM) durante 15 min inhibió parcial y 

significativamente el efecto de R(+)-metanandamida (tabla 4). Sin embargo, no 

afectó a la vasorrelajación causada por WIN 55,212-2 (tabla 4), indicando la 

implicación de derivados de ciclooxigenasa en la vasorrelajación causada por 

R(+)-metanandamida. (Figura 21). 

 

  A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
INDOMETACINA 50 µM

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

  B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
INDOMETACINA 50 µM

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 21. Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (A) (n = 9) y 

Win 55,212-2 (B) (n = 9) en presencia de Indometacina (50 µM). Los datos se 

presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

 



   

1.6 Efecto de SR141716A, SR144528 y ambos asociados en bolo  
 
La incubación de los anillos de aorta de rata con SR141716A (1, 3 y 6 µM) 

durante 15 min, produjo una inhibición significativa de la vasorrelajación 

inducida por R(+)-metanandamida a todas las concentraciones estudiadas 

(tabla 4). No se encontraron diferencias significativas entre la inhibición del 

efecto causada por las 3 concentraciones estudiadas (Figura 22). En el caso de 

WIN 55,212-2 ninguna de las concentraciones estudiadas produjo una 

significativa inhibición de la vasorrelajación (tabla 4)(Figura 22). 

A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
SR141716A 1 µM
SR141716A 3 µM
SR141716A 6 µM******

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

  B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
SR141716A 1 µM
SR141716A 3 µM
SR141716A 6 µM

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
Fig. 22. Efecto vasorrelajante de R(+)-metanandamida (A) (n = 6-7) y Win55,212-2 (B) 

(n = 5-8) en arteria aorta de rata en presencia y ausencia de SR141716A (1, 3, 6 µM). 

Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

 

 

 



   

La incubación de los anillos de aorta de rata con las tres concentraciones de 

SR144528 (1, 3 y 6 µM) durante 15 min produjo una inhibición significativa de 

la vasorrelajación producida por R(+)-metanandamida (tabla 4). No hubo 

diferencias significativas entre la magnitud de la inhibición producida por las 

diferentes concentraciones utilizadas (1, 3 y 6µM) (Figura 23).  

La vasorrelajación producida por WIN 55,212-2 solo fue inhibida 

significativamente por la incubación durante 15 min con SR144528 a la 

concentración de 6µM (tabla 4) (Figura 23).  

 

  A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
SR144528 1 µM
SR144528 3 µM
SR144528 6 µM*********

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
SR144528 1 µM
SR144528 3 µM
SR144528 6 µM

***

Log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 23. Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (A) (n = 5-7) y 

Win 55,212-2 (B) (n = 4-9) en presencia de SR144528 (1, 3, 6 µM). Los datos se 

presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

 

Con objeto de valorar un efecto sinérgico entre ambos antagonistas se evaluó 

el efecto de la combinación de ambos SR141716A y SR144528, utilizándose 



   

solamente las concentraciones mas bajas (1µM). En presencia de ambos 

antagonistas la vasorrelajación producida por R(+)-metanandamida fue 

completamente bloqueada, resultando los valores de Rmax mas bajos que los 

obtenidos con ambos antagonistas por separado (tabla 4), y similares a los 

obtenidos con vehículo (figura 24).  

En presencia de ambos antagonistas se produjo una inhibición significativa de 

la vasorrelajación inducida por WIN 55,212-2 (tabla 4) que fué similar a la 

producida por SR144528 a la concentración de 6µM. (figura 24). 

  A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
SR141716A+SR144528

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2

SR141716A+SR144528

**

Log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 24. Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (A) (n = 6) y 

Win 55,212-2 (B) (n = 5) en presencia de SR141716A + SR144528 (1 µM). Los datos 

se presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

1.7  Efecto de capsazepina 
 



   

Cuando las arterias fueron pretratadas con el antagonista de los receptores 

VR1, capsazepina (100 nM), durante 30 minutos, el efecto de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 fué parcial y significativamente inhibido, (tabla 

4), indicando la implicación de receptores vanilloides (figura 25). 

 

A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
CAPSAZEPINA 100 nM

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
CAPSAZEPINA 100 nM

***

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 25. Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (A) (n = 8) y 

Win 55,212-2 (B) (n = 6) en presencia de Capsazepina (100 nM). Los datos se 

presentan como la media ± error estándar de la media *** p<0,001 

 

 

 

1.8 Efecto de la desensibilización con capsaicina 
 



   

Para comprobar la implicación de receptores vanilloides, se incubaron los 

anillos de aorta de rata con capsaicina (10 µM) durante 1 hora, lo que produjo 

una inhibición parcial y estadísticamente significativa, de la vasorrelajación 

causada por R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 (tabla 4) (Figura 26). 

 

A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
CAPSAICINA 10µM

***

log[Metanandamida]  
 

B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
CAPSAICINA 10µM

***

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 26. Efecto del pretratamiento con capsaicina (10 µM) sobre las respuestas 

inducidas por R(+)-metanandamida (A) (n = 5) y Win 55,212-2 (B) (n = 7) en arteria 

aorta de rata. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media *** 

p<0,001 

 

 

1.9 Efecto de CGRP 8-37 
 



   

Debido a que la activación de receptores vanilloides conlleva la liberación de 

CGRP, se bloqueó el receptor (CGRP1) de este péptido con el antagonista 

CGRP 8-37 de rata. Se incubaron los anillos de aorta de rata con CGRP 7-38 

(3 µM) durante 30 min, lo que produjo una inhibición parcial y estadísticamente 

significativa, de la vasorrelajación causada por R(+)-metanandamida y WIN 

55,212-2 (tabla 4) (Figura 27 ). Esto corrobora la implicación de los receptores 

vanilloides en la vasorrelajación producida por estos cannabinoides en arteria 

aorta de rata. 

A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
CGRP 8-37

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2

CGRP 8-37 3 µM

***

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
Fig. 27. Efecto del pretratamiento con CGRP8-37 (3 µM) sobre las respuestas 

inducidas por R(+)-metanandamida (A) (n = 7) y Win 55,212-2 (B) (n = 6) en arteria 

aorta de rata. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media  

*** p<0,001 

 

1.10 Efecto de charibdotoxina y apamina 
 



   

Cuando las arterias fueron pretratadas con la mezcla de toxinas, charibdotoxina 

(100 nM) y apamina (100 nM), durante 15 minutos, no se afectó la 

vasorrelajación causada por R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 (tabla 4), 

descartando la implicación del EDHF en este efecto(figura 28). 

A) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
CHTX+APA 100 nM

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 

B) 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Win 55,212-2
CHTX+APA 100 nM

log[Win 55,212-2]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

Fig. 28. Efecto del pretratamiento con charibdotoxina y apamina (100 nM) sobre las 

respuestas inducidas por R(+)-metanandamida (A) (n = 8) y Win 55,212-2 (B) (n = 6)  

en arteria aorta de rata. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la 

media *** p<0,001 

 

 

 

 

1.11  Efecto de PMSF 
 



   

La incubación de los anillos de aorta de rata con el inhibidor de la FAAH , 

PMSF (200 µM y 100 µM), durante 30 min inhibió parcial y significativamente el 

efecto de R(+)-metanandamida (tabla 4). No se encontraron diferencias 

significativas entre la inhibición del efecto causada por las 2 concentraciones 

estudiadas (Figura 29). De estos resultados se puede deducir la implicación de 

metabolitos de R(+)-metanandamida en su efecto vasodilatador. 

 
 
 

 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida

PMSF 200 µM
PMSF 100 µM***

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 
 
Fig. 29 Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (n = 6-7) en 

presencia de PMSF (200 y 100 µM). Los datos se presentan como la media ± error 

estándar de la media*** p<0,001 
 

 
 
 
 
 
 



   

 

1.12  Efecto de AM404 
 

Cuando las arterias fueron pretratadas con el inhibidor del transportador de 

anandamida, AM404 (10 µM), se produjo una leve (tabla 4), pero significativa, 

inhibición de la vasorrelajación producida por R(+)-metanandamida. (figura 30.).  

 

 

 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
AM404 10 µM

***

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

 
 

 
 
 
Fig. 30 Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (n = 10) en 

presencia de AM404 (10 µM). Los datos se presentan como la media ± error estándar 

de la media *** p<0,001 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



   

1.13 Efecto de 17-ODYA 
 

Cuando las arterias fueron pretratadas con el inhibidor inespecífico de CYP450 

monoxigenasas, durante 30 minutos, no se afectó la vasorrelajación causada 

por R(+)-metanandamida (tabla 4), descartando la implicación de los 

metabolitos producidos por este enzima en la vasorrelajación producida por 

R(+)-metanandamida (figura 31). 

 

-10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3

0

20

40

60

80

100

120

Metanandamida
17-ODYA  5mM

log[Metanandamida]

%
 R

el
aj

ac
ió

n

**

 
 

 

 

 
Fig. 31 Inhibición de la respuesta vasorrelajante a R(+)-metanandamida (n = 15) en 

presencia de 17-ODYA (5 mM). Los datos se presentan como la media ± error 

estándar de la media *** p<0,001 



   

 

2 ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD DE LOS NUEVOS 
COMPUESTOS SOBRE LA PREPARACION DE 
CONDUCTO DEFERENTE DE RATON. 

 

En los ensayos llevados a cabo con las nuevas moléculas LH1.11,  

LH1.20 y LH1.21 en la preparación conducto deferente de ratón, se pudo 

observar que estos compuestos producían un bloqueo de la inhibición 

concentración-dependiente de la respuesta contráctil producida por los 

agonistas cannabinoides Win 55,212-2 y anandamida. 

 

Ha sido estudiada la capacidad de cada uno de los compuestos, tanto los 

antagonistas de referencia SR141716A y AM251, como los nuevos LHs, para 

antagonizar la inhibición concentración-dependiente de la respuesta contráctil 

producida por los agonistas cannabinoides Win 55,212-2 y Anandamida. Los 

resultados obtenidos en cada grupo de preparaciones se exponen a 

continuación. 

 

En abscisas se detallan las concentraciones molares utilizadas del 

agonista y en ordenadas el porcentaje de inhibición de la respuesta contractil 

de la preparación, respecto a la que esta presentaba en el primer periodo 

(5min) de estimulación, justo antes del comienzo de la realización de la curva 

concentración-respuesta (media ± E.E.M.). 

 



   

2.1 Efecto de Win 55,212-2  
 
 

En las figuras se muestra el efecto del agonista Win 55,212-2 en ausencia 

y en presencia de distintas concentraciones, tanto de los antagonistas de 

referencia, como de los nuevos compuestos estudiados. 

 

Win 55,212-2

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

Concentración Molar

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Win 55,212-2

 

 

 

Fig. 32. Efecto inhibitorio de Win 55,212-2 (n =6) sobre la respuesta contractil de la 

preparación de conducto deferente de ratón. Los datos se presentan como la media ± 

error estándar de la media * p<0,05 

 

 

 

 

 

 

 

 

* 



   

2.2 Efecto inhibitorio de AM251 

AM251

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

WIN 55,212-2

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
AM25110-6M
AM25110-7M

 

Figura 33 Efecto inhibitorio de AM251 ( n= 5-8 ) a concentración 10-6M, 10-7M y 10-8M 

sobre la respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón inducida 

por Win 55,212-2. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media 

* p<0,05 

 

2.3 Efecto inhibitorio de SR141716A 
 

SR141716A

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

WIN 55,212-2

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
SR141716A 10-6M
SR141716A10-7M
SR141716A10-8M

 

 

Figura 34 Efecto inhibitorio del antagonista CB1 SR141716A (n = 5-4 ) a concentración 

10-6M, 10-7M y 10-8M sobre la respuesta contractil de la preparación conducto 

deferente de ratón inducida por Win 55,212-2. Los datos se presentan como la media 

± error estándar de la media * p<0,05 

* 
* 

* 



   

2.4 Efecto inhibitorio de LH1.11 
 

LH1.11

-20

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

WIN55,212-2

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
LH1.11 10-6M
LH1.11 10-7M

 

Figura 35 Efecto inhibitorio del nuevo compuesto LH1.11 ( n=5 ) a concentración 10-6M 

y 10-7M sobre la respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón 

inducida por Win 55,212-2. Los datos se presentan como la media ± error estándar de 

la media ** p<0,01 

 

2.5 Efecto inhibitorio de LH1.20 
LH 1.20 

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

WIN 55,212-2

%
In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Veh
LH1.20 10-6M
LH1.20 10-7M

 

Figura 36 Efecto inhibitorio del nuevo compuesto LH1.20 ( n= 5 ) a concentración 10-

6M y 10-7M sobre la respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón 

inducida por Win 55,212-2. Los datos se presentan como la media ± error estándar de 

la media * p<0,05 

  

** 

* 



   

2.6 Efecto inhibitorio de LH1.21 
 

 

LH1.21

-20

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

WIN55,212-2

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
LH1.21 10-6M
LH1.21 10-7M

 

 

 

Figura 37 Efecto inhibitorio del nuevo compuesto LH1.21 ( n= 6 ) a concentración 

10-6M y 10-7M sobre la respuesta contractil de la preparación conducto deferente de 

ratón inducida por Win 55,212-2.Los datos se presentan como la media ± error 

estándar de la media * p<0,05 

* 



   

 

2.7 Efecto de anandamida 
 
 

En las figuras se muestra el efecto del agonista anandamida en ausencia 

y en presencia de distintas concentraciones, tanto de los antagonistas de 

referencia, como de los nuevos compuestos estudiados. 

 

Anandamida

0

20

40

60

80

100

8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

Concentración Molar

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Anandamida

 

 

Fig. 38. Efecto inhibitorio de anadamida (n =7) sobre la respuesta contractil de la 

preparación de conducto deferente de ratón. Los datos se presentan como la media ± 

error estándar de la media * p<0,05 

 

 

 

 

 

 

 

 

* 



   

2.8 Efecto inhibitorio de AM251 
 

AM 251

0

20

40

60

80

100

2,7x10-8M 8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

Anandamida

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
AM251 10-6
AM251 10-7M

 

Figura 39 Efecto inhibitorio de AM251 ( n = 5-9 ) a concentración 10-6M y 10-7M sobre 

la respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón inducida por 

anandamida. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media  

* p<0,05 

 

2.9 Efecto inhibitorio de SR141716A 
 

SR141716A

0

20

40

60

80

100

2,7x10-8M 8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M

Anandamida

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
SR141716A 10-6M
SR141716A 10-7M

 

Figura 40 Efecto inhibitorio de SR141716A ( n = 6-7 ) a concentración 10-6M y 10-7M 

sobre la respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón inducida 

por anandamida. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media  

 

* 



   

2.10 Efecto inhibitorio de LH1.11 
 

LH1.11

-20

0

20

40

60

80

100

2,7x10-8M 8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

Anandamida

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
LH1.11 10-6M

 

Figura 41 Efecto inhibitorio de LH1.11 ( n= 4 ) a concentración 10-6M, sobre la 

respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón inducida por 

anandamida. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media  

* p<0,05 

 

2.11 Efecto inhibitorio de LH1.20 
 

LH1.20

-20

0

20

40

60

80

100

2,7x10-8M 8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

Anandamida

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
LH1.20 10-6M

 

Figura 42 Efecto inhibitorio de LH1.20 (n = 5) a concentración 10-6M, sobre la 

respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón inducida por 

anandamida. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media  

* p<0,05 

 

* 

* 



   

2.12 Efecto inhibitorio de LH1.21 
 

 

LH1.21

-20

0

20

40

60

80

100

2,7x10-8M 8,1x10-8M 2,4x10-7M 7,2x10-7M 10-6M

ANANDAMIDA

%
 In

hi
bi

ci
ón

 C
on

tr
ac

ci
ón

Control
LH1.21 10-6M
LH1.21 10-7M

 

 

 

Figura 43 Efecto inhibitorio de LH1.21 ( n= 5 ) a concentración 10-6M, sobre la 

respuesta contractil de la preparación conducto deferente de ratón inducida por 

anandamida. Los datos se presentan como la media ± error estándar de la media 

 * p<0,05 

* 



   

 

3 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA (IN VIVO) 
 

Debido a que fué el compuesto más activo en los ensayos in vitro el 

efecto del compuesto LH1.21 fue evaluado usando el modelo de evaluación de 

compuestos cannabinoides in vivo, la tetrada cannabinoide.  

 

En estos ensayos se comparó el efecto de LH1.21 con el antagonista de 

referencia SR141716A. El tratamiento de ratones con estos compuestos no 

indujo modificaciones significativas en ninguno de los parámetros valorados 

(nocicepción, temperatura corporal, actividad espontánea y catalepsia). 

 

Asimismo, se comprobó su capacidad para bloquear los efectos de WIN 

55,212-2 (1.5 mg/kg) en este modelo animal. El compuesto LH1.21 se ensayó a 

tres concentraciones diferentes (0.25, 0.5 y 1 mg/kg) y el antagonista patrón 

sólo a la concentración 1mg/kg, obteniéndose resultados similares a esta dosis. 



   

 

3.1 Efecto de agonistas y antagonistas cannabinoides sobre la 
temperatura corporal del ratón 
 

 

 

 
 

 

Figura 44 Inhibición del efecto de Win 55,212-2 (1,5mg/kg) por SR141716A y LH1.21 

sobre la temperatura corporal del ratón. Los datos se presentan como la media ± 

e.e.m. ** p>0,01, *** p<0,001 

+ WIN 1.5 

*** 

** 
*** 

ºC Temperatura

33 

34 

35 

36 

37 

38 

39 

Contro Veh. WIN 1.5 LH 0.25 LH 0.5 LH 1 SR 1 



   

 

3.2 Efecto de agonistas y antagonistas cannabinoides sobre la 
actividad locomotora 

 

 

 

 

 
 

 

 

 

Figura 45 Inhibición del efecto de Win 55,212-2 (1,5mg/kg) por SR141716A y LH1.21 

sobre la actividad locomotora del ratón. Los datos se presentan como la media ± 

e.e.m. * p>0,05; ** p>0,01 

 

 

 

 

 

 

 

 

+ WIN 1.5 

** 

* * 

Nº cortes 
Motilidad 

0 

500 

1000 

1500 

2000 

2500 

Contro Veh. WIN 1.5 LH 0.25 LH 0.5 LH 1 SR 1 



   

3.3 Catalepsia producida por agonistas y antagonistas 
cannabinoides  

 

 

 
 

 

Figura 46 Inhibición del efecto cataléptico de Win 55,212-2 (1,5mg/kg) por SR141716A 

y LH1.21. Los datos se presentan como la media ± e.e.m. ** p>0,01, *** p<0,001 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Seg. 

+ WIN 1.5 

*** 

** *** *** 

Catalepsia

2

6

10

14

18

Control Veh. WIN 1.5 LH 0.25 LH 0.5 LH 1  SR 1  



   

3.4 Analgesia producida por agonistas y antagonistas 
cannabinoides  

 

 

 

 

 
 

 

Figura 46 Inhibición del efecto analgésico de Win 55,212-2 (1,5mg/kg) por SR141716A 

y LH1.21. Los datos se presentan como la media ± e.e.m. * p>0,05; ** p>0,01 

** 

* * * * 

M.E.P. 

+ WIN 1.5 

Analgesia

0

2

4

6

8

10

Contro Veh. WIN 1.5 LH 0.25 LH 0.5 LH 1  SR 1  



  Discusión 
 
 

 113 

1 ESTUDIO DE LOS EFECTOS VASCULARES DE LOS 
CANNABINOIDES. 
 

La primera parte de esta tesis doctoral ha tenido como objetivo iniciar la 

caracterización del mecanismo de acción mediante el cual dos agonistas 

cannabinoides de distinta naturaleza química, R(+)-metanandamida y WIN 

55,212-2, producen relajación vascular en la aorta aislada de rata. Hasta la 

fecha no se había realizado ningún  trabajo de este tipo en arteria aorta de rata. 

Se han estudiado algunos de los principales mecanismos moduladores de la 

vasodilatación arterial  producida por cannabinoides.  

 

Aunque los efectos de los cannabinoides, tanto naturales como sintéticos, 

han sido ampliamente estudiados, no hay datos concluyentes que demuestren 

la existencia de un mecanismo de acción general, ya que los resultados van a 

depender de la especie, del lecho vascular y de la metodología empleada (Lay 

y cols., 2000; O’Sullivan y cols., 2004; Randall y cols., 2004). 

 

A pesar de que se han hecho diversos ensayos farmacológicos en vasos 

sanguíneos con la mayoría de los cannabinoides conocidos, el más utilizado es la 

anandamida. La mayoría de los autores consideran que la R(+)-metanandamida, 

un análogo estructural de anandamida, produce efectos muy similares a esta, 

aunque de más larga duración puesto que la velocidad de degradación es 

diferente. Estudios comparativos entre ambos compuestos han sido descritos 

dando resultados incluso contradictorios. En 1997, Zygmunt y cols comprobaron 

que anandamida y R(+)-metanandamida tienen la misma potencia vasorrelajante 

en arterias hepáticas y mesentéricas de rata. Por el contrario, Grainger y Boachie-

Ansah (2001) demostraron que en arterias coronarias bovinas aisladas la 

anandamida produce vasorrelajación mientras que R(+)-metanandamida carece 

de efecto. 

 



  Discusión 
 
 

 114 

Estudiando sus efectos sobre presión arterial y frecuencia cardiaca en 

ratas anestesiadas, Malinowska y cols (2001) demostraron que la R(+)-

metanandamida produce hipotensión y bradicardia con más potencia que la 

anandamida, lo que concuerda con los resultados de Mendizábal y cols. (2001) 

en lecho mesentérico de rata aislado y perfundido. 

 

También se han descrito efectos contradictorios con WIN 55,212-2 en 

diversos vasos sanguíneos. Este compuesto no produce relajación en arteria 

hepática de rata, en arteria basilar de cobayo (Zygmunt y cols, 1997), ni en 

anillos de aorta de conejo (Mukhopadhyay y cols, 2001). Sin embargo sí la 

produce en las ramas mesentéricas de rata (Ho y Hiley, 2003) y en arterias 

cerebrales de gato (Gebremedhin y cols, 1999) Al estudiar sus efectos in vivo, 

se ha demostrado que produce hipotensión en conejos y ratas desmedulados 

(Niederhoffer y Szabo, 1999; Niederhoffer y cols, 2003). 

 

Ninguno de los ensayos que se han hecho hasta la fecha con R(+)-

metanandamida o con WIN 55,212-2, estudia todas las posibles vías mediante 

las cuales un compuesto cannabinoide produce su efecto vasorrelajante, y no 

hay ensayos comparativos entre ellos.  

 

La primera diferencia entre estos dos compuestos es su afinidad por los 

receptores cannabinoides, siendo la R(+)-metanandamida más afín por los 

receptores CB1, mientras que el WIN 55,212-2 es mas afín por los receptores 

CB2 (Lake y cols, 1997; Niederhoffer y Szabo, 1999). Esto hace que la potencia 

del efecto sea variable dependiendo del tejido empleado y del número de 

receptores cannabinoides en cada tejido. Si este es bajo también lo será la 

actividad intrínseca del agonista cannabinoide estudiado (Ross,2003). 

 

En nuestro estudio se comprobó que R(+)-metanandamida es más eficaz 

que WIN 55,212-2, puesto que la relajación producida es mayor (71%) para 



  Discusión 
 
 

 115 

R(+)-metanandamida que el efecto de WIN 55,212-2 52 (52%) a las mismas 

dosis.  

 

1.1 MECANISMOS 
 

1.1.1 Dependencia del endotelio  

 

Nuestro estudio ha demostrado que en la arteria aorta de rata 

precontraída con fenilefrina, estos cannabinoides producen una lenta relajación 

concentración-dependiente cuando el endotelio está intacto, efecto que no 

aparece en arterias carentes de endotelio.  

 

Aunque la vasorrelajación en arteria aorta de rata ha sido mencionada por 

algunos autores (O’Sullivan y cols., 2004) no hay estudios completos sobre los 

efectos vasorrelajantes de R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 en vasos de 

conductancia, excepto en aorta de conejo, donde se demostró que tanto 

anandamida como R(+)-metanandamida inducen vasorrelajación siendo este 

último compuesto más eficaz. Sin embargo, en este tejido WIN 55,212-2 no 

produce relajación  Estos autores proponen que ambos R(+)-metanandamida y 

anadamida pueden activar al menos dos vías diferentes para producir la 

relajación. La primera sería endotelio-dependiente, sensible a SR141716A, 

regulada por proteínas G sensibles a toxina pertussis, que actuarían 

estimulando la liberación de NO por el endotelio. La segunda vía sería la 

liberación de NO no endotelial e independiente de proteínas G (Mukhopadhyay 

y cols, 2002).  

 

En nuestras condiciones experimentales, la participación de mecanismos 

endotelio dependientes parece ser esencial debido a que las arterias sin 

endotelio presentan una pérdida de respuesta al efecto de los cannabinoides, 

hecho corroborado por muchos autores (Lake y cols., 1997; Pratt y cols., 1998; 

Chaytor y cols., 1999; Gotopoulos y cols., 2001; Grainger and Boachie-Ansah, 



  Discusión 
 
 

 116 

2001; Wagner y cols., 2001). No todos los datos previos están de acuerdo con 

la importancia del endotelio en otros lechos vasculares. En arterias coronarias 

bovinas, la anandamida produce el mismo tipo de relajación endotelio-

dependiente (Pratt y cols., 1998), pero resultados obtenidos con otras arterias 

como la hepática (Zygmunt y cols., 1997; Zygmunt y cols., 2002), coronaria 

(White y cols 2001), carótida (Holland y cols, 1999), y mesentéricas de rata 

(White y Hiley, 1998; Zygmunt y cols., 2002) y la arteria basilar de cobayo 

(Deutsch y cols,1997) describen que la relajación es endotelio-independiente. 

 

Con la finalidad de identificar el mecanismo de acción de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 se llevaron a cabo experimentos con 

compuestos que interfieren con los principales mecanismos vasodilatadores 

dependientes de endotelio que han sido previamente descritos como 

implicados en los efectos vasculares de los cannabinoides. 

 

Anandami da

Ci t  P
450

Cél ul a
endot el i al

CB1

CB2
T

Anandami da

FAAH

AA + Et anol ami na
LOX

Leucot r i enos

COX

Pr ost agl andi nas HETEs
EETs
Et c. .

Cél ul as
múscul o l i so vascul ar

Gi / 0

Gi / 0

L- Ar g L- Ci t r ul i naNOS

NO

Ca2+/ Cal modul i na dep

EDHF
VR1

RELAJACI ÓN

COX2

PGE2et anol ami na

CGRP
CGRP1

 
 

 



  Discusión 
 
 

 117 

En primer lugar habría que señalar que en nuestros experimentos, y en 

ausencia de agonista, ninguno de los antagonistas utilizados causó por si 

mismo vasodilatación en arterias precontraidas con fenilefrina, ni modificación 

de la relajación producida por carbacol (10 µM).  

 

1.1.2 Mecanismos mediados por receptores 

 

Clasicamente se admite que los receptores que median los efectos de los 

cannabinoides CB1 y CB2 son receptores acoplados a proteinas reguladoras 

Gi/o sensibles a toxina pertussis (Mukhodpyay y cols., 2002; Begg y cols., 

2003; Offertáler y cols., 2003). Para comprobar si estos receptores están 

implicados en el mecanismo de acción relajante de R(+)-metanandamida y WIN 

55,212-2 en aorta de rata, se incubaron los anillos con dicha toxina. En 

nuestros resultados, al igual que en otros tejidos previamente estudiados, 

(Bouaboula y cols., 1999; Holland y cols., 1999; Mukhodpyay et 2002; Begg y 

cols., 2003; Offertáler y cols., 2003; Gebremedhin y cols., 1999), se comprobó 

la inhibición del efecto relajante de ambos cannabinoides R(+)-metanandamida 

y WIN 55,212-2.  

 

Esto confirma, en un tejido que no había sido estudiado previamente, la 

aorta de rata, la implicación de receptores acoplados a proteínas Gi/o en la 

vasorrelajación endotelio-dependiente causada por estos cannabinoides, al 

igual que sucede en la de conejo (Mukhopadhyay y cols., 2002). 

 

Los resultados obtenidos hasta el momento en otros vasos sanguíneos 

son contradictorios. A pesar de que el efecto vasorrelajante de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 en otros tejidos vasculares parece mediado a 

través de receptores endoteliales, no existen datos previos sobre el subtipo de 

receptor implicado en la vasorrelajación producida por cannabinoides en aorta 

de rata.  

 



  Discusión 
 
 

 118 

Los receptores que median los efectos cannabinoides pueden ser de 

varios tipos: 

 

a) receptores CB1 (Ishac y cols., 1996; Deutsch y cols., 1997; Lake y cols., 

1997; Sugiura y cols., 1998; Gebremedhin y cols.,1999; Jarai y cols., 1999; Liu 

y cols. 2000; Maccarrone y cols, 2000, O'Sullivan y cols., 2004). 

 

b) receptores endoteliales CB2: su papel funcional no ha sido 

completamente establecido aunque su presencia en células aisladas de 

endotelio pulmonar de carnero ha sido confirmada recientemente (Zoratti y 

cols., 2003). 

 

c) receptores endoteliales de anandamida (no CB1/2): (Jarai y cols., 1999; 

Bukoski y cols., 2002; Kunos y cols., 2002; Zygmunt y cols., 2002; Ho y Hiley, 

2003; Offertaler y cols., 2003). 

 

d) receptores vanilloides (Zygmunt y cols 1999; Smart y cols., 2000; Ross, 

2001; Mukhopadhyay y cols., 2002;Ralevic y cols., 2002) 

 

e) otros receptores: numerosas evidencias sugieren la existencia de 

varios nuevos subtipos de receptores cannabinoides que aún no han sido 

identificados ni plenamente caracterizados: sensibles a SR141716A, no CB1 no 

CB2, similares a vanilloides que son antagonizados por capsazepina, acoplados 

o no a proteinas G, etc (Ross, 2002; Pertwee, 2003). 

 

 

A Efecto de los antagonistas de receptores cannabinoides 

 

Para identificar el subtipo de receptor cannabinoide implicado en el efecto 

de los agonistas, en nuestro trabajo se emplearon antagonistas relativamente 

específicos de receptores cannabinoides: SR141716A antagonista del receptor 



  Discusión 
 
 

 119 

CB1 (Rinaldi-Carmona y cols., 1995) y SR144528 antagonista del receptor CB2 

(Rinaldi-Carmona y cols., 1998; Bouaola y cols., 1998; Shire y cols., 1999; 

Gouldson y cols., 2000).  

 

Debido a que la implicación del receptor no CB1/CB2  no está bien definida 

ni caracterizada, ni tampoco estaba disponible el antagonista del “receptor de 

anandamida”, O-1918, no se pudieron llevar a cabo experimentos para 

comprobar la implicación de dicho receptor en el efecto vasorrelajante de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 

 

Los antagonistas empleados fueron ensayados a tres concentraciones 

diferentes: 1, 3 y 6 µM. En nuestros experimentos no utilizamos 

concentraciones superiores a 6µM debido a que White y Hiley (1998) 

demostraron que SR141716A a concentraciones mayores de 10 µM produce 

relajación vascular endotelio-independiente a través de la inhibición de canales 

de Ca++ voltaje-dependientes y a la activación de canales de K+. Aunque no hay 

unanimidad, otros autores describen que dosis ≥1 µM pueden bloquear 

receptores VR1 (Zygmunt y cols., 1999), inhibir la neurotrasmisión en la unión 

neuro-efectora (Chaytor y cols.,1999); receptores imidazolidínicos (Molderings 

y cols., 1999) o actuar como un agonista inverso (Bouaboula y cols., 1997). 

 

En este trabajo, todas las dosis produjeron el mismo grado de bloqueo del 

efecto de R(+)-metanandamida, que fue en torno al 60% para SR141716A, y 

~40% para SR144528, lo cual sugeriría la implicación de los receptores CB1 y 

CB2 en su efecto vasorrelajante.  

 

El bloqueo del efecto de R(+)-metanandamida por SR141716A ha sido 

demostrado por muchos autores (Chaytor y cols., 1999; Jarai y cols., 1999; 

Wagner y cols., 2001; Mukhopadhyay y cols., 2002) en diferentes lechos 

vasculares y en animales de diferentes especies, implicando al receptor CB1 en 

los efectos vasculares de R(+)-metanandamida. Aunque también efectos 



  Discusión 
 
 

 120 

contrarios han sido descritos por otros autores (Van Den Bossche y cols., 2000; 

Vanheel y cols., 2001; Wagner y cols., 2001). 

 

Por el contrario, la relajación producida por WIN 55,212-2 no se afectó por 

la presencia de concentraciones bajas de ambos antagonistas y solamente se 

inhibió parcialmente con la dosis 6 µM de SR144528 (~25%).  

 

La ausencia de efecto de SR141716A sobre la relajación producida por 

WIN 55,212-2 en aorta de rata concuerda con los resultados de otros autores a 

concentración 3 µM, en arterias mesentéricas de rata (Ho y Hiley, 2003; White 

y Hiley, 1998). Por el contrario, a dosis tan bajas como 100nM se ha 

demostrado que el efecto vasorrelajante de WIN 55,212-2 era bloqueado por 

SR141716A en arterias cerebrales de gato (Gebremedhin y cols., 1999). 

 

Estos resultados indican una posible diferencia entre el subtipo de 

receptor implicado en la respuesta causada por R(+)-metanandamida y WIN 

55,212-2. En el caso de R(+)-metanandamida todo el efecto vasodilatador 

parece estar mediado a través de receptores CB1 y CB2. En cambio el efecto 

de WIN 55,212-2, parece estar mediado parcialmente por receptores CB2. 

 

La implicación de receptores CB2 en los efectos vasculares de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 no había sido demostrada previamente. 

 

No existen trabajos previos que utilicen la combinación de ambos 

antagonistas. 

 

En este trabajo, cuando se administraron simultáneamente ambos 

antagonistas, la vasorrelajación inducida por R(+)-metanandamida fue 

completamente abolida. 

 



  Discusión 
 
 

 121 

Nuestros resultados demuestran claramente y por primera vez que tanto 

los receptores CB1 como los CB2 están implicados en las acciones vasculares, 

en vasos de conductancia, de R(+)-metanandamida, aunque hasta ahora su 

efecto se consideraba mediado en su mayor parte por receptores CB1  

( Mukhopadhyay y cols., 2002). 

 

Este efecto es similar al obtenido al bloquear con toxina pertussis el 

efecto vasorrelajante de R(+)-metanandamida y demuestra de manera clara la 

implicación de receptores acoplados a proteínas G en la respuesta endotelio-

dependiente. 

 

Cuando se administraron simultáneamente ambos antagonistas, la 

vasorrelajación inducida por WIN 55,212-2 fue similar a la obtenida con la dosis 

más alta de SR144528, además es semejante al obtenido al bloquear con 

toxina pertussis, lo que implicaría nuevamente al receptor CB2 en el 

mecanismo de acción de este compuesto.  

 

B Efecto del bloqueo de receptores vanilloides 

 

Entre los mecanismos propuestos previamente como mediadores de la 

vasorrelajación producida por cannabinoides se encuentra la activación de 

receptores vanilloides. El agonista natural de estos receptores es la capsaicina, 

pero también pueden ser activados por anandamida, R(+)-metanandamida y 

otros agonistas cannabinoides. Los mecanismos que se desencadenan tras la 

activación de estos receptores son muy complejos y, abarcan liberación de 

CGRP, NO, ATP, sustancia P, y NKA, fosforilación de proteínas, bloqueo de 

canales de Ca++ e incluso fenómenos de desensibilización del receptor por 

exposición prolongada a agonistas (Ralevic y cols, 2002). El efecto mediado 

por estos receptores puede ser antagonizado tanto por bloqueantes 

competitivos de receptores VR1 (capsazepina), CGRP1 (CGRP 8-37), pero 

también puede ser inhibido por desensibilización con capsaicina. 



  Discusión 
 
 

 122 

 

Debido a que el efecto del antagonista competitivo del receptor VR1, 

capsazepina, es mas bien moderado y que a concentraciones micromolares 

(las necesarias para inhibir las respuestas de capsaicina) también bloquea 

canales de Ca++ (Docherty y cols, 1997) y receptores nicotínicos (Liu y Simon, 

1997), en nuestros ensayos hemos estudiado el efecto de capsazepina, 

capsaicina y CGRP 8-37. 

 

El efecto vasorrelajante de R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 fue 

inhibido parcialmente (~50%), en los tres ensayos, no encontrándose 

diferencias significativas entre ellos. 

 

Como demuestran nuestros resultados en el caso de la vasorrelajación 

producida por R(+)-metanandamida, parece existir una implicación parcial de 

los receptores vanilloides, puesto que se obtuvo inhibición, tanto con el bloqueo 

selectivo del receptor, como con la desensibilización del receptor, y con el 

bloqueo de uno de los mediadores vasodilatadores mas potentes implicado en 

su efecto.  

 

 

Otros autores también han descrito el efecto de R(+)-metanandamida 

sobre receptores vanilloides , pero es la primera vez que se describe en arteria 

aorta de rata. También ha sido demostrado en arteria aorta de conejo 

(Mukhopadhyay y cols., 2002) y en arterias mesentéricas (Ralevic y cols., 2000; 

Malinowska y cols., 2001; Vanheel y Van De Voorde, 2001; Nieri y cols., 2002), 

donde se encontraron diferencias de efecto dependiendo de la rama 

mesentérica estudiada (O’Sullivan y cols., 2004). 

 

De manera similar, no se había descrito previamente que el compuesto 

WIN 55,212-2 activase receptores vanilloides en vasos sanguíneos, ni se 

habían estudiado anteriormente sus efectos sobre aorta de rata.  



  Discusión 
 
 

 123 

 

A la vista de nuestros resultados podría sugerirse una implicación parcial de 

receptores vanilloides en el mecanismo de acción de WIN 55,212-2, debido a que 

se obtuvo un bloqueo del efecto vasodilatador tanto bloqueando selectivamente 

el receptor VR1, desensibilizando el receptor, y con el bloqueo de receptores 

CGRP1. Hay que señalar asimismo que la magnitud del bloqueo es similar para 

los dos cannabinoides estudiados. 

 

No resulta fácil definir exactamente el subtipo de receptor vanilloide 

implicado en el mecanismo de acción de los cannabinoides en aorta de rata. 

Pertwee (2003). ha propuesto la existencia de un receptor de naturaleza 

vanilloide sensible a capsazepina y a SR141716A, que sería activado tanto por 

capsaicina como por los cannabinoides WIN 55,212-2 y CP 55940, que podría 

corresponderse con nuestros resultados . 

 

1.1.3 Mecanismos intracelulares 

 

Con el fin de identificar los principales mediadores celulares responsables 

de la vasodilatación producida por los cannabinoides estudiados en esta tesis 

doctoral, y teniendo en cuenta los antecedentes descritos en la literatura, se 

han estudiado las principales vías de relajación endotelial como liberación de 

NO, prostaglandinas y EDHF. 

 

Asimismo hemos estudiado el metabolismo y transporte al interior de la 

célula de R(+)-metanandamida porque los productos del metabolismo de 

cannabinoides también han sido propuestos como mediadores del efecto 

vasorrelajante. En este trabajo solamente han sido estudiados los efectos de la 

inhibición del transporte y metabolismo de R(+)-metanandamida ya que el WIN 

55,212-2, debido a su naturaleza química, no puede seguir ninguna de estas 

vías. 

 



  Discusión 
 
 

 124 

A Mecanismos mediados por NO 

 

Considerando que el NO es el principal mediador responsable de la 

relajación mediada por el endotelio, se estudió el efecto del inhibidor de la NO 

sintasa, L-NAME, sobre la respuesta inducida por cannabinoides en anillos de 

aorta de rata.  

 

En presencia de L-NAME el efecto vasorrelajante de R(+)-metanandamida 

y WIN 55,212-2 fue completamente abolido. Nuestros datos corroboran la 

importancia del papel del NO en esta respuesta vasodilatadora. Resultados 

similares han sido extensamente descritos, también en vasos de resistencia 

(Deutsch y cols., 1997; Maccarrone y cols., 2000; Högestätt y Zygmunt 2002). 

Asimismo, en células endoteliales aisladas de arteria renal de rata, la 

estimulación del receptor CB1 da como resultado un incremento de la 

producción de NO (Deutsch y cols., 1997), lo que demuestra que en algunos 

lechos vasculares la anandamida es capaz de facilitar la vasodilatación 

dependiente de NO endotelial (Högestätt y Zygmunt 2002). 

 

Con estos resultados se demuestra que la vasorrelajación producida por 

R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 en arteria aorta de rata es         

endotelio–dependiente, y que el NO juega un papel fundamental. 

 

B Inhibición del metabolismo de R(+)-metanandamida 

 

Los endocannabinoides son degradados por la FAAH dando lugar a ácido 

araquidónico. Este compuesto puede metabolizarse por distintas enzimas 

produciendo compuestos vasodilatadores. Por este motivo, en este trabajo se 

ha estudiado el metabolismo de R(+)-metanandamida y la posible implicación 

de algunos de los metabolitos que se producen por la vía del ácido 

araquidónico. 

 



  Discusión 
 
 

 125 

I Inhibición de la FAAH: 

 

Para ello, el primer paso fue inhibir el metabolismo de R(+)-

metanandamida por FAAH con dos dosis diferentes del compuesto PMSF, el 

mas ampliamente utilizado para bloquear de la degradación de anandamida 

 

Hasta el momento, no se ha llegado a conclusiones definitivas sobre el 

efecto que produce la inhibición de FAAH en la vasodilatación cannabinoide, 

habiendose descrito, tanto inhibición en arterias mesentéricas (Ishioka y 

Bukoski, 1999) y en arterias coronarias bovinas (Grainger y Boachie-Ansah, 

2001), como potenciación del efecto vasorrelajante en arterias mesentericas de 

ratas (White y cols, 1998), e incluso la ausencia de efecto en arteria coronaria y 

lecho mesentérico perfundido de rata (Vanheel y cols, 2001; White y cols, 

2001). 

 

En nuestro trabajo la inhibición del enzima FAAH por PMSF (200 y 100 

µM) produjo un bloqueo parcial y significativo del efecto vasorrelajante de R(+)-

metanandamida (~50%), aunque este efecto no fue concentración-

dependiente.  

 

Por lo tanto parece que la R(+)-metanandamida penetra, al menos en 

parte, al interior celular, donde es metabolizada por la FAAH. Hay que señalar 

que esto parece lógico por la similitud estructural que tiene la R(+)-

metanandamida con el endocannabinoide anandamida. 

 

Nuestros resultados, además sugieren, de manera indirecta, la presencia 

de la enzima FAAH en aorta de rata.  

 

Se sabe que el ácido araquidónico generado por la transformación de 

anandamida, se biotransforma por distintas rutas de las cuales las que han 

adquirido más importancia para justificar el efecto vascular de los 



  Discusión 
 
 

 126 

cannabinoides son las de metabolización via ciclooxigenasa y via CYP450. De 

hecho los metabolitos originados en estas rutas son conocidos vasodilatadores 

y se han implicado en la vasorrelajación producida por cannabinoides. 

 

II Inhibición de COX 

 

Con objeto de comprobar si la liberación de PGs vasodilatadoras en la 

arteria aorta de la rata participa en el efecto de R(+)-metanandamida, se empleó 

indometacina (50 µM) para bloquear la síntesis de PGs.  

 

En nuestras condiciones experimentales, la indometacina bloqueó 

parcialmente el efecto de R(+)-metanandamida (~30%). 

 

Aunque el WIN 55,212-2 no es sustrato de COX, el efecto de su inhibición 

se estudió para descartar efectos inespecíficos. 

 

Estos resultados indican que los metabolitos producidos por COX al 

metabolizar el ácido araquidónico están implicados en la vasorrelajación 

producida por R(+)-metanandamida, pero no nos permiten identificar que 

isoenzima es responsable de este efecto, ya que la indometacina es un 

inhibidor inespecífico de las dos isoenzimas de COX. 

 

La participación de derivados de ciclooxigenasa en la vasorrelajación 

inducida por cannabinoides ha sido descrita previamente en arterias cerebrales 

de ratas, (Ellis y cols, 1995; Randall, 2003), en arterias mesentéricas de rata 

(Vanheel y Van de Voorde, 2001) y conejo (Fleming y cols, 1999) y en arterias 

coronarias bovinas (Grainger y Boachie-Ansah, 2001) donde los cannabinoides 

producen vasorrelajación que es sensible a indometacina.  

Contrariamente a estos resultados, Chaytor y cols (1999) no encontraron 

implicación de prostanoides en el efecto de anandamida y R(+)-metanandamida 

en arteria mesentérica de conejo.  



  Discusión 
 
 

 127 

 

Además de la transformación de R(+)-metanandamida a derivados de 

PGs, el efecto de indometacina podría ser explicado por el hecho de que la R(+)-

metanandamida podría inducir la expresión de COX2 y por tanto aumentar la 

liberación de PGs (Ramer y cols.,2001; Hinz y cols, 2003). 

 

III Inhibición del CYP450: 

 

La utilización de un inhibidor de CYP450, 17-ODYA, inhibió 

escasamente la respuesta vasorrelajante producida por R-(+)-metanandamida.  

 

Estos resultados indican que los metabolitos del ácido araquidónico 

producidos por CYP450 no son de importancia en el efecto vasorrelajante 

producido por R(+)-metanandamida en la aorta de la rata. Esto concuerda con 

los resultados obtenidos utilizando miconazol en las ramas de la arteria 

mesentérica de rata (Ishioka y Bukoski, 1999) y miconazol y 17-ODYA en 

arterias coronarias bovinas (Grainger y Boachie-Ansah, 2001). 

 

C Mecanismos mediados por EDHF 

 

Se ha descrito que la activación de receptores cannabinoides estimula la 

liberación de EDHF, el cual, produce hiperpolarización de la membrana celular 

por apertura de canales de K+. 

 

La implicación de EDHF no se había descrito anteriormente con R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2. En esta tesis doctoral, se evaluó el efecto de 

la combinación de dos toxinas: charibdotoxina (un bloqueante de canales de 

K+-voltaje dependientes y de Ca++ de alta conductancia activados por K+) y 

apamina (un bloqueante de canales de Ca++ de baja conductancia activados 

por K+) que regulan la liberación de EDHF en anillos de aorta de rata. 

 



  Discusión 
 
 

 128 

En ninguno de los casos la combinación de ambas toxinas produjo 

inhibición del efecto vascular de los cannabinoides estudiados, lo que descarta 

en principio la implicación de EDHF en el efecto vasorrelajante de R(+)-

metanandamida y WIN 55,212-2 en aorta aislada de rata.  

 

Estos resultados coinciden con los obtenidos en arteria basilar de 

cobayo (Zygmunt y cols, 2000), en arteria hepática de rata (Zygmunt y cols, 

1997) y en arteria mesentérica de conejo (Kagota y cols, 2001). Los resultados 

descritos en relación a este tema siguen siendo contradictorios. De hecho, en 

la arteria mesentérica de rata la implicación de EDHF ha sido ampliamente 

demostrada (Jarai y cols, 1999; Randall y Kendall, 1997; Harris y cols., 2002; 

Offertaler y cols, 2003; O’Sullivan y cols, 2004).  

 

Estas diferencias, así como los resultados obtenidos en esta tesis 

doctoral podrían explicarse por lo propuesto por Triggle y Ding (2002), que 

sugieren que la liberación de EDHF y la consiguiente hiperpolarización de la 

membrana es más importante en vasos de resistencia que en vasos de 

conductancia. 

 

D Inhibición del transporte de anandamida por AM404: 

 

Para demostrar la importancia y participación del metabolismo de los 

cannabinoides en su efecto vasodilatador es necesario que estos accedan al 

interior de la célula, tanto endotelial como células de la musculatura lisa. Como 

ya se ha descrito en la introducción de esta tesis doctoral, existe una gran 

controversia sobre la participación del transportador de anandamida en los 

efectos de los endocannabinoides, e incluso sobre su existencia. (Beltramo y 

cols., 1997; Glaser y cols, 2003). 

 

Lo primero que hay que señalar es que la influencia de este transporte 

solo se ha evaluado con el análogo estable de anandamida, R(+)-



  Discusión 
 
 

 129 

metanandamida, ya que este transportador es específico de anandamida y por 

tanto de los cannabinoides estudiados en este trabajo, solo la R(+)-

metanandamida podría utilizar este transportador para acceder al interior 

celular por su similitud estructural con anandamida. 

 

En nuestras preparaciones la respuesta vasorrelajante a R-(+)-

metanandamida fue inhibida parcialmente (25%) por AM 404. Otros autores 

describen resultados similares a los obtenidos en esta tesis doctoral en arterias 

mesentéricas aisladas de conejo (Chaytor y cols., 1999). Estos investigadores 

comprueban que el efecto inhibidor de AM404 es más potente sobre 

anandamida (~40%) que sobre R-(+)-metanandamida (~29%).  

 

También en este punto hay discrepancias, ya que mientras algunos 

autores ratifican el efecto inhibidor de AM404 sobre anandamida en diferentes 

lechos vasculares como arterias coronarias bovinas (Grainger y Boachie-

Ansah, 2001), otros afirman que no solo no inhibe sino que potencia los efectos 

vasorrelajantes de anandamida en lecho mesentérico aislado y perfundido de 

rata (Mendizábal y cols., 2001). 



  Discusión 
 
 

 130 

 

2 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA IN VITRO E IN VIVO 
DE NUEVAS MOLÉCULAS DE NATURALEZA CANNABINOIDE. 

 
La caracterización farmacológica de las nuevas moléculas de naturaleza 

cannabinoide sintetizadas por el equipo de química médica del CSIC dirigido por la 

Dra. Pilar Goya, tanto in vitro como la valoración in vivo de sus efectos en ratón, ha 

constituido el fundamento de la segunda parte de la presente tesis doctoral. 

 

La síntesis de nuevos compuestos de naturaleza cannabinoide con una 

mayor selectividad por algún subtipo de receptor, tiene una gran importancia en la 

actualidad. En los últimos años han aparecido múltiples trabajos sobre relación 

estructura-actividad y especialmente selectividad por algún subtipo de receptor CB. 

 

A pesar de que hay muchos tejidos que contienen receptores CB1, la 

mayoría de los ensayos preliminares in vitro se hacen siempre en conducto 

deferente de ratón. Los agonistas cannabinoides poseen la capacidad de 

producir una inhibición de las respuestas contráctiles inducidas por 

estimulación eléctrica en algunos tejidos aislados, como el conducto deferente 

de ratón, y este efecto es bloqueado por los antagonistas de receptores 

cannabinoides (Pertwee, 1997).  

 

Otra de las pruebas iniciales que se llevan a cabo cuando se estudia la 

posible naturaleza cannabiboide de un compuesto, es la comprobación de los 

efectos in vivo en el ratón, lo que se conoce con el nombre de “tetrada 

cannabinoide” (analgesia, hipotermia, inhibición de la actividad motora 

espontánea y catalepsia) que aparece cuando se inyecta por vía intraperitoneal 

al ratón un compuesto agonista cannabinoide y que es bloqueada por 

antagonistas cannabinoides (Martin y cols., 1987; Pertwee, 1972; Compton y 

cols., 1993). 

 



  Discusión 
 
 

 131 

En nuestro trabajo, para comprobar el efecto de los nuevos compuestos, 

denominados LHs, hemos utilizado ambos tipos de pruebas, comparandolos 

tanto con agonistas cannabinoides (anandamida y WIN 55,212-2) como con 

antagonistas del receptor CB1 (AM251 y SR141716A). 

 

2.1 ENSAYOS “IN VITRO”  
 

Para comprobar el efecto de los nuevos compuestos, se empleó el 

conducto deferente de ratón, que posee diversos tipos de receptores para 

numerosas sustancias, entre los cuales se encuentran los receptores CB1 de 

cannabinoides (Pertwee y cols., 1996; Lay y cols., 2000), y no se puede 

descartar la presencia del subtipo CB2 (Griffin y cols., 1997).  

 

La inhibición del efecto contráctil producido por estimulación eléctrica en 

diversos tejidos aislados se debe probablemente a un efecto presináptico, 

disminuyendo la liberación de neurotrasmisores que son los responsables de la 

contracción de la musculatura lisa. Este efecto podría ser el resultado, a su vez, 

de la inhibición de flujos de Ca++ producida por los cannabinoides (Pertwee y 

Griffin, 1995). Los antagonistas como AM251 y SR141716A, activos sobre 

receptor CB1, atenúan significativamente este efecto inhibidor de los agonistas 

(Rinaldi-Carmona y cols., 1995; Lay y cols.,2000). 

 

En nuestros experimentos, los agonistas cannabinoides WIN 55212-2 y 

anandamida inhibieron las contracciones inducidas por estimulación electrica 

en conducto deferente de ratón, mientras que ninguno de los nuevos 

compuestos ensayados tuvo efecto sobre dichas contracciones. Esto permite 

descartar el efecto agonista de estos compuestos, no solo de receptores 

cannabinoides sino de otros receptores presentes en conducto deferente de 

ratón (adrenérgicos, µ, δ y К opioides y purinérgicos). 

 



  Discusión 
 
 

 132 

Posteriormente, y con objeto de valorar su posible efecto antagonista 

cannabinoide, se ensayó su capacidad de inhibir la respuesta de los agonistas 

cannabinoides WIN 55212-2 y anandamida. Los antagonistas de referencia 

utilizados en este trabajo (SR141716A y AM251), produjeron una disminución 

del efecto vasodilatador, lo que concuerda con los resultados obtenidos por 

otros autores con los mismos compuestos y que demuestra la validez de la 

técnica (Rinaldi-Carmona y cols., 1995).  

 

De todos los compuestos ensayados en este trabajo, solo tres (LH1.11, 

LH1.20 y LH1.21) producen una reducción estadísticamente significativa del 

efecto inhibidor de la contracción producido por WIN 55,212-2 y anandamida, 

de una forma similar a la de los compuestos de referencia. 

 

Dada la ausencia de efecto en tejido aislado y el hecho de que no se 

observaron modificaciones significativas de la contracción cuando se 

administraron solos, podemos sugerir que estos tres compuestos se comportan 

como antagonistas cannabinoides.  

 

Con los datos de que disponemos no podemos afirmar ni descartar que 

se trate de un antagonismo competitivo ya que la baja solubilidad de los 

agonistas no permite incrementar las concentraciones en el baño de órganos y 

por lo tanto no es posible comprobar si se alcanzaría el efecto máximo. 

 

A pesar de que se ha demostrado un efecto antagonista en estos 

estudios funcionales, ensayos de unión al receptor no corroboraron los 

resultados obtenidos en tejido aislado. 

 

Esta discrepancia entre actividad biológica y ensayos de unión al 

receptor ha sido descrita para muchas sustancias incluidas los bloqueantes de 

la recaptación de dopamina y cannabinoides (Lake y cols., 1997; Xu y cols., 

2002), y pueden ser debidas a la naturaleza de la interacción ligando-receptor 



  Discusión 
 
 

 133 

(antagonismo competitivo o no competitivo), tipo de ensayo in vitro, existencia 

de distintos subtipos del receptor, incluidos los cambios conformacionales del 

receptor (descritos para receptores CB1) (Losonczy y cols., 2004). 

 

Hasta el momento no se ha conseguido sintetizar compuestos 

antagonistas puros del receptor cannabinoide CB1, puesto que se ha descrito, 

que tanto el SR141716A como el AM 251, pueden actuar como agonistas 

inversos (Landsman y cols., 1997; Bouaboula y cols., 1999).  

 

2.2 ENSAYOS “IN VIVO”  
 

El efecto del compuesto LH1.21 fue evaluado usando el modelo más 

aceptado de evaluación de compuestos cannabinoides in vivo, la tetrada 

cannabinoide. El tratamiento de ratones con LH1.21 no indujo modificaciones 

significativas en ninguno de los parámetros valorados (nocicepción, 

temperatura corporal, actividad espontánea y catalepsia). 

 

Esto descarta nuevamente la posible actividad agonista cannabinoide de 

este compuesto. Asimismo, se comprobó la capacidad de este compuesto para 

bloquear los efectos de WIN 55,212-2 en este modelo animal, obteniéndose 

resultados similares a los obtenidos con el antagonista SR141716A.  

 

Estos resultados corroboran los obtenidos en conducto deferente de ratón, 

aunque son necesarios más estudios para comprobar la naturaleza exacta del 

antagonismo producido por estos nuevos compuestos, puesto que su interés 

ha quedado demostrado por el hecho de que hayan sido patentados  y que un 

laboratorio farmacéutico esté interesado en adquirir los derechos de esta 

patente.  

 
 
 



  Conclusiones 
 

 133 

 
 

CONCLUSIONES....................................................................................................................................133
1 Efectos vasculares de R(+)-metanandamida y Win 55,212-2 .........................................................134 
2 Caracterización Farmacológica de nuevos Cannabinoides .............................................................135 

 
 
 
 



  Conclusiones 
 

 134 

 

CONCLUSIONES 
1 Efectos vasculares de R(+)-metanandamida y Win 55,212-2 

 
1) El efecto vasorrelajante de R-(+)-metanandamida y Win 55,212-2 en la 

aorta aislada de rata, parece ser producido por la mediación de varios 

mecanismos. En relación a los receptores implicados en la vasodilatación 

producida por estos cannabinoides, ambos compuestos actúan a través de 

receptores cannabinoides, aunque  no parece que sean los receptores clásicos 

los exclusivamente implicados, sino que en este efecto vasodilatador también 

participan, aunque de manera parcial, los receptores VR1 y sistemas efectores 

activados por estos. Esta es la primera vez que se describe este efecto con el 

cannabinoide sintético WIN 55,212-2. 

 

2) Con estos resultados se demuestra que la vasorrelajación producida 

por R(+)-metanandamida y WIN 55,212-2 en arteria aorta de rata es endotelio 

dependiente, produciendo su efecto a través de la liberación de NO, pero no de 

prostanoides o EDHF. Al contrario que en las arterias de pequeño calibre, 

ninguno de los dos compuestos estudiados produce hiperpolarización de 

células de la musculatura lisa de la arteria aorta de la rata. 

 

3) La metabolización de R(+)-metanandamida produce compuestos 

vasodilatadores implicados en su mecanismo de acción,  

 

 

 

 

 

 

 

 
 



  Conclusiones 
 

 135 

2 Caracterización Farmacológica de nuevos Cannabinoides 

 

 

 

Con los resultados obtenidos con los nuevos derivados 1-24 triazólicos 

ensayados en este trabajo, podemos afirmar que poseenr actividad antagonista 

de receptores de cannabinoides. El compuesto LH1.21 tiene una eficacia 

similar al antagonista de referencia SR141716A. 

 

 

 

 



  Bibliografía 
 

 134 

 
BIBLIOGRAFÍA...............................................................................................................................135 
 



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 158 

 

 


	INDICE
	INTRODUCCIÓN
	1 HISTORIA
	2 SISTEMA CANNABINOIDE ENDÓGENO
	3 TERMINOLOGÍA Y CLASIFICACIÓN DE LOS CANNABINOIDES
	4 EFECTOS DE LOS CANNABINOIDES
	5 POSIBILIDADES DE APLICACIÓN TERAPÉUTICA
	6 EFECTOS VASCULARES DE LOS CANNABINOIDES
	7 EFECTOS DE CANNABINOIDES SOBRE EL APARATO CARDIOVASCULAR
	8 REQUERIMIENTOS ESTRUCTURALES DE LOS ANÁLOGOS DE CANNABINOIDES SINTÉTICOS
	9 ENSAYOS CON CANNABINOIDES

	OBJETIVOS
	MATERIAL Y MÉTODOS
	1.1 MATERIAL
	1.2 APARATOS
	1.3 ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN 
	1.4 MÉTODOS
	2.1 ENSAYOS IN VITRO: CONDUCTO DEFERENTE DE RATÓN
	2.2 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA (IN VIVO)

	RESULTADOS
	1 MECANISMOS DE ACCIÓN VASODILATADOR DE R(+)-METANANDAMIDA Y WIN 55,212-2 EN ANILLOS DE ARTERIA AORTA DE RATA
	2 ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD DE LOS NUEVOS COMPUESTOS SOBRE LA PREPARACIÓN DE CONDUCTO DEFERENTE DE RATÓN 
	3 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA (IN VIVO)

	DISCUSIÓN 
	I ESTUDIO DE LOS EFECTOS VASCULARES DE LOS CANNABINOIDES
	2 CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA IN VITRO E IN VIVO DE NUEVAS MOLÉCULAS DE NATURALEZA CANNABINOIDE

	CONCLUSIONES
	BIBLIOGRAFÍA