ESTUDIO CROMATOGRÁFICO DE LOS EQUILIBRIOS QUE AFECTAN A LA ESTABILIDAD DE LOS FÁRMACOS ANTITUMORALES Autor: Miguel Largo Almoguera. DNI: 03929389T. Convocataria: Febrero 2015. La camptotecina es el cabeza de serie de un grupo de fármacos antitumorales con actividad inhibidora de topoisomerasas. Esta molécula posee singulares características por lo que ha sido seleccionada como un ejemplo en el que recopilar la mayoría de las competencias adquiridas en las distintas materias que componen el Grado en Farmacia. 1. Pommier Y, Marchand C. Nature Reviews Drug Discovery. 2012. p. 250–250.. 2. Mullangi R, Ahlawat P, Srinivas NR: Review of bioanalytical methods and recent update from clinical pharmacology perspectives. Biomedical Chromatography. 2010. p. 104–23. 3. Kazakevich Y, LoBrutto R. HPLC for Pharmaceutical Scientists. HPLC for Pharmaceutical Scientists. 2006. 4. Poole CF. The essence of chromatography. Elsevier. 2003. Camptoteticina y otros inhibidores de topoisomerasa: los ensayos iniciales se hicieron con la sal sódica de la camptotecina, sin embargo esta produjo efectos secundarios como la cistitis hemorrágica. El descubrimiento de la diana farmacológica de estos compuestos, la topoisomerasa I, produjo la aparición de dos análogos el topotecán y el irinotecan. Actualmente estos compuestos se utilizan en el tratamiento de cáncer de colon y de ovario. Cromatogramas de la separación de las formas lactona y carboxilato de la CPT a distintas proporciones de tampón acetato de trietilamina: acetonitrilo en elución isocrática. Fase estacionaria: columna core-shell C-18. Efecto de la Fase Móvil Estabilidad química de la camptotecina y análogos: el anillo de lactona resulta fundamental para la actividad farmacológica de la camptotecina pero es causa al mismo tiempo de su inestabilidad química. Reacción de equilibrio de apertura del anillo de lactona en la camptotecina y sus análogos. La presencia del anillo le confiere carácter lábil pudiéndose obtener ambas formas regulando sólo las condiciones del equilibrio. 1. Introducción Métodos de cuantificación de la camptotecina: Métodos de separación de las formas lactona y carboxilato de la camptotecina y sus análogos inhibidores de topoisomerasas de tal manera que la concentración que determinan se corresponde con los niveles de ambas formas en plasma. Comparación esquemática de una partícula de sílice totalmente porosa, colunmnas convencionales, y dos partículas de sílice superficialmente porosas con distinto diámetro de partícula, columnas tipo “core-shell”.  Revisión bibliográfica de los fármacos antitumorales: farmacología, mecanismo de acción, análisis y aspectos fisiológicos del cáncer.  Aplicación de un método de HPLC-FD a la determinación de CPT y estudio de los factores fisico- químicos que afectan al equilibrio y estabilidad de este antitumoral 3. Parte experimental Efecto del pH Efecto de la albúmina El pH de la disolución en el que se encuentra, va a afectar al equilibrio de la CPT. Las disoluciones de CPT a pH 3 muestran un único pico cromatográfico que aparece a 0,7 min atribuible a la forma lactona. A pH 10 este equilibrio se haya desplazado completamente hacia la forma carboxilato. Efecto del tiempo incubación Fármacos Antitumorales: En el tratamiento del cáncer o quimioterapia se emplean dos tipos de fármacos. Fármacos citotóxicos, capaces de causar la muerte celular, y los citostáticos encaminados a detener la proliferación celular. A pesar de la existencia de un prolífico arsenal terapéutico (1) sigue siendo un desafío la búsqueda de nuevas dianas terapéuticas. 2. Objetivos 4. Resultados 6. Bibliografía 5. Conclusiones El incremento de la temperatura favorece la apertura del anillo de lactona al ser esta una forma menos estable que la forma carboxilato. La disolución de CPT incubada, a 37 ºC y en presencia de HSA a pH 7,02 demuestra que el equilibrio se va desplazando paulatinamente hacia la forma carboxilato de la CPT.  Revisión bibliográfica de los mecanismos de acción de antitumorales, su vehiculización y los aspectos fisiopatológicos de los procesos tumorales. Además, se estudiaron los distintos métodos de análisis de antitumorales.  Hemos deducido la importancia de la camptotecina como modelo en el que interconectar las diversas materias que componen el Grado de Farmacia.  Se han adquirido las habilidades y la destreza para la puesta a punto y el trabajo de rutina en cromatografía y otras técnicas básicas de laboratorio.  Se ha logrado reproducir un método que permite la separación de las formas activa y farmacológicamente inactiva de la camptotecina. Usando métodos actuales como las “core-shell”.  Las variables fisicoquímicas que afectan al equilibrio de la camptotecina han sido estudiadas mediante cromatografía adquiriendo el conocimiento de la importancia de las mismas sobre la estabilidad de este antitumoral. Aducto ADN- Topotecán Complejo ternario ADN- Topoisomerasa- CPT Filtración de fase móvil Preparación de disoluciones Esquema del cromatógrafo El pH de la disolución en el que se encuentra, va a afectar al equilibrio de la CPT. Las disoluciones de CPT a pH 3 muestran un único pico cromatográfico que aparece a 0,7 min atribuible a la forma lactona. A pH 10 este equilibrio se haya desplazado completamente hacia la forma carboxilato.