UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID 
 

FACULTAD DE VETERINARIA 
Departamento de Medicina y Cirugía Animal 

  
 

 
 
 

EVALUACIÓN DEL INMUNOFENOTIPO EN LA 
ESPECIE CANINA: ESTUDIO DEL EFECTO DE LA 

ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA EN 
PERROS SANOS Y CON EHRLICHIOSIS. 

 
 

MEMORIA PARA OPTAR AL GRADO DE DOCTOR 

PRESENTADA POR 

 
Alejandra Villaescusa Fernández 

 
 

Bajo la dirección de los doctores 
 

 Miguel Ángel Tesouro Díez 
Ángel Sainz Rodríguez   

 
 

 Madrid, 2011 
 
 

ISBN: 978-84-694-5901-0                                                       © Alejandra Villaescusa Fernández, 2011                               
                                                                                                                                                                   
                                                                                                                                                                   



 

 
 
 

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID 

FACULTAD DE VETERINARIA 

DEPARTAMENTO DE MEDICINA Y CIRUGÍA ANIMAL 

 

 

 

 

EVALUACIÓN DEL INMUNOFENOTIPO EN LA 

ESPECIE CANINA.  

ESTUDIO DEL EFECTO DE LA ADMINISTRACIÓN DE 

DOXICICLINA EN PERROS SANOS Y CON 

EHRLICHIOSIS  
 

 

 

 

 

 

TESIS DOCTORAL 

 

 

ALEJANDRA VILLAESCUSA FERNÁNDEZ 

Madrid, 2011 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 

 
 
 
 

 D. Miguel Ángel Tesouro Díez, con D.N.I. 5223566-J, Catedrático de Universidad 

del Departamento de Medicina y Cirugía Animal, en la Facultad de Veterinaria de la 

Universidad de León, y 

 
 D. Ángel Sainz Rodríguez, con D.N.I. 2225544-H, Profesor Titular del 

Departamento de Medicina y Cirugía Animal, en la Facultad de Veterinaria de la 

Universidad Complutense de Madrid 

 

 

 

 CERTIFICAN : 

 

 Que la Tesis Doctoral titulada “Evaluación del inmunofenotipo en la especie 

canina. Estudio del efecto de la administración de doxiciclina en perros sanos y con 

ehrlichiosis”, ha sido realizada bajo su dirección y supervisión por Dª. Alejandra 

Villaescusa Fernández. 

 

 Revisado el presente trabajo, consideran que tiene la debida calidad para su 

presentación y defensa. 

 

 

 En Madrid, a 15 de diciembre de 2010, 

 

 

 

 

 

 

 

Miguel Ángel Tesouro Díez                                             Ángel Sainz Rodríguez 

 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 



 

 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

A todos los que me quieren,  
por las horas robadas 

 

A Aitor,  
por tantos motivos... 

 

 

 

 



 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 



 

 

AGRADECIMIENTOS  

 

 

Cuando en mayo de 2006 esta tesis doctoral empezó a tomar forma, parecía muy 

lejano este momento en el que intentaría agradecer a todos los que me han ayudado en este 

proceso. Y ahora me encuentro delante del ordenador sin saber por dónde empezar e 

intentando no emocionarme demasiado... creo que lo más difícil de esta tesis va a ser 

conseguir resumir en unas pocas líneas lo agradecida que estoy a tanta gente por tantas 

cosas, porque, al fin y al cabo, no habría sido posible llegar hasta aquí sin el apoyo enorme 

que he recibido.  

 

Voy a comenzar agradeciendo a mis directores de tesis, Ángel Sainz y Miguel 

Ángel Tesouro, la oportunidad que me dieron de meter la cabeza en este “mundo de las 

ehrlichias” que tanto me ha hecho disfrutar. Ángel, gracias por guiarme, ayudarme y, sobre 

todo, por acompañarme desde hace tantísimo tiempo, cuando aún era una alumna de 

veterinaria que no sabía qué hacer al acabar la carrera. Gracias, Miguel, porque incluso 

antes de empezar este trabajo juntos ya estabas ahí, aunque lejos geográficamente, pero 

siempre dispuesto a echar un cable. Gracias a los dos con toda mi alma. 

 

Fernando, los agradecimientos hacia tí tienen que ir aquí, detrás de los de los 

directores oficiales, aunque espero que sepas que tu apoyo, consejos y cariño durante estos 

años han sido para mí tan importantes como si fueses un director más. Gracias por estar 

siempre ahí. 

 

Y, por supuesto, millones de gracias a las que siempre serán para mí mis 

compañeras de despacho, aunque haga ya mucho tiempo que no compartimos el “cuartito 

del torreón”. Merche, no sé qué habría sido de mí sin tu ayuda, sin nuestras conversaciones 

sobre lo que no es ciencia. Tania, mi compañera de “ehrlichias y demás bichos”, gracias 

por hacer tan fáciles de llevar los momentos difíciles. Carol, aunque ahora estés tan lejos 

espero que sepas que para mí eres tan parte de esta tesis como cuando estabas a sólo dos 

mesas de distancia. Creo que las tres lo sabéis, pero sois mucho más que unas compañeras 

para mí. Espero poder devolveros todo lo que me habéis dado, aunque habéis puesto el 

listón muy alto. Gracias. 



 

 

 

Violeta, gracias por todo, pero sobre todo por tu apoyo, por tus ánimos y por los 

cafés compartidos en el trecho final de este trabajo. Alba, gracias por tus ánimos y por ser 

una alumna de ehrlichias estupenda. 

 

Gracias a los “compañeros de comidas”: Juan Pablo, Isabel, Marigel, Pedro, Luis, 

Susana, Rafa, Vero... ¡Qué importantes sois en esta tesis a pesar de que los temas de 

trabajo no se tocan en las comidas!. Gracias de todo corazón. 

 

Tino, cómo podría agradecerte tantas IFIs hechas a contrarreloj pero, sobre todo, 

tanto cariño. Espero que, al menos, sepas que has sido un grandísimo apoyo para mí. Miki, 

a ti también te debo todo mi agradecimiento por esas mismas IFIs, pero también por tu 

apoyo y palabras de ánimo durante todos estos años. Pero, además de a Tino y a Miki, 

tengo que darle las gracias a otros “habitantes” del laboratorio de Biopatología: Pilar, Eva, 

Ana y Carmen, gracias por vuestra ayuda siempre que la he necesitado.  

 

Y, por supuesto, gracias a los vecinos de laboratorio: Carmen, Gloria, Susana, Mari 

Luz, Ernesto... gracias por vuestras sonrisas y ayuda en todo momento. 

 

Gracias, Coro, porque siempre tienes palabras amables para mí y porque has sido 

una parte importante de esta tesis y de otros proyectos en la recogida de muestras de un 

número ya incalculable de perros. 

 

No puedo dejar de agradecer a todo el personal del Departamento de Medicina y 

Cirugía Animal la ayuda prestada, de una forma u otra, durante todo este tiempo, y en 

especial a Laura y a Mª José. 

 

Este proyecto me ha permitido conocer a gente que de forma totalmente 

desinteresada me ha enseñado todo lo que ha podido del mundo de la citometría de flujo. 

Amalia, Carmen, Juanjo: gracias por tantas horas delante del citómetro, por vuestro apoyo 

inestimable y por siempre recibirme con una sonrisa, a pesar de que os llevase a menudo 

miles de tubos y de haberos dado tanto trabajo. 

 



 

Gracias a todo el personal de LAV, especialmente a Gustavo Sánchez Visconti, por 

vuestras ganas de ayudar.  

 

Quiero agradecer a Santiago Cano su enorme ayuda en la estadística de este trabajo 

pero, sobre todo, su paciencia y sus palabras de ánimo. 

 

Y, por supuesto, gracias a todos los voluntarios y trabajadores de Perrikus, ANAA 

y ALBA, a la Unidad de Guías Caninos de la Policía Nacional y a Silvestre, a Miriam 

Portero y a Ana Peña, y, claro, a Kika, Patricia y Paloma, porque todos vosotros habéis 

contribuido directamente a que esta tesis llegue hasta aquí.  

  

No quiero olvidarme de los que fueron mis primeros profesores veterinarios 

externos a la Facultad: miles de gracias, Epi y Fran. No sólo me habéis ayudado antes de 

comenzar en el mundo investigador, sino que alguno de los perros de esta tesis procede de 

Los Álamos, lo que demuestra vuestro apoyo constante desde que no era más que un 

proyecto de veterinaria. Tampoco querría dejar de agradecer a muchos de los compañeros 

de mi vida profesional como veterinaria clínica de pequeños animales, porque han sido un 

apoyo insustituible en el desarrollo de esta tesis. Gracias especialmente a Mar, Andrea y 

Fabi. 

 

Por otra parte, mis compañeros de “vacas” merecen una mención especial, por toda 

la comprensión que me han ofrecido en este tiempo, apoyándome en mis “dos mundos”. 

Juan, gracias por tus ánimos y ganas de ayudar siempre durante estos años. Gracias Paco, 

Miki, Gabriel, Javier, Juanvi, Ito... sois un gran apoyo para mí. 

 

Quisiera continuar agradeciendo el simplemente estar ahí siempre a Laura, Marta, 

Cristina, Claudia, Mireya, Mariana, Lorena, Llanos, Cata, Mónica, Alicia, María, Álvaro, 

Ruth, Sara, Marina, Kiko, Rafa...  

 

Y gracias también a otra parte de mi vida que también simplemente ha estado ahí 

siempre, apoyándome y dándome todo el cariño: Elisa, Miguel, Abel, Gloria, Paco...  

Millones de gracias. 

 



 

Por supuesto tengo que agradecerles a mis padres sus ánimos constantes para 

superarme, ya que sin ellos, con mi indecisión, no se si me habría atrevido a hacer miles de 

cosas que me han dado muchas alegrías. Gracias, mamá, por tu cariño, tus consejos, tus 

ánimos, por escucharme y por ser la mejor madre. Papá, gracias por tu cariño y por 

enseñarme la diferencia entre los gorriones (mejor dicho pardales) machos y hembras. 

Sabes que estás detrás de mi vocación veterinaria, la mejor profesión del mundo. Luci, 

hermana, has escuchado tantas veces mis quejas y mis alegrías y me has animado 

tantísimas veces que no se cómo decir por escrito lo que siento: ¡gracias!. Y gracias al resto 

de mi familia, por supuesto, por animarme siempre, pero especialmente a mi tía Vicky, que 

ya sabe que es mi apoyo. Y entre mi familia espero que sepáis que os estoy incluyendo, 

Concha, Manolo, Mar y Víctor... 

 

En último lugar quiero darle las gracias a la persona que más ha sufrido con esta 

tesis: gracias Aitor. A pesar de que se podría decir que esta tesis ha sido tu enemiga, al 

haberme obligado a abandonarte durante tantísimas horas, siempre me has apoyado, me 

has animado en los momentos más duros y me has hecho ver que siempre estarás ahí. Sin 

tu cariño esto habría sido imposible. 

 

¡Gracias! 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

ABREVIATURAS  

 

 

ADN Ácido desoxirribonucleico 

ALBA Asociación para la Liberación y Bienestar Animal  

ANAA Asociación Nacional de Amigos de los Animales  

APC Aloficocianina 

ARN Ácido ribonucleico 

ARNm Ácido ribonucleico mensajero 

BCR Receptor del antígeno de los linfocitos B 

BSA Albúmina sérica bovina 

CAM Complejo de ataque a membrana 

CD Grupo de diferenciación (Cluster of Differentiation) 

CEA Comité de Experimentación Animal 

CLMF Cytotoxic lymphocyte maturation factor 

CMH Complejo Mayor de Histocompatibilidad 

CMT Tetraciclinas modificadas químicamente 

COX Ciclooxigenasa 

CR2 Receptor del complemento de tipo 2 

DC Célula dendrítica 

EDTA Tetra-acetato de etilenediamida 

ELISA Prueba de inmunoadsorción ligada a enzimas 

EMC Ehrlichiosis monocítica canina 

FasL Ligando del receptor de muerte celular Fas 

FITC Isotiocianato de fluoresceína 

FSC Dispersión frontal de luz (forward light scatter) 

GM-CSF Factor estimulador de colonias granulocito-macrófago 

HCVC Hospital Clínico Veterinario Complutense 

HGE Ehrlichiosis granulocítica humana 

IFI Inmunofluorescencia indirecta 

IFN Interferón 

Ig Inmunoglobulina 

IL Interleucina 

IP Ioduro de Propidio 

LPS Lipopolisacárido 

LT Linfotoxina 

MAPK Ruta de transducción de señales Mitogen-Activated Protein Kinases 

MASP Proteasas de serina asociadas a MBL 

MBL Lectina de unión a manosa 

MBLA Mouse-specific B lymphocyte antigen 



 

MMP Metaloproteinasa 

MT-MMP Metaloproteinasa asociada a la membrana 

NK Células “natural killer” o linfocitos citolíticos naturales 

NKSF Natural killer cell stimulatory factor 

NO Óxido Nítrico 

NOD Dominio de oligomerización de nucleótido 

NOS Sintasa de óxido nítrico 

PAMP Patrones moleculares asociados a patógenos 

PBS Phosphate buffer solution 

PCR Reacción en cadena de la polimerasa 

pDC Célula dendrítica plasmocitoide 

PE Ficoeritrina 

PG Prostaglandina 

PK Proteína quinasa 

PRR Receptor de reconocimiento de patrones 

PTX3 Pentraxina larga 3 

SP Surfactante pulmonar 

SPD Enfermedad del salmón (Salmon Poisoning Disease) 

SSC Dispersión lateral de luz (side light scatter) 

Tc Linfocitos T citotóxicos 

TCR Receptor del antígeno de los linfocitos T 

TGF-β Factor de crecimiento transformante β 

Th Linfocitos T cooperadores (T helper) 

TLR Receptor tipo Toll 

TNF Factor de necrosis tumoral 

Treg Linfocitos T reguladores 

UCM Universidad Complutense de Madrid 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ÍNDICE 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

1. INTRODUCCIÓN .....................................................................1 
 

2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA................................................5 
 

2.1. LA RESPUESTA INMUNITARIA EN LA ESPECIE CANINA ........................ 7 

 
2.1.1. INMUNIDAD INNATA ..................................................................................... 8 

 

2.1.1.1. Componentes de la inmunidad innata........................................................... 9 
a. Barreras físicas y químicas:........................................................................................................ 9 

b. Componentes celulares de la inmunidad innata.......................................................................... 9 

c. Componentes humorales de la inmunidad innata...........................................................14 

2.1.1.2. Reconocimiento innato de los agentes patógenos ...................................... 28 

 

2.1.2. INMUNIDAD ADAPTATIVA......................................................................... 31 

 

2.1.2.1. Componentes de la inmunidad adaptativa .................................................. 33 
a. Órganos y tejidos de la inmunidad adaptativa .................................................................... 33 

b. Componentes celulares de la inmunidad adaptativa ........................................................... 36 

c. Componentes humorales de la inmunidad adaptativa ......................................................... 44 

2.1.2.2. Reconocimiento antigénico de la inmunidad adaptativa ............................ 48 

 

2.2. CITOMETRÍA DE FLUJO................................................................................... 51 

 

2.2.1. MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA RESPUESTA INMUNITARIA ............... 51 

2.2.2. FUNDAMENTOS DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO ................................... 53 

2.2.3. COMPONENTES DE LOS CITÓMETROS DE FLUJO................................. 56 

2.2.4. APLICACIONES DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO..................................... 57 

 

2.3. EHRLICHIOSIS CANINA.................................................................................... 60 

 

2.3.1. INTRODUCCIÓN A LA EHRLICHIOSIS CANINA...................................... 60 

2.3.2. ESPECIES DE LOS GÉNEROS EHRLICHIA, ANAPLASMA Y 

NEORICKETTSIA QUE AFECTAN A LA ESPECIE CANINA ............................... 61 

2.3.3. EHRLICHIOSIS MONOCÍTICA CANINA..................................................... 64 

2.3.3.1. Patogenia y cuadro clínico de la EMC ....................................................... 65 

2.3.3.2. Hallazgos laboratoriales en la EMC ........................................................... 67 

2.3.3.3. Diagnóstico de la EMC .............................................................................. 68 

2.3.3.4. Tratamiento de la EMC .............................................................................. 71 



 

2.3.3.5. Prevención de la EMC................................................................................ 75 

2.3.3.6. La EMC en España..................................................................................... 76 

2.3.3.7. Inmunopatogenia y respuesta inmunitaria en la EMC ............................... 77 

 

2.4. LA DOXICICLINA................................................................................................ 93 

 

2.4.1. EFECTOS EN LOS MICROORGANISMOS PATÓGENOS Y MECANISMO 

DE ACCIÓN ............................................................................................................... 95 

2.4.2. FARMACOCINÉTICA .................................................................................... 95 

2.4.3. EFECTOS NO ANTIMICROBIANOS ............................................................ 97 

 
3. OBJETIVOS .......................................................................... 103 

 
4. MATERIALES Y MÉTODOS............................................. 109 
 

4.1. PLAN DE TRABAJO .......................................................................................... 111 

 

4.2. ANIMALES .......................................................................................................... 113 

 

4.3. PROTOCOLO DIAGNÓSTICO Y CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN DE 

LOS ANIMALES ........................................................................................................ 114 

 

4.3.1. ANAMNESIS.................................................................................................. 114 

4.3.2. EXPLORACIÓN FÍSICA............................................................................... 115 

4.3.3. TOMA DE MUESTRAS SANGUÍNEAS...................................................... 115 

4.3.4. CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES.......................... 116 

 

4.4. ENSAYO CLÍNICO: ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA .................. 118 

 
4.4.1. PROTOCOLO DE TRATAMIENTO CON DOXICICLINA ........................ 118 

4.4.2. PLANIFICACIÓN DE LOS CONTROLES................................................... 119 

 
4.5. TÉCNICAS LABORATORIALES EMPLEADAS .......................................... 120 

 
4.5.1. HEMATOLOGÍA Y BIOQUÍMICA SANGUÍNEA...................................... 120 



 

4.5.2. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: INMUNOFLUORESCENCIA  

INDIRECTA (IFI) ..................................................................................................... 122 

4.5.2.1. Antígenos empleados................................................................................ 122 

4.5.2.2. Técnica ..................................................................................................... 123 

4.5.2.3. Puntos de corte ......................................................................................... 125 

4.5.3. DIAGNÓSTICO MOLECULAR: REACCIÓN EN CADENA DE LA 

POLIMERASA (PCR) .............................................................................................. 126 

4.5.3.1. Extracción de ADN .................................................................................. 126 

4.5.3.2. Control de la extracción de ADN ............................................................. 126 

4.5.3.3. Cuantificación  y valoración de la calidad del ADN................................ 127 

4.5.3.4. Procesamiento de las muestras mediante PCR......................................... 127 

4.5.4. CITOMETRÍA DE FLUJO ............................................................................. 130 

4.5.4.1. Anticuerpos monoclonales empleados ..................................................... 130 

4.5.4.2. Procesado de las muestras ........................................................................ 131 

4.5.4.3. Análisis de los datos e inmunofenotipaje ................................................. 133 

4.5.5. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN PLASMÁTICA DE 

CITOCINAS MEDIANTE ELISA............................................................................ 138 

4.5.5.1. Protocolo de procesado de las muestras ................................................... 138 

4.5.5.2. Lectura de la absorbancia ......................................................................... 140 

 
4.6. ESTUDIO ESTADÍSTICO.................................................................................. 141 

 
5. RESULTADOS.......................................................................145 
 

5.1. CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES.......................................................... 147 

 

5.2. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS ........... 151 

 

5.2.1. DESCRIPCIÓN ESTADÍSTICA DE LA POBLACIÓN DE  

PERROS SANOS...................................................................................................... 151 

5.2.1.1. Distribución en función del sexo.............................................................. 151 

5.2.1.2. Distribución en función de la edad........................................................... 152 

5.2.1.3. Distribución en función de la raza............................................................ 153 

5.2.2. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS BIOPATOLÓGICOS DE LA 

POBLACIÓN DE PERROS SANOS........................................................................ 153 

5.2.2.1. Analítica sanguínea básica y proteinograma ............................................ 153 

5.2.2.2. Inmunofenotipo ........................................................................................ 156 



 

5.2.2.3. Concentración plasmática de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10 ...................... 157 

5.2.3. ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE LA EDAD, EL SEXO Y LA RAZA 

SOBRE LAS VARIABLES ANALIZADAS EN LA POBLACIÓN DE PERROS 

SANOS...................................................................................................................... 158 

5.2.3.1. Sexo.......................................................................................................... 158 

5.2.3.2. Edad.......................................................................................................... 158 

5.2.3.3. Raza.......................................................................................................... 165 

 

5.3. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS CON EMC ..... 170 

 

5.3.1. DESCRIPCIÓN ESTADÍSTICA DE LA POBLACIÓN DE PERROS CON 

EMC .......................................................................................................................... 170 

5.3.1.1. Distribución en función del sexo.............................................................. 170 

5.3.1.2. Distribución en función de la edad........................................................... 171 

5.3.1.3. Distribución en función de la raza............................................................ 171 

5.3.1.4. Distribución en función de la fase de la EMC ......................................... 172 

5.3.2. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS BIOPATOLÓGICOS DE LA 

POBLACIÓN DE PERROS CON EMC .................................................................. 173 

5.3.2.1. Analítica sanguínea básica y proteinograma............................................ 173 

5.3.2.2. Inmunofenotipo ........................................................................................ 176 

5.3.2.3. Concentración plasmática de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α ...................... 177 

5.3.3. ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE LA FASE DE LA EMC SOBRE LAS 

VARIABLES ANALIZADAS EN LA POBLACIÓN DE PERROS CON EMC.... 177 

 

5.4. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SIN EMC Y CON 

DIFERENTES PATOLOGÍAS.................................................................................. 182 

 

5.4.1. DESCRIPCIÓN ESTADÍSTICA DE LA POBLACIÓN DE PERROS SIN 

EMC PERO CON OTRAS PATOLOGÍAS ............................................................. 182 

5.4.1.1. Distribución en función del tipo de patología .......................................... 182 

5.4.1.2. Distribución en función del sexo.............................................................. 184 

5.4.1.3. Distribución en función de la edad........................................................... 184 

5.4.1.4. Distribución en función de la raza............................................................ 185 

5.4.2. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS BIOPATOLÓGICOS DE LA 

POBLACIÓN DE PERROS SIN EMC PERO CON OTRAS PATOLOGÍAS........ 186 

 

5.5. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS ENTRE 

LAS POBLACIONES DE PERROS SANOS, CON EMC Y CON OTRAS 

PATOLOGÍAS ............................................................................................................ 187 



 

 

5.6. ENSAYO CLÍNICO: EVOLUCIÓN DE LAS VARIABLES ANALIZADAS A 

LO LARGO DEL TIEMPO TRAS LA ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA 

EN PERROS SANOS Y EN PERROS CON EMC .................................................. 201 

 

5.6.1. EVOLUCIÓN DE LOS PARÁMETROS DEL ERITROGRAMA E ÍNDICES 

ERITROCITARIOS .................................................................................................. 202 

5.6.2.  EVOLUCIÓN DEL RECUENTO PLAQUETARIO A LO LARGO DEL 

TIEMPO .................................................................................................................... 209 

5.6.3. EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DE LOS RECUENTOS  

LEUCOCITARIOS ................................................................................................... 210 

5.6.4. EVOLUCIÓN DE LOS PARÁMETROS DE LA BIOQUÍMICA 

SANGUÍNEA BÁSICA ............................................................................................ 218 

5.6.5. EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DE LOS PARÁMETROS DEL 

PROTEINOGRAMA ................................................................................................ 222 

5.6.6.  EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DEL INMUNOFENOTIPO ....................... 233 

5.6.7. EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DE LA CONCENTRACIÓN PLASMÁTICA 

DE IFN-γ, IL-6, IL-10 Y TNF-α ...............................................................................244 

 
6. DISCUSIÓN............................................................................249 
 

6.1. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS ........... 251 

 

6.1.1. DATOS ANALÍTICOS DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS.......... 251 

6.1.1.1. Analítica sanguínea .................................................................................. 251 

6.1.1.2. Inmunofenotipo ........................................................................................ 252 

6.1.1.3. Concentración plasmática de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α ...................... 257 

6.1.2. ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DEL SEXO, LA EDAD Y LA RAZA 

SOBRE LAS VARIABLES ANALIZADAS EN LA POBLACIÓN DE PERROS 

SANOS...................................................................................................................... 261 

6.1.2.1. Sexo .......................................................................................................... 261 

6.1.2.2. Edad.......................................................................................................... 261 

6.1.2.3. Raza .......................................................................................................... 266 

 

6.2. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS ENTRE 

LAS POBLACIONES DE PERROS SANOS, CON EMC Y CON OTRAS 

PATOLOGÍAS ............................................................................................................ 271 

 



 

6.3. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS ENTRE 

LOS PERROS CON EMC EN FASE SUBCLÍNICA Y LOS PERROS CON EMC 

EN FASE CLÍNICA.................................................................................................... 276 

 

6.4. ENSAYO CLÍNICO: EVOLUCIÓN DE LAS VARIABLES ANALIZADAS A 

LO LARGO DEL TIEMPO TRAS LA ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA 

EN PERROS SANOS Y EN PERROS CON EMC.................................................. 279 

 
7. CONCLUSIONES ................................................................. 289 

 
8. RESUMEN ............................................................................. 295 

 
9. SUMMARY............................................................................ 299 

 
10. BIBLIOGRAFÍA ................................................................... 303 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



1 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. INTRODUCCIÓN 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



2 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Introducción 

 

3 

 

 

 

 

La ehrlichiosis monocítica canina (EMC) es una enfermedad de transmisión 

vectorial causada por Ehrlichia canis, bacteria gramnegativa intracelular obligada con 

tropismo por monocitos y macrófagos. A pesar de que la primera descripción de la 

infección por E. canis en el perro se remonta a 1935, los conocimientos actuales sobre la 

respuesta inmunitaria y la inmunopatogenia en el curso de la enfermedad en el perro son 

escasos. Diversos investigadores han sugerido que la respuesta inmunitaria desarrollada en 

la EMC no sólo es ineficaz, sino que puede contribuir de forma decisiva en el cuadro 

clínico, la sintomatología y los hallazgos laboratoriales y anatomopatológicos de los perros 

afectados.  

 

La doxiciclina es uno de los fármacos más empleados en el tratamiento de esta 

patología, así como en las enfermedades causadas, tanto en el perro como en otros 

animales y en el hombre, por otras especies bacterianas de la familia Anaplasmataceae, a la 

que pertenece E. canis. Se trata de una tetraciclina semisintética ampliamente prescrita por 

sus conocidas propiedades antimicrobianas basadas en la inhibición de la síntesis proteica 

en los microorganismos sensibles. Sin embargo, este fármaco cada vez recibe más atención 

por otra serie de propiedades independientes de su actividad antimicrobiana: se ha descrito 

que la doxiciclina, al igual que otras tetraciclinas, puede ejercer una serie de efectos 

inmunomoduladores y/o antiinflamatorios, asociados con efectos sobre la proliferación y 

actividad de los linfocitos sanguíneos, inhibición de la síntesis de algunas citocinas e 

inhibición de la actividad de determinadas metaloproteinasas. Estos efectos han promovido 

el que en la actualidad existan numerosos estudios clínicos en marcha evaluando su posible 

empleo en patologías tan dispares como la artritis reumatoide, periodontitis, patologías 

dermatológicas de base inmunomediada o, incluso, en ciertas patologías oncológicas. 

Algunos autores han sugerido que la respuesta al tratamiento con doxiciclina en algunas 

patologías infecciosas podría asociarse no sólo a su efecto antimicrobiano, sino también a 

sus efectos directos sobre el sistema inmunitario, que podrían favorecer la eliminación del 

agente y evitar el desarrollo de lesiones o alteraciones inmunomediadas, como las que 

suelen asociarse con la EMC. 

 

Los estudios existentes hasta el momento para tratar de esclarecer tanto la respuesta 

inmunitaria y la inmunopatogenia de la infección por Ehrlichia spp. como el efecto de la 

doxiciclina sobre el sistema inmunitario se han llevado a cabo principalmente in vitro o en 

modelos murinos. A su vez, los conocimientos disponibles sobre las subpoblaciones 

linfocitarias en la especie canina, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas, son 



Introducción 

 

4 

muy limitados. Todo ello ha conducido a que en esta tesis doctoral se haya intentado 

profundizar en el conocimiento de la respuesta inmunitaria en perros con infección natural 

por E. canis, principalmente basándonos en el inmunofenotipo y la secreción de citocinas. 

Asimismo, se ha evaluado el efecto que sobre el sistema inmunitario ejerce la doxiciclina 

tanto en los perros sanos como en los perros con EMC. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

5 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 

 

 
 

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

6 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

7 

 

2.1. LA RESPUESTA INMUNITARIA EN LA ESPECIE CANINA 

 

 
El sistema inmunitario es uno de los componentes más complejos del organismo y 

es el encargado de la protección de los animales frente a la invasión microbiana y otras 

agresiones, por lo que resulta esencial para la vida.  

 

La protección del organismo viene dada por un sistema complejo de mecanismos de 

defensa que se interrelacionan para conseguir de forma conjunta la destrucción o control 

del agente patógeno. El fallo de estas defensas, tanto porque el sistema inmunitario se 

encuentre dañado como porque el agente patógeno sea capaz de evadir las defensas del 

hospedador, dará como resultado la enfermedad e, incluso, la muerte del animal afectado 

(Tizard 2009h). 

 

Tradicionalmente se ha dividido el sistema inmunitario en dos componentes (innato 

y adaptativo), con diferentes funciones y papeles en la defensa del hospedador y que 

constan de lo que podríamos denominar un brazo aferente (o sensitivo) y un brazo eferente 

(o efector). El brazo aferente se encargará de la forma en la que los organismos 

multicelulares son capaces de percibir la infección, mientras que el brazo eferente será el 

encargado de tratar de erradicar dicha infección. Ambos brazos constan a su vez de un 

componente humoral y otro componente celular (Beutler 2004). 

 

A pesar de la división descrita entre inmunidad innata y adaptativa, ambos 

componentes del sistema inmunitario se relacionan entre sí, de forma que, en muchas 

ocasiones, puede ser difícil determinar dónde terminan las labores de la inmunidad innata y 

dónde comienzan las de la inmunidad adaptativa (Beutler 2004).  

 

Una vez hecha esta apreciación, con el fin de facilitar la comprensión de los 

mecanismos implicados en la respuesta inmunitaria en los organismos superiores, haremos 

en esta revisión bibliográfica la división clásica de los componentes innato y adaptativo, 

para centrarnos, a continuación, en la respuesta inmunitaria que se genera en la especie 

canina frente a la invasión rickettsial por especies del género Ehrlichia.  

 

 

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

8 

 
2.1.1. INMUNIDAD INNATA  

 
Todos los seres vivos, para garantizar su supervivencia, deben poseer alguna forma 

de defensa frente a los organismos que puedan causarles algún tipo de daño que les lleve a 

contraer enfermedad o, incluso, a la muerte. Tanto los invertebrados como los vertebrados 

poseen defensas inmunitarias innatas y, sin embargo, el sistema inmunitario adquirido 

evolucionó únicamente después de la aparición de los peces provistos de mandíbula, de 

forma que sólo los vertebrados superiores poseen ambas formas de inmunidad, innata y 

adaptativa (Tizard 2009j). 

 
La inmunidad innata, que también se denomina inmunidad natural o espontánea, 

aporta la primera línea de defensa frente a los microorganismos y consiste en un conjunto 

de mecanismos celulares y bioquímicos de protección existentes ya de forma previa al 

encuentro con los patógenos y que son capaces de activarse con rapidez una vez producida 

la infección. Estos mecanismos sólo se instauran frente a los patógenos y los derivados de 

las células dañadas y responden siempre de la misma manera, al carecer de la llamada 

“memoria inmunitaria” (Abbas et al. 2008g, Tizard 2009h).  

 
Esta función de la inmunidad innata de ofrecer la primera respuesta frente a los 

microorganismos de forma rápida no es su única labor, sino que también estimula las 

respuestas adaptativas, de forma que estas respuestas adaptativas únicamente se activarán 

tras haberse producido el reconocimiento inmunitario innato. Es necesario, por tanto, que 

exista una comunicación entre ambos sistemas (Janeway & Medzhitov 1998, Medzhitov & 

Janeway 1998, Medzhitov & Janeway 2000, Saalmuller 2006, Abbas et al. 2008g).  

 
A continuación vamos a pasar a hacer una revisión de los componentes celulares y 

humorales que participan en las respuestas inmunitarias innatas y de los mecanismos de 

reconocimiento inmunitarios implicados en estas respuestas. En muchas ocasiones será 

inevitable hacer referencia a las funciones o relaciones existentes con las respuestas 

adaptativas, debido a la interconexión existente ya descrita. 

 

 

 

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

9 

 

2.1.1.1. Componentes de la inmunidad innata 

 

Los principales componentes de la inmunidad innata son los siguientes: 

 

a.  Barreras físicas y químicas: las defensas más efectivas del organismo serán 

aquellas que impidan la entrada de los patógenos. No todos los autores consideran que 

estas barreras pertenezcan al sistema inmunitario (Tizard 2009h), pero tradicionalmente 

han sido incluidas como un componente más de la inmunidad innata (Abbas et al. 2008g).  

 

 La separación física entre el medio externo y el hospedador es llevada a cabo 

principalmente por tres superficies: la piel y las superficies mucosas del aparato digestivo y 

del aparato respiratorio. Estas superficies están constituidas por un epitelio continuo que 

forma una barrera física que impide el paso de los microorganismos. Si estos epitelios 

resultan dañados, habrá una predisposición al desarrollo de infecciones (Abbas et al. 

2008g, Tizard 2009h). 

 

 Por otra parte, no debemos olvidar la existencia de otras defensas físicas incluidas 

en los denominados procesos de “auto-limpieza”, como la tos, el estornudo o el flujo 

mucoso en el aparato respiratorio, el vómito y la diarrea en el aparato digestivo o el propio 

flujo urinario en el aparato urinario (Tizard 2009h).  

 

Además, los epitelios son capaces de producir péptidos que poseen propiedades 

antimicrobianas y que describiremos con más detalle en el apartado de los componentes 

humorales de la inmunidad innata.  

 

b. Componentes celulares de la inmunidad innata: los componentes celulares más 

importantes del sistema inmunitario innato proceden de las células madre de la médula 

ósea. Incluyen células de la estirpe mielocítica, como los neutrófilos, los fagocitos 

mononucleares, las células dendríticas y los mastocitos, y células de la estirpe linfocítica, 

como los linfocitos citolíticos naturales (o células “natural killer”, NK), los linfocitos T γδ 

y los linfocitos B B-1 (Beutler 2004, Abbas et al. 2008g).   

 

 Dos tipos de estos leucocitos se han especializado en la fagocitosis de los 

microorganismos invasores y nacen a partir de una estirpe común de células de la médula 

ósea: son los neutrófilos y los macrófagos, y comenzaremos por la descripción de sus 

características en esta revisión de los componentes celulares implicados en la inmunidad 

innata. 

 



Revisión bibliográfica 

 

10 

• Neutrófilos: los neutrófilos también se denominan “fagocitos polimorfonucleares” o 

“granulocitos polimorfonucleares neutrófilos”  y representan la población más 

abundante de leucocitos circulantes en muchas especies de mamíferos, incluido el 

perro. Son células esféricas, de unos 12 a 15 µm de diámetro y presentan un núcleo 

segmentado en unos tres a cinco lobulillos conectados entre sí. En su citoplasma 

podemos encontrar granulaciones que contienen enzimas (lisozima, colagenasa, 

elastasa...) y otras sustancias de actividad microbicida (como defensinas y 

catelicidinas). En la sangre existe una población de neutrófilos circulantes y otra 

población de neutrófilos que se hallan secuestrados en los capilares. Durante la 

infección bacteriana, el número de neutrófilos circulantes aumentará de forma 

llamativa. Estas células intervienen en las primeras fases de las respuestas 

inflamatorias, de forma muy rápida, pero son células de vida muy corta, sobreviviendo 

únicamente 6 horas, tras las cuales entran en el proceso de apoptosis (Beutler 2004, 

Abbas et al. 2008g, Tizard 2009q). Una vez que los neutrófilos alcanzan el lugar de la 

infección, comienza el proceso de fagocitosis y destrucción de las partículas extrañas 

mediante una combinación de procesos oxidativos y procesos enzimáticos (Smith 

1994, Tizard 2009q). Por otra parte, estas células son capaces de sintetizar y secretar 

mediadores humorales, como ciertas citocinas, que pueden jugar un papel importante 

en la regulación de las respuestas inmunitarias (Smith 1994).  

 

• Fagocitos mononucleares: el sistema mononuclear fagocitario o sistema monocito-

macrofágico está constituido por células que se forman a partir de células madre de la 

médula ósea denominadas monoblastos (Tizard 2009l). Los componentes de este 

sistema presentan como función principal la fagocitosis y ocupan un lugar central en la 

inmunidad innata y adaptativa. El primer tipo celular de este sistema que abandona la 

médula ósea para entrar en el torrente sanguíneo es el monocito, que permanece en 

sangre durante unos tres días (Abbas et al. 2008g, Tizard 2009l). Se trata de células de 

unos 10-15 µm con un núcleo simple y un abundante citoplasma granular fino que 

contiene lisosomas y vacuolas fagocíticas (Abbas et al. 2008g, Tizard 2009l). Una vez 

que han penetrado en los tejidos, se produce su maduración para dar lugar a los 

macrófagos, células que presentan una morfología variable en función de los estímulos 

a los que estén sometidos y que han recibido diferentes nombres según su localización 

en el organismo (células de Kupffer en el hígado, osteoclastos en el hueso, 

microgliocitos en el sistema nervioso central, etc.). Una vez que los macrófagos 

resultan activados se inician sus funciones efectoras casi a tanta velocidad como ocurre 

con los neutrófilos. Sin embargo, estas células, a diferencia de lo que ocurre con los 

neutrófilos, no se han diferenciado por completo, por lo que pueden sufrir una división 

celular en el foco inflamatorio, lo que, unido al hecho de que poseen una vida media 

mucho mayor, hace que sean las células efectoras dominantes durante las últimas 



Revisión bibliográfica 

 

11 

etapas de la respuesta inmunitaria innata, 1-2 días después de la infección (Abbas et al 

2008g). Además, los macrófagos son células centinela importantísimas, junto con las 

células dendríticas y los mastocitos, y son capaces de secretar citocinas 

proinflamatorias que promueven respuestas inmunitarias tanto innatas como 

adaptativas. 

 

Además de estos leucocitos polimorfonucleares y mononucleares que se han 

especializado en la fagocitosis, existen otras células procedentes de la estirpe mielocítica 

que participan en la respuesta inmunitaria innata y que describiremos a continuación: 

 

• Células dendríticas (DC): las células dendríticas constituyen una población 

heterogénea de células que pueden ser halladas en prácticamente cualquier tejido del 

organismo, a excepción del cerebro, algunas partes del globo ocular y los testículos. 

Son especialmente numerosas en los nódulos linfáticos, la piel y superficies mucosas, 

localizaciones donde con mayor frecuencia podrán encontrarse patógenos. Las 

células dendríticas poseen tres funciones principales: en primer lugar, sirven como 

células centinela, junto con los macrófagos y, por tanto, activan las respuestas 

inmunitarias innatas. En segundo lugar, se encargan del procesamiento de los 

antígenos, al tratarse de las células presentadoras de antígeno más importantes del 

organismo. Finalmente, gracias a sus funciones previamente descritas, son capaces de 

regular ambas formas de inmunidad (Tizard 2009i), constituyendo un importante 

puente entre la inmunidad innata y la adaptativa. Las células dendríticas son las 

únicas células presentadoras de antígeno capaces de activar los linfocitos T vírgenes, 

es decir, aquellos que no han entrado aún en contacto con el antígeno (Abbas et al. 

2008g, Tizard 2009i). Además, son capaces de ejercer efectos citotóxicos directos 

(Chauvin & Josien 2008, Tizard 2009i). Las células dendríticas poseen una 

morfología variable, dependiendo principalmente de su estado de activación o 

maduración, y son capaces de migrar al sitio donde hay inflamación, para atrapar y 

procesar el posible antígeno y los restos celulares, y transportarlos a continuación a 

los tejidos linfoides para poder llevarse a cabo la presentación antigénica 

(Banchereau et al. 2000, Tizard 2009i). Esta migración dendrítica se acompaña de 

una maduración y diferenciación hacia células dendríticas maduras que conduce a 

una mayor expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad 

(CMH), moléculas de adhesión celular (CD54, CD58) y moléculas coestimuladoras 

involucradas en la activación de los componentes celulares del sistema inmunitario 

adaptativo (CD80, CD86), entre otras. Tras esta maduración, las células dendríticas 

son ya capaces de interactuar en los nódulos linfáticos con los linfocitos T vírgenes 

(Saalmuller 2006). 

 



Revisión bibliográfica 

 

12 

• Mastocitos: estas células forman parte de las denominadas células centinela, al 

igual que los macrófagos y las células dendríticas, y se originan a partir de células 

madre de la médula ósea (Tizard 2009l). Son células grandes, de unos 15 a 20 µm, 

redondeadas, con el citoplasma densamente empaquetado con gránulos grandes 

(lisosomas secretores). El precursor de los mastocitos migra hacia los tejidos, donde 

se produce su maduración y sobrevive durante varias semanas o meses. Los 

mastocitos se localizan en diferentes tejidos conectivos del organismo, bajo las 

superficies mucosas, en la piel y rodeando los nervios, pero en donde encontraremos 

un mayor número de estas células es en las zonas del organismo en las que exista una 

mayor exposición a posibles agentes patógenos, es decir, en la piel y en los aparatos 

digestivo y respiratorio. En estas localizaciones se disponen cerca de los vasos 

sanguíneos, donde, mediante la liberación de ciertas moléculas que contienen sus 

gránulos, pueden regular el flujo sanguíneo e influyen en la migración celular, 

jugando así un papel central en la inmunidad innata y, más concretamente, en la 

inflamación aguda (Tizard 2009l). 

 

Como se ha comentado al comienzo de este apartado, dentro de los componentes 

celulares implicados en las respuestas inmunitarias innatas se incluyen no sólo células de la 

estirpe mielocítica, sino también células pertenecientes a la estirpe linfocítica, entre las que 

destacan: 

 

• Linfocitos citolíticos naturales o linfocitos NK: estas células pertenecen a una 

población de linfocitos que contribuyen a las respuestas protectoras innatas frente a una 

gran variedad de agentes infecciosos y células tumorales gracias a su habilidad para 

producir la destrucción directa de las células diana y ser, además, una fuente temprana 

de citocinas inmunorreguladoras (Trinchieri 1989, Abbas et al. 2008g). Probablemente 

comparten precursores en la médula ósea con los linfocitos T, pero, a diferencia de 

éstos, los linfocitos citolíticos naturales no dependen de un procesamiento en el timo 

para su total desarrollo (Tizard 2009s). Pueden encontrase en sangre periférica y en 

diferentes tejidos, como médula ósea, bazo, nódulos linfáticos, hígado, pulmón, 

omento, intestino y placenta (Vivier 2006). Las células NK en la mayoría de los 

mamíferos son linfocitos grandes, granulares y sin actividad fagocítica, y se ha 

estimado que aproximadamente el 5-15% del total de los linfocitos que se hallan en 

sangre circulante pertenecen a esta población (Tizard 2009s). Prácticamente todos los 

linfocitos citolíticos naturales presentes en sangre periférica contienen gránulos 

citoplasmáticos con perforina, una proteína con potente actividad citolítica por su 

habilidad para formar poros en la membrana celular (Abbas et al. 2008g, Tizard 

2009s). En base a sus marcadores de superficie, no son ni linfocitos T ni B (Glimcher 

et al. 1977, Abbas et al. 2008g, Tizard 2009s) y no expresan receptores del antígeno de 



Revisión bibliográfica 

 

13 

distribución clonal sometidos a un reordenamiento somático (Abbas et al. 2008g). De 

hecho, no utilizan receptores antígeno-específicos como hacen el resto de linfocitos, 

sino que emplean diferentes combinaciones de receptores de reconocimiento de lesión 

inhibidores y activadores para unirse a las células (Tizard 2009s). Tradicionalmente 

han sido descritos como una población de células efectoras citotóxicas cuya rápida 

respuesta frente a las células infectadas o lesionadas sin necesidad de un contacto 

previo hace que participen en la primera línea de defensa inmunitaria, anterior a la 

activación de las respuestas adaptativas frente a la infección y el desarrollo tumoral 

(Trinchieri 1989). Pero, además, se ha comprobado que los linfocitos NK interaccionan 

con diferentes componentes celulares, principalmente con células presentadoras de 

antígeno y linfocitos T y B, siendo capaces de este modo de ejercer funciones 

reguladoras de la inmunidad innata y adaptativa (Lunemann et al. 2009). Por otra parte, 

es importante tener en cuenta que no se trata de una población celular homogénea, sino 

que en ella se incluye una serie de subpoblaciones con diferentes funciones, 

localizaciones y orígenes. En el hombre, las células NK en sangre periférica pueden ser 

divididas según su expresión de los marcadores de superficie CD56 y CD16 en, al 

menos, dos subpoblaciones funcionalmente diferentes. Las células NK CD56dim 

CD16+ constituyen aproximadamente el 90% del total de los linfocitos NK en sangre 

periférica y responden al reconocimiento de células infectadas o dañadas 

principalmente mediante su destrucción directa (Lanier et al. 1986, Lunemann et al. 

2009), siendo su producción de citocinas baja (Cooper et al. 2001), por lo que 

podríamos hablar de ellas como las verdaderas células NK “citolíticas”. En cambio, las 

células NK CD56bright CD16- constituyen menos del 10% del total de las células NK 

en sangre periférica, siendo más abundantes en los órganos linfoides secundarios 

(Ferlazzo et al. 2004) y, una vez activadas, producen abundantes citocinas (Cooper et 

al. 2001), adquiriendo citotoxicidad únicamente tras una prolongada activación 

(Ferlazzo et al. 2004). Además, se ha descrito otra población de linfocitos citolíticos 

naturales que comparten propiedades tanto de los linfocitos NK como de los linfocitos 

T: son las células NK T. Son producidas en el timo pero su especificidad se centra en 

algunos patrones moleculares asociados a patógenos, característico de la inmunidad 

innata, como veremos más adelante. Sirven de unión entre las células T y el sistema 

innato de las células NK y juegan un papel importante en determinadas alergias, 

inmunidad antitumoral, autoinmunidad e inmunidad antimicrobiana (Tizard 2009s). 

 

•  Linfocitos T γδ y linfocitos B B-1: las barreras epiteliales y las cavidades serosas 

contienen ciertos tipos de linfocitos (como los linfocitos T γδ y los linfocitos B B-1, 

respectivamente) que reconocen a los microorganismos de contacto más habitual y 

responden frente a ellos. Como veremos más adelante en esta revisión bibliográfica, la 

mayor parte de los linfocitos T y B, participan en las respuestas inmunitarias 



Revisión bibliográfica 

 

14 

adaptativas y reconocen a las células diana gracias a unos receptores antigénicos 

exclusivos de cada clon de linfocitos que se generan mediante recombinación somática 

entre los segmentos de ADN de la línea germinal. En cambio, los linfocitos T γδ y los 

linfocitos B B-1 presentes en las cavidades serosas reconocen estructuras que se 

expresan de forma habitual en muchas especies de patógenos, presentando, por tanto, 

una diversidad mucho más escasa. Estos linfocitos responderán de forma similar a 

como lo hacen otras células de la inmunidad innata frente a una gran variedad de 

agentes invasores, bien mediante la secreción de citocinas, activación de fagocitos y 

destrucción de las células infectadas, en el caso de los linfocitos T γδ intraepiteliales, o 

bien mediante la producción de anticuerpos constituidos por inmunoglobulina M, en el 

caso de los linfocitos B-1 (Abbas et al. 2008g). 

 

c. Componentes humorales de la inmunidad innata: en el plasma y en los líquidos 

extracelulares podemos encontrar diferentes proteínas que, por una parte, ejercen funciones 

de reconocimiento de las células diana y, por otra parte, sirven como elementos efectores 

de la respuesta inmunitaria innata. Los principales componentes de esta rama humoral de la 

inmunidad innata son: el sistema del complemento, pentraxinas, colectinas, ficolinas, 

lisocima, lactoferrina, péptidos antimicrobianos y determinadas citocinas (Beutler 2004, 

Abbas et al. 2008g).  

 

� Sistema del complemento: el sistema del complemento fue descrito por primera vez

en 1901 por Jules Bordet y Octave Gengou (Bordet & Gengou 1901) gracias a una 

serie de ensayos que fueron realizados con el fin de estudiar la capacidad antibacteriana 

de la sangre humana. En estos experimentos se descubrió la existencia de dos 

fracciones en el suero sanguíneo normal en función de su estabilidad a altas 

temperaturas: una fracción termolábil y otra fracción termoestable. La primera de estas 

fracciones es la que posteriormente fue denominada “complemento”, en referencia a su 

actividad “complementaria” a la función antibacteriana ejercida por la fracción 

termoestable. Estos investigadores observaron que la fracción termolábil, el 

complemento, era necesaria para la opsonización de las bacterias pero, además, era 

capaz de destruir algunos microorganismos de forma directa. Hoy en día se sabe que el 

complemento es un sistema altamente complejo consistente en más de 30 proteínas 

séricas y de superficie celular que interactúan entre sí y con otras moléculas del sistema 

inmunitario y que está íntimamente involucrado no sólo en las respuestas inmunitarias 

innatas, sino también en la regulación de la inmunidad mediada por células B y T 

(Carroll 2004a, Abbas et al. 2008i). En condiciones normales, las proteínas del 

complemento se encuentran en su forma inactiva y, únicamente cuando son activadas 

por determinados estímulos, dan lugar a la formación de diferentes productos que 

ejercen las funciones efectoras del complemento que veremos a continuación. Esta 



Revisión bibliográfica 

 

15 

activación puede llevarse a cabo por, al menos, tres vías que se han denominanado 

clásica, alternativa y de la lectina. Las vías alternativa y de la lectina son mecanismos 

efectores de la inmunidad innata, mientras que la vía clásica es un mecanismo de la 

inmunidad adaptativa, ya que depende de la unión antígeno-anticuerpo. Sea cual sea la 

vía implicada en la activación del sistema del complemento, ésta se produce por medio 

de una cascada enzimática que da como resultado la generación de enzimas con 

actividad proteolítica, entre las que cabe destacar los complejos denominados C3-

convertasa y C5-convertasa que son proteínas clave encargadas de la escisión de la 

proteína C3 en los fragmentos denominados C3a y C3b y la proteína C5 en los 

fragmentos C5a y C5b, respectivamente, que poseen diferentes funciones biológicas 

(Abbas et al. 2008i). Precisamente uno de estos fragmentos proteolíticos constituye el 

componente central del complemento y la mayor opsonina del organismo, y en él 

convergen las tres vías de activación de este sistema: es el fragmento proteíco C3b, 

formado a partir de la escisión de C3 (Friec & Kemper 2009).  

 

 Las funciones biológicas de la activación del sistema del complemento por 

cualquiera de estas rutas incluyen la opsonización y fagocitosis de los agentes 

patógenos, la estimulación de las respuestas inflamatorias y la citólisis directa mediada 

por el complemento (Beutler 2004, Abbas et al. 2008i, Tizard 2009g). Los fragmentos 

proteicos C3b y C4b, formados tras la activación del complemento, son capaces de 

unirse mediante enlaces covalentes a las superficies de las células sobre las que se ha 

activado el complemento y, mediante su posterior unión a receptores específicos de los 

macrófagos y los neutrófilos, conducir a su fagocitosis. Esta fagocitosis de los 

microorganismos dependiente de C3b y C4b es un mecanismo de defensa importante 

frente a las infecciones tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa. Por otra 

parte, los fragmentos proteolíticos C5a, C4a y C3a son lo que se denomina 

“anafilatoxinas”. Estas moléculas son potentes agentes quimiotácticos y son capaces de 

inducir una reacción inflamatoria aguda mediante el reclutamiento de células efectoras 

del sistema inmunitario al lugar donde se ha producido la activación del complemento, 

a la vez que generan la activación y degranulación de los mastocitos y otras células 

inmunitarias (Beutler 2004, Abbas et al. 2008i). Además de los efectos descritos, la 

activación del complemento puede conducir a la lisis directa de los microorganismos 

en un mecanismo mediado por el “complejo de ataque a membrana” (o CAM), anillo 

formado por subunidades proteicas generadas en los pasos finales de la activación del 

complemento. En concreto se trata del complejo C5b6789, que se inserta dentro de la 

doble cadena lipídica de dicha membrana para dar lugar a la formación de poros que 

actúan como canales que permiten el movimiento libre de agua e iones, provocando un 

desequilibrio osmótico y la rotura de las células en cuya superficie se ha depositado 

(Abbas et al. 2008i). Por otra parte, hay que recordar que el sistema del complemento 



Revisión bibliográfica 

 

16 

ejerce funciones reguladoras de la inmunidad, en parte mediada por el hecho de que 

algunos de sus productos son capaces de actuar como señales secundarias para la 

activación de los linfocitos B y la síntesis de anticuerpos, iniciándose de este modo 

respuestas inmunitarias humorales propias de la inmunidad adaptativa (Carroll 2004a, 

Abbas et al. 2008i). Asimismo, se ha observado que el complemento modula las 

respuestas mediadas por células T, afectando tanto a la activación de dichas células 

como a sus funciones efectoras (Carroll 2004b). 

 

� Pentraxinas: se trata de un grupo de proteínas pentaméricas plasmáticas muy

antiguas desde el punto de vista evolutivo que se encargan del reconocimiento 

microbiano y participan en la inmunidad innata. Entre ellas destacan la proteína C 

reactiva, el amiloide sérico P y la pentraxina larga PTX3. Las dos primeras en 

ocasiones son denominadas “reactantes de fase aguda”, ya que su síntesis aumenta en 

respuesta a las interleucinas (IL) 1 y 6 que son producidas por los fagocitos en las 

respuestas inmunitarias innatas. Estas proteínas reconocen ligandos moleculares 

observados en las membranas de los agentes patógenos y en las células que se 

encuentran en proceso de apoptosis, pero no en las células sanas del hospedador. 

Pueden actuar como opsoninas y activar o interactuar con el sistema del complemento 

para ejercer sus funciones. La PTX3 no pertenece al grupo de los reactantes de fase 

aguda. Es producida por diferentes tipos celulares (principalmente células dendríticas, 

células endoteliales y macrófagos) en respuesta a TNF (Abbas et al. 2008g). 

 

� Colectinas: se trata de una familia de proteínas que presentan un dominio de

estructura similar al colágeno y otro dominio de lectina de tipo C. En este grupo de 

proteínas se incluyen tres que funcionan como moléculas solubles para el 

reconocimiento de patrones en la inmunidad innata: la lectina de unión a manosa 

(MBL) y las proteínas del surfactante pulmonar SP-A y SP-D. La lectina de unión a 

manosa es una proteína plasmática que es sintetizada en el hígado y se libera en las 

respuestas agudas. Se une a los carbohidratos de las membranas de bacterias 

grampositivas y gramnegativas, así como a algunos virus y parásitos, y puede activar el 

sistema del complemento (Medzhitov & Janeway 2000, Abbas et al. 2008g). 

 

� Ficolinas: las ficolinas son unas proteínas plasmáticas con características

estructurales parecidas a las de las colectinas, ya que poseen un dominio similar al 

colágeno pero, en lugar de un dominio de lectina de tipo C, poseen un dominio de tipo 

fibrinógeno para el reconocimiento de hidratos de carbono. Participan en las respuestas 

inmunitarias innatas mediante su unión a diferentes especies bacterianas, su 

opsonización y estimulación del sistema del complemento de forma similar a como lo 

hace la lectina de unión a manosa (Abbas et al. 2008g).  



Revisión bibliográfica 

 

17 

 

� Lisocima: Es una proteína presente en diferentes fluidos corporales capaz de

destruir las paredes de bacterias tanto grampositivas como gramnegativas por medio de 

un mecanismo enzimático (Beutler 2004). 

 

� Lactoferrina: se trata de una proteína capaz de alterar la motilidad de las bacterias y

su habilidad para formar biopelículas, así como ayudar a su eliminación (Singh et al. 

2002). 

 

� Péptidos antimicrobianos: como se comentó en el apartado de barreras físicas

implicadas en la inmunidad innata, los epitelios son capaces de producir péptidos que 

poseen propiedades antimicrobianas y que pertenecen a varias familias, entre las que 

cabe destacar las defensinas y las catelicidinas (Abbas et al. 2008g, Tizard 2009q). 

Aunque son estructuralmente diversas, estas familias peptídicas comparten una serie de 

características: poseen una carga neta catiónica debido a la presencia de múltiples 

residuos de arginina y lisina y son capaces de formar estructuras anfipáticas, al 

insertarse sus regiones hidrofóbicas en la membrana lipídica bacteriana, quedando las 

regiones hidrofílicas cubriendo la membrana o formando, incluso, canales iónicos, que 

dan como resultado una interrupción en la membrana y la muerte microbiana (Tizard 

2009q). 

 

� Defensinas: son unos pequeños péptidos catiónicos que contienen tres o

cuatro puentes disulfuro dentro de su cadena y que poseen una longitud de 28 a 

42 aminoácidos. En los mamíferos se han identificado más de 50 defensinas, que 

se clasifican en función de su origen y de la localización de los puentes disulfuro 

en tres familias: α, β y θ. Estas últimas sólo pueden encontrarse en los neutrófilos 

de primates. Las defensinas pueden producirse tanto de forma constitutiva como 

en respuesta a la infección por microorganismos. Son producidas en los epitelios 

de las mucosas y en ciertos tipos de leucocitos que contienen gránulos, son 

capaces de ejercer actividades microbicidas directas sobre bacterias, hongos y 

algunos tipos de virus y participan en la defensa inmunitaria mediante la 

atracción y activación de células relacionadas con la respuesta inflamatoria, 

principalmente monocitos, células dendríticas inmaduras y células T. Algunas 

defensinas pueden, además, neutralizar toxinas microbianas como, por ejemplo, 

las toxinas de Bacillus anthracis, Corynebacterium diphteridae o Staphylococcus 

aureus (Ganz et al. 1985, Daher et al.1986, Lehrer et al. 1989, Abbas et al. 2008g, 

Tizard 2009q). 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

18 

 

� Catelicidinas: se trata de péptidos de 12 a 80 aminoácidos de longitud que se

expresan en los neutrófilos y en los epitelios de la piel y en las mucosas digestiva 

y respiratoria. Su proteína precursora se transcribe para su proteolisis en dos 

péptidos. Poseen un amplio espectro de actividades antibacterianas. Las 

catelicidinas se almacenan en el interior de las células en su forma inactiva y, 

tanto la síntesis del precursor como la posterior proteolisis, pueden estimularse 

por las citocinas de la inflamación y los productos microbianos. El fragmento del 

extremo carboxílico ejerce una actividad tóxica directa sobre diversos 

microorganismos y, además, activa respuestas inmunitarias en leucocitos y otros 

tipos celulares (Zanetti 2004, Abbas et al. 2008g, Tizard 2009q). 

 
� Citocinas: las células del sistema inmunitario requieren de una comunicación que

permita coordinar sus efectos. Dicha comunicación es llevada a cabo en gran medida 

por las citocinas, mediadores polipeptídicos de bajo peso molecular secretados en 

respuesta a diferentes estímulos que participan tanto en las respuestas inmunitarias 

innatas como en las adaptativas, estando implicados, además, en el crecimiento y 

diferenciación celular, en la inflamación y en la reparación tisular (Nicod 1993, Abbas 

et al. 2008d, Tizard 2009f). La combinación de citocinas que son producidas en 

respuesta a una agresión determina el tipo de respuesta inmunitaria que se desencadena 

(Steinke & Borish 2006). En general son secretadas por células del sistema inmunitario 

y actúan, a su vez, sobre células del sistema inmunitario. Sin embargo, otras células del 

organismo son capaces del mismo modo de producir algunas de estas moléculas o de 

responder frente a ellas, como ocurre, por ejemplo, con algunas células endoteliales o 

con ciertos fibroblastos (Nicod 1993, Abbas et al. 2008d). Asimismo, ciertas citocinas 

son responsables de algunos de los procesos implicados en la hematopoyesis, como 

veremos más adelante (Nicod 1993, Abbas et al. 2008d). La producción de las citocinas 

se origina en respuesta a diferentes señales, entre las que destacan ciertos estímulos que 

inician las respuestas adaptativas, como son los antígenos que actúan a través de los 

receptores de los linfocitos y los complejos antígeno-anticuerpo que actúan sobre los 

receptores de anticuerpos, así como los patrones moleculares asociados a patógenos 

(PAMP) que actúan a través de los receptores de tipo Toll y que participan en las 

respuestas innatas (Tizard 2009f).  

 

 A pesar de que las citocinas forman un grupo heterogéneo desde el punto de 

vista estructural, todas ellas comparten una serie de propiedades: en primer lugar, son 

moléculas de vida corta y su secreción es un fenómeno breve y autolimitado, no 

existiendo habitualmente un almacenamiento como moléculas preformadas. Su síntesis 

se inicia por la transcripción génica transitoria consecuencia de la activación celular 



Revisión bibliográfica 

 

19 

ante los diferentes estímulos y, una vez sintetizadas, son secretadas rápidamente, dando 

lugar a un estallido de liberación cuando es necesario. Por otra parte, las citocinas 

pueden actuar a nivel local o sistémico. La mayoría de estas proteínas actúan cerca del 

lugar donde han sido secretadas, ejerciendo su función bien sobre la misma célula 

productora (acción autocrina) o sobre células vecinas (acción paracrina). Sin embargo, 

ciertas citocinas pueden ejercer acciones endocrinas, al ser secretadas al torrente 

circulatorio y actuar así a distancia. Uno de los ejemplos más característicos de esta 

acción endocrina es el factor de necrosis tumoral (TNF), con efectos tanto locales como 

sistémicos importantes. Además, las acciones de las citocinas son con frecuencia 

pleiotrópicas, es decir, que una misma citocina actúa sobre diferentes tipos celulares, 

no limitándose a una única diana y permitiendo así que un mismo mediador proteico 

inicie diferentes efectos biológicos. Por otra parte, las citocinas son redundantes en sus 

efectos, ya que diferentes moléculas ejercen las mismas funciones (Semenzato 1990, 

Abbas et al. 2008d, Tizard 2009f).  

 
 Para que puedan iniciarse estos efectos biológicos de las citocinas, sean o no 

autocrinos, paracrinos o endocrinos y redundantes y/o pleiotrópicos, estas moléculas 

deben unirse a receptores de membrana específicos en sus células diana. La expresión 

de estos receptores y, por tanto, la reactividad de las células ante las citocinas, está 

regulada por una serie de señales externas, de forma que ante un estímulo concreto, una 

célula determinada puede aumentar o disminuir su expresión del receptor de una 

citocina, mecanismo que permite mantener una especificidad de las respuestas 

inmunitarias. Esa señal externa que regula la expresión de los receptores de citocinas 

puede consistir, por ejemplo, en un antígeno bacteriano o en las propias citocinas, 

incluso la misma que se une al receptor, pudiendo existir una amplificación positiva o 

una retroalimentación negativa. De esta misma forma, las citocinas influyen 

frecuentemente en la síntesis y las acciones de otras citocinas (Abbas et al. 2008d, 

Tizard 2009f).  

 
 Debido a la diversidad estructural de este grupo proteico de mediadores de las 

respuestas inmunitarias, a lo largo del tiempo se ha tratado de hacer diversas 

clasificaciones. En la actualidad se tiende a emplear aquellas clasificaciones basadas en 

la estructura proteica o en las funciones que desempeñan las diversas citocinas. Así, 

por una parte, vamos a poder hablar de varias familias estructurales de estas proteínas: 

la familia más amplia es la que constituye el grupo 1. Son polipéptidos que poseen 

cuatro hélices-α enrolladas entre sí. En este grupo se incluye un gran número de 

interleucinas (IL-2, -3, -4, -5, -6, -7, -9, -11, -13, -15, -21, -23, -30), así como la 

hormona del crecimiento, leptina, eritropoyetina y prolactina. También se han incluido 



Revisión bibliográfica 

 

20 

en el grupo 1 dos subfamilias de citocinas relacionadas: la subfamilia del interferón 

(IFN-α/ β, IFN-γ) y la subfamilia de la IL-10. Las citocinas del grupo 2 están formadas 

por cadenas largas de láminas-β, e incluyen los factores de necrosis tumoral (TNF), el 

factor de crecimiento transformante β (TGF-β), la IL-1α, la IL-1β y la IL-18. Las 

citocinas del grupo 3 son pequeñas proteínas que poseen hélices-α y láminas-β e 

incluyen las quimiocinas y otras proteínas relacionadas. El grupo 4 está constituido por 

citocinas formadas por dominios con motivos variados y el representante típico es la 

IL-12. Hay una serie de citocinas que presentan estructuras singulares y no pertenecen 

a ninguna de estas familias principales: son la IL-14, la IL-16 y la IL-17 (Tizard 

2009f). 

 
 Por otra parte, podemos hablar de tres categorías funcionales de citocinas en 

función de sus principales acciones biológicas: los mediadores y reguladores de la 

inmunidad adaptativa, los estimuladores de la hematopoyesis y los mediadores y 

reguladores de la inmunidad innata. Los mediadores y reguladores de la inmunidad 

adaptativa son citocinas sintetizadas principalmente por los linfocitos T tras el 

reconocimiento antigénico y son capaces de actuar a varios niveles en las respuestas 

adquiridas. Así, algunas de estas moléculas promueven el crecimiento y diferenciación 

de ciertas poblaciones de linfocitos, mientras que otras atraen, activan y regulan la 

función de fagocitos mononucleares, neutrófilos o eosinófilos. Dentro de este grupo 

funcional de citocinas destacan las IL-2, -4, -5 y -13, así como el IFN-γ. Este último 

posee funciones importantes tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa. Por 

otra parte, los estimuladores de la hematopoyesis son citocinas secretadas por células 

de la médula ósea, leucocitos y otros tipos celulares y entre ellos destacan el Factor de 

Células Progenitoras, la IL-7 y la IL-3. Estas proteínas son necesarias para la 

hematopoyesis normal, estimulando el crecimiento y diferenciación de las células 

progenitoras de la médula ósea, asegurándose así el suministro de nuevos leucocitos en 

las reacciones inmunitarias e inflamatorias, procesos en los que se está generando un 

consumo acelerado de dichas células. En respuesta a los microorganismos infecciosos, 

ciertos leucocitos, principalmente los fagocitos mononucleares, sintetizan las citocinas 

que actúan como mediadores y reguladores de la inmunidad innata. Esta secreción de 

citocinas es la responsable de muchas de las funciones efectoras de las respuestas 

inmunitarias innatas tempranas frente a virus y bacterias (Abbas et al. 2008d). A 

continuación vamos a hacer una breve descripción de las citocinas de mayor relevancia 

como mediadores de la inmunidad innata, comenzando por el factor de necrosis 

tumoral-α, para continuar con la IL-1, las quimiocinas más importantes, la IL-12, los 

interferones de tipo I, el interferón-γ, la IL-10 y la IL-6. 

 



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21 

� Factor de necrosis tumoral-α (TNF- α): es una proteína trimérica de 25 kDa

producida por macrófagos, mastocitos, linfocitos T y B, células NK, células 

endoteliales y fibroblastos y es considerada el principal mediador de la respuesta 

inflamatoria aguda frente a bacterias gramnegativas y otros microorganismos 

(Tizard 2009l, Abbas et al. 2008d). Esta citocina ejerce un papel central en la 

activación de la respuesta inflamatoria, estimulando la atracción leucocitaria 

hacia los focos de lesión tisular y activando a estas células para la eliminación de 

los agentes causantes del daño (Ming et al. 1987, Abbas et al. 2008d, Tizard 

2009l). Por otra parte, gracias a su capacidad para potenciar la presentación 

antigénica y coestimular a los linfocitos T, contribuye a la comunicación entre 

inmunidad innata e inmunidad adaptativa (Semenzato 1990, Tizard 2009l). Para 

llevar a cabo sus efectos biológicos, el TNF-α actúa tanto sobre las células 

endoteliales vasculares como sobre los leucocitos. A nivel de las células 

endoteliales de los pequeños vasos sanguíneos estimula la expresión de moléculas 

de adhesión sobre su superficie que permitan que los leucocitos se adhieran a 

ellas (Gamble et al. 1985, Semenzato 1990, Tizard 2009l). Además, promueve la 

secreción de quimiocinas y otras citocinas, favoreciendo de este modo la 

migración, adherencia y activación de los leucocitos en el foco de la inflamación 

(Bachwich et al. 1986, Abbas et al. 2008d, Tizard 2009l). Esta citocina actúa 

sobre los neutrófilos mediante su reclutamiento y estimulación de sus actividades 

microbicidas, estimula la fagocitosis y síntesis de productos oxidantes por parte 

de los macrófagos y activa a los mastocitos (Philip & Epstein 1986, Abbas et al. 

2008d, Tizard 2009l). Asimismo, se ha observado que el TNF-α es capaz de 

inducir apoptosis sobre algunas células tumorales o infectadas mediante la 

activación de caspasas (Tizard 2009l). A pesar de la contribución, en principio 

beneficiosa, de esta citocina a la instauración de las primeras respuestas ante las 

agresiones, es capaz asimismo de producir algunas reacciones locales 

perjudiciales para el hospedador e, incluso, cuando es sintetizado en grandes 

cantidades tras un estímulo lo suficientemente intenso, puede inducir la aparición 

de reacciones sistémicas (Abbas et al. 2008d). La acción sistémica del TNF-α se 

caracteriza por la aparición de fiebre, al actuar sobre el hipotálamo, y por la 

síntesis de proteínas de fase aguda, por su efecto a nivel hepático. Pero, además, 

en aquellos casos en los que la concentración plasmática alcanzada de TNF-α es 

muy elevada, puede observarse la aparición de caquexia (Tracey et al. 1988, 

Abbas et al. 2008d,), debido a la supresión del apetito y la inhibición de la 

síntesis de enzimas implicadas en la utilización de los ácidos grasos por los 

tejidos, disminución del gasto cardíaco e hipotensión, trombosis e hipoglucemia. 

De hecho, una complicación importante de las infecciones bacterianas graves es 

lo que se denomina “síndrome de choque séptico”, caracterizado por la aparición 



Revisión bibliográfica 

 

22 

de hipotensión, coagulación intravascular diseminada y alteraciones metabólicas 

y que se debe a la síntesis inducida por lipopolisacárido (LPS) de TNF-α, IL-12, 

IFNγ e IL-1 (Abbas et al. 2008d, Tizard 2009o).  

 

� Interleucina-1 (IL-1): esta citocina es sintetizada principalmente por los

fagocitos mononucleares una vez que han sido estimulados por ciertos productos 

bacterianos, principalmente LPS, o por otras citocinas, entre las que destaca el 

TNF-α. Otras células, como neutrófilos, células epiteliales y células endoteliales, 

son capaces asimismo de sintetizar IL-1. Esta proteína posee funciones muy 

similares a las descritas para el TNF-α, actuando juntos en la inmunidad innata y 

en la inflamación. La IL-1 actúa sobre las células del endotelio vascular para 

promover la expresión de moléculas de adhesión leucocitaria y estimula la 

síntesis por parte de los macrófagos de la sintasa de óxido nítrico-2 (NOS-2) y la 

ciclooxigenasa-2 (COX-2), promoviendo y prolongando la inflamación. Al igual 

que ocurre con el TNF-α, cuando se alcanzan concentraciones elevadas, cierta 

cantidad de IL-1 es capaz de pasar al torrente sanguíneo e inducir la aparición de 

efectos sistémicos, entre los que destacan la fiebre, aparición de edemas y 

tumefacción, letargia, malestar, pérdida de apetito y aumento de la síntesis 

hepática de proteínas de fase aguda (Abbas et al. 2008d, Tizard 2009l). 

 

� Quimiocinas: las quimiocinas forman una extensa familia de proteínas de

pequeño tamaño, de unos 8 a 10 kDa, estructuralmente homólogas, que poseen 

dos bucles disulfuro internos y que estimulan el movimiento leucocitario y 

regulan la migración celular desde la sangre a los tejidos. Son, por tanto, citocinas 

quimiotácticas y pueden ser sintetizadas por diferentes tipos celulares. Se han 

clasificado en cuatro familias en función del número y posición de los residuos de 

cisteína de su estructura. Ciertas quimiocinas son sintetizadas en respuesta a 

estímulos externos y ejercen una acción atrayente sobre leucocitos hacia la zona 

de inflamación o de invasión microbiana. Esta atracción leucocitaria es regulada 

por una serie de acciones secuenciales de estas proteínas sobre las células: las 

quimiocinas se unen a la superficie de las células endoteliales y facilitan la 

adherencia de los leucocitos al endotelio, como paso previo a su migración 

tisular. Según la quimiocina secretada, varía el tipo leucocitario que es atraído al 

foco inflamatorio y, de esta forma, el organismo es capaz de controlar la 

composición de la población de células del sistema inmunitario que actúa en una 

determinada localización para asegurar la respuesta más eficaz frente a los 

diferentes patógenos. Pero, además, existe otro grupo de quimiocinas que no 

participan en los procesos inflamatorios, sino que son sintetizadas de forma 

constitutiva en ciertos tejidos y son las encargadas de regular el tránsito celular a 



Revisión bibliográfica 

 

23 

través de estos tejidos. Se ha observado que la función principal de ciertas 

citocinas consiste en la regulación de la migración normal de las células 

inmunitarias, principalmente linfocitos, hacia los órganos linfáticos. Otras 

favorecen la angiogénesis y la curación de las heridas e, incluso, pueden 

participar en el desarrollo de órganos no linfáticos (Abbas et al. 2008d, Tizard 

2009l). 

 

� Interleucina-12 (IL-12): esta citocina constituye un importante mediador de la

respuesta inmunitaria temprana frente a microorganismos intracelulares. Se trata 

de un heterodímero compuesto por dos glicoproteínas de 35 y 40 kDa 

aproximadamente que se encuentran unidas covalentemente mediante un único 

puente disulfuro para formar una molécula activa de unos 70 kDa (Stanley et al. 

1994). Los principales productores de la IL-12 en la inmunidad innata son las 

células dendríticas activadas y los macrófagos. Esta citocina fue descrita 

inicialmente como un activador de la citotoxicidad de los linfocitos NK, 

denominándose originalmente por los dos grupos investigadores que la 

describieron en primer lugar tras su descubrimiento en trabajos independientes 

CLMF (de sus siglas en inglés “cytotoxic lymphocyte maturation factor”) y 

NKSF (“natural killer cell stimulatory factor”), respectivamente (Stern et al. 

1990, Kobayashi et al. 1989). Ha sido descrito que la IL-12 potencia las 

funciones citotóxicas de los linfocitos NK activados y de los linfocitos T 

citotóxicos (CD8+) tanto in vitro como in vivo (Stanley et al. 1994). Sin embargo, 

en la actualidad se sabe que los efectos biológicos de la IL-12 van más allá de una 

simple estimulación de la citotoxicidad, ya que esta citocina participa además en 

la estimulación de la síntesis de otras citocinas, principalmente IFN-γ por parte de 

los linfocitos T y NK, favorece la diferenciación de los linfocitos T cooperadores 

CD4+ hacia la subpoblación de linfocitos Th1, que son a su vez, productores de 

IFN-γ, estimula la proliferación de linfocitos NK y T activados, inhibe la 

secreción de ciertas inmunoglobulinas e, incluso, posee ciertas funciones sobre 

los procesos hematopoyéticos (Brunda 1994, Stanley et al. 1994, Abbas et al. 

2008d). Por lo tanto, la IL-12 constituye un importante vínculo entre inmunidad 

innata y adaptativa, ya que es sintetizada en las primeras etapas de la respuesta 

inmunitaria innata frente a microorganismos intracelulares y, posteriormente, 

contribuye a la instauración de las respuestas adaptativas frente a estos mismos 

microorganismos (Abbas et al. 2008d). 

 

� Interferones de tipo I: los interferones (IFN) de tipo I fueron las primeras

citocinas descubiertas gracias a los estudios llevados a cabo por Isaacs y 

Lindenmann publicados en 1957 (Isaacs & Lindenmann 1957). El nombre de 



Revisión bibliográfica 

 

24 

“interferón” proviene de su elevada capacidad para “interferir” en la replicación 

vírica (Isaacs & Lindenmann 1957, Abbas et al. 2008d), si bien estas moléculas 

son tanto pleiotrópicas como redundantes y poseen otras funciones biológicas de 

importancia (Fitzgerald-Bocarsly & Feng 2007). La familia del IFN de tipo I está 

constituida por una serie de citocinas relacionadas estructuralmente que 

participan en la inmunidad innata que se desarrolla de forma temprana en las 

infecciones víricas y favorecen la inmunidad celular frente a patógenos 

intracelulares, actuando como inmunomoduladores (Takaoka & Yanai 2006, 

Fitzgerald-Bocarsly & Feng 2007, Abbas et al. 2008d, Tizard 2009b). Dentro del 

tipo I destacan los IFN-α y el IFN-β. Existe una gran variedad de células que son 

capaces de sintetizar IFN de tipo I, aunque la capacidad de cada uno de estos 

tipos celulares para producir estos polipéptidos varía, siendo las células 

dendríticas plasmocitoides (pDCs) las mayores productoras de estas citocinas 

(Asselin-Paturel & Trinchieri 2005, Fitzgerald-Bocarsly et al. 2008), 

especialmente de IFN-α. Los fagocitos mononucleares son también importantes 

productores de esta molécula (Abbas et al. 2008d), mientras que el IFN-β, aunque 

puede ser producido por diversos tipos celulares, es sintetizado mayoritariamente 

por fibroblastos, lo que llevó en un origen a que se denominara “IFN 

fibroblástico” (Abbas et al. 2008d). Sea cual sea el tipo celular implicado en la 

síntesis de estos IFNs de tipo I, ésta se induce tras el reconocimiento de 

componentes de los patógenos durante la infección, resultando los estímulos más 

potentes los ácidos nucleicos víricos y, en menor medida, ciertos componentes 

bacterianos, como lipopolisacáridos de membrana (Taniguchi & Takaoka 2002, 

Abbas et al. 2008d). Posteriormente a este reconocimiento de los patógenos, los 

IFN de tipo I son responsables de la inducción de la transcripción de diversos 

genes que participan de manera clave en la resistencia del hospedador frente a las 

infecciones víricas y en la activación de componentes del sistema inmunitario 

tanto innato como adaptativo, participando en la maduración de células 

presentadoras de antígeno y en la producción por parte de éstas de citocinas 

implicadas en la activación de linfocitos T, B y NK (Perry et al. 2005). Por tanto, 

entre las funciones biológicas de estos polipéptidos destacan: la inhibición de la 

replicación vírica mediante la síntesis de enzimas que interfieren con la 

transcripción del ARN o ADN vírico (Perry et al. 2005, Abbas et al. 2008d); la 

estimulación de la expresión de las moléculas del complejo mayor de 

histocompatibilidad (CMH) de clase I, potenciando de este modo el 

reconocimiento antigénico, ya que los linfocitos T citotóxicos CD8+ reconocen 

los antígenos unidos a estas moléculas (Abbas et al. 2008d); la regulación de la 

supervivencia, proliferación y citotoxicidad de las células NK mediante la 

inducción de la síntesis de otra citocina, la IL-15 (Perry et al. 2005, Abbas et al. 



Revisión bibliográfica 

 

25 

2008d); la estimulación de la síntesis de quimiocinas que permiten el 

reclutamiento de linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos (Perry et al. 2005, 

Abbas et al. 2008d); la estimulación de la diferenciación de monocitos en células 

dendríticas, así como la maduración y activación de éstas (Tizard 2009b); y la 

proliferación de células T de memoria, activando a los linfocitos T vírgenes y 

estimulando el desarrollo de linfocitos Th1 específicos, al favorecer la expresión 

de receptores para la IL-12 sobre la superficie de las células T (Abbas et al. 

2008d, Tizard 2009b).  

 

� Interferón-γ (IFN-γ): el IFN-γ es el único miembro de los IFN de tipo II y, a

diferencia de los anteriores, no presenta una actividad antivírica potente 

(Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d). Se trata de una proteína homodimérica 

que juega un papel central en las respuestas inmunitarias frente a patógenos 

intracelulares y en la inmunidad antitumoral (Chen & Liu 2009) y es el principal 

activador macrofágico (Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d). La producción 

de IFN-γ es llevada a cabo tanto por células del sistema inmunitario innato como 

por células de la inmunidad adquirida. Entre las primeras, la síntesis de esta 

citocina es llevada a cabo por parte de los linfocitos NK y los linfocitos Tγδ, 

aunque, bajo ciertos estímulos, las células presentadoras de antígeno 

profesionales son también capaces de producirla (Schroder et al. 2004, Abbas et 

al. 2008d, Chen & Liu 2009). Los linfocitos NK sintetizan IFN-γ en respuesta a 

los ligandos activadores que se localizan en la superficie de las células que han 

sido sometidas a agresiones o bien en respuesta a la secreción de IL-12 y, una vez 

liberado, este IFN-γ actúa como mediador en la inmunidad innata (Abbas et al. 

2008d). En las respuestas adaptativas, los principales responsables de la síntesis 

de IFN-γ son los linfocitos T CD4+ Th1 y los linfocitos T citotóxicos CD8+ 

(Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d, Chen & Liu 2009) en respuesta al 

reconocimiento antigénico, aumentando esta síntesis en presencia de IL-12 e IL-

18. Es importante resaltar que las respuestas inmunitarias en las que participan la 

IL-12 y el IFN-γ son fundamentales en la inmunidad celular frente a 

microorganismos intracelulares (Abbas et al. 2008d). Dentro de las acciones 

biológicas de esta citocina destacan los efectos que ejerce sobre los monocitos y 

macrófagos, células que son consideradas la primera línea de defensa frente a los 

microorganismos infecciosos. Su principal efecto sobre ellas es la estimulación de 

los mecanismos citotóxicos para destruir los microorganismos fagocitados, efecto 

que lleva a cabo mediante la activación de la transcripción de genes que codifican 

enzimas que son necesarias para la generación, dentro de los lisosomas, de 

especies reactivas de oxígeno e intermediarios reactivos del nitrógeno (Young & 

Hardy 1995, Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d). Además de este efecto, el 



Revisión bibliográfica 

 

26 

IFN-γ activa otras funciones macrofágicas, como la citotoxicidad tumoral y la 

destrucción de patógenos intracelulares (Young & Hardy 1995). Además, es 

capaz de estimular el procesamiento y presentación de antígenos mediante el 

incremento de la expresión de moléculas del complejo mayor de 

histocompatibilidad de clase I y II y otros coestimuladores sobre las células 

presentadoras de antígeno profesionales, lo que va ser de gran importancia en la 

regulación de las respuestas inmunitarias frente a los patógenos intracelulares 

(Young & Hardy 1995, Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d). Por otra parte, 

esta citocina promueve la atracción leucocitaria, al actuar sobre las células 

endoteliales vasculares y favorecer la adhesión leucocitaria y su extravasación a 

los focos de infección (Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d, Chen & Liu 

2009). El IFN-γ afecta también al desarrollo y diferenciación de los linfocitos T. 

En este sentido, el fenotipo que desarrollan los linfocitos T cooperadores CD4+ 

vírgenes depende directamente de la expresión de IFN-γ y de IL-4, de forma que 

el IFN-γ inhibe la diferenciación de los linfocitos T CD4+ de la subpoblación Th2 

(productora de IL-4) y actúa como un factor de crecimiento autocrino, de manera 

sinérgica con la IL-12, para el crecimiento y diferenciación de la subpoblación 

Th1 (linfocitos CD4+ productores de IFN-γ e IL-2) (Young & Hardy 1995, 

Abbas et al. 2008d). El IFN-γ actúa también sobre los linfocitos B, favoreciendo 

el cambio a ciertas clases de inmunoglobulinas G (IgG) y actuando sobre el 

cambio de isotipo dependiente de IL-4, aunque la actuación de esta citocina sobre 

estas células parece tener diversos efectos (Young & Hardy 1995, Abbas et al. 

2008d). Así, se ha observado un efecto negativo de este IFN-γ sobre las 

poblaciones de linfocitos B tempranos y efectos antiapoptóticos sobre células B 

maduras (Young & Hardy 1995). Otras funciones biológicas de esta citocina 

incluyen el incremento de la actividad citotóxica de los linfocitos NK (Schroder 

et al. 2004), la estimulación de la fagocitosis y citotoxicidad de los neutrófilos y 

la supresión del desarrollo de las células progenitoras hematopoyéticas tempranas 

cuando el IFN-γ actúa de forma “solitaria” , actuando, en cambio, incrementando 

el desarrollo de estas células progenitoras cuando se une a otras citocinas (Young 

& Hardy 1995).  

 

� Interleucina-10 (IL-10): hasta ahora se han descrito las citocinas que actúan

principalmente estimulando los mecanismos inmunitarios innatos, pero también 

es necesario que exista una inhibición de ciertos procesos, de forma que se eviten 

respuestas exacerbadas que lleven al desarrollo de daños tisulares o sistémicos en 

el hospedador. En este sentido, la IL-10 constituye una molécula crítica en la 

inmunorregulación (Mege et al. 2006, Abbas et al. 2008d, Couper et al. 2008). Se 

trata de una proteína perteneciente a la familia de las citocinas de estructura 



Revisión bibliográfica 

 

27 

constituida por hélices α (Mege et al. 2006). La producción de IL-10 puede ser 

llevada a cabo por macrófagos, células dendríticas, linfocitos B y varias 

subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+ (Mege et al. 2006, Couper et al. 

2008) para inducir una serie de funciones biológicas que permitan controlar las 

reacciones inmunitarias innatas y de la inmunidad celular. Estos efectos de la IL-

10 se desarrollan gracias a la capacidad de esta molécula para inhibir muchas de 

las funciones de los macrófagos y células dendríticas activadas, limitando de esta 

forma las respuestas Th1 y Th2 (Mege et al. 2006, Abbas et al. 2008d, Couper et 

al. 2008). Los macrófagos y las células dendríticas responden frente a los 

microorganismos mediante la secreción de ciertas citocinas y la expresión de 

coestimuladores en su superficie que permiten la posterior activación de los 

linfocitos de la inmunidad adaptativa celular: la IL-10 se encarga de finalizar 

estas respuestas de los macrófagos y células dendríticas que han sido activados 

por los microorganismos. Para ello actúa principalmente a dos niveles: por una 

parte, la IL-10 limita la producción de citocinas proinflamatorias (IL-1α y β, IL-6, 

IL-12, IL-18 y TNF-α) y quimiocinas y, por otra parte, inhibe la expresión de 

moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II y 

coestimuladores por parte de los macrófagos y células dendríticas. Además, es 

capaz de actuar de forma directa sobre los linfocitos T CD4+ mediante la 

inhibición de su proliferación y producción de IL-2, IFN-γ, IL-4, IL-5 y TNF-α 

(Couper et al. 2008). 

 

� Interleucina 6 (IL-6): se trata de un homodímero en el que cada subunidad

forma un dominio globular con cuatro hélices α (Abbas et al. 2008d) y que 

participa tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa (Abbas et al. 2008d, 

Tizard 2009l). Esta citocina es sintetizada por macrófagos, células endoteliales, 

fibroblastos y linfocitos T activados en respuesta a diferentes estímulos, entre los 

que destacan las endotoxinas bacterianas y otras citocinas, principalmente IL-1 y 

TNF-α (Abbas et al. 2008d, Tizard 2009l). En los procesos de la inmunidad 

innata, la IL-6 actúa mediante la estimulación de la producción de neutrófilos a 

partir de sus progenitores de la médula ósea y favoreciendo la síntesis de 

proteínas de fase aguda, por lo que se ha sugerido que esta citocina regula la 

transición entre las primeras fases de la inflamación llevadas a cabo por los 

neutrófilos y fases posteriores en las que las células predominantes son los 

macrófagos (Abbas et al. 2008d Tizard 2009l). En la inmunidad adaptativa, la IL-

6 se caracteriza por estimular el crecimiento de las células plasmáticas y por 

favorecer la comunicación entre leucocitos mediante la estimulación de la síntesis 

de citocinas proinflamatorias (Abbas et al. 2008d).  

 



Revisión bibliográfica 

 

28 

 

2.1.1.2. Reconocimiento innato de los agentes patógenos 

 
Para que los diferentes componentes del sistema inmunitario innato descritos 

puedan ejercer sus funciones efectoras, es evidente que deben ser activados y, para ello, 

debe existir algún tipo de reconocimiento de los patógenos. Además, la principal diferencia 

existente entre la inmunidad innata y la adaptativa se basa precisamente en los mecanismos 

y los receptores que están involucrados en este reconocimiento (Medzhitov & Janeway 

2000). Las respuestas inmunitarias adaptativas emplean una serie de receptores de 

antígenos que se generan en un proceso de reordenamiento somático aleatorio, como 

veremos más adelante. En cambio, las respuestas inmunitarias innatas dependen de un 

número limitado de receptores que se encuentran codificados en la línea germinal y 

reconocen patrones moleculares conservados que se encuentran únicamente en los 

microorganismos (Janeway 1992, Medzhitov & Janeway 1997a, Kimbrell & Beutler 

2001). 

 

El sistema inmunitario innato ha empleado como estrategia para el reconocimiento 

de los microorganismos patógenos o de las células infectadas o lesionadas  la detección de 

ciertas estructuras que se encuentran altamente conservadas entre diferentes tipos de 

agentes, que son esenciales para la supervivencia de los microorganismos o para su 

patogenidad y que son producidas únicamente por microorganismos, no por las células del 

hospedador (Janeway 1989, Abbas et al. 2008g, Tizard 2009l). Estas estructuras son 

denominadas tradicionalmente “patrones moleculares asociados a patógenos” (PAMP, de 

sus siglas en inglés), si bien es importante recalcar que muchas de estas estructuras se 

encuentran o son sintetizadas por microorganismos no patógenos (Janeway 1989, 

Medzhitov & Janeway 1997b). Entre estas moléculas probablemente la mejor caracterizada 

y más estudiada es el lipopolisacárido (LPS) presente en la mayoría de las bacterias 

gramnegativas, aunque también destacan otros, como los peptidoglicanos de las bacterias 

grampositivas, los ácidos lipoteitoicos, los mananos, el ADN bacteriano, el RNA de doble 

cadena y ciertos glucanos (Medzhitov & Janeway 2000, Janeway & Medzhitov 2002, 

Beutler 2004, Tizard 2009l).  

 

El reconocimiento inmnunitario innato de estas moléculas es llevado a cabo por los 

denominados “receptores de reconocimiento de patrones” (PRRs, de sus siglas en inglés), 

que se encuentran codificados en la línea germinal, por lo que la especificidad de cada 

receptor está predeterminada genéticamente (Janeway 1989, Medzhitov & Janeway 2000). 

Se expresan en numerosas células efectoras del sistema inmunitario innato, entre las que 

cabe destacar los macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, células endoteliales, células 



Revisión bibliográfica 

 

29 

epiteliales y linfocitos (Medzhitov & Janeway 2000, Abbas et al. 2008g). Desde un punto 

de vista estructural, estos receptores pertenecen a varias familias de proteínas (Medzhitov 

& Janeway 1997a) y pueden expresarse sobre la superficie celular, en vesículas 

endosómicas o en el citoplasma de las células (Abbas et al. 2008g). Además, ciertos PRRs 

son secretados, ejerciendo una acción similar a opsoninas, al unirse específicamente a las 

paredes de las células microbianas para su posterior fagocitosis o reconocimiento por parte 

del sistema de complemento. Entre estas moléculas podemos citar a la lectina de unión a 

manosa, la proteína C reactiva y la proteína amiloide sérica (Fraser et al. 1998), que son 

secretadas en las respuestas de fase aguda.  

 

Algunos PRRs son expresados en la superficie celular de los macrófagos y median 

la fagocitosis de los microorganismos que expresen los PAMP específicos. Un ejemplo de 

este tipo de receptores de reconocimiento de patrones es el receptor de manosa 

macrofágico, que interacciona con bacterias grampositivas y gramnegativas y con ciertos 

tipos de hongos (Fraser et al. 1998). 

 

Por otra parte, dado que los virus y numerosas bacterias son capaces de penetrar en 

las células del hospedador, es necesario que existan receptores de reconocimiento de 

patrones que se expresen en el citoplasma. Entre estos PRRs destacan la proteína quinasa 

PKR, que se activa tras su unión al ARN durante la infección vírica y bloquea la síntesis 

proteíca viral y celular e induce la síntesis de IFN de tipo I, y la familia de los receptores 

tipo NOD (dominio de oligomerización de nucleótido) (Clemens & Elia 1997). 

 

Sin duda, los receptores de reconocimiento de patrones más importantes y más 

conocidos son los receptores tipo Toll (TLR), glucoproteínas de membrana de cadena corta 

que se expresan principalmente en las células centinela en las superficies corporales. 

Pueden ser expresados en las superficies de las células o en membranas endosomales del 

interior celular (Tizard 2009l). Se han descrito unos 14 TLRs que se diferencian en sus 

especificidades, los patrones de expresión y, probablemente, en los genes diana que 

inducen (Janeway & Medzhitov 2002). A menudo se asocian unos TLR con otros para 

reconocer y unirse a los PAMP y ejercer sus acciones de forma conjunta (Tizard 2009l). 

 

Por otra parte, a pesar de que hasta el momento sólo se ha descrito el 

reconocimiento por parte de los receptores del sistema inmunitario de los denominados 

PAMP, estos receptores también pueden reconocer células del hospedador agredidas o 

lesionadas y, por tanto, iniciar respuestas inmunitarias ante estas señales (Abbas et al. 

2008g, Tizard 2009l). Las moléculas que son liberadas tras la lesión o muerte celular son 

las denominadas alarminas. Algunos autores (Tizard 2009l), denominan patrones 



Revisión bibliográfica 

 

30 

moleculares asociados a lesión al conjunto de todas las señales que inician las respuestas 

inmunitarias innatas (alarminas y PAMPs). Entre las alarminas encontramos algunos 

grupos de moléculas que ya han sido mencionados en esta revisión, como son las 

defensinas, las catelicidinas y ciertas quimiocinas.  

 

Una vez que los receptores inmunitarios innatos han reconocido una señal de 

lesión, sea una alarmina o un PAMP, se inician en la célula efectora una serie de procesos 

de manera secuencial que conducen a que dicha célula lleve a cabo sus funciones 

biológicas de forma inmediata, sin precisar de una proliferación previa, como ocurre en las 

respuestas adaptativas (Medzhitov & Janeway 2000). Entre las funciones que se 

desencadenan tras la activación de los receptores y de las vías de transducción de señales 

asociadas a ellos destacan la estimulación de la fagocitosis, la activación del sistema del 

complemento y de la cascada de la coagulación, la inducción de la síntesis de péptidos 

antimicrobianos y la inducción de la enzima NOS por parte de las células de la inmunidad 

innata (Medzhitov & Janeway 1998). Asimismo, se induce la producción de una serie de 

quimiocinas y citocinas proinflamatorias y la expresión de moléculas coestimuladoras 

sobre las células presentadoras de antígeno, lo que conduce al reclutamiento de leucocitos 

y a la regulación de la activación de los mecanismos efectores más adecuados en cada caso 

(Medzhitov & Janeway 1998). 

 

Cada microorganismo presenta lo que puede denominarse una “firma inmunitaria” 

innata, que viene determinada por su contenido en los diferentes PAMPs que son 

reconocidos por los PRRs. Esta firma permite que se inicien las rutas de transducción de 

señales que son más adecuadas en la generación de cada respuesta inmunitaria de cada 

estímulo infeccioso en concreto (Beutler 2004). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

31 

 

2.1.2. INMUNIDAD ADAPTATIVA  

 
La primera línea de defensa que se instaura ante una agresión es aportada por la 

inmunidad innata mediante respuestas rápidas pero de duración limitada y carentes de 

memoria inmunitaria a través de los mecanismos ya descritos. Los vertebrados superiores 

son capaces de desarrollar, además, respuestas inmunitarias adaptativas que precisan de 

más tiempo para ponerse en funcionamiento pero que son más flexibles, altamente 

específicas y duraderas y que permiten combatir infecciones o agresiones capaces de 

evadir las respuestas innatas. Además, poseen la habilidad de “recordar” y “aprender” de 

las exposiciones sucesivas a un mismo agente para aumentar así cada vez en magnitud y 

capacidad defensiva (Medzhitov & Janeway 2000, Clark & Kupper 2005, Borghesi & 

Milcarek 2007, Abbas et al. 2008j, Tizard 2009h). No se debe olvidar, sin embargo, que 

para que se produzca una activación efectiva de estas respuestas adquiridas es 

imprescindible la existencia de una interacción con el sistema inmunitario innato 

(Medzhitov & Janeway 2000, Clark & Kupper 2005). 

 

Como se ha comentado anteriormente, entre las principales diferencias existentes 

entre ambos tipos de inmunidad destacan los mecanismos de reconocimiento inmunitario. 

En la inmunidad innata el reconocimiento se basa en la existencia de un número de 

receptores limitado que se encuentran codificados en la línea germinal y reaccionan ante 

patrones moleculares altamente conservados, característicos de los principales grupos de 

patógenos. En cambio, la funcionalidad de la inmunidad adaptativa se basa en la capacidad 

que presenta para generar de forma aleatoria un amplísimo espectro de receptores por 

mecanismos somáticos de reorganización génica que conducen al reconocimiento potencial 

de cualquier antígeno, conservado o exclusivo de un único patógeno. Estos receptores son 

distribuidos clonalmente en los linfocitos T y B y, cuando se produce la exposición a un 

antígeno, aquellos linfocitos que poseen receptores útiles son seleccionados para una 

expansión clonal (Medzhitov & Janeway 2000, Clark & Kupper 2005, Borghesi & 

Milcarek 2007, Tizard 2009h).  

 

Una de las principales ventajas de las respuestas inmunitarias adaptativas frente a 

las innatas viene dada precisamente por esta generación aleatoria de un amplio repertorio 

de receptores, lo que confiere a la inmunidad adquirida de una excelente especificidad. 

Estos receptores son capaces de discernir pequeñas diferencias en la estructura de dos 

antígenos, al reconocer diversas porciones de un solo complejo proteico, polisacárido u 

otra molécula, que se denominan determinantes antigénicos o epítopos (Medzhitov & 

Janeway 1998, Abbas et al. 2008j). Esto hace que exista un número elevadísimo de clones 



Revisión bibliográfica 

 

32 

de linfocitos (repertorio linfocítico) con sus receptores específicos, por lo que las 

respuestas inmunitarias adaptativas se caracterizan por presentar una gran diversidad 

(Abbas et al. 2008j). 

 

Por otra parte, además de las elevadas especificidad y diversidad, existe otra 

propiedad que define a la inmunidad adaptativa y que dota a estas respuestas de otra 

ventaja frente a las innatas: se trata de la denominada “memoria inmunitaria”. Esta 

característica favorece el desarrollo de respuestas inmunitarias más rápidas y amplias ante 

la segunda y sucesivas exposiciones a un mismo antígeno, ya que el sistema adaptativo es 

capaz de recordar y adaptarse a las agresiones que sufre el organismo. Esta memoria se 

debe, por una parte, a que con cada exposición a un antígeno se amplía el clon de linfocitos 

específicos que se desarrollan frente a él y, por otra parte, a que se generan células de 

memoria de vida larga capaces de reaccionar de forma más rápida y enérgica a como lo 

hacen los linfocitos vírgenes (Janeway & Medzhitov 2002, Abbas et al. 2008j). 

 

Otros rasgos característicos de la inmunidad adaptativa son la capacidad de generar 

una expansión clonal, o aumento en la cantidad de células que expresan receptores 

idénticos frente al mismo antígeno, y la falta de reactividad frente a sí mismo o 

autotolerancia, que se logra mediante la eliminación de aquellos linfocitos que expresan 

receptores específicos frente a antígenos propios. 

 

Por otra parte, para lograr la máxima eficacia en las respuestas frente a las 

agresiones, el sistema inmunitario ha tendido hacia la especialización, organizando 

mecanismos de defensa específicos para cada tipo de microorganismo. Así, en función del 

tipo de agresión, el sistema inmunitario puede generar dos tipos de respuestas, al igual que 

se ha descrito en la inmunidad innata: respuestas inmunitarias de tipo humoral y respuestas 

inmunitarias de tipo celular. A grandes rasgos, la inmunidad adaptativa humoral es el 

principal mecanismo de defensa frente a las infecciones por microorganismos 

extracelulares y emplea una serie de moléculas denominadas anticuerpos que son 

generadas por los linfocitos B. Estos anticuerpos son capaces de reconocer los antígenos y, 

mediante su unión a ellos, marcarlos para su eliminación. Los propios anticuerpos poseen, 

asimismo, una cierta especialización, de forma que cada tipo diferente puede estimular la 

puesta en marcha de diferentes mecanismos efectores (Abbas et al. 2008j). Por otra parte, 

la inmunidad adaptativa celular se instaura principalmente para hacer frente a las 

agresiones intracelulares y depende de los linfocitos T (Abbas et al. 2008j). 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

33 

2.1.2.1. Componentes de la inmunidad adaptativa 

 
Una vez hecha esta breve introducción de sus características más importantes, a 

continuación se describirán los principales componentes de la inmunidad adaptativa, 

comenzando por una revisión de los principales órganos y tejidos que participan en este 

tipo de inmunidad, para continuar describiendo sus componentes celulares y humorales. 

  
a. Órganos y tejidos de la inmunidad adaptativa: En el organismo existen ciertos 

tejidos que se encargan de regular el desarrollo y maduración de los linfocitos y que se 

denominan órganos linfoides primarios o generadores. El sistema inmunitario adaptativo 

comprende, además, una serie de órganos denominados órganos linfoides secundarios o 

periféricos, en los que tienden a concentrarse los linfocitos y las células presentadoras de 

antígeno y a donde también son conducidos los antígenos extraños, favoreciéndose así la 

interacción de estos antígenos con los receptores específicos frente a ellos expresados en 

los linfocitos e iniciándose en estos órganos las respuestas inmunitarias adaptativas frente a 

las agresiones.  

 

� Órganos linfoides primarios o generadores: en ellos los linfocitos expresan por

primera vez los receptores del antígeno y maduran fenotípica y funcionalmente. Entre 

estos órganos linfoides primarios destacan la médula ósea, el timo, la bolsa de Fabricio 

en las aves, las placas de Peyer y los complejos linfoglandulares. 

 

 La médula ósea es un órgano encargado de una serie de procesos de gran 

importancia, entre los que destacan la hematopoyesis (por la que se generan todas las 

células sanguíneas circulantes, incluidos los linfocitos inmaduros) y los primeros 

fenómenos de maduración de los linfocitos B en algunas especies de mamíferos, como 

primates y roedores, aunque en el caso del perro parece que el lugar de maduración de 

este tipo de células es el tejido linfoide intestinal constituido por las Placas de Peyer 

(Tizard 2009r). La médula ósea contiene diveros tipos celulares, entre ellos células 

dendríticas, macrófagos y linfocitos. Por ello, es capaz de captar agentes extraños de la 

sangre y, gracias a las numerosas células productoras de anticuerpos que se encuentran 

en ella, constituye la principal fuente de los mismos (Abbas et al. 2008c, Tizard 2009r). 

 

El timo es un órgano que va retrayéndose con la edad aunque, incluso en animales 

viejos, sigue contando con cierta cantidad de tejido linfoide y es funcionalmente activo. 

Se trata del lugar de maduración de los linfocitos T. A su corteza llegan los linfocitos T 

inmaduros generados en la médula ósea, que se dividen rápidamente y sufren dos 

procesos de selección consecutivos, denominados “selección negativa” y “selección 



Revisión bibliográfica 

 

34 

positiva”, que aseguran, por una parte, que los linfocitos T maduros que abandonan 

este órgano no posean receptores frente a antígenos propios y, por tanto, no respondan 

frente a componentes normales del organismo, y, por otra parte, que sean capaces de 

reconocer antígenos extraños unidos a moléculas del complejo mayor de 

histocompatibilidad de clase II. Sólo los linfocitos T maduros abandonan el timo para 

entrar en la sangre y en los tejidos linfoides secundarios (Abbas et al. 2008c, Tizard 

2009r). 

 

Las placas de Peyer son órganos linfoides localizados en la lámina propia del 

intestino delgado cuyas estructura y funciones varían en las diferentes especies, por lo 

que nos centraremos en la especie canina. En estos animales existen dos tipos de placas 

de Peyer: el primero de ellos forma una única estructura continua que cumple su 

función principal durante los primeros meses de vida, involucionando de forma 

temprana, mientras que el segundo tipo, mucho menos numeroso que el primero, está 

constituido por estructuras que perduran durante toda la vida del animal. Estos órganos 

linfoides contienen principalmente linfocitos B y aproximadamente un 30% de 

linfocitos T. Recubriendo las placas de Peyer se dispone una envoltura de tejido 

conjuntivo rico en células M especializadas que se encargan de trasladar ciertos 

antígenos desde la luz intestinal hasta estos órganos. La principal función de las placas 

de Peyer en el perro es similar a la que ejerce la bolsa de Fabricio en las aves, siendo 

un lugar de rápida proliferación de linfocitos B y en el que se produce una selección 

negativa de estas células, para asegurar que los linfocitos B maduros que abandonen 

estos órganos para pasar a la circulación, no sean reactivos frente a antígenos propios 

(Abbas et al. 2008c, Tizard 2009r). 

 

Los complejos linfoglandulares son unas estructuras submucosas de tejido linfoide 

presentes en las paredes del intestino grueso de perros, caballos, rumiantes y cerdos. La 

función concreta que desempeñan es desconocida, pero se cree que pueden constituir 

importantes lugares de producción de anticuerpos y de captación antigénica, debido a 

su elevado contenido de células plasmáticas y de células M (Tizard 2009r). 

 

� Órganos linfoides secundarios o periféricos: entre estos órganos linfoides

secundarios destacan principalmente los nódulos linfáticos y el bazo, aunque también 

existen otros tejidos linfoides en los tractos digestivo, respiratorio y urogenital que 

ejercen la misma labor. 

 

 Los nódulos linfáticos son pequeños órganos redondeados o arriñonados que se 

interponen a lo largo de los vasos linfáticos para actuar como una especie de filtros que 

captan los antígenos que transporta la linfa. En ellos comenzarán las respuestas 



Revisión bibliográfica 

 

35 

inmunitarias adaptativas frente a los antígenos que hayan penetrado en el organismo, 

ya que su función consiste en facilitar las interacciones entre las células presentadoras 

de antígeno y los linfocitos T y B sensibles al antígeno. Para lograrlo, poseen una 

estructura reticular con gran cantidad de linfocitos, células dendríticas y macrófagos, 

organizándose las diferentes células en una corteza, una paracorteza y una médula del 

nódulo gracias a la acción de determinadas citocinas (Abbas et al. 2008c, Tizard 

2009r). 

 

El bazo es un órgano de gran importancia en la puesta en funcionamiento de las 

respuestas de la inmunidad adaptativa que se generan frente a los antígenos que son 

transportados por la sangre (Abbas et al. 2008c, Tizard 2009r). Este órgano elimina 

partículas antigénicas, como microorganismos o restos celulares, a través de una serie 

de procesos de filtración de la sangre similares a los realizados por los nódulos 

linfáticos en la filtración de la linfa. Además, el bazo es capaz de servir de almacén de 

eritrocitos y plaquetas y participa en la producción de hematíes en el desarrollo fetal 

(Tizard 2009r). Para llevar a cabo estas acciones, el bazo contiene una serie de regiones 

que se encuentran repletas de linfocitos y que constituyen la denominada “pulpa 

blanca”, cuya función principal es la de favorecer las respuestas de la inmunidad 

adaptativa frente a los antígenos transportados por la sangre, al permitir la captura de 

dichos antígenos por parte de las células presentadoras de antígeno y su presentación 

posterior a los linfocitos que contiene. Además de la pulpa blanca descrita, en el bazo 

se distingue otra región denominada “pulpa roja” que está constituida por una gran 

cantidad de eritrocitos, macrófagos, células dendríticas, unos pocos linfocitos y células 

plasmáticas, y que se encarga principalmente de la filtración de la sangre y del 

almacenamiento de glóbulos rojos (Abbas et al. 2008c, Tizard 2009r). 

 

Como se ha comentado previamente, además de los nódulos linfáticos y el bazo, 

existen otros órganos linfoides secundarios o periféricos, como son el sistema 

inmunitario cutáneo y el sistema inmunitario de las mucosas. La piel constituye una 

barrera física importantísima desde el punto de vista inmunitario, pero, además, 

contiene un sistema inmunitario especializado que participa de forma activa en la 

defensa del organismo y cuyas poblaciones celulares más importantes son: 

queratinocitos, melanocitos, células epidérmicas de Langerhans y linfocitos T 

intraepiteliales (Abbas et al. 2008c). Del mismo modo, en las superficies mucosas del 

tracto digestivo y de las vías respiratorias existen tanto células presentadoras de 

antígeno como linfocitos y se generan fenómenos de defensa inmunitaria ante las 

agresiones (Abbas et al. 2008c). 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

36 

b. Componentes celulares de la inmunidad adaptativa: Los principales componentes 

celulares de la inmunidad adaptativa son los linfocitos. Sin embargo, es importante 

recordar que en la puesta en funcionamiento de las respuestas inmunitarias adaptativas 

resulta imprescindible la participación de las células presentadoras de antígeno, que se 

encargan del procesamiento y posterior exhibición de estos antígenos a los linfocitos 

específicos para su activación y diferenciación en las células efectoras de las respuestas 

adaptativas. En este apartado sólo se van a describir las principales características de los 

linfocitos, ya que las células presentadoras de antígeno, así como otras células que también 

participan en la inmunidad adaptativa, ya han sido descritas en el apartado de los 

componentes celulares de la inmunidad innata de esta revisión bibliográfica.  

 

Los linfocitos son las únicas células del organismo capaces de diferenciar 

específicamente diversos determinantes antigénicos y son los responsables de las 

características de la respuesta inmunitaria adaptativa de especificidad y memoria (Abbas et 

al. 2008c). Aunque morfológicamente los diferentes linfocitos son indistinguibles entre sí, 

se han descrito varias poblaciones de estas células. En general, los tres tipos principales de 

linfocitos son: las células T, encargadas de la regulación de las respuestas inmunitarias 

adaptativas, así como del desarrollo de respuestas de base celular; las células B, 

responsables de la producción de anticuerpos y, por tanto, del desarrollo de respuestas 

adaptativas de tipo humoral; y los linfocitos citolíticos naturales o NK que, como ya se ha 

mencionado, desarrollan un importante papel en la inmunidad innata (Trinchieri 1989, 

Lunemann et al. 2009, Tizard 2009n) y son los únicos que presentan unas características 

morfológicas ligeramente diferentes respecto al resto de linfocitos, siendo algo mayores de 

tamaño y con gránulos citoplasmáticos evidentes (Tizard 2009n). Se ha descrito que el 90-

95% de los linfocitos sanguíneos periféricos son linfocitos T y B y el 5-15% restante está 

constituido por esos linfocitos ligeramente mayores de tamaño que son en su mayoría 

linfocitos NK (Powell & Jenkins 1987).  

 

Independientemente de estos tipos principales de linfocitos, se puede distinguir 

varias poblaciones en base a su desarrollo y a sus antecedentes de exposición a un 

antígeno. Todos los linfocitos son generados a partir de unas células progenitoras 

existentes en la médula ósea y posteriormente atraviesan una serie de fases de maduración 

que les llevarán a expresar sus receptores antigénicos, así como diferentes moléculas de 

superficie, y a adquirir sus características funcionales para convertirse en células maduras 

efectoras de las funciones de la inmunidad adaptativa. A modo de resumen, cabe destacar 

que en el perro los linfocitos B maduran parcialmente en las placas de Peyer del intestino 

para, a continuación, pasar a la circulación y dirigirse a los órganos linfoides secundarios 

para poder finalizar este proceso de maduración (Tizard 2009n). En cambio, los linfocitos 

T maduran en el timo y, a continuación, entran en la circulación periférica y colonizan los 



Revisión bibliográfica 

 

37 

tejidos periféricos. Tanto las células B como las T, una vez que han madurado pero antes 

de ser activadas por el contacto con el antígeno para el que son específicas, reciben el 

nombre de linfocitos vírgenes. Estos linfocitos vírgenes se encuentran en un estado de 

reposo o fase G0 del ciclo celular. En los órganos linfoides secundarios, los antígenos 

presentes estimulan su proliferación y diferenciación, lo que conduce a la expresión de 

diferentes moléculas de superficie y a la secreción de ciertas citocinas. En este momento se 

produce, además, el proceso denominado “expansión clonal”, que permite que se produzca 

una proliferación  rápida de los linfocitos específicos para un microorganismo. Parte de los 

linfocitos T y B que han sido estimulados por un antígeno se diferencia en células 

efectoras, que ejercen sus funciones con el objetivo de eliminar a los agentes agresores. 

Otra parte de esos linfocitos estimulados se diferencia hacia células de memoria longevas, 

que permanecen en un estado de latencia para permitir el desarrollo de respuestas rápidas y 

de mayor intensidad ante siguientes exposiciones al mismo antígeno (Powell & Jenkins 

1987, Clark & Kupper 2005, Abbas et al. 2008c).  

 

Por otra parte, dentro de estas poblaciones principales de linfocitos, se distinguen 

varias subpoblaciones. Sin embargo la diferenciación de estas subpoblaciones en base a sus 

características morfológicas se encuentra dificultada debido a que poseen una estructura 

similar, lo que hace que sea necesario emplear diferentes moléculas de superficie a modo 

de marcador fenotípico para distinguir estos linfocitos. Así, se denomina  

“ inmunofenotipo” al patrón de moléculas de superficie expresadas por los diferentes 

linfocitos (Abbas et al. 2008c, Tizard 2009n). A lo largo de la historia se han empleado 

diferentes marcadores antigénicos de superficie que permitían distinguir diferentes 

poblaciones linfocitarias. A modo de ejemplo, cabe destacar lo descrito por Raff (Raff 

1971), que cita el empleo de dos de los marcadores antigénicos de superficie empleados en 

el ratón para tratar de distinguir y separar los linfocitos T y B ya en los años 60 y 70: el 

“aloantígeno theta” (θ), específico de los linfocitos timo-dependientes o linfocitos T, y el 

“antígeno de linfocitos B específicos de ratón” (MBLA de sus siglas en inglés, “mouse-

specific B lymphocyte antigen”), que diferencia los linfocitos timo-independientes o 

linfocitos B. Con el paso del tiempo se han ido desarrollando diferentes anticuerpos 

monoclonales frente a antígenos o marcadores de diferenciación leucocitaria para tratar de 

optimizar la detección y distinción entre las diferentes subpoblaciones. En la actualidad, 

los anticuerpos específicos frente a dichos marcadores linfocíticos son empleados, 

generalmente unidos a unas sondas que pueden ser detectadas por medio de distintos 

métodos, para identificar y aislar las diferentes poblaciones de linfocitos. La nomenclatura 

aceptada para dichos marcadores linfocíticos se basa en los denominados CD o grupos de 

diferenciación (de sus siglas en inglés, Cluster of Differentiation). Cada CD se emplea para 

referirse a un marcador de superficie que identifica una estirpe particular o una fase de 

diferenciación y que resulta reconocido por un grupo de anticuerpos monoclonales. De esta 



Revisión bibliográfica 

 

38 

forma, con el sistema CD podemos disponer de un modo uniforme de identificación de las 

moléculas de superficie celular presentes en los linfocitos y otros tipos celulares del 

sistema inmunitario. En un principio, este sistema se empleó únicamente para denominar a 

los marcadores linfocíticos humanos, pero actualmente se utiliza la misma denominación 

CD para las moléculas homólogas de otras especies, incluido el perro (Abbas et al. 2008c). 

Entre las estructuras presentes en la superficie de los linfocitos, las más importantes son 

aquellas que forman parte de sus receptores antigénicos, pero existen otras proteínas de 

superficie que pueden emplearse también para la caracterización fenotípica, como ciertas 

proteínas transportadoras, enzimas o receptores de citocinas, anticuerpos o componentes 

del complemento (Tizard 2009n). Entre los anticuerpos monoclonales más frecuentemente 

empleados en el inmunofenotipaje tanto en la especie canina como en el hombre destacan 

aquellos capaces de identificar CD3, CD4 y CD8, diversas moléculas de superficie 

presentes en los linfocitos B (CD19, CD21, CD20, etc.), CD56 o CD25 (indicativo de 

activación reciente de los linfocitos T y B). Asimismo, frecuentemente se han empleado 

anticuerpos frente a las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad, tanto de 

clase I como de clase II. 

 

Gracias al empleo de estas moléculas, se han podido identificar diferentes 

subpoblaciones de linfocitos con funciones muy diversas en la inmunidad. Así, dentro de 

las células T y B, se encuentran varios subconjuntos, pudiendo destacarse entre los 

linfocitos T los T cooperadores (Th), dentro de los que, a su vez, se describen varias 

subpoblaciones, y los T citotóxicos (Tc). Estas dos subpoblaciones expresan un receptor 

del antígeno llamado αβ, pero existe otro tipo de linfocitos T que expresan un receptor del 

antígeno constituido por las cadenas γ y δ, como son los linfocitos T intraepiteliales 

descritos en el apartado de componentes celulares de la inmunidad innata. En la 

bibliografía se puede encontrar, además, la descripción de otras subpoblaciones celulares, 

pero en esta revisión nos centraremos en las de mayor importancia. 

 

� Linfocitos Th: se suelen definir como linfocitos CD3+, CD4+, CD8- y se encargan

de regular las respuestas inmunitarias adaptativas mediante la estimulación de otras 

células inmunitarias efectoras (Saalmuller 2006). El antígeno linfocitario CD3 está 

presente en todos los linfocitos T, ya que se trata de un conjunto de proteínas que 

forman parte del receptor de antígeno de estos linfocitos (TCR) que están implicadas 

en la transmisión de la señal de activación desde el receptor hasta el interior celular tras 

la unión antigénica. El CD4 es una glucoproteína formada por una única cadena 

peptídica y se encuentra estrechamente asociada con el TCR. Está presente únicamente 

en aquellos linfocitos T que reconocen los antígenos procesados y asociados a 

moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II (CMHII) de las 

células presentadoras de antígeno, es decir, en los linfocitos Th (Tizard 2009n). Los 



Revisión bibliográfica 

 

39 

diferentes linfocitos T cooperadores son capaces de segregar ciertas citocinas que 

interaccionan con otras células del sistema inmunitario, principalmente linfocitos B, 

linfocitos T citotóxicos CD8+ y macrófagos, promoviendo su activación (Abbas et al. 

2008h, Corthay 2009). Por otra parte, se ha observado que las diferentes poblaciones de 

linfocitos Th poseen, además, ciertas propiedades supresoras, siendo capaces de inhibir 

la síntesis de citocinas por parte de las demás poblaciones de Th (Corthay 2009). Según 

el patrón de citocinas que sean producidas por estos linfocitos, se tenderá hacia la 

estimulación o supresión de unas células del sistema inmunitario u otras (Corthay 

2009), por lo que estos linfocitos son capaces de regular así las respuestas inmunitarias 

desencadenadas por un antígeno y es por ello que reciben el nombre de células T 

cooperadoras o colaboradoras (o T helper, en inglés). Una serie de trabajos llevados a 

cabo entre los años 1977 y 1986 llevaron a varios investigadores a sugerir que dentro 

de la población de linfocitos Th existían, al menos, dos subpoblaciones que se 

diferenciaban en los patrones de secreción de citocinas (Mosmann et al. 1986, Tizard 

2009k). Actualmente se considera que existen, al menos, cuatro subpoblaciones de 

linfocitos Th (Corthay 2009), que difieren en las citocinas que sintetizan y en sus 

funciones efectoras (Abbas et al. 2008h). Entre ellas, las mejor definidas son los 

linfocitos Th1 y Th2 y, a continuación, se van a describir brevemente sus principales 

características: 

 

• Th1: los linfocitos Th1 son estimulados principalmente por células dendríticas 

mieloides y por los linfocitos B. Dicha estimulación se lleva a cabo mediante el 

empleo de la molécula de coestimulación CD80 y la secreción de IL-12 e IL-18 por 

parte de las células dendríticas y, una vez activados, estos linfocitos Th1 secretan 

IL-2, IFN-γ, TNF-α y TNF-β, entre otras. Estos linfocitos intervienen 

principalmente en las respuestas inmunitarias de base celular y parecen regular las 

respuestas inmunitarias frente a microorganismos intracelulares y células 

cancerosas, así como las reacciones de hipersensibilidad retardadas (Street & 

Mosmann 1991, Mosmann & Sad 1996, Kidd 2003, Abbas et al. 2008h, Tizard 

2009k). El IFN-γ producido por estas células estimula las actividades microbicidas 

de los fagocitos, para promover así la destrucción intracelular de los 

microorganismos fagocitados, y estimula la síntesis de IgG, que opsonizan y fijan 

el complemento para favorecer la fagocitosis de los microorganismos (Abbas et al. 

2008h).  

 

• Th2: los linfocitos Th2 son estimulados principalmente por células dendríticas 

plasmocíticas o linfoides, macrófagos y linfocitos B. En este caso, las células 

dendríticas secretan IL-4 para provocar la estimulación de estos linfocitos, y se 

emplea como señal coestimuladora aquella mediada por CD86. Los Th2 poseen 



Revisión bibliográfica 

 

40 

además receptores para la IL-1 secretada por macrófagos o por células dendríticas. 

Una vez activados, secretan principalmente IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 y IL-13, 

que estimulan la proliferación de los linfocitos B y la secreción por parte de estos 

de inmunoglobulinas, especialmente IgE (Mosmann & Coffman 1989, Kunzendorf 

et al. 1998, Abbas et al. 2008h, Tizard 2009k). Por lo tanto, estas células se asocian 

con el desarrollo de respuestas inmunitarias de tipo humoral (Constant & Bottomly 

1997, Abbas et al. 2008h).  

 

• Otras subpoblaciones de linfocitos Th: 

 

- Th0: los linfocitos Th0 son células que son capaces de producir una 

mezcla de citocinas características tanto de los linfocitos Th1 como de los 

linfocitos Th2, por lo que se ha sugerido que se trate de los precursores de 

ambas poblaciones o bien células en transición (Tizard 2009k, 

Kunzendorf et al. 1998). El proceso de diferenciación de las células Th0 

se inicia por la estimulación del TCR por su ligando, pero son necesarias 

una serie de señales adicionales para determinar si se diferenciará hacia 

Th1 o hacia Th2 (Coffman & von der Weid 1997). El entorno en el que se 

produce la estimulación de las células Th0 por las células presentadoras 

de antígeno está influenciado tanto por factores genéticos como por 

factores relacionados con el antígeno (la forma, la dosis y la ruta de 

entrada) y las citocinas presentes en dicho entorno van a ser determinantes 

en la polarización de Th0 hacia Th1 o hacia Th2 (Constant & Bottomly 

1997, Kunzendorf et al. 1998). Así, la diferenciación hacia Th1 está 

determinada por la producción de IL-12 e IFN-γ por parte de macrófagos 

y células dendríticas en respuesta al antígeno, mientras que la 

estimulación de las células T CD4+ vírgenes en presencia de IL-4 

conduce a la diferenciación hacia Th2 (Trinchieri 1995, Coffman & von 

der Weid 1997).  

 

- Th17: Estudios recientes llevados a cabo en ratón han mostrado la 

existencia de unos linfocitos T CD4+ denominados Th17 que se 

caracterizan por la secreción de IL-17 y que promueven algunas 

reacciones inflamatorias (Abbas et al. 2008h). Parece que la 

diferenciación de estos linfocitos a partir de las células T CD4+ vírgenes 

es estimulada por la secreción conjunta por parte de las células dendríticas 

de IL-6 y TGF-β o por IL-23 o IL-21, siendo inhibida, en cambio, por la 

presencia de IFN-γ o de IL-4, lo que indica que se trata de una población 

diferente de los linfocitos Th1 y Th2 (Abbas et al. 2008h, Tizard 2009k). 



Revisión bibliográfica 

 

41 

Su principal función está asociada con la inducción de reacciones 

inflamatorias, especialmente aquellas que son ricas en neutrófilos, y con 

enfermedades inflamatorias crónicas de mecanismo inmunitario (Abbas et 

al. 2008h, Tizard 2009k). Por otra parte, cabe destacar que las citocinas de 

la familia de la IL-17 regulan las respuestas inmunitarias frente a bacterias 

extracelulares y hongos y son esenciales en la regulación de las respuestas 

inflamatorias (Park et al. 2005, Corthay 2009, Tizard 2009k). 

 

� Linfocitos T reguladores (Treg): además de los linfocitos Th, se ha descrito la

existencia de otras células CD3+, CD4+, CD8- que han sido denominadas “linfocitos T 

reguladores” y que se definen como linfocitos encargados de suprimir ciertas 

actividades potencialmente dañinas de los linfocitos Th, evitando así la “autoagresión” 

(Jonuleit & Schmitt 2003, Vigouroux et al. 2004, Corthay 2009). La principal función 

de estos linfocitos Treg es, por tanto, la prevención de las enfermedades autoinmunes 

mediante el mantenimiento de la autotolerancia inmunitaria, pero se han descrito otras 

funciones de estas células, entre las que destacan la supresión del asma y alergia y 

reacciones frente a antígenos alimentarios, la inducción de tolerancia materna frente al 

feto en desarrollo, la supresión de la inmunopatogenia de las enfermedades infecciosas 

o parasitarias, la supresión de la activación de las células T desencadenadas por 

estímulos débiles y el control de la magnitud de las respuestas inmunitarias mediadas 

por Th (Cohn 2008, Corthay 2009). Sin embargo, cabe destacar que algunos de los 

autores consultados cuestionan la existencia de un linaje especial de células T CD4+ 

dedicado en exclusiva a la supresión de los efectos de otras células, teniendo en cuenta 

que todos los linfocitos T CD4+, incluidos los Th “convencionales”, parecen presentar 

tanto actividades estimuladoras como supresoras de otras células T (Corthay 2009). Por 

lo tanto, estos autores sugieren que, al menos algunas de las actividades supresoras 

atribuidas a los linfocitos Treg, pueden ser llevadas a cabo, en realidad, por algunas 

poblaciones de células Th “convencionales” (Corthay 2009). Uno de los principales 

problemas que ha llevado a estos autores a dudar de la existencia de las células Treg 

como un linaje independiente es el hecho de que, por el momento, ha sido imposible 

encontrar un marcador linfocítico específico de esta población, habiéndose empleado 

marcadores que pueden expresarse en otros tipos celulares (Corthay 2009).   

 

� Linfocitos Tc: los linfocitos T citotóxicos son células caracterizadas por el fenotipo

CD3+, CD4-, CD8+ que se encargan de eliminar las células infectadas o dañadas que 

expresan antígenos endógenos asociados a moléculas del complejo mayor de 

histocompatibilidad de clase I (Abbas et al. 2008h). Estas células Tc se relacionan 

estrechamente con las respuestas inmunitarias adaptativas desarrolladas frente a 

microorganismos intracelulares. Para su activación precisan, además de la presentación 



Revisión bibliográfica 

 

42 

del antígeno para el que son específicas, de otras señales coestimuladoras provenientes 

de las células presentadoras de antígeno o de los linfocitos Th (Abbas et al. 2008h). El 

marcador CD8 sólo se encuentra en los linfocitos Tc y no en los Th, ya que forma parte 

del receptor para las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I. 

Una vez que los linfocitos T CD8+ activados reconocen un complejo antígeno-

complejo mayor de histocompatibilidad de clase I expresado en otra célula y se 

estimula su TCR, procederán a la destrucción de la célula diana (Tizard 2009t). La 

forma en la que la célula diana será destruida puede variar, ya que se han descrito, al 

menos, tres vías de citotoxicidad diferentes que pueden desarrollar los Tc, dos de ellas 

mediante el contacto directo entre el linfocito y la célula dañada y la otra mediante la 

secreción de citocinas (Andersen et al. 2006). El mecanismo efector de citotoxicidad de 

mayor importancia es uno de los que se encuentran mediados por el contacto directo 

célula-célula e implica la liberación al espacio intercelular confinado entre las 

membranas plasmáticas del linfocito Tc y la célula diana (anillo sináptico) de las 

proteínas citotóxicas contenidas en el interior de los gránulos citoplásmicos del 

linfocito Tc (Andersen et al. 2006, Williams & Bevan 2007, Abbas et al. 2008h). 

Dichas proteínas, entre las que destacan la perforina y algunas granzimas, inducen la 

apoptosis de la célula diana, pero no del linfocito Tc ni de otras células vecinas 

(Andersen et al. 2006). Los linfocitos Tc son capaces de emplear otro mecanismo de 

destrucción mediado por interacciones de las moléculas de membrana de los linfocitos 

con las de las células diana. En este caso, la activación linfocitaria induce la expresión 

en su superficie de la proteína denominada ligando de Fas (FasL, CD178), que se une a 

continuación con el receptor de muerte celular Fas (CD95 o Apo-1), que se encuentra 

presente en muchos tipos celulares, lo que conduce a la apoptosis de la célula diana por 

la vía clásica de las caspasas (Andersen et al. 2006, Abbas et al. 2008h). El tercer 

mecanismo de citotoxicidad que han desarrollado los linfocitos Tc se encuentra 

mediado por citocinas, principalmente TNF-α e IFN-γ (Andersen et al. 2006, Williams 

& Bevan 2007). El TNF-α liberado por los Tc activados desencadena en la célula diana 

la cascada de las caspasas y, por tanto, la apoptosis. En el caso del IFN-γ, se 

incrementa el procesamiento y presentación de antígenos mediante el incremento de la 

expresión de moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I en la 

célula diana (Andersen et al. 2006). Por otra parte, al igual que se ha descrito en el caso 

de los linfocitos Th, los linfocitos Tc pueden dividirse en dos subpoblaciones 

principales (Tc1 y Tc2) en función de las citocinas que sintetizan: las células Tc1 

secretan IL-2, IFN-γ y TNF-α y constituyen la población más numerosa de linfocitos 

Tc, mientras que las células Tc2 secretan IL-4 e IL-5 y su número es mucho menor 

debido, principalmente, al hecho de que para que se produzca la diferenciación de los 

linfocitos T CD8+ hacia Tc2 es necesario que exista una concentración muy elevada de 

IL-4 (Seder et al. 1992). También existe una tercera subpoblación (Tc0) que puede 



Revisión bibliográfica 

 

43 

considerarse equivalente a la subpoblación de linfocitos Th0 ya que posee un perfil de 

citocinas no restringido (Tizard 2009t).   

 

� Linfocitos B: los linfocitos B se definen fenotípicamente como linfocitos CD3- y

positivos a la expresión de alguna de las moléculas de superficie que se han empleado 

para su caracterización. Entre los marcadores de superficie de los linfocitos B 

utilizados en la actualidad en la caracterización linfocitaria canina destacan CD79α 

(Faldyna et al. 2001, Comazzi et al. 2006, Sinkora et al. 2007), IgM de superficie 

(Wilkerson et al. 2005) y CD21 (Faldyna et al. 2001, Sakai et al. 2003, Wilkerson et al. 

2005, Breathnach et al. 2005, Comazzi et al. 2006). CD79α constituye la porción 

encargada de la transducción de señales del receptor de las células B y abarca las 

regiones transmembrana e intracitoplásmica de dicho receptor. Se expresa, por tanto, 

en todas las células B, tanto maduras como inmaduras (Chu & Arber 2001), mientras 

que la IgM de superficie forma parte del receptor de estas células en su estado 

inmaduro (Wilkerson et al. 2005). CD21 es el receptor de los linfocitos B para C3d y se 

denomina comúnmente “receptor del complemento de tipo 2” (CR2). Este receptor se 

expresa en los linfocitos B maduros en forma de complejo con otras dos proteínas de 

membrana, CD19 y CD81, formando el “complejo del correceptor de los linfocitos B”, 

cuya activación conduce a una amplificación importantísima de la respuesta de los 

linfocitos B tras la estimulación antigénica (Wilkerson et al. 2005, Abbas et al. 2008a, 

Tizard 2009e). Estos linfocitos son los principales responsables de las respuestas 

inmunitarias humorales, siendo los encargados de la síntesis de anticuerpos. En 

general, estas células son capaces de reconocer los antígenos directamente a través de 

su receptor antigénico (BCR), pero para que se produzca una activación efectiva es 

necesaria la existencia de una segunda señal de una célula Th activada, una 

cooperación entre los B y T específicos de antígeno, además de otra serie de señales 

coestimuladoras (Saalmuller 2006, Abbas et al. 2008a). Sin embargo, ciertos antígenos 

no proteínicos, principalmente polisacáridos y lípidos, son capaces por sí solos de 

inducir respuestas en los linfocitos B, estimulando la síntesis de anticuerpos sin la 

ayuda de los linfocitos Th, y estos antígenos y las respuestas que ocasionan se 

denominan “independientes del timo” o “independientes de los linfocitos T” (Abbas et 

al. 2008a). En cualquier caso, cuando un antígeno específico se une al receptor del 

antígeno del linfocito B (BCR) en presencia de una serie de señales coestimuladoras 

adecuadas, se estimula la entrada de este linfocito, que previamente estaba en reposo, 

en la fase G1 del ciclo celular, lo que se acompaña de una serie de cambios que 

conducen a la división y diferenciación del linfocito B. Entre estos cambios destacan 

un incremento del tamaño celular, del ARN citoplásmico, de los orgánulos 

biosintéticos celulares, así como un importante aumento en la expresión de receptores 

de citocinas, CMHII, BCR, IgM y coestimuladores (CD86 y CD80) (Abbas et al. 



Revisión bibliográfica 

 

44 

2008a, Tizard 2009e). Una fracción de los linfocitos B activados se diferenciará hacia 

células plasmáticas, que se distribuirán por todo el organismo, pero especialmente en el 

bazo, en la médula de los nódulos linfáticos y en la médula ósea, lugares donde darán 

lugar a la síntesis de grandes cantidades de inmunoglobulinas de especificidad idéntica 

a la del BCR de su linfocito B progenitor (Tizard 2009e). Otra fracción de los linfocitos 

B que han sido estimulados por su antígeno específico se diferenciarán hacia células de 

memoria, que permanecen en la corteza de los nódulos linfáticos, proliferan y forman 

centros germinales (Tizard 2009e). Por otra parte, cabe destacar que, a pesar de que la 

población de linfocitos B parece ser más homogénea que la de linfocitos T, en el 

hombre y varias especies animales se ha descrito la existencia de dos subpoblaciones 

de estos linfocitos que se denominan linfocitos B1 y B2. Los B-B2 son los linfocitos B 

convencionales, los que se encargan de las respuestas inmunitarias humorales, y son los 

predominantes. Los linfocitos B-B1 dan lugar a células productoras de IgA (Tizard 

2009e) o IgM (Abbas et al. 2008a) en intestino y participan de alguna forma en las 

respuestas innatas, como se describió previamente. 

 
c. Componentes humorales de la inmunidad adaptativa: entre los componentes 

humorales de la inmunidad adaptativa destacan de manera especial los anticuerpos, que 

son producidos por los linfocitos B y células plasmáticas derivadas de ellos tras su 

estimulación antigénica y de los que a continuación describiremos las características de 

mayor relevancia. Sin embargo, el sistema del complemento (Nielsen & Leslie 2002) y 

diferentes péptidos antimicrobianos, como las defensinas y catelicidinas (Oppenheim et al. 

2003), ejercen también una importante labor en la puesta en funcionamiento de las 

respuestas adaptativas. Asimismo, algunas citocinas ya descritas no sólo participan en la 

inmunidad innata, sino que también juegan un papel central en las respuestas adaptativas y 

son sintetizadas por células de esta rama de la inmunidad. Entre ellas cabe destacar el 

TNF-α, el IFN-γ, la IL-10 y la IL-6. Otras citocinas ejercen sus funciones principales en el 

seno de las respuestas inmunitarias adaptativas y a continuación describiremos las 

principales características de las más importantes para pasar luego a la descripción de los 

anticuerpos. 

 

� Citocinas de la inmunidad adaptativa: de la misma forma que se ha descrito para

las citocinas que participan en las respuestas innatas, las citocinas de la inmunidad 

adaptativa permiten que exista una comunicación entre las células que intervienen en 

ella. Se encargan de mediar la proliferación y la diferenciación de los linfocitos tras el 

reconocimiento antigénico y de la activación de las células efectoras (Abbas et al. 

2008d). Entre las citocinas que actúan como mediadoras de las respuestas adaptativas 

destacan: IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, TNF-β, IL-17 e IL-21. 

 



Revisión bibliográfica 

 

45 

• IL-2: esta citocina es una glucoproteína de 14 a 17 kD cuya estructura 

contiene cuatro hélices α. La IL-2 fue descrita inicialmente como un factor de 

crecimiento de las células T, es sintetizada principalmente por los linfocitos Th 

CD4+ tras su activación y actúa de forma autocrina y paracrina (Gemmell & 

Seymour 1994 Abbas et al. 2008d). Su síntesis es transitoria, llegando a un pico 

de secreción a las 8-12 horas tras la estimulación de los linfocitos. Dicha 

secreción se concentra en la sinapsis entre el linfocito y la célula presentadora de 

antígeno, donde también se concentran los receptores de IL-2 de dicho linfocito, 

lo que favorece el contacto necesario para que se inicien las respuestas 

correspondientes (Abbas et al. 2008d). Entre las funciones de esta citocina 

destacan la estimulación de la supervivencia, proliferación y diferenciación de los 

linfocitos T activados por el antígeno. Asimismo, aumenta la síntesis de IFN-γ e 

IL-4 por parte de los linfocitos T (Abbas et al. 2008d) y estimula la citotoxicidad 

de las células NK y Tc (Gemmell & Seymour 1994). Por otra parte, esta citocina 

actúa como un factor de crecimiento para las células B e induce un incremento en 

la secreción de inmunoglobulinas (Abbas et al. 2008d). La IL-2 es también 

necesaria para la supervivencia de los linfocitos Treg y parece influir en su 

función (Abbas et al. 2008d). 

 

• IL-4: la IL-4 es también un miembro de la familia de las citocinas con cuatro 

hélices α y es producida por linfocitos T CD4+ pertenecientes a la subpoblación 

Th2, mastocitos y basófilos (Gemmell & Seymour 1994, Abbas et al. 2008d). Se 

encarga de estimular la producción de anticuerpos IgE, al ser la principal citocina 

que promueve el cambio de clase de la cadena pesada de la inmunoglobulina de 

los linfocitos B al isotipo IgE. Además, es un importante factor en la expansión 

clonal de las células B específicas de antígeno y estimula el desarrollo de los 

linfocitos Th2 a partir de los linfocitos TCD4+ vírgenes (Abbas et al. 2008d). Por 

el contrario, inhibe el desarrollo de los linfocitos Th1 y Th17 (Abbas et al. 

2008d). Todo ello parece sugerir que la IL-4 es un modulador de las respuestas 

humorales frente a diferentes estímulos antigénicos (Gemmell & Seymour 1994). 

Por otra parte, la IL-4 disminuye los receptores para la IL-2, inhibiendo así sus 

funciones, y es capaz de bloquear la generación de óxido nítrico por parte de los 

macrófagos, que es necesario para la destrucción de los microorganismos 

intracelulares (Gemmell & Seymour 1994). Muchas de sus funciones son 

inhibidas por el IFN-γ y, a su vez, la IL-4 inhibe muchas de las funciones del 

IFN-γ (Abbas et al. 2008d). 

 

• IL-5: la IL-5 está constituida por un homodímero que contiene un dominio de 

cuatro hélices α y es sintetizada, al igual que la anterior, por los linfocitos Th2 y 



Revisión bibliográfica 

 

46 

por los mastocitos activados (Abbas et al. 2008d). Se trata de una citocina con 

una potente labor de estimulación para el crecimiento y diferenciación de los 

eosinófilos (Abbas et al. 2008d). Por otra parte, la IL-5 actúa sobre los linfocitos 

B y estimula la síntesis de IgA e IgM (Gemmell & Seymour 1994, Abbas et al. 

2008d). 

 

• IL-13: la IL-13 pertenece también al grupo de citocinas con cuatro hélices α y 

posee una estructura similar a la IL-4, compartiendo con ella muchas funciones 

biológicas. Es sintetizada principalmente por los linfocitos Th2, pero también los 

linfocitos Tc, las células NK, los basófilos y los eosinófilos pueden sintetizarla 

(Gemmell & Seymour 1994, Abbas et al. 2008d). La IL-13 es secretada de forma 

temprana tras la estimulación  y durante largos períodos, lo que la diferencia de la 

IL-4, que es sintetizada de forma tardía y de modo transitorio (Zurawski & de 

Vries 1994). En cuanto a sus efectos, destaca su acción junto con la IL-4 en la 

defensa frente a los parásitos helmintos y en las enfermedades alérgicas (Abbas et 

al. 2008d) y, al igual que la IL-4, induce el cambio de clase a IgE en los linfocitos 

B (Gemmell & Seymour 1994, Abbas et al. 2008d). Por otra parte, inhibe la 

actividad citotóxica de los monocitos y macrófagos y, por tanto, su capacidad de 

destruir los microorganismos intracelulares (Gemmell & Seymour 1994). 

También estimula a los fibroblastos y a los macrófagos para que sinteticen 

colágeno en la reparación tisular en inflamaciones crónicas y actúa sobre la 

proliferación, diferenciación y función secretora de moco de las células 

caliciformes epiteliales bronquiales (Abbas et al. 2008d). 

   

• TNF-β: el TNF-β es una citocina sintetizada principalmente por los linfocitos 

T que comparte muchas características estructurales y funcionales con el TNF-α y 

que a menudo es denominada linfotoxina (LT). Se trata de un mediador de la 

inflamación aguda y actúa a nivel local. Se encarga de activar a las células 

endoteliales y a los neutrófilos (Abbas et al. 2008d).  

 

• IL-17: la IL-17 incluye realmente una familia de seis citocinas relacionadas 

estructuralmente que son sintetizadas por una subpoblación de linfocitos TCD4+ 

diferentes de los Th1 y Th2. Estimulan la producción de neutrófilos por la médula 

ósea y la síntesis de IL-1 y quimiocinas por parte de las células endoteliales y los 

macrófagos para favorecer la atracción de neutrófilos (Abbas et al. 2008d). 

 

• IL-21: esta citocina también es sintetizada por los linfocitos T CD4+ 

activados. Se encarga de estimular a los linfocitos T CD8+ y células NK y el 



Revisión bibliográfica 

 

47 

cambio de clase y la síntesis de inmunoglobulinas por parte de los linfocitos B 

(Abbas et al. 2008d). 

 

� Anticuerpos: las moléculas de anticuerpo son glucoproteínas pertenecientes a la

familia de las inmunoglobulinas (Ig) y son los principales mediadores de la inmunidad 

humoral. Estas moléculas pueden expresarse unidas a la membrana celular de los 

linfocitos B actuando como su receptor para el antígeno (BCR), o en forma secretada 

por estos mismos linfocitos, encontrándose en el plasma, en las secreciones mucosas y 

en el líquido intersticial de los tejidos, donde se unen a sus antígenos específicos para 

iniciar sus funciones efectoras (Abbas et al. 2008b, Tizard 2009c). Esta forma 

secretada soluble es la que se denomina realmente “inmunoglobulina”, empleándose el 

término BCR (o receptor del antígeno del linfocito B) para hablar de la forma 

expresada en la superficie celular (Tizard 2009c). Los linfocitos B en sus diferentes 

estados de maduración son las únicas células capaces de sintetizar anticuerpos. Así, los 

linfocitos B inmaduros expresan genes para moléculas de inmunoglobulinas, pero 

producen sólo pequeñas cantidades de estas proteínas, muchas de ellas en forma de 

receptor de membrana (IgM, principalmente). Sin embargo, una vez producido el 

reconocimiento antigénico, estos linfocitos B son estimulados y comienza su 

diferenciación hacia células plasmáticas, que son las responsables de la síntesis de la 

mayor parte de los anticuerpos (Askonas 1975). Todas las moléculas de anticuerpo 

comparten una serie de características estructurales básicas, pero son muy variables en 

las regiones que se unen al antígeno, que son las que les confieren su especificidad. Sus 

funciones efectoras y propiedades físico-químicas se relacionan con las porciones del 

anticuerpo que no se unen al antígeno y que son mucho menos variables. Cada 

molécula de anticuerpo tiene una estructura básica simétrica compuesta por dos 

cadenas ligeras idénticas y dos cadenas pesadas idénticas, que constan de regiones 

variables amino terminales (V) que se encargan del reconocimiento antigénico, y 

regiones constantes carboxi terminales (C), que son las que median las funciones 

efectoras y que determinan el isotipo del anticuerpo (Casadevall & Pirofski 2004, 

Abbas et al. 2008b). Por tanto, las regiones variables se unen a los antígenos, mientras 

que las regiones constantes se unen a los receptores celulares y a algunos componentes 

humorales del sistema inmunitario, como el complemento (Casadevall & Pirofski 

2004). Existen diferentes clases (isotipos) y subclases de anticuerpos en función de las 

diferencias en la estructura de sus regiones constantes de la cadena pesada. Dichas 

diferencias son las que determinan las funciones efectoras que desempeñarán. Estos 

isotipos se denominan IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. La especie canina posee IgA, IgD, 

IgE (que parece que posee dos subclases, IgE1 e IgE2), cuatro subclases de IgG (IgG1, 

IgG2, IgG3 e IgG4) e IgM. Durante la respuesta inmunitaria, las clases de 

inmunoglobulinas que son secretadas cambian (cambio de isotipo): el tipo de región 



Revisión bibliográfica 

 

48 

constante y, por tanto, el isotipo, de las inmunoglobulinas sintetizadas por el clon de 

linfocitos B estimulado por un antígeno se modifica, pero no las regiones variables, por 

lo que la especificidad no cambia. Como resultado, los linfocitos B que en origen 

sintetizaban IgM e IgD pueden dar lugar a isotipos y subtipos diferentes con mayor 

capacidad para eliminar ese antígeno en concreto. Así, la respuesta humoral frente a la 

mayoría de bacterias y virus está mediada principalmente por IgG, que favorece su 

fagocitosis (Abbas et al. 2008b, Tizard 2009c). Entre las funciones de los diferentes 

tipos de anticuerpos que se describieron inicialmente se incluyen funciones directas, 

como neutralización de toxinas y virus, y funciones indirectas, que requieren la 

participación de otros componentes del sistema inmunitario, como la opsonización o la 

activación del complemento (Kozel et al. 2004). Sin embargo, el número de funciones 

que ejercen los anticuerpos en la puesta en funcionamiento de las respuestas 

inmunitarias se ha ido ampliando, destacando entre estas funciones efectoras la 

estimulación de la citotoxicidad celular, sus actividades como mediadores de la 

inflamación y de las respuestas inmunitarias de base celular y su capacidad para actuar 

en ciertos casos como agentes bacteriostáticos o bactericidas directos (Casadevall & 

Pirofski 2004). Por otra parte, es importante tener en cuenta que la eficacia de las 

respuestas inmunitarias adaptativas humorales es el resultado de la suma de las 

eficacias de las diversas moléculas de anticuerpos sintetizadas en el hospedador 

(Casadevall & Pirofski 2004).  

 
2.1.2.2. Reconocimiento antigénico de la inmunidad adaptativa 

 
 Todos estos componentes del sistema inmunitario adaptativo sólo comenzarán a ejercer 

sus funciones una vez que se haya producido el reconocimiento antigénico. El sistema 

inmunitario adaptativo puede reconocer y responder a una amplia variedad de estructuras 

moleculares no propias que se denominan antígenos (Tizard 2009d) que pueden ser tanto 

ligandos altamente conservados entre los diferentes patógenos como ligandos no 

conservados, presentes en unos pocos microorganismos (Borghesi & Milcarek 2007). Las 

moléculas antigénicas, para ser reconocidas por los receptores del sistema inmunitario 

adaptativo, deben ser capturadas, procesadas y presentadas por las células presentadoras de 

antígeno ya descritas a las células efectoras de las respuestas adaptativas (Tizard 2009d). 

Los receptores antigénicos son generados somáticamente en procesos aleatorios de 

reorganización génica y son distribuidos clonalmente en los diferentes linfocitos T y B. 

Como consecuencia, la funcionalidad del sistema inmunitario adaptativo se basa en la 

habilidad para generar un amplio espectro de receptores con especificidades particulares 

(Medzhitov & Janeway 1998). Estos receptores para el antígeno de los linfocitos T y B se 

denominan de forma abreviada TCR y BCR, respectivamente, y son estructuras proteicas 



Revisión bibliográfica 

 

49 

complejas en las que ciertas porciones se encargan de la unión al antígeno y otras de la 

transducción de las señales de activación (Tizard 2009n). Por otra parte, los BCR poseen la 

particularidad de que son liberados de la célula, pasando a la sangre y a otros fluidos del 

organismo, donde se denominan anticuerpos (Tizard 2009n).  

 
 Para que se produzca la activación de los linfocitos es necesario que los receptores 

antigénicos reconozcan los ligandos para los que son específicos pero, además, es preciso 

que participe una segunda señal coestimuladora proveniente de la célula presentadora de 

antígeno. Esto hace que, en general, el reconocimiento inmunitario adaptativo en ausencia 

de reconocimiento innato dé como resultado la inactivación clonal de aquellos linfocitos 

que expresen los receptores implicados en ese evento de reconocimiento (Medzhitov & 

Janeway 1998).  

 
 Las moléculas antigénicas deben ser fraccionadas en el interior de las células y los 

fragmentos resultantes deben unirse a los receptores apropiados para la presentación del 

antígeno, que son denominados “moléculas de histocompatibilidad”. Estas moléculas son 

glucoproteínas codificadas por genes localizados en el locus denominado “complejo mayor 

de histocompatibilidad” (CMH) dentro del cual podemos diferenciar tres clases: las 

moléculas del CMH de clase I se expresan en la mayoría de las células nucleadas del 

organismo; las moléculas del CMH de clase II se localizan sólo en las células 

presentadoras de antígeno profesionales (células dendríticas, macrófagos y linfocitos B) y, 

en el perro, en casi todos los linfocitos T adultos; y las moléculas del CMH de clase III 

poseen funciones diversas, muchas de ellas asociadas con la inmunidad innata  (Tizard 

2009p). Mientras que los linfocitos B y sus anticuerpos son capaces de reconocer antígenos 

tanto solubles como asociados a células, los linfocitos T sólo son capaces de reconocer 

antígenos presentados en otras células a través de estas moléculas del CMH (Monaco 1995, 

Abbas et al. 2008e). Las moléculas de clase I presentan péptidos a los linfocitos Tc (CD8+) 

y, en general, dichos péptidos derivan de proteínas endógenas o citosólicas, como proteínas 

víricas o bacterianas presentes en células infectadas por microorganismos intracelulares o 

proteínas extrañas de células tumorales (Monaco 1995, Abbas et al. 2008e). Por el 

contrario, las moléculas de clase II presentan péptidos derivados de proteínas halladas en el 

medio extracelular o que forman parte de dominios extracelulares de proteínas de 

superficie celular a los linfocitos Th (CD4+) (Monaco 1995, Abbas et al. 2008e). Una vez 

producido el reconocimiento del complejo formado por el antígeno específico junto con la 

molécula del CMH correspondiente, se inician los procesos que conducen hacia la puesta 

en funcionamiento de las funciones efectoras de los linfocitos T.  

 

  



Revisión bibliográfica 

 

50 

  

Al igual que lo descrito para los linfocitos T, los linfocitos B requieren de varias 

señales para su activación completa: por una parte, como es evidente, será imprescindible 

que se produzca la unión del antígeno con el BCR, y, por otra parte, el linfocito B necesita 

una coestimulación proveniente de los linfocitos Th que, a su vez, han recibido una 

coestimulación por parte de las células presentadoras de antígeno (Tizard 2009e). Sin 

embargo, como se comentó previamente, existen ciertos antígenos, por lo general 

polímeros repetitivos simples, que son capaces de estimular la síntesis de anticuerpos por 

parte de los linfocitos B en ausencia de la señal coestimuladora de los linfocitos Th. Estos 

antígenos se denominan T-independientes, son capaces de proporcionar una señal 

suficiente para la proliferacion de los linfocitos B e inducen la síntesis de IgM, pero no son 

capaces de inducir células de memoria (Tizard 2009e). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

51 

 

2.2. CITOMETRÍA DE FLUJO 

 

 
2.2.1. MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA RESPUESTA INMUNITARIA  

 
En el ámbito clínico y de la investigación las respuestas inmunitarias 

desencadenadas ante una agresión pueden cobrar importancia tanto desde un punto de vista 

diagnóstico como desde un punto de vista terapéutico y como indicador pronóstico. Así, el 

estudio del inmunofenotipo, o caracterización de las diferentes subpoblaciones linfocitarias 

en base al patrón de moléculas de superficie expresadas, puede emplearse para tratar de 

determinar el tipo de respuesta inmunitaria desarrollada ante una enfermedad y poder así 

evaluar el pronóstico en cada caso en concreto. Asimismo, puede emplearse para evaluar 

las alteraciones producidas en el curso de enfermedades autoinmunes o con base 

inmunomediada o para evaluar el efecto que sobre el sistema inmunitario pueden tener 

diversos estímulos.  

 

En el estudio de las respuestas inmunitarias pueden emplearse diversos métodos 

que no sólo estarán encaminados al inmunofenotipaje. Muchas técnicas de laboratorio 

habitualmente empleadas en el campo de la inmunología están basadas en la producción 

y/o detección de anticuerpos (Abbas et al. 2008k, Tizard 2009m). La elevada especificidad 

de los anticuerpos por un antígeno concreto hace que sean un reactivo perfecto para su 

detección, purificación y cuantificación (Abbas et al. 2008k). Así, los anticuerpos pueden 

emplearse en el diagnóstico de una enfermedad de dos formas: en primer lugar, es posible 

determinar si una animal ha estado expuesto previamente a un agente infeccioso mediante 

la detección de anticuerpos específicos en su suero; y, en segundo lugar, pueden utilizarse 

anticuerpos específicos para detectar o identificar un antígeno de interés, tanto asociado a 

un agente infeccioso como a las células del animal (Tizard 2009m). 

 

Los métodos inmunológicos empleados para cuantificar la concentración de los 

antígenos o los anticuerpos son de elevada especificidad y sensibilidad y entre ellos 

destacan las pruebas de unión primaria, que se realizan midiendo los inmunocomplejos que 

se forman al permitir que el antígeno y el anticuerpo se combinen (Abbas et al. 2008k, 

Tizard 2009m). Esto requiere el marcaje de uno de los reactivos, bien con radioisótopos 

(como en el radioinmunoanálisis o RIA), con enzimas (como en el enzimoinmunoanálisis 

de adsorción o ELISA) o con colorantes fluorescentes o fluorocromos (como en las 

pruebas de inmunofluorescencia directas e indirectas). Además de las pruebas de unión 

primarias, pueden emplearse otras técnicas serológicas denominadas de unión secundaria, 



Revisión bibliográfica 

 

52 

que permiten evaluar in vitro el resultado de esa interacción antígeno-anticuerpo, como la 

precipitación de inmunocomplejos, la aglutinación de anticuerpos unidos a antígenos 

particulados o la lisis celular inducida por la activación de la vía clásica del complemento 

(Tizard 2009m). 

 

Por otra parte, con frecuencia se emplean anticuerpos que son específicos frente a 

los antígenos expresados o contenidos en un tipo celular concreto con el objetivo de 

identificar estas células en los tejidos o en las suspensiones celulares y de separarlas a 

partir de las poblaciones mixtas (Abbas et al. 2008k). Estos anticuerpos son con frecuencia 

anticuerpos monoclonales puros y específicos derivados de un hibridoma que pueden 

emplearse como reactivos químicos estandarizados y pueden obtenerse en cantidades casi 

ilimitadas (Tizard 2009m). Una de las aplicaciones más destacadas de estos anticuerpos 

monoclonales es la citometría de flujo, técnica que analiza propiedades de las células o 

partículas en suspensión en un flujo contínuo, empleada con frecuencia en el 

inmunofenotipaje y en la que nos centraremos a continuación en esta revisión 

bibliográfica.   

 

Además, se han desarrollado otros métodos que evalúan las respuestas de los 

linfocitos T y B mediante técnicas laboratoriales que han permitido obtener importantes 

avances en los conocimientos sobre el sistema inmunitario. Así, se emplean activadores 

policlonales de linfocitos T, como concanavalina A y fitohemaglutinina, para evaluar la 

capacidad de activación de los linfocitos T aislados a partir de sangre. En el caso de los 

linfocitos B suelen emplearse como análogos de los antígenos anticuerpos anti-Ig que se 

unen a la región constante de las Ig de la membrana de estos linfocitos para activarlos. 

También puede evaluarse la capacidad proliferativa de estas células mediante la 

determinación de la cantidad de timidina que queda incorporada al ADN de las células 

cultivadas en su replicación, ya que el ritmo de división celular suele ser directamente 

proporcional a la velocidad de síntesis del ADN. Otras técnicas permiten evaluar la 

secreción de citocinas por parte de los linfocitos T y la síntesis de anticuerpos por parte de 

los linfocitos B (Abbas et al. 2008k).  

 

Otra técnica que ha ayudado a la comprensión de diversas enfermedades es el 

empleo de ratones transgénicos en los que se expresa de forma aumentada un gen en 

concreto en un tejido determinado o ratones con genes inactivados (knockout) en los que se 

ha anulado el funcionamiento de un gen en particular (Abbas et al. 2008k). En concreto, 

estos ratones knockout se han utilizado en diversos estudios llevados a cabo en la infección 

por Ehrlichia spp. para tratar de dilucidar los mecanismos implicados en la respuesta 

inmunitaria desencadenada, así como los mecanismos de evasión de estas respuestas y la 

inmunopatogenia de la enfermedad (Akkoyunlu & Fikrig 2000, Ganta et al. 2002, Feng & 



Revisión bibliográfica 

 

53 

Walker 2004, Bitsaktsis et al. 2004, Yager et al. 2005, Bitsaktsis & Winslow 2006, Ismail 

et al. 2006, Ismail et al. 2007). 

 
2.2.2. FUNDAMENTOS DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO  

 
La primera descripción de un citómetro de flujo data de 1934 y se sugería la 

posibilidad de llevar a cabo recuentos celulares al hacer fluir a dichas células por un tubo 

capilar mientras se empleaba un sensor fotoeléctrico para hacer las mediciones. 

Posteriormente, en 1947 Gucker y colaboradores describieron la detección por citometría 

de flujo de bacterias en aerosoles (Gucker & O'Konski 1947). Este trabajo se desarrolló 

durante la Segunda Guerra Mundial en un intento de identificar de forma rápida la 

presencia de bacterias y esporas transmitidas por el aire que podían ser empleadas como 

armas biológicas. Los primeros citómetros de flujo disponibles comercialmente datan de 

1970. En la actualidad, la citometría de flujo constituye una valiosa técnica laboratorial que 

se emplea en la rutina diaria de muchos laboratorios clínicos y de investigación y que 

permite caracterizar a elevada velocidad poblaciones celulares heterogéneas a través de la 

identificación simultánea de un amplio rango de propiedades biológicas (Shapiro 2003b).  

 

La citometría es un proceso en el que se miden características físicas y/o químicas 

de las células o, por extensión, de otras partículas biológicas o no biológicas. La citometría 

de flujo permite analizar electrónicamente las señales generadas por células individuales u 

otras partículas en suspensión a medida que van pasando por una fuente de luz en el 

aparato de medida, el citómetro de flujo (Shapiro 2003b). Algunas de las aplicaciones más 

frecuentes de la citometría de flujo están directamente relacionadas con la evaluación de 

las respuestas inmunitarias y con el inmunofenotipaje, como veremos más adelante. La 

velocidad de análisis puede ser mayor a miles de células por segundo y las células 

individuales procedentes de subpoblaciones heterogéneas pueden ser no sólo identificadas 

sino también separadas físicamente en base a sus propiedades. Esta separación de las 

células permite emplearlas posteriormente para nuevos estudios físicos, químicos, 

biológicos o moleculares y es llevada a cabo por ciertos citómetros de flujo, los 

denominados “sorters” (Herrera et al. 2007). 

 

En el citómetro de flujo, las células en suspensión son inyectadas en un fluido que 

las alinea individualmente y, por tanto, hace que pasen de una en una. A continuación se 

dirige un haz de luz a este flujo de células y se valora para cada una de ellas las 

características de dispersión de luz y emisión de fluorescencia. Dichas características serán 

recogidas, filtradas y convertidas en valores digitales que son almacenados en un 

ordenador para su posterior interpretación.  



Revisión bibliográfica 

 

54 

Los parámetros que podrán ser recogidos de cada una de las células analizadas en 

un citómetro de flujo son parámetros relacionados con sus características intrínsecas, como 

su tamaño o la complejidad de su núcleo y citoplasma, y parámetros relacionados con las 

características antigénicas o funcionales de cada célula, que vienen determinadas por la 

expresión de las moléculas para las que son específicas las sondas empleadas en cada caso 

y que nos servirán de ayuda en el inmunofenotipaje.  

 

Por lo tanto, las señales producidas por la interacción de las células con el haz de 

luz son de dos tipos: señales de dispersión de la luz y señales de fluorescencia. 

 

- Las características de dispersión de luz de una célula se relacionan con las 

propiedades específicas de tamaño celular y complejidad, que se relacionan a su 

vez con las propiedades de reflexión y refracción de la luz. Son el resultado de la 

interacción de la luz con una partícula, que produce un cambio de dirección, pero 

no de longitud de onda, en todas las direcciones del espacio. El citómetro de flujo 

mide a través de fotodetectores la dispersión frontal o “forward light scatter” 

(FSC), que se corresponde con la luz dispersada en un ángulo pequeño que casi 

coincide con la dirección de la luz incidente, y la dispersión lateral o “side light 

scatter” (SSC) de la luz para cada una de las células, que se corresponde con la luz 

dispersada en un ángulo de 90º respecto a la luz incidente (Shapiro 2003b). La 

intensidad de la dispersión frontal de la luz depende de la diferencia del índice de 

refracción entre la partícula y el medio, así como del tamaño de la partícula, lo que 

conduce a que este valor sea proporcional al tamaño, forma y homogeneicidad 

óptica de la célula, influyendo en mayor medida las propiedades de tamaño y 

superficie de la célula. Así, en general, el valor de FSC de una célula grande será 

mayor que el de una célula pequeña, aunque no debe olvidarse la participación de 

otros factores en este parámetro. Por su parte, la intensidad de la dispersión lateral 

de la luz se encuentra influenciada por diversas propiedades, pero, en general, se 

puede asumir que es proporcional a la complejidad celular. De esta forma, las 

células con una elevada complejidad, o, dicho de otra forma, con una estructura 

interna granular, como los granulocitos sanguíneos, mostrarán un valor de SSC 

mayor que aquellas células que carezcan de gránulos en su citoplasma, como los 

linfocitos (Shapiro 2003b). En resumen y de forma general, la FSC de un haz de luz 

se puede usar para medir el tamaño de la célula y la SSC proporciona una medida 

de la rugosidad de la superficie celular y de su complejidad interna y, mediante la 

combinación de estos dos parámetros, se pueden identificar las diferentes 

poblaciones leucocitarias en una muestra sanguínea (Tizard 2009m). 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

55 

- Sin embargo, el citómetro de flujo suele emplearse para algo más que 

determinar el tamaño y complejidad de las células. Es posible determinar la estirpe 

tisular, la etapa madurativa o el estado de activación que presenta una célula 

analizando la expresión de diferentes moléculas en su superficie o en su interior. 

Para llevar a cabo esta identificación pueden emplearse una serie de sondas 

específicas (o anticuerpos monoclonales) frente a dichas moléculas (o antígenos). 

Estas sondas son marcadas con sustancias que emiten fluorescencia cuando son 

excitadas a una determinada longitud de onda y el citómetro de flujo es capaz de 

detectar la fluorescencia procedente de las células en suspensión y determinar así el 

número de ellas que expresan la molécula a la que se encuentra unida la sonda 

fluorescente (Shapiro 2003b, Abbas et al. 2008k). Las sustancias que se emplean 

por sus características de emisión de fluorescencia son los denominados 

“fluorocromos”. Cada fluorocromo posee un espectro de absorción o excitación, 

que es el rango de longitud de onda en el que absorbe luz, y un espectro de emisión, 

que es el rango sobre el que el fluorocromo emite luz. Cuando el fluorocromo 

interacciona con la luz de excitación, procedente del láser del citómetro, parte de 

esa energía se absorberá y el resto será emitida en forma de luz a una longitud de 

onda superior (debido a que esa luz emitida es de menor energía que la que provocó 

la excitación). Los citómetros de flujo detectan esas señales de fluorescencia 

procedentes de los complejos antígeno-anticuerpo (o “molécula problema”-sonda) 

marcados con un fluorocromo y situados en una célula (Shapiro 2003b). El empleo 

de un fluorocromo u otro está condicionada por el tipo de láser (o láseres) de los 

que disponga el citómetro de flujo que se vaya a emplear, ya que si éste emite un 

haz de luz a 488 nm, los fluorocromos empleados deben poseer un espectro de 

absorción lo más cercano posible a ese espectro de emisión del láser. Además, si se 

utiliza más de un fluorocromo a la vez, las longitudes de onda a las que emitan 

deben ser lo más lejanas posibles, para que no interfieran las señales de uno y otro. 

En la actualidad existen multitud de fluorocromos en el mercado que pueden ser 

empleados en citometría de flujo. Algunos de los más utilizados son: isotiocianato 

de fluoresceína (FITC), que se excita a 490 nm y emite a 514 nm; ficoeritrina (PE), 

que se excita a partir de 480 nm (con un máximo de excitación a 565 nm) y emite a 

578 nm; rojo Texas, que se excita a 596 nm y emite a 615 nm; aloficocianina 

(APC), que se excita a 635 nm y emite a 660 nm; ioduro de propidio (IP), que se 

excita a 480 nm y emite a 510 nm y que suele emplearse para marcar ácidos 

nucleicos (Shapiro 2003c). 

 

    

 

 



Revisión bibliográfica 

 

56 

2.2.3. COMPONENTES DE LOS CITÓMETROS DE FLUJO 

 

A modo de resumen y para favorecer la comprensión de los componentes 

estructurales de los citómetros de flujo, podemos decir que la citometría de flujo es una 

técnica laboratorial de análisis multiparamétrico que se basa en hacer pasar una suspensión 

de partículas, que son por lo general células, alineadas y de una en una por delante de un 

haz de luz láser focalizado. El impacto de cada célula con el rayo de luz produce señales 

que corresponden a diferentes características de la célula y que son recogidos por 

diferentes detectores. Estos detectores convierten dichas señales en señales eléctricas que 

posteriormente serán digitalizadas para permitir la medida simultánea de varios parámetros 

de una misma célula. 

 

Estas características hacen que sean necesarios para el funcionamiento de un 

citómetro de flujo unos sistemas de fluidos, que se encargan de transportar (o inyectar) las 

células hacia el centro del láser de una en una y de generar un flujo laminar; unos sistemas 

ópticos, constituidos tanto por las fuentes de luz como por los detectores de la luz 

dispersada y de la fluorescencia; y unos sistemas electrónicos e informáticos, encargados 

del procesado, transformación y análisis de las señales recibidas (Shapiro 2003a). 

 

� Sistemas de fluidos: el sistema de fluidos de un citómetro de flujo transporta las

células de la muestra hacia y a través de la región donde se lleva a cabo la 

excitación por el haz de luz y se toman las medidas. Para ello, en la cámara de 

flujo de un citómetro se produce un flujo laminar al interaccionar dos fluidos: el 

de la muestra y el de la vaina envolvente, que rodea el fluido que contiene la 

muestra (que es el núcleo). Ambos fluidos, el de la muestra y el de la vaina 

envolvente, nunca se mezclan, ya que se generan diferentes presiones y 

velocidades en diferentes puntos del sistema, y las células se localizan y 

circulan por el centro, alineándose hasta quedar en fila, de modo que pasan de 

una en una ante el haz de luz. El sistema de fluidos del citómetro de flujo se 

encuentra contínuamente activo durante el paso de la muestra y debe mantener 

siempre ese flujo laminar a una velocidad constante para asegurar que las 

medidas se realicen de forma satisfactoria (Shapiro 2003a). 

 

� Sistemas ópticos: Los sistemas ópticos de los citómetros de flujo incluyen tanto

sistemas de iluminación como detectores que se encargan de recoger las señales 

de luz emitida. En general, los sistemas de iluminación en los citómetros 

actuales emplean luz láser, aunque también pueden emplear otras fuentes de 

iluminación, como las lámparas de arco. A su vez, entre los láseres, los más 

ampliamente empleados en citometría de flujo son los láseres de argón, que 



Revisión bibliográfica 

 

57 

generalmente emiten a 488 nm, una longitud de onda que es útil para excitar a 

muchos de los fluorocromos más utilizados, como FITC, PE, IP o cianinas, 

entre otros. La fuente luminosa consta de uno o dos láseres (con emisiones a 

diferentes longitudes de onda) y de una serie de lentes que dirigen el haz de luz 

hacia el punto deseado, que es la zona donde interacciona con las células y que 

debe ser siempre constante. Una vez producida esa interacción, la luz excita a 

los fluorocromos y es dispersada. A continuación debe producirse la recogida 

de estas señales lumínicas, lo que se lleva a cabo gracias a la existencia de 

detectores. Es muy frecuente que se empleen fotodiodos como detectores de la 

FSC y tubos fotomultiplicadores para detectar la SSC y la fluorescencia. Con el 

objetivo de seleccionar la longitud de onda específica que llega a cada 

fotodetector y dotar así de la especificidad de lectura de una u otra 

fluorescencia, se emplean filtros ópticos, que forman parte también del sistema 

óptico de los citómetros de flujo. Existen diferentes tipos de filtros, como los 

filtros de absorción, que absorben la luz a una determinada longitud de onda, o 

los filtros de interferencia o dicroicos, que reflejan la luz que tiene una longitud 

de onda superior o inferior a la que dejan pasar (Shapiro 2003a). 

 

� Sistema electrónico: Una vez que se ha producido la interacción de la señal

lumínica con los fotodetectores, se genera una señal eléctrica. El sistema 

electrónico del citómetro de flujo se encarga de procesar los pulsos detectados 

por los fotodetectores, es decir, se encarga de la detección y amplificación de la 

señal en forma analógica y la posterior transformación de esta señal analógica a 

digital. Tras el procesamiento informático de las señales pueden obtenerse en 

modo lista o como histogramas monoparamétricos, biparamétricos o 

multiparamétricos, junto con información de las diferentes poblaciones 

detectadas (Shapiro 2003a). 

 
2.2.4. APLICACIONES DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO  

 
En la actualidad la citometría de flujo es una técnica ampliamente empleada tanto 

en labores de investigación como en diferentes campos de la medicina y ha permitido 

avanzar enormemente en el conocimiento disponible sobre la etiología, patogenia, 

diagnóstico y pronóstico de multitud de enfermedades e, incluso, se ha empezado a 

emplear en ciertas terapias, principalmente de patologías oncológicas (Chabanne et al. 

2000, Shapiro 2003d). Debido a la enorme cantidad de aplicaciones de la citometría de 

flujo, en esta revisión bibliográfica sólo se describirán brevemente algunas de las más 

relevantes. 



Revisión bibliográfica 

 

58 

 

Una de las aplicaciones más lógicas de esta técnica en labores clínicas es su empleo 

en hematología. En un principio se empleó en este sentido únicamente como un medio de 

recuento y diferenciación de las poblaciones celulares sanguíneas (Shapiro 2003d). Así, 

entre los usos de la citometría de flujo en hematología podemos destacar los recuentos de 

reticulocitos (y cálculo del índice de maduración de reticulocitos), recuento de plaquetas y 

cálculo de la fórmula leucocitaria, así como el estudio de las diferentes poblaciones 

celulares de la sangre (Shapiro 2003d). El desarrollo de los anticuerpos monoclonales y la 

definición de los grupos de diferenciación o CD permitieron lograr una caracterización más 

objetiva de las diferentes líneas hematopoyéticas y sus sucesivos estados de maduración 

(Chabanne et al. 2000), lo que se ha empleado en estudios de transfusiones, citopenias 

inmunomediadas o en la identificación y separación de las células madre pluripotenciales 

de la médula ósea, y han constituido la base para su aplicación en oncología, sobre todo en 

el fenotipaje de leucemias y linfomas, estableciendo diagnósticos y pronósticos y 

permitiendo alcanzar una mejor monitorización de la enfermedad (Shapiro 2003d). 

  

De forma estrechamente relacionada, la inmunología ha sido uno de los campos que 

más se ha beneficiado del empleo rutinario de la citometría de flujo, permitiendo llevar a 

cabo la caracterización de una población celular heterogénea mediante la definición de 

subpoblaciones en base a la expresión de proteínas que en la membrana celular o, incluso, 

en el citoplasma, son identificables mediante anticuerpos monoclonales específicos, junto 

con la evaluación de parámetros intrínsecos a las células analizadas, como el tamaño y la 

complejidad, para lograr lo que se ha denominado inmunofenotipaje (Baumgarth & 

Roederer 2000, Owens et al. 2000, Shapiro 2003d). Así, se pueden evaluar las 

proporciones de células del sistema inmunitario y de subpoblaciones de células T o el 

estado de estimulación de los linfocitos y su síntesis de citocinas, lo que ha permitido 

evaluar el efecto de enfermedades infecciosas y no infecciosas, de base inmunomediada o 

no inmunomediada, sobre el sistema inmunitario. Uno de los usos más extendidos de la 

citometría de flujo y que, de hecho, se considera que ha sido fundamental para que esta 

técnica haya llegado a emplearse de forma tan extensa, es el estudio en medicina humana 

de la subpoblación de células TCD4+ en los pacientes con infección por el virus de la 

inmunodeficiencia humana (Shapiro 2003d). 

 

Además, la citometría de flujo se emplea en estudios de ciclo celular, biología 

celular y molecular, en biotecnología y en ensayos de cinética celular en farmacología y 

permite identificar protozoos, bacterias y virus en el campo de la microbiología y 

parasitología (Fouchet et al. 1993, Yagi et al. 2000, O'Connor et al. 2001, Abbas et al. 

2008k). También se ha empleado en estudios en el campo de la genética, que permiten 

identificar cromosomas y establecer diagnósticos prenatales o de portadores y que están 



Revisión bibliográfica 

 

59 

abriendo muchas puertas en el ámbito de las terapias génicas de diversas patologías 

(Shapiro 2003d).  

 

En la clínica veterinaria el uso de la citometría de flujo aún hoy es mucho más 

limitado que en medicina humana, en parte debido a la menor cantidad de anticuerpos 

monoclonales disponibles para especies animales como el perro o el gato (Byrne et al. 

2000). Sin embargo, cada vez se publican más trabajos llevados a cabo empleando 

citometría de flujo en estudios de inmunología, oncología, hematología, parasitología y 

microbiología veterinarias (Chabanne et al. 2000, Byrne et al. 2000, Strasser et al. 2000, 

Greeley et al. 2001, Faldyna et al. 2001, Blount et al. 2005, Comazzi et al. 2006, Horiuchi 

et al. 2007a, Horiuchi et al. 2007b, Lawler et al. 2008, Gelain et al. 2008, Stein et al. 2008, 

Williams et al. 2008, Hogenesch & Thompson 2009, Schultz et al. 2009, Day 2009). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

60 

 

2.3. EHRLICHIOSIS CANINA 

 
 

2.3.1. INTRODUCCIÓN A LA EHRLICHIOSIS CANINA  

 

 Las ehrlichiosis son un grupo de enfermedades de transmisión vectorial causadas 

por bacterias gramnegativas que pueden afectar tanto a animales domésticos y salvajes 

como al hombre (Cohn 2003). Estos agentes se comportan como parásitos intracelulares 

obligados que se replican en el interior de fagosomas en el citoplasma de sus células diana, 

característica que las diferencia de otro grupo bacteriano estrechamente relacionado con 

ellas, las rickettsias, que se replican directamente en el citoplasma de las células (Cohn 

2003, Hotopp et al. 2006). En general, las especies bacterianas implicadas en estas 

enfermedades se caracterizan por poseer tropismo por un tipo celular en concreto, 

diferenciándose especies monocitotrópicas (aquellas que predominantemente residen en 

monocitos y macrófagos), granulocitotrópicas (aquellas que infectan neutrófilos y 

eosinófilos) o trombocitotrópicas (aquellas que residen en las plaquetas del hospedador). 

Algunas de estas especies pueden infectar también células endoteliales y epiteliales 

(Rikihisa et al. 1985, Okada et al. 2003). Sin embargo, es importante tener en cuenta que el 

tropismo descrito no es absoluto, pudiendo ser infectados varios tipos celulares por la 

misma especie bacteriana (Cohn 2003). 

 

En 2001 Dumler y colaboradores llevaron a cabo una reorganización de los géneros 

Anaplasma, Ehrlichia, Cowdria, Neorickettsia y Wolbachia, que previamente habían sido 

clasificados en base a sus características morfológicas, ecológicas, epidemiológicas y 

clínicas. En la nueva clasificación taxonómica se emplearon análisis genéticos basados en 

la similitud del RNA ribosómico, del groESL heat shock operon y de genes que codifican 

proteínas de superficie, quedando finalmente la familia Anaplasmataceae dividida en tres 

genogrupos o géneros (Ehrlichia, Anaplasma y Neorickettsia) (Dumler et al. 2001), cuyos 

miembros producen, por lo general, una elevada reacción antigénica cruzada entre especies 

de un mismo genogrupo (Cohn 2003). Por lo tanto, taxonómicamente, estas especies 

quedarían clasificadas dentro del filum Proteobacterias, orden Rickettsiales, familia 

Anaplasmataceae (Dumler et al. 2001) y las diferentes especies quedarían incluidas en los 

géneros descritos de la siguiente forma: 

- El género Ehrlichia incluye las especies E. canis, E. ewingii, E. 

chaffeensis, E. ruminantium y E. muris. 

- El género Anaplasma incluye a A. phagocytophilum, A.platys, A. bovis y 

A. marginale. 

- El género Neorickettsia incluye a N. risticii, N. sennetsu y N. helmintoeca. 



Revisión bibliográfica 

 

61 

Como se ha mencionado previamente, estos agentes bacterianos requieren para su 

transmisión de la participación de vectores: garrapatas en el caso de Ehrlichia spp. y 

Anaplasma spp. (Groves et al. 1975, Cohn 2003, Neer & Harrus 2006) y trematodos en el 

caso de Neorickettsia spp. (Philip et al. 1954, Neer & Harrus 2006). Esta transmisión 

vectorial hace que la prevalencia de la infección por cada agente dependa de la distribución 

geográfica de su vector (Hinrichsen et al. 2001). 

 

En la especie canina, la ehrlichiosis fue descrita por primera vez en Argelia en 1935 

por Donatien y Lestoquard, quienes observaron unos pequeños microorganismos en el 

interior de los monocitos de perros infestados por garrapatas que habían desarrollado un 

cuadro patológico caracterizado por la aparición de fiebre y anemia (Donatien & 

Lestoquard 1935). En un principio el agente causal de esta enfermedad se denominó 

Rickettsia canis, aunque estudios posteriores llevaron a sustituir este nombre por el actual 

de E. canis (Moshkovskii 1945). Fue a partir de los años sesenta cuando se comenzó a dar 

una mayor importancia a la enfermedad, debido a la aparición de un proceso patológico 

agudo en perros militares británicos y americanos destacados en Singapur y Vietnam, 

respectivamente, que se caracterizaba por manifestaciones hemorrágicas graves, 

pancitopenia y emaciación y que causó la muerte de un elevado número de animales 

afectados (Huxsoll et al. 1970). En un principio la etiología de este proceso creó confusión, 

por lo que recibió diversos nombres, entre los que el más aceptado fue el de “pancitopenia 

tropical canina”, aunque finalmente se confirmó que el agente causal de aquella patología 

era E. canis (Huxsoll et al. 1969). A finales de los años 80 se produjo un nuevo repunte en 

la importancia que se daba a esta enfermedad debido a la descripción de la infección por E. 

canis en el hombre, aunque posteriormente se determinó que aquellos casos en medicina 

humana estaban causados por otra especie ehrlichial, E. chaffeensis  (Maeda et al. 1987, 

Dawson et al. 1991, Neer & Harrus 2006).  
 
2.3.2. ESPECIES DE LOS GÉNEROS EHRLICHIA, ANAPLASMA Y 

NEORICKETTSIA QUE AFECTAN A LA ESPECIE CANINA  

 

Las especies de los géneros Ehrlichia, Anaplasma y Neorickettsia que son capaces 

de infectar a la especie canina son:  

 

- E. canis: como se ha comentado previamente, esta especie fue descrita en 1935 

por Donatien y Lestoquard y, en la actualidad, continúa siendo uno de los principales 

agentes productores de enfermedad clínica y cuadros graves en el perro en todo el mundo. 

Se trata del agente etiológico primario de la ehrlichiosis monocítica canina (Woody & 

Hoskins 1991, Rikihisa 1991, Neer & Harrus 2006, Baneth et al. 2009) y, en nuestro país, 



Revisión bibliográfica 

 

62 

es el más importante agente causal de ehrlichiosis en el perro (Solano-Gallego et al. 2006, 

Amusategui et al. 2008, Couto et al. 2010), por lo que en él nos centraremos 

posteriormente en esta revisión bibliográfica. 

 

- E. chaffeensis: se trata del agente etiológico de la ehrlichiosis monocítica humana 

(Dawson et al. 1991, Anderson et al. 1991). Sin embargo, el papel potencial de E. 

chaffeensis como causante de enfermedad tras la infección natural en la especie canina no 

se ha confirmado hasta 1998, cuando se identificó esta especie en sangre de perros con 

sintomatología clínica y serorreactividad frente a antígenos de E. canis (Breitschwerdt et 

al. 1998b). Al igual que ocurre con E. canis, las células diana de E. chaffeensis son las 

células mononucleares (Neer & Harrus 2006). Su principal vector es la garrapata 

Amblyomma americanum, aunque también  Dermacentor variabilis es capaz de transmitir 

la enfermedad (Neer & Harrus 2006). La distribución de este vector hace que se hayan 

descrito casos principalmente en Estados Unidos (Kordick et al. 1999, Neer & Harrus 

2006).  

 

- A. platys: la infección por A. platys en el perro da lugar a lo que tradicionalmente 

se ha denominado trombocitopenia cíclica infecciosa, descrita por primera vez en Estados 

Unidos en 1978 por Harvey y colaboradores (Harvey et al. 1978). Actualmente se trata de 

una enfermedad de distribución mundial (Harvey 2006). Esta especie constituye el único 

agente rickettsial con capacidad para infectar plaquetas en el perro (Harvey et al. 1978). La 

infección por A. platys se caracteriza por causar una trombocitopenia que suele ser cíclica 

y recurrente (Harvey et al. 1978) y, aunque se ha descrito que en muchas ocasiones los 

perros infectados son asintomáticos, la trombocitopenia puede acompañarse, entre otros 

signos, de la aparición de fiebre, anorexia, depresión, letargia, palidez de mucosas, pérdida 

de peso, secreción nasal y uveítis (Hibler et al. 1986, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 

1997a). Se cree que el vector de esta bacteria es, al igual que para E. canis, la garrapata 

Rhipicephalus sanguineus, aunque los estudios experimentales llevados a cabo para tratar 

de confirmarlo no han obtenido resultados satisfactorios (Hibler et al. 1986, Simpson et al. 

1991).  

 

- A. phagocytophilum: bajo esta denominación se engloba a las especies 

anteriormente conocidas como E. equi, el agente de la ehrlichiosis granulocítica humana 

(HGE) y E. phagocytophila y, en el perro, es el agente causal de la anaplasmosis 

granulocítica canina (Dumler et al. 2001, Woldehiwet 2010), aunque es capaz de infectar a 

otras muchas especies animales, entre ellas caballos, gatos, rumiantes y al hombre (Dumler 

et al. 1995a, Dumler & Bakken 1995b, Woldehiwet 2010). Es una de las especies 

conocidas como granulocíticas, por su tropismo por neutrófilos y eosinófilos (Woldehiwet 

2010). Los vectores de A. phagocytophilum parecen ser las garrapatas pertenecientes al 



Revisión bibliográfica 

 

63 

complejo de Ixodes persulcatus, siendo en Europa I. ricinus el principal vector de la 

enfermedad, si bien otras especies de garrapatas podrían estar implicadas en su transmisión 

(Woldehiwet 2010). En los perros con infección natural por A. phagocytophilum se ha 

descrito la aparición de signos clínicos inespecíficos, como fiebre, letargia y 

esplenomegalia y es frecuente hallar leucopenia debida a linfocitopenia y neutropenia así 

como trombocitopenia (Greig, Armstrong 2006a, Woldehiwet 2010). 

 

- E. ewingii: se trata de otra de las especies denominadas granulocíticas, al igual 

que la anterior. Es el agente causal de la ehrlichiosis granulocítica canina (Goldman et al. 

1998), aunque también puede infectar a otras especies animales y al hombre (Greig et al. 

2006b). Su vector es la garrapata A. americanum (Wolf et al. 2000) y, hasta el momento, la 

infección por E. ewingii sólo ha sido descrita en Estados Unidos (Greig et al. 2006b). Los 

animales afectados presentan con frecuencia una poliartritis aguda, aunque, al igual que el 

resto de especies de la familia Anaplasmataceae que afectan al perro, es frecuente la 

aparición de una sintomatología inespecífica (Goldman et al. 1998, Greig et al. 2006b). 

 

- N. risticii: la enfermedad causada por N. risticii fue descrita en primer lugar en 

caballos, especie en la que recibió el nombre de fiebre de los caballos de Potomac o 

ehrlichiosis monocítica equina. Se ha visto que puede causar una ehrlichiosis 

monocitotrópica en el perro tras la infección natural, descrita como una ehrlichiosis atípica 

(Kakoma et al. 1994). Sus células diana son los monocitos y macrófagos, pero también los 

enterocitos (Rikihisa et al. 1985). El modo de transmisión de N.risticii es desconocido, 

aunque se cree que podrían participar trematodos o nematodos (Neer & Harrus 2006). 

 

- N. helminthoeca: es el agente casual de la enfermedad del salmón o “salmon 

poisoning disease” (SPD), patología descrita en 1950 en la especie canina que presenta una 

elevada mortalidad en los casos no tratados (Rikihisa 1991) y que se ha descrito 

principalmente en Estados Unidos (Gorham & Foreyt 2006). Esta especie infecta 

macrófagos e histiocitos intestinales (Rikihisa 1991) y es transmitida por el trematodo N. 

salmincola (Rikihisa 1991). 

 

- E. ruminantium: se trata de una especie monocitotrópica que se ha visto que puede 

infectar de forma natural a la especie canina, habiendo sido detectada por métodos 

moleculares en sangre de perros tanto sanos como enfermos en algunos países africanos. 

Sin embargo, su potencial patógeno en esta especie, así como sus posibles vectores, son 

desconocidos por el momento (Neer & Harrus 2006).  

 

 

 



Revisión bibliográfica 

 

64 

2.3.3. EHRLICHIOSIS MONOCÍTICA CANINA  

 

Generalmente se refiere a la enfermedad causada por E. canis como ehrlichiosis 

monocítica canina (EMC), debido a su tropismo por las células monocíticas, aunque a lo 

largo de la historia ha recibido numerosas denominaciones, como tifus canino, fiebre 

hemorrágica canina, síndrome hemorrágico idiopático, rickettsiosis canina, enfermedad del 

perro rastreador o pancitopenia tropical canina (Woody & Hoskins 1991). 

 

E. canis puede infectar, además de al perro, a otras especies animales, 

especialmente miembros de la familia Canidae, como coyotes, lobos, zorros y chacales 

(Stiles 2000), aunque se ha sugerido que E. canis u otra especie estrechamente relacionada 

podría ser capaz de infectar al gato e, incluso, al hombre (Pérez et al. 1996, Breitschwerdt 

et al. 2002, Aguirre et al. 2004b, Pérez et al. 2006, Ayllón et al. 2009).  

 

El vector de esta bacteria gramnegativa es la garrapata Rhipicephalus sanguineus, 

probablemente la garrapata más ampliamente distribuida en el mundo (Groves et al. 1975), 

aunque experimentalmente también Dermacentor variabilis puede transmitir a E. canis 

(Johnson et al. 1998). R. sanguineus se infecta al ingerir sangre de un animal infectado, de 

forma más probable durante las primeras 2-3 semanas de la infección, ya que en este 

período existe un mayor número de leucocitos con E. canis en la sangre circulante (Woody 

& Hoskins 1991). Posteriormente, la garrapata transmitirá E. canis a otro hospedador al 

alimentarse de éste. El modo de transmisión es transestadial, pero no transovárico, y se ha 

observado que la garrapata puede transmitir la infección al perro susceptible hasta 155 días 

después de haber ingerido al agente (Lewis et al. 1977). 

 

La infección natural en el perro se produce cuando la garrapata infectada se 

alimenta, ingiriendo la sangre y, a la vez, contaminando con sus secreciones salivares el 

punto donde se ha fijado. También se ha descrito la posibilidad de una transmisión 

yatrogénica mediante transfusiones sanguíneas procedentes de perros con EMC (Neer & 

Harrus 2006). Posteriormente, E. canis se replica en las células mononucleares de nódulos 

linfáticos, hígado, bazo y médula ósea (Reardon & Pierce 1981a), en los que penetra por 

endocitosis mediada por receptores proteicos de la superficie celular (Messick & Rikihisa 

1993). En el interior de su célula diana, estos microorganismos inicialmente se desarrollan 

en forma de lo que se denominan “cuerpos elementales”, con un diámetro de 0,5-0,9 µm 

(Nyindo et al. 1971). Dichos cuerpos elementales aumentan de tamaño, se replican por 

fisión binaria y se agrupan, pasando a ser los denominados “cuerpos iniciales”, de 1,4-2 

µm de diámetro, que continúan replicándose y agrupándose y, por tanto, aumentando de 

tamaño, para dar lugar a las “mórulas”, colonias bacterianas rodeadas por una membrana 

vacuolar, que poseen un diámetro mayor a 2 µm y que son denominadas así por su forma 



Revisión bibliográfica 

 

65 

típica (Nyindo et al. 1971). Los microorganismos se liberan de la célula hospedadora por 

lisis celular y exocitosis (Rikihisa 1991).  

 

 

2.3.3.1. Patogenia y cuadro clínico de la EMC 

 

El período de incubación de la EMC puede variar en la infección natural entre 8 y 

20 días (Hibler et al. 1986) tras el que se describen clásicamente tres fases de la 

enfermedad: aguda, subclínica y crónica. Estas fases han sido descritas en las infecciones 

experimentales y, sin embargo, en la infección natural no son fácilmente distinguibles entre 

sí (Woody & Hoskins 1991). 

 

Tras la entrada y replicación en el interior de las células monocíticas de E. canis se 

produce la fase aguda de la enfermedad, que consiste en la multiplicación y diseminación 

por la circulación sanguínea o linfática de las bacterias y que habitualmente dura entre dos 

y cuatro semanas (Huxsoll et al. 1970, Hibler et al. 1986). Esta diseminación de E. canis 

por el organismo le permite distribuirse por aquellos órganos que presentan una población 

numerosa de fagocitos mononucleares, como son el hígado, bazo y nódulos linfáticos, lo 

que da como resultado el desarrollo de una hiperplasia linforreticular y el consiguiente 

aumento de tamaño de estos órganos (Reardon & Pierce 1981a). Pero además de afectar a 

hígado, bazo y nódulos linfáticos, E. canis se disemina por otros órganos, produciendo 

vasculitis e inflamación perivascular en pulmón, riñón y meninges y es posible que se 

desarrolle una coagulación intravascular diseminada (Reardon & Pierce 1981a, Hibler et 

al. 1986). 

 

Los signos clínicos observados durante esta fase son inespecíficos (Harrus et al. 

1999), destacando la aparición de fiebre, apatía, anorexia, pérdida de peso, secreción 

oculo-nasal, palidez de mucosas y, en ocasiones, linfadenomegalia, esplenomegalia y 

edema en extremidades o escroto (Huxsoll et al. 1970, Woody & Hoskins 1991, Sainz 

1996a, Neer & Harrus 2006). Además pueden presentarse signos hemorrágicos, aunque 

éstos son más frecuentes en la fase crónica de la enfermedad (Neer & Harrus 2006). En 

ocasiones pueden presentarse durante esta fase signos oculares, como conjuntivitis, 

opacidad corneal, uveítis anterior, panuveítis, hipema, hemorragias retinianas, 

desprendimiento de retina o glaucoma (Harrus et al. 1998a). También pueden aparecer 

signos respiratorios, entre los que destacan disnea, exudado oculonasal y aumento de la 

intensidad de los sonidos respiratorios, que pueden deberse al desarrollo de una neumonía 

intersticial (Codner et al. 1985). 

 



Revisión bibliográfica 

 

66 

En la mayoría de los animales, la fase aguda se resuelve espontáneamente, 

progresando la enfermedad a la fase subclínica (Codner & Farris-Smith 1986) e, incluso, se 

ha descrito que algunos perros son capaces de eliminar E. canis gracias al desarrollo de una 

respuesta inmunitaria adecuada (Eddlestone et al. 2007).  

 

Durante la fase subclínica el perro únicamente muestra alteraciones biopatológicas, 

entre las que destacan, como veremos más adelante, la trombocitopenia e 

hiperglobulinemia. Clínicamente el animal parece sano, desapareciendo la fiebre y demás 

sintomatología observada en la fase anterior y recuperando el peso perdido (Woody & 

Hoskins 1991). La duración de esta fase puede ser muy variable; así, se ha descrito en 

infecciones experimentales una duración de entre 40 y 120 días para esta fase (Woody & 

Hoskins 1991), mientras que en la infección natural puede durar hasta 5 años (Codner & 

Farris-Smith 1986). Parece que durante esta fase, el bazo es el responsable de albergar a E. 

canis (Neer & Harrus 2006). No se conocen con exactitud los factores que pueden influir 

en la progresión de la enfermedad hacia la fase crónica y parece que aquellos animales que 

son capaces de desarrollar una respuesta inmunitaria adecuada pueden eliminar el agente 

(Woody & Hoskins 1991, Neer & Harrus 2006). 

 

Es muy frecuente que la EMC se diagnostique durante la fase crónica de la 

enfermedad (Cohn 2003). Algunos autores consideran que es más apropiado diferenciar 

una fase crónica leve y una fase crónica grave (Woody & Hoskins 1991). La gravedad de 

esta fase dependerá de varios factores, como la virulencia de la cepa de E. canis, el estado 

inmunitario del perro, su edad, su raza, la existencia de enfermedades concurrentes o el 

estrés (Nyindo et al. 1980, Woody & Hoskins 1991). Como se verá más adelante, se ha 

sugerido que el Pastor Alemán está más predispuesto a padecer una forma de ehrlichiosis 

más grave que otras razas, como el Beagle (Nyindo et al. 1980). 

 

De nuevo en esta fase podemos encontrar signos clínicos inespecíficos, similares a 

los descritos durante la fase aguda, entre los que destacan la aparición de letargia, anorexia 

y pérdida de peso. En la exploración física con frecuencia encontraremos 

linfadenomegalia, fiebre, palidez de mucosas y esplenomegalia (Harrus et al. 1997b, 

Mylonakis et al. 2004). Asimismo, es frecuente el hallazgo de signos hemorrágicos, como 

epistaxis, melena, petequias y/o equimosis, hipema, hemorragias retinianas y hematuria 

(Harrus et al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 1999, Mylonakis et al. 2004). En ocasiones 

pueden observarse alteraciones oftalmológicas, principalmente uveítis anterior y diferentes 

cambios retinianos, que pueden conducir, incluso, a la ceguera del animal (Frank & 

Breitschwerdt 1999, Neer & Harrus 2006). Probablemente debido a hemorragias, vasculitis 

o infiltración plasmocitaria perivascular en las meninges (Hibler et al.1986) pueden 

aparecer signos neurológicos, como ataxia, paraparesia, déficit en la propiocepción o 



Revisión bibliográfica 

 

67 

nistagmo (Woody & Hoskins 1991, Frank & Breitschwerdt 1999). Algunos perros con 

EMC pueden presentar signos locomotores debidos a polimiositis o poliartritis, cuya causa 

puede ser el desarrollo de hemartrosis o el depósito de inmunocomplejos. Sin embargo, la 

aparición de esta sintomatología se asocia en la mayoría de los casos con especies 

granulocitotrópicas, como E. ewingii o A. phagocytophilum (Cowell et al. 1988, Neer & 

Harrus 2006). Además, se ha descrito la posibilidad de aparición de síntomas respiratorios, 

con exudado nasal, disnea y tos, como consecuencia de una neumonía intersticial (Reardon 

& Pierce 1981a), y síntomas reproductivos, con esterilidad, muerte neonatal y abortos 

(Woody & Hoskins 1991). En la fase crónica grave de la EMC pueden aparecer signos 

clínicos asociados con el desarrollo de glomerulonefritis y/o hipoplasia o aplasia de médula 

ósea, que se asocian con un mal pronóstico de la enfermedad (Frank & Breitschwerdt 

1999, Cohn 2003).  

 

En las infecciones naturales por E. canis el hecho de que la sintomatología pueda 

ser similar en la fase aguda y en la fase crónica hace que no siempre sea posible 

diferenciarlas clínicamente. 

 

 

2.3.3.2. Hallazgos laboratoriales en la EMC 

 

Como se ha comentado, la infección por E. canis en el perro puede cursar con una 

sintomatología muy poco específica o, incluso, hacer que los animales permanezcan 

asintomáticos durante largos períodos de tiempo, por lo que no es infrecuente que sean los 

hallazgos de la analítica sanguínea los que nos hagan sospechar de esta enfermedad. 

 

Entre los cambios en la hematología que con mayor frecuencia se describen en la 

EMC destaca la trombocitopenia, que puede aparecer tan pronto como a los 15-20 días tras 

la infección y que puede mantenerse durante todas las fases de la enfermedad (Huxsoll et 

al. 1970, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 1997b, Mylonakis et al. 2004, Frank & 

Breitschwerdt 1999, Neer & Harrus 2006,). Sin embargo, es importante destacar que es 

posible encontrar animales con recuentos plaquetarios normales, por lo que no debe 

descartarse la ehrlichiosis por la ausencia de trombocitopenia (Neer & Harrus 2006). 

Además de un descenso en el número de plaquetas, pueden aparecer desórdenes de la 

funcionalidad plaquetaria, principalmente debidas a alteraciones de la agregación y 

migración en sangre (Kakoma et al. 1978). Más adelante, en esta revisión bibliográfica, se 

describirán con más detalle los mecanismos inmunopatogénicos involucrados en estas 

alteraciones plaquetarias. 

 



Revisión bibliográfica 

 

68 

También es frecuente observar en el curso de la EMC la existencia de anemia 

(Harrus et al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 1999), que puede ser más o menos intensa y 

que en la fase aguda de la enfermedad suele ser regenerativa debido al aumento de la 

destrucción de hematíes por mecanismos inmunológicos (Reardon & Pierce 1981a). En la 

fase crónica de la EMC la anemia observada es no regenerativa, debido a la destrucción 

continuada de eritrocitos, a la pérdida crónica de sangre y a la existencia de una hipoplasia 

o aplasia de médula ósea (Woody & Hoskins 1991). 

 

La infección por E. canis puede producir tanto leucopenia como leucocitosis, 

aunque esta última es menos frecuente. Se ha sugerido que en las fases iniciales el 

secuestro leucocitario por procesos inmunológicos puede dar lugar a la aparición de 

leucopenia (Reardon & Pierce 1981a), mientras que en la fase crónica podría deberse a la 

aplasia medular mencionada (Neer & Harrus 2006). Dentro de la serie blanca pueden 

encontrarse diferentes alteraciones, como neutropenia, linfocitosis o linfopenia y 

monocitosis, aunque estos hallazgos pueden ser muy variables (Mylonakis et al. 2004). 

 

La hiperproteinemia por hiperglobulinemia parece ser el hallazgo más frecuente en 

la bioquímica sanguínea en los perros con EMC (Harrus et al. 1997b, Frank & 

Breitschwerdt 1999, Neer et al. 2002, Mylonakis et al. 2004, Harrus & Waner 2010). Esta 

hiperglobulinemia suele deberse a una gammapatía policlonal, pero también se ha descrito 

la presentación de gammapatías monoclonales (Breitschwerdt et al. 1987, Neer et al. 

2002). A menudo se asocia esta hiperglobulinemia con la presencia de hipoalbuminemia, 

que puede deberse, entre otros, a la existencia de proteinuria, pérdida de peso, 

malnutrición, hepatopatía o a un intento de compensación de la hiperproteinemia (Hibler et 

al. 1986, Woody & Hoskins 1991). También se han descrito en la bioquímica sanguínea 

elevaciones de algunas enzimas hepáticas (Harrus et al. 1997b, Mylonakis et al. 2004), así 

como de la creatinina. Este aumento de la creatinina podría tener un origen prerrenal (por 

deshidratación) o renal (por glomerulonefritis o plasmocitosis intersticial renal) 

(Breitschwerdt et al. 1987). 

 

 

2.3.3.3. Diagnóstico de la EMC 

 

Los signos clínicos y las alteraciones analíticas observadas pueden sugerir la 

existencia de una EMC, pero, debido a la inespecificidad mencionada, no son 

concluyentes, por lo que es necesario recurrir a pruebas analíticas específicas que 

determinen de forma directa o indirecta la infección por E. canis. 

 



Revisión bibliográfica 

 

69 

Los métodos directos de diagnóstico de EMC se basan en la detección u 

observación del agente etiológico a partir de muestras obtenidas del animal sospechoso. La 

observación de mórulas de Ehrlichia spp. en el interior de los leucocitos a partir de frotis 

sanguíneos o aspirados de tejidos (como bazo, médula ósea, pulmón, líquido 

cefalorraquídeo, líquido sinovial o nódulo linfático) permite un diagnóstico definitivo de la 

enfermedad (Neer & Harrus 2006). Sin embargo, y a pesar del desarrollo de técnicas 

destinadas a incrementar la posibilidad de identificar mórulas a partir de estas muestras 

(Huxsoll et al. 1970, Mylonakis et al. 2003), esta técnica resulta muy poco sensible, ya que 

las mórulas aparecen con mayor frecuencia en la fase aguda de la enfermedad y de forma 

transitoria, gracias a la presencia de un mayor número de leucocitos infectados en la sangre 

en esta fase (Hibler et al. 1986, Woody & Hoskins 1991). Se ha estimado que sólo se 

observan mórulas en un 4% de los frotis (Woody & Hoskins 1991). A esto hay que añadir 

el hecho de que es necesario personal entrenado y cualificado para la detección de las 

mórulas sin confundirlas con artefactos, tinciones mal realizadas u otras inclusiones 

(Mylonakis et al. 2003). 

 

Otro posible método de diagnóstico directo de la infección por E. canis sería el 

cultivo de este agente a partir de muestras del animal sospechoso en líneas celulares 

susceptibles de ser infectadas por este agente, como la línea celular macrofágica canina 

DH82. Sin embargo, este método es laborioso y requiere mucho tiempo, por lo que queda 

prácticamente relegado a labores de investigación (Harrus & Waner 2010). 

 

Las técnicas moleculares, como la reacción en cadena de la polimerasa o PCR y la 

posterior secuenciación del material amplificado, son métodos sensibles y específicos para 

la detección y caracterización de estas infecciones (Harrus & Waner 2010). Se ha descrito 

la detección de DNA de E. canis a los 4-10 días post-infección (Iqbal & Rikihisa 1994b), 

en ocasiones antes de que se puedan detectar anticuerpos en sangre. Esta técnica puede 

ayudar, además, a confirmar la eliminación del microorganismo tras el tratamiento, ya que 

detecta el ADN del mismo y, por tanto, la existencia de infección activa. Esto permite 

diferenciar entre aquellos perros que han sido tratados pero permanecen infectados de 

aquellos que tras el tratamiento han eliminado a E. canis pero mantienen títulos de 

anticuerpos elevados (Harrus et al. 1998b). 

 

Sin embargo, esta técnica posee algunos inconvenientes que deben ser tenidos en 

cuenta a la hora de su empleo como método de diagnóstico, entre los que se encuentran su 

elevado coste, la falta de estandarización entre laboratorios o la aparición de resultados 

falsos positivos o falsos negativos. Esto hace que sea recomendable emplear la PCR 

siempre en combinación con la serología para el diagnóstico de la EMC (Neer et al. 2002). 

 



Revisión bibliográfica 

 

70 

Una alternativa a los métodos diagnósticos que permiten una detección directa de 

E. canis son los métodos indirectos, que permiten determinar la presencia del agente 

infeccioso mediante la valoración de la respuesta inmunitaria desarrollada por el 

hospedador. En general, con estos métodos indirectos se valora la respuesta inmunitaria de 

tipo humoral que se desencadena. De hecho, la detección de los anticuerpos generados 

mediante técnicas serológicas es una de los métodos más comúnmente empleados para el 

diagnóstico de la EMC (Harrus & Waner 2010), pudiendo emplearse tanto la 

inmunofluoresecencia indirecta (IFI) como el Enzyme-linked immunosorbent assay 

(ELISA) o el inmunoblot (Ristic et al. 1972, Waner et al. 2000b, Waner et al. 2001, Harrus 

& Waner 2010). 

 

La IFI para la detección de anticuerpos IgG anti-E. canis fue desarrollada en 1972 

por Ristic y colaboradores, presenta una alta sensibilidad y especificidad y es considerada 

la técnica serológica “gold-standard” o de referencia para el diagnóstico de la EMC (Ristic 

et al. 1972, Waner et al. 2001, Neer et al. 2002, Harrus & Waner 2010). Las IgM no se 

consideran un indicador fiable de la exposición a E. canis, debido a la elevada variabilidad 

de los anticuerpos IgM en esta infección (McBride et al. 2003). Para realizarla, por lo 

general se emplean como antígeno cultivos celulares infectados por E. canis, que se fijan a 

un porta especial para inmunofluorescencia al que se enfrentarán diluciones seriadas de la 

muestra sérica del perro sospechoso (Ristic et al. 1972). 

 

Al emplear esta técnica como método diagnóstico se debe tener en cuenta que un 

resultado serológico positivo en una muestra de un perro que vive en una zona endémica 

de EMC sólo confirma la exposición al patógeno, pero no confirma que los síntomas 

observados en el animal sean necesariamente causados por E. canis, ya que los anticuerpos 

pueden mantenerse elevados incluso después de haber eliminado la infección o durante la 

fase subclínica (Neer & Harrus 2006). No obstante, un título de anticuerpos positivo junto 

con signos clínicos y/o alteraciones laboratoriales compatibles con EMC es considerado 

diagnóstico (Neer et al. 2002). De la misma forma, un resultado negativo no siempre 

permite descartar la infección por E. canis, ya que aquellos animales que se encuentran en 

una fase muy avanzada y grave de la enfermedad o los animales moribundos pueden ser 

incapaces de desarrollar anticuerpos (Waner et al. 2001). Además, esta técnica permite 

detectar anticuerpos de forma tan temprana como a los 3 días postinfección, pero muchos 

perros no serán seropositivos hasta 28 días después de infectarse (Iqbal et al. 1994a, Neer 

& Harrus 2006). Por lo tanto, en los casos clínicamente sospechosos de EMC que dan un 

resultado serológico negativo se recomienda repetir la prueba a las 2-3 semanas en busca 

de seroconversión (Neer et al. 2002, Neer & Harrus 2006, Harrus, Waner 2010). 

 



Revisión bibliográfica 

 

71 

El diagnóstico serológico de la EMC se complica por la existencia de reacciones 

cruzadas entre E. canis y otras especies de la familia Anaplasmataceae (Neer & Harrus 

2006, Harrus, Waner 2010). E. canis no presenta reacción cruzada con A. platys, pero sí 

con E. chaffeensis, E. ruminatium, E. ewingii, N. helminthoeca, N. risticii y, en menor 

medida que con las anteriores, con A. phagocytophilum (Waner et al. 2001, Neer et al. 

2002, Neer & Harrus 2006, Harrus & Waner 2010). Ante un resultado serológico positivo 

se debería valorar la posible exposición a estas especies bacterianas teniendo en cuenta el 

área geográfica de residencia del perro y su historial de viajes, ya que de las especies 

mencionadas, solamente se ha descrito la presencia de E. canis, A. phagocytophilum y A. 

platys en nuestro país (Sainz et al. 1999, Sainz et al. 2000a, Neer et al. 2002, Neer & 

Harrus 2006, Amusategui et al. 2008, Harrus & Waner 2010). En cualquier caso, desde un 

punto de vista clínico, estos agentes se comportan de modo parecido y su abordaje clínico 

y terapéutico es similar. 

 

Además de la IFI, se han desarrollado técnicas ELISA para el diagnóstico de la 

EMC que han permitido poner al alcance de los clínicos veterinarios métodos diagnósticos 

que pueden realizarse sin necesidad de equipo especial ni personal cualificado (Waner et 

al. 2000b, Harrus & Waner 2010). El ELISA aplicado al diagnóstico de la infección por E. 

canis sirve para la detección de anticuerpos IgG frente a este agente (Waner et al. 2000b). 

Algunos autores consideran que existe una baja correlación entre los resultados obtenidos 

entre los ELISAs comercialmente disponibles, el Western blot y la IFI a títulos de 

anticuerpos bajos, lo que debe ser tenido en cuenta a la hora de su utilización (O'Connor et 

al. 2006). 

 

El inmunoblot o Western immunoblot es una técnica serológica más específica que 

puede servir de ayuda a la hora de caracterizar el agente implicado en la infección, sobre 

todo si existen dudas derivadas de las posibles reacciones cruzadas ya descritas (Rikihisa et 

al.1994, Harrus & Waner 2010).  

 

 

2.3.3.4. Tratamiento de la EMC 

 

 Incluye, por una parte, un tratamiento farmacológico específico que permita 

eliminar al agente causal de la enfermedad y, por otra parte, una terapia de apoyo 

sintomático que favorezca la recuperación del animal afectado (Neer & Harrus 2006). 

Entre los fármacos eficaces frente a estos agentes destacan las tetraciclinas, el dipropionato 

de imidocarb, la amicarbalida y el cloranfenicol (Neer & Harrus 2006). Se recomienda 

comenzar el tratamiento lo más pronto posible, ya que muchas de las complicaciones o 



Revisión bibliográfica 

 

72 

alteraciones que se producen en el curso de la fase crónica de la EMC hacen que sea más 

complicada la recuperación del animal (Woody & Hoskins 1991, Mylonakis et al. 2004). 

 

 Dentro del grupo de las tetraciclinas, la tetraciclina y la oxitetraciclina fueron 

empleadas para el tratamiento de las ehrlichiosis y aún se describe una buena actividad 

antirickettsial para estas sustancias. Sin embargo, las tetraciclinas semisintéticas 

doxiciclina y minociclina son en la actualidad las drogas de elección en el tratamiento de la 

EMC (Breitschwerdt et al. 1998a, Sainz et al. 2000b, Neer et al. 2002, Neer & Harrus 

2006) debido a su mayor liposolubilidad, excelente absorción y una menor nefrotoxicidad. 

El hecho de que posean una mayor liposolubilidad hace que su penetración en las células 

sea mayor, lo que favorece que estas sustancias sean más eficaces en la lucha frente a E. 

canis, bacteria intracelular obligada. La administración de estas sustancias se realiza por 

vía oral, aunque la doxiciclina puede ser administrada también por vía intravenosa. Más 

adelante, en esta revisión bibliográfica, se abordarán de forma más extensa las 

características y propiedades de este grupo de fármacos y, más concretamente, de la 

doxiciclina.  

 

 La duración del tratamiento parece ser más importante que la dosis o la frecuencia 

de administración de las tetraciclinas (Woody & Hoskins 1991). Sin embargo, por el 

momento no se ha fijado una duración del tratamiento que garantice la eliminación 

completa del agente, aunque se ha recomendado la administración de doxiciclina a dosis de 

10 mg/kg cada 24 horas durante 28 días (Neer et al. 2002). Tratamientos de menor 

duración han resultado en algunas ocasiones insuficientes en la eliminación de E. canis 

(Iqbal & Rikihisa 1994b, Schaefer et al. 2007), mientras que el empleo de la doxiciclina 

durante los 28 días recomendados ha mostrado ser eficaz en la eliminación de este agente 

en diferentes estudios (Breitschwerdt et al. 1998b, Eddlestone et al. 2007). No obstante, 

Harrus y colaboradores en 1998 describieron la persistencia de E. canis tras un tratamiento 

con doxiciclina de 6 semanas de duración en un perro que se encontraba en la fase 

subclínica de la EMC (Harrus et al. 1998b). Generalmente, tras 24-48 horas del comienzo 

de la administración de doxiciclina se observa una marcada mejoría clínica en los perros 

que se encontraban en la fase aguda o en la fase crónica leve de la enfermedad (Neer & 

Harrus 2006). 

 

Los principales efectos adversos de la administración de tetraciclinas son 

alteraciones gastrointesinales, pudiendo causar vómitos tras su administración por vía oral. 

Asimismo estas sustancias pueden causar decoloración de los dientes en desarrollo y puede 

afectar a la funcionalidad renal y/o hepática. Sin embargo, la doxiciclina es el miembro 

más seguro de las tetraciclinas, ya que se excreta en forma de conjugado inactivo con las 

heces, con lo que disminuye sus efectos negativos sobre el tracto intestinal y puede ser 



Revisión bibliográfica 

 

73 

administrada en animales con insuficiencia renal. Además, si se administra con alimento 

pueden evitarse en la mayoría de los casos las nauseas y los vómitos (Riviere & Spoo 

2001).  

 

 El dipropionato de imidocarb puede ser una alternativa terapéutica eficaz en el 

tratamiento de la EMC. Su administración se lleva a cabo por vía intramuscular o 

subcutánea, a dosis de 5-7 mg/kg en dos inyecciones separadas por 15 días (Matthewman 

et al. 1994, Sainz et al. 2000b). Se trata de un fármaco de carácter ácido, por lo que puede 

producir dolor en el punto de inoculación y, en ocasiones, provoca efectos anticolinesterasa 

como salivación, disnea, taquicardia, temblores o diarrea (Woody & Hoskins 1991), que 

pueden revertirse mediante el empleo de atropina o glicopirrolato (Cohn 2003). Un estudio 

publicado en 1980 muestra un mayor efecto terapeútico del dipropionato de imididocarb en 

comparación con la tetraciclina administrada durante dos semanas (Price & Dolan 1980), 

pero estudios posteriores empleando doxiciclina y dipropionato de imidocarb de forma 

conjunta han mostrado que no existen diferencias significativas en las respuestas clínicas 

entre los perros tratados con ambas drogas o con una sola de ellas por separado, 

retrasándose, sin embargo, la recuperación a los valores normales de los recuentos 

plaquetarios y proteinogramas en los perros a los que se les administró dipropionato de 

imidocarb (Sainz et al. 2000b). En la misma línea, recientemente se ha constatado que el 

dipropionato de imidocarb no es capaz de eliminar E. canis en perros experimentalmente 

infectados por este agente (Eddlestone et al. 2006). 

 

 La amicarbalida es una diamidina aromática empleada en el tratamiento de las 

babesiosis que ha sido utilizada también en el tratamiento de las ehrlichiosis, aunque los 

estudios llevados a cabo sobre su eficacia en estas enfermedades son escasos. Se emplea a 

dosis de 5-6 mg/kg, por vía intramuscular en dos inyecciones separadas por un intervalo de 

15 días (Neer & Harrus 2006). 

 

 El cloranfenicol es otro de los fármacos que pueden ser empleados en el tratamiento 

de la EMC y ha sido recomendado para el tratamiento de cachorros menores de 5 meses 

para evitar la decoloración de los dientes en erupción que causan los fármacos de la familia 

de las tetraciclinas (Neer & Harrus 2006). Sin embargo, debido a los riesgos sobre la salud 

pública derivados del uso del cloranfenicol y a que posee un efecto depresor de la médula 

ósea, a lo que se une el hecho de que existen mejores alternativas (principalmente, 

doxiciclina y dipropionato de imidocarb), este fármaco no suele emplearse en la práctica 

clínica para el tratamiento de la EMC (Neer & Harrus 2006).  

 

 Otra alternativa descrita para el tratamiento de la EMC la constituyen las 

quinolonas, que poseen cierta actividad antirickettsial. Entre ellas, la enrofloxacina se ha 



Revisión bibliográfica 

 

74 

visto que es eficaz en el tratamiento de la infección por R. rickettsii en perros, por lo que 

algunos autores sugieren que podría ser eficaz en el tratamiento de la infección causada por 

E. canis (Greene & Breitschwerdt 2006). Sin embargo, en la infección experimental parece 

que no es capaz de eliminar a este agente (Neer et al. 1999). 

 

 Aunque no existen estudios sobre su eficacia, se han descrito otras posibilidades en 

el tratamiento de la EMC, como son: eritromicina, macrólidos, rifampicina, penicilina y 

aminoglicósidos, entre otros (Neer & Harrus 2006). 

 

 Como terapia de apoyo, en ocasiones puede ser necesario emplear fluidoterapia o, 

incluso, llevar a cabo transfusiones de sangre completa (en casos de anemia o 

pancitopenia) o de plasma rico en plaquetas (en casos de trombocitopenia marcada) 

(Huxsoll et al. 1970, Neer & Harrus 2006). También se ha descrito el empleo de 

glucocorticoides durante 2-7 días para atenuar los efectos inmunomediados relacionados 

con la infección, como son la trombocitopenia, la poliartritis, la vasculitis y meningitis 

(Frank & Breitschwerdt 1999, Neer, Harrus 2006). 

 

 Tras el tratamiento de los perros diagnosticados de EMC que se encuentran en la 

fase aguda, subclínica o crónica leve, la respuesta clínica suele ser muy buena y se 

evidencia a las 24-48 horas, mejorando el apetito, actividad del animal y demás 

síntomatología (Frank & Breitschwerdt 1999, Sainz et al. 2000b, Neer & Harrus 2006), 

aunque en ocasiones la respuesta puede ser más lenta (Frank & Breitschwerdt 1999). La 

normalización de las alteraciones de la analítica sanguínea suele ser más progresiva. La 

resolución de la trombocitopenia se suele producir en un período de 7 a 10 días tras el 

inicio del tratamiento y es recomendable monitorizar el valor plaquetario para evaluar la 

eficacia de la terapia instaurada (Neer & Harrus 2006). En cuanto a las alteraciones del 

proteinograma, los valores de la albúmina y de las globulinas se suelen normalizar en 3-9 

meses, aunque pueden tardar hasta 12 meses en hacerlo (Neer & Harrus 2006). El título de 

anticuerpos específicos frente a Ehrlichia spp. disminuye progresivamente tras el 

tratamiento eficaz y generalmente se negativiza a los 6-9 meses (Neer et al. 2002), aunque 

algunos animales, a pesar de mejorar clínicamente, mantienen títulos elevados durante 

años, lo que puede indicar la permanencia del agente en el organismo, una producción de 

anticuerpos persistente, una nueva infección por E. canis o, simplemente, una respuesta 

inmunitaria residual indicativa de una infección pasada (Woody & Hoskins 1991, Frank & 

Breitschwerdt 1999, Neer et al. 2002). Además, se ha observado que cuando el título de 

anticuerpos de partida al comenzar el tratamiento es muy elevado, el tiempo necesario para 

su normalización o negativización es mayor que cuando se parte de un título bajo (Greene 

1995, Sainz et al. 2000b). En ocasiones, el hecho de que los anticuerpos frente a E. canis 

permanezcan durante períodos de tiempo tan prolongados hace que sea difícil establecer si 



Revisión bibliográfica 

 

75 

el agente ha sido realmente eliminado del hospedador, por lo que puede ser aconsejable la 

realización de la PCR en combinación con la serología para garantizar que el tratamiento 

ha sido eficaz (Neer et al. 2002). Sin embargo, es importante tener en cuenta que esta 

técnica no va a distinguir entre los microorganismos vivos y los muertos y que si E. canis 

permanece secuestrado en algún órgano, como el bazo, el resultado de la PCR a partir de 

una muestra de sangre periférica será negativo, a pesar de la persistencia del agente (Neer 

et al. 2002). 

 

Por otra parte, si un animal no muestra mejoría clínica y/o resolución de las 

alteraciones analíticas tras 1-2 semanas del comienzo del tratamiento, debe considerarse la 

posibilidad de que existan otras patologías concurrentes o que la causa de la sintomatología 

no sea la infección por E. canis (Cohn 2003, Neer, Harrus 2006). 

 

En general se considera que el pronóstico de la EMC tras el tratamiento será 

favorable en las fases aguda, subclínica o crónica leve (Woody & Hoskins 1991), mientras 

que en la fase crónica grave, que puede asociarse con el desarrollo de insuficiencia renal o 

aplasia de médula ósea, entre otros desórdenes, será desfavorable (Woody & Hoskins 

1991, Frank, Breitschwerdt 1999, Mylonakis et al. 2004). 

 

 

2.3.3.5. Prevención de la EMC 

 

Desafortunadamente no existe por el momento una vacuna que permita proteger a 

los perros frente a la infección por E. canis (Neer & Harrus 2006). Por lo tanto, la 

prevención de esta enfermedad se centra en el control de los vectores. A ello debe unirse el 

diagnóstico precoz de los animales enfermos y la aplicación de un tratamiento 

farmacológico adecuado (Neer & Harrus 2006).  

 

Se ha descrito la posibilidad de administrar doxiciclina de modo preventivo a perros 

que puedan estar expuestos a la EMC (Davoust et al. 2005), pero este empleo de las 

tetraciclinas puede llevar al desarrollo de resistencias microbianas (Neer & Harrus 2006). 

 

En las áreas endémicas debe mantenerse un control estricto de las garrapatas, 

principalmente mediante el empleo de antiparasitarios externos, entre los que destacan por 

su eficacia, entre otros, los collares de amitraz, el fipronil y la asociación de imidacloprid 

con permetrina (10% y 50%, respectivamente) (Davoust et al. 2003, Estrada-Peña & Reme 

2005, Otranto et al. 2008, Otranto et al. 2010). Podrían emplearse, asimismo, 

antiparasitarios ambientales (Woody & Hoskins 1991). 

 



Revisión bibliográfica 

 

76 

Por otra parte, debe evitarse el acceso de los perros a las zonas infestadas por 

garrapatas e inspeccionar al animal para detectarlas y eliminarlas, sobre todo después de 

sus paseos, disminuyendo así la probabilidad de transmisión de E. canis y otros agentes 

(Neer et al. 2002). 

 

Todos los animales que sean introducidos en una colectividad deberían ser 

analizados serológicamente para la detección de estas infecciones, protegidos frente a las 

garrapatas y aislados hasta que se tenga los resultados de las analíticas, para evitar de este 

modo introducir portadores en la colectividad (Woody & Hoskins 1991). 

 

Debido a la posibilidad de transmisión yatrogénica de la EMC mediante 

transfusiones sanguíneas, sería recomendable descartar la infección de los perros donantes 

(Woody & Hoskins 1991).  

 

 

2.3.3.6. La EMC en España 

 

La primera descripción de EMC en nuestro país data de 1988 (Font et al. 1988). 

Desde entonces se han descrito casos en casi todas las comunidades autónomas, con 

valores de seroprevalencia que varían entre un 1,98% y un 66,7% en función de diferentes 

variables, como las regiones estudiadas y las medidas preventivas adoptadas frente a las 

garrapatas (Sainz et al. 1995, Sainz et al. 1996b, Sainz et al. 1998, Solano-Gallego et al. 

2006, Amusategui et al. 2008, Couto et al. 2010), habiéndose señalado una prevalencia en 

Madrid de un 6,5% (Sainz et al. 1998). 

 

En el año 2004 Aguirre y colaboradores describieron el primer aislamiento y 

cultivo de E. canis en España a partir de la sangre de un perro con infección natural, con lo 

que se identificó genéticamente por primera vez este agente en nuestro país (Aguirre et al. 

2004a). 

 

La infección por E. canis parece encontrarse extendida por la práctica totalidad del 

territorio nacional, probablemente debido a que su vector, la garrapata R. sanguineus, es la 

más ubicua y frecuente en perros de nuestro país (Estrada-Peña 1995). 

 

Se ha sugerido que un mayor contacto con las garrapatas en las áreas rurales puede 

ser la causa de una mayor prevalencia de la presentación de esta infección en los perros de 

estas zonas (Sainz et al. 1995). De forma estrechamente relacionada, se ha visto que los 

perros de caza con infestación masiva de garrapatas tienen una mayor prevalencia de 

infección que perros con un control profiláctico exhaustivo frente a las mismas (Sainz et al. 



Revisión bibliográfica 

 

77 

1995) y que los animales procedentes de perreras se encuentran más expuestos a la 

ehrlichiosis que los atendidos en clínicas particulares (Amusategui et al. 2008).  

 

 

2.3.3.7. Inmunopatogenia y respuesta inmunitaria en la EMC 

 

Como se ha descrito previamente, la EMC es una enfermedad causada por E. canis, 

bacteria gramnegativa intracelular obligada que es capaz de inducir en el perro una 

enfermedad potencialmente mortal (Harrus et al. 1999).  

 

A pesar de que la primera descripción de ehrlichiosis canina se remonta a 1935 

(Donatien & Lestoquard 1935), hoy en día todavía no han sido bien definidos ni los 

mecanismos inmunitarios protectores desarrollados por el hospedador ni la patogenia de la 

enfermedad en la infección por E. canis (Mavromatis et al. 2006, Unver et al. 2006). Sin 

embargo, los ensayos in vitro y el desarrollo de modelos murinos in vivo empleando otras 

especies de Ehrlichia altamente relacionadas, así como los estudios llevados a cabo en 

infecciones naturales por Ehrlichia spp. en el hombre y otros animales, han permitido 

progresar significativamente en la comprensión actual de los mecanismos de la inmunidad 

e inmunopatogenia de la ehrlichiosis (Feng & Walker 2004, Walker et al. 2004, Chapes & 

Ganta 2008). 

 

A continuación se revisarán los conocimientos actuales referentes a los aspectos 

más significativos de la evasión y respuesta inmunitaria en las infecciones ehrlichiales, así 

como de la inmunopatogenia de estas enfermedades.  

 
Evasión inmunitaria  

 

La capacidad de supervivencia y patogenicidad de cualquier microorganismo en el 

hospedador va a depender de forma directa de su habilidad para evitar o resistir los 

mecanismos efectores de la inmunidad (Abbas et al. 2008f). Las bacterias intracelulares 

obligadas, entre ellas las pertenecientes al género Ehrlichia, han desarrollado diferentes 

estrategias que les permiten asegurar no sólo su supervivencia, sino también su capacidad 

de replicación en el interior de los fagocitos (Abbas et al. 2008f). Generalmente esta 

supervivencia en el interior de las células del hospedador es considerada por sí misma 

como uno de los principales mecanismos empleados en la evasión inmunitaria, ya que estas 

bacterias encuentran de este modo un lugar inaccesible para los anticuerpos circulantes, 

por lo que su erradicación requerirá la participación de la inmunidad celular (Abbas et al. 

2008f). Sin embargo, esta estrategia evasiva ha llevado a la necesidad del desarrollo por 



Revisión bibliográfica 

 

78 

parte de Ehrlichia spp. de otra serie de mecanismos para eludir o inhibir las respuestas 

defensivas desencadenadas en los fagocitos, potentes células efectoras de la inmunidad 

innata (Barnewall et al. 1997, Zhang et al. 2004). Por lo tanto, la interacción entre 

Ehrlichia spp. y las células del hospedador resulta ser mucho más compleja que la simple 

satisfacción de las necesidades metabólicas de la bacteria (Zhang et al. 2004), como 

veremos a continuación. 

 

Diversos estudios llevados a cabo en los últimos años han mostrado efectos de los 

agentes rickettsiales sobre el sistema inmunitario innato del hospedador que les permiten 

evadir las respuestas defensivas (Heeckeren et al. 1993, Lee & Rikihisa 1996, Barnewall et 

al. 1997, van Vachiery et al. 1998, Reddy & Streck 1999, Mott et al. 1999, Mott & 

Rikihisa 2000, Harrus et al. 2003, Zhang et al. 2004, Lin & Rikihisa 2004). Así, se ha 

observado que E. chaffeensis, especie ehrlichial con tropismo por los monocitos-

macrófagos y responsable de la ehrlichiosis monocítica humana (Dawson et al. 1991), es 

capaz de afectar a las respuestas defensivas tempranas que se desarrollan en el hospedador 

al actuar sobre los receptores patogénicos innatos presentes en las células del sistema 

mononuclear fagocitario y en las vías de señalización que son activadas tras la 

estimulación de dichos receptores (Lin & Rikihisa 2004). Estos hallazgos son el resultado 

de los estudios experimentales desarrollados por Lin y Rikihisa en una línea celular 

monocítica humana infectada por E. chaffeensis  que mostraron una disminución en la 

expresión de ciertos PRRs, en concreto TLR-2, TLR-4 y CD14, así como de varios 

factores de transcripción, como PU.1 y NF-κB, probablemente a través de su inhibición de 

la ruta de transducción de señales MAPK (mitogen-activated protein kinases) (Lin & 

Rikihisa 2004). Estos resultados sugieren un nuevo mecanismo de evasión inmunitaria a 

través del cual E. chaffeensis es capaz de sobrevivir en el interior de las células del 

hospedador mediante la inhibición de ciertas vías de señalización responsables de la 

activación de funciones bactericidas asociadas a la estimulación de los PRRs de los 

monocitos humanos (Lin & Rikihisa 2004). 

 

Por otra parte, las especies de la familia Anaplasmataceae han desarrollado otra 

estrategia que les permite impedir o, al menos, dificultar el reconocimiento inmunitario 

innato, al actuar sobre su expresión de dos de los PAMP de mayor importancia en la 

activación de diversos PRRs: a nivel genómico estas bacterias han eliminado todos los 

genes necesarios para la biosíntesis del LPS y muchos de los genes necesarios para la 

biosíntesis de peptidoglicano (Lin & Rikihisa 2003, Mavromatis et al. 2006). 

 

Generalmente los monocitos y los macrófagos son capaces de destruir a los 

microorganismos invasores mediante la fusión de los endosomas que contienen las 

bacterias con ciertos gránulos que contienen péptidos antimicrobianos y enzimas 



Revisión bibliográfica 

 

79 

hidrolíticas (Abbas et al. 2008g). Sin embargo, la supervivencia en el interior del fagocito 

de ciertas bacterias intracelulares, entre las que se encuentran E. chaffeensis y A. 

phagocytophilum, va a depender precisamente de su habilidad para inhibir la fusión del 

fagosoma con los lisosomas (Barnewall et al. 1997, Mott et al. 1999, Zhang et al. 2004, 

Abbas et al. 2008f, Tizard 2009a). Así, se ha observado, por ejemplo, que, tras la ingestión 

por el macrófago, E. chaffeensis evita la maduración del endosoma donde reside, 

impidiendo la expresión de marcadores lisosomales en su superficie y, por tanto, evitando 

su destrucción por las enzimas contenidas en dichos lisosomas (Mott et al. 1999). 

 

Otro de los mecanismos más comúnmente empleados por los macrófagos y 

neutrófilos para la destrucción de los microorganismos es la generación de especies 

reactivas de oxígeno (Tizard 2009q), frente a las que E. chaffeensis y A. phagocytophilum 

son muy sensibles (Barnewall & Rikihisa 1994). Por lo tanto, estas bacterias han precisado 

desarrollar mecanismos que eviten la generación de estas especies reactivas de oxígeno, lo 

que han logrado mediante la inhibición de la actividad de la NADPH-oxidasa, principal 

sistema enzimático responsable de la generación de estas especies reactivas (Mott & 

Rikihisa 2000). 

 

La infección por Ehrlichia spp. es capaz de actuar a nivel transcripcional sobre un 

amplio rango de genes del hospedador, lo que, por una parte, favorece la evasión de las 

respuestas inmunitarias de forma directa, al actuar sobre la síntesis de citocinas o la 

inhibición de la apoptosis de la célula infectada, y, por otra parte, induce cambios en la 

transcripción de genes que codifican proteínas implicadas en procesos celulares como la 

biosíntesis y metabolismo, la expresión de canales de transporte iónico y la regulación de 

la diferenciación celular (Lee & Rikihisa 1996, Zhang et al. 2004). Así, se ha observado 

que la infección por E. chaffeensis en una línea monocítica humana altera 

significativamente los niveles transcripcionales del 4,5% de los genes del hospedador 

(Zhang et al. 2004). Entre los efectos que se desencadenan en la célula hospedadora cabe 

destacar el hecho de que se impide la estimulación de la transcripción de ciertas citocinas, 

como son IL-12, IL-15 e IL-18, implicadas en la regulación de las respuestas inmunitarias 

innatas tempranas y las respuestas inmunitarias mediadas por células que se desarrollan 

frente a microorganismos intracelulares. Esta represión puede ayudar a E. chaffeensis a 

evadir las respuestas inmunitarias tanto innatas como adaptativas, ya que la secreción de 

dichas citocinas daría como resultado la estimulación de las células NK y Th1 para la 

producción de IFN-γ, que activaría a su vez a los macrófagos para destruir a las bacterias 

fagocitadas (Zhang et al. 2004). Del mismo modo y de forma relacionada, otros estudios 

han mostrado una inhibición de la síntesis de TNF-α, IL-6 y GM-CSF (de sus siglas en 

inglés, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor) y, en cambio, la expresión de 

bajos niveles de IL-1β, IL-8 e IL-10 en monocitos humanos infectados por E. chaffeensis 



Revisión bibliográfica 

 

80 

(Lee & Rikihisa 1996), así como una supresión en la síntesis de citocinas 

inmunoestimuladoras y proinflamatorias y prostaglandinas en macrófagos de ratón 

infectados por otro agente de la familia Anaplasmataceae, Neorickettsia risticii, en 

respuesta al LPS de Escherichia coli (van Heeckeren et al. 1993). 

 

Por otra parte, el efecto de E. chaffeensis a nivel transcripcional se refleja también 

en un incremento en la supervivencia de las células infectadas, ya que esta bacteria parece 

inducir la producción de ciertos inhibidores de la apoptosis (Zhang et al. 2004), al igual 

que se ha observado para A. phagocytophilum en neutrófilos humanos (Yoshiie et al. 

2000). La apoptosis es uno de los mecanismos innatos de defensa del hospedador, por lo 

que esta inhibición supone una forma más que emplean los agentes intracelulares obligados 

para evadir las respuestas inmunitarias, al prevenir la destrucción de las bacterias que han 

sido internalizadas y evitar la muerte de estas células que han sido infectadas, con lo que la 

bacteria dispone de suficiente tiempo para replicarse en el interior de la célula del 

hospedador (Zhang et al. 2004). 

 

Hasta el momento nos hemos centrado en los efectos que sobre el sistema 

inmunitario innato ejercen para evitar su destrucción por el hospedador ciertos agentes 

rickettsiales relacionados estrechamente con E. canis. Sin embargo, es importante recalcar 

que, en la evasión de las respuestas defensivas, estos microorganismos actúan también 

sobre los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa, no sólo por medio de una 

inhibición de la secreción de citocinas reguladoras de las respuestas inmunitarias, como ya 

se ha descrito, sino también por medio de otros mecanismos más específicos. Como 

veremos más adelante, estudios llevados a cabo en relación con la respuesta inmunitaria 

protectora frente a organismos ehrlichiales indican que el componente predominante de 

estas defensas parece ser una respuesta de tipo Th1, caracterizada por la secreción de IFN-

γ, TNF-α e IL-2, que conduce al desarrollo de una respuesta de base celular (Akkoyunlu & 

Fikrig 2000, Bitsaktsis et al. 2004). Sin embargo, ciertos agentes ehrlichiales, como E. 

ruminantium y E. canis, parecen haber desarrollado un mecanismo de evasión inmunitaria 

consistente en una inhibición de esta respuesta de base celular mediante la disminución de 

la expresión de las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II 

(Vachiery et al. 1998, Harrus et al. 2003) e, incluso, de las de clase I (Vachiery et al. 1998) 

en sus células diana, con lo que la presentación antigénica a los linfocitos T estaría 

comprometida (Vachiery et al. 1998, Harrus et al. 2003). 

 

Sin embargo, algunos autores sugieren que E. muris, otra especie bacteriana 

genéticamente relacionada con E. canis y cuyas células diana son también los monocitos-

macrófagos, no evade la respuesta inmunitaria mediante la inhibición de la presentación 



Revisión bibliográfica 

 

81 

antigénica por parte de las moléculas del CMH de clase II, sino que parece que lo logran 

por medio de la supresión de las señales de las células T activadas (Nandi et al. 2009).  

 

Por otra parte, los datos moleculares obtenidos por Reddy y Streck en 1999 

muestran otro posible mecanismo de evasión inmunitaria en el caso de E. chaffeensis. La 

existencia de variabilidad en algunos de sus genes, en concreto en algunas proteínas 

antigénicas de superficie, puede dificultar el reconocimiento antigénico y, por tanto, la 

puesta en funcionamiento de respuestas inmunitarias adaptativas por parte del hospedador 

(Reddy & Streck 1999). 

 

Todos estos mecanismos evasivos son los que van a conducir a que los agentes 

rickettsiales provoquen en el hospedador infecciones crónicas que pueden durar años, con 

recidivas y reactivaciones tras una curación aparente, que son difíciles de erradicar (Abbas 

et al. 2008f) y que les permiten establecer un estado de portador persistente (Waner et al. 

2001). 

 
Respuesta inmunitaria frente a Ehrlichia spp. 

 

A pesar del desarrollo por parte de Ehrlichia spp. de las citadas estrategias para 

evitar ser destruidas por el hospedador, éstas no resultan totalmente eficaces y se desarrolla 

por parte del sistema inmunitario del animal afectado una serie de respuestas en las que 

están implicados tanto el sistema inmunitario innato como el adaptativo y en las que 

participan tanto la rama celular como la humoral.  

 

La infección por Ehrlichia spp. se produce tras la picadura de la garrapata. Dicha 

picadura es la responsable del desarrollo de una inflamación inicial y de la liberación de 

mediadores químicos que atraen al foco de inflamación a las células del sistema 

inmunitario innato, lo que va a favorecer la infección por Ehrlichia spp., ya que así se 

logra aumentar en el punto de inoculación el número de células diana (neutrófilos o 

monocitos-macrófagos, según la especie ehrlichial implicada) (Rikihisa 1991). 

 

De forma general, la inmunidad innata frente a bacterias intracelulares se inicia tras 

el reconocimiento de componentes bacterianos por parte de los TLR y otros PRRs, lo que 

desencadena una cascada enzimática que conduce hacia la estimulación de los 

componentes celulares que forman parte de esta rama de la inmunidad, la liberación de 

citocinas, la activación del complemento y el desarrollo de la inflamación (Abbas et al. 

2008f, Tizard 2009a). Sin embargo, como se ha mencionado previamente, los agentes 

ehrlichiales parecen carecer de dos de los ligandos más importantes de los TLR, LPS y 

péptidoglicano (Lin & Rikihisa 2003, Mavromatis et al. 2006), por lo que estas bacterias 



Revisión bibliográfica 

 

82 

probablemente expresen otros PAMP diferentes que permitan iniciar las respuestas innatas. 

Así, Huang y colaboradores han demostrado recientemente en ensayos in vitro con cultivos 

celulares de E. chaffeensis la expresión de múltiples lipoproteínas (Huang et al. 2008) que 

podrían estimular actividades microbicidas en los monocitos y macrófagos a través del 

receptor TLR2 (Rikihisa 2010). Sin embargo, entre los mecanismos evasivos de las 

respuestas defensivas de E. chaffeensis destaca su capacidad para disminuir la expresión de 

estos TLR en la superficie de monocitos y macrófagos infectados (Lin & Rikihisa 2004), 

por lo que es probable que estas lipoproteínas de E. chaffeensis no sean capaces de 

estimular a las células ya infectadas, sino que actúen sobre los monocitos y macrófagos no 

infectados y sobre otros tipos celulares para hacerlos refractarios a la infección y promover 

en ellos el inicio de respuestas defensivas. Por otra parte, parece que estas lipoproteínas 

son necesarias para la infección de las células del hospedador por E. chaffeensis (Huang et 

al. 2008). 

 

A pesar de que clásicamente se ha considerado que el receptor TLR4 está implicado 

en el reconocimiento innato del LPS de las bacterias gramnegativas, se ha observado en 

ensayos experimentales in vivo de infección por E. chaffeensis que los ratones con 

deficiencia de TLR4 muestran un retraso en la eliminación de la infección y una 

disminución en la síntesis de NO2 e IL-6 por los macrófagos en comparación con los 

ratones wild type (Ganta et al. 2002), por lo que se ha sugerido que E. chaffeensis, y 

probablemente otras especies ehrlichiales, contengan otros PAMP que interaccionen con 

este receptor (Bitsaktsis et al. 2004, Chapes & Ganta 2008). 

 

Una vez producida la estimulación de los receptores innatos se inicia una serie de 

respuestas para la destrucción de los agentes ehrlichiales, como la síntesis de citocinas, que 

van a estimular tanto a células del sistema inmunitario innato como del adaptativo. 

 

En general, la protección frente a bacterias intracelulares está mediada por 

macrófagos, que adquieren la capacidad para destruir a las bacterias unos 10 días después 

del inicio de la infección y cuya respuesta suele ser inespecífica (Abbas et al. 2008f, Tizard 

2009a). Generalmente esta respuesta implica mecanismos dependientes e independientes 

de oxígeno (Waner et al. 2001), pero en el caso de la infección por Ehrlichia spp. no está 

claro el papel que desempeñan los mecanismos oxidativos en la eliminación de estas 

bacterias, habiéndose descrito tanto un efecto mínimo de este mecanismo efector de las 

respuestas innatas (Waner et al. 2001) como un papel crítico de las especies reactivas de 

oxígeno dependientes de la NADPH oxidasa (Yager et al. 2005). 

 

A pesar de que las actividades de los macrófagos y probablemente de otras células 

del sistema inmunitario innato, como las células NK, contribuyen a la destrucción de 



Revisión bibliográfica 

 

83 

Ehrlichia spp., no parece que por sí solas sean capaces de eliminar por completo al 

patógeno y requieren, por el contrario, de la participación de las respuestas inmunitarias 

adaptativas (Ganta et al. 2002, Abbas et al. 2008f). 

 

En este sentido, la principal respuesta inmunitaria adaptativa que se desarrolla 

frente a las bacterias intracelulares es la inmunidad mediada por linfocitos T (Akkoyunlu 

& Fikrig 2000, Tizard 2009a). En el caso de las infecciones ehrlichiales, parece que el 

mecanismo predominante en la protección del hospedador está constituido por la 

inmunidad mediada por células T de tipo 1 y la secreción por parte de éstas de IFN-γ, que 

conducen hacia una respuesta inmunitaria de base celular (Waner et al. 2001, Bitsaktsis et 

al. 2004). Asimismo, recientemente se ha comenzado a describir un papel protector 

importante de los anticuerpos en estas infecciones, contrariamente a lo que se había 

asumido históricamente (Kaylor et al. 1991, Winslow et al. 2000, Yager et al. 2005). Sin 

embargo, como se describirá a continuación, existen resultados muy variables con respecto 

a los mecanismos implicados en las respuestas inmunitarias adaptativas desencadenadas en 

la ehrlichiosis, por lo que, en ocasiones, el papel que desempeña cada tipo celular o cada 

citocina en concreto puede ser confuso. Estos resultados divergentes pueden deberse al 

empleo en los diferentes estudios de distintos hospedadores o especies ehrlichiales y 

pueden reflejar mecanismos biológicos diferentes (Waner et al. 2001).  

 

De forma general, se ha observado que el IFN-γ juega un papel importante en el 

control del grado de rickettsemia durante las fases tempranas de la infección por A. 

phagocytophilum en ratones (Akkoyunlu & Fikrig 2000, Martin et al. 2001) y la respuesta 

que se induce en estos animales es predominantemente de tipo Th1, si bien en fases más 

avanzadas los mecanismos que se desencadenan parecen ser independientes de IFN-γ 

(Akkoyunlu & Fikrig 2000). Asimismo, en la infección experimental en ratón por el agente 

ehrlichial recientemente aislado de una garrapata Ixodes ovatus (conocido como Ixodes 

ovatus ehrlichia, IOE), que, al igual que E. canis, posee tropismo por los monocitos y 

macrófagos, se observó un incremento en la susceptibilidad a la enfermedad fatal en 

aquellos animales deficientes para IL-12p40, IFN-γ, TNF-α o para los receptores de IFN-γ 

o de TNF-α, lo que demuestra la importancia de las citocinas de tipo 1 en la defensa del 

hospedador frente a las infecciones por estos agentes patógenos (Bitsaktsis et al. 2004).  

 

Entre los mecanismos a través de los cuales el IFN-γ es capaz de inducir la 

destrucción de los microorganismos intracelulares, destacan en el caso de las infecciones 

ehrlichiales principalmente dos. Diferentes modelos de infección rickettsial han mostrado 

que el IFN-γ en asociación con el TNF-α induce un mecanismo de destrucción rickettsial 

en los fagocitos mediado por NO que es crítico para la supervivencia del hospedador (Feng 

et al. 1994). El IFN-γ también puede efectuar la destrucción de Ehrlichia spp. en las 



Revisión bibliográfica 

 

84 

células por el secuestro de arginina y/o por disminución de la expresión de receptores de 

superficie de transferrina y la consiguiente reducción en las reservas intracelulares de 

hierro (Park, Rikihisa 1991, Barnewall & Rikihisa 1994). Independientemente del 

mecanismo empleado por esta citocina para inducir la destrucción ehrlichial, es importante 

recalcar que su actuación se efectúa de forma sinérgica con el TNF-α, como fue descrito 

por Feng y Walker en 2004 en un modelo murino de infección por E. muris en el que se 

observó en los animales infectados un incremento en la mortalidad de hasta un 75% 

cuando se combinaban la neutralización de IFN-γ y de TNF-α en el mismo animal, 

mientras que los ratones con neutralización de una sola de las citocinas no mostraron una 

diferencia significativa en la mortalidad en comparación con los ratones en los que no se 

neutralizó ninguna (Feng & Walker 2004). 

 

Ambas citocinas, IFN-γ y TNF-α, son dos de los principales mediadores de la 

inmunidad de tipo 1 y, por lo tanto, cabría esperar un papel decisivo para las células Th1 

en la defensa del hospedador en la infección por estas rickettsias. En este sentido diversos 

estudios han mostrado la participación de estas células en la protección frente a Ehrlichia 

spp. de una forma similar a la descrita para otras infecciones por agentes intracelulares 

(Ganta et al. 2002, Bitsaktsis et al. 2004, Stevenson et al. 2006, Ismail et al. 2007). En 

2002, Ganta y colaboradores sugirieron que las moléculas del CMH de clase II eran 

esenciales en la eliminación de la infección por E. chaffeensis en el hospedador murino, lo 

que conduciría a que la completa supresión de este patógeno requeriría la presencia de 

células TCD4+ funcionales (Ganta et al. 2002). Diferentes estudios han apoyado esta 

hipótesis, como, por ejemplo, los de Bitsaktsis y colaboradores en 2004 (Bitsaktsis et al. 

2004) o los de Ismail y colaboradores en 2007 (Ismail et al. 2007). Ambos trabajos 

describen un papel crítico para el correceptor CD4, y no para el correceptor CD8, en la 

defensa del hospedador en la infección experimental por IOE en ratones knockout 

(Bitsaktsis et al. 2004, Ismail et al. 2007). 

 

Sin embargo, en este punto es importante recalcar que los estudios experimentales 

llevados a cabo en infecciones por agentes ehrlichiales en ratones knockout han mostrado 

en ocasiones algunos resultados que varían notablemente entre los diferentes ensayos. Así, 

y a pesar de lo mencionado en el párrafo anterior, en base a los hallazgos de diferentes 

estudios, no todos los autores consultados opinan que las células T CD8+ ejerzan un 

mínimo papel en la defensa frente a la ehrlichiosis, sino que se ha descrito un papel 

esencial para estas células en las respuestas defensivas frente a E. muris (Feng & Walker 

2004). Asimismo, Thirumalapura y colaboradores en 2008 y 2009 describieron que, tras la 

infección persistente por E. muris en ratones, se logró obtener una protección cruzada 

frente a la infección posterior por IOE en los mismos animales, y dicha protección se 

asoció con la generación y mantenimiento de respuestas mediadas por células T de 



Revisión bibliográfica 

 

85 

memoria tanto CD4+ como CD8+ específicas de Ehrlichia productoras de IFN-γ, así como 

con la producción de IgG séricas específicas de Ehrlichia (Thirumalapura et al. 2008, 

Thirumalapura et al. 2009). Sin embargo, de nuevo existe controversia en estos resultados, 

ya que otros estudios han dotado de importantes papeles a las células T CD8+ en la 

ehrlichiosis, pero no en la protección de los hospedadores, sino, por el contrario, en la 

inmunopatogenia relacionada con la enfermedad y, por lo tanto, en el daño ocasionado al 

hospedador por su propio sistema inmunitario (Ismail et al. 2004, Bitsaktsis & Winslow 

2006, Ismail et al. 2007). 

 

Por otra parte, estudios recientes de Bitsaktsis y colaboradores en 2007 

cuestionaron el papel que ejercen las células T CD4+ y las células T CD8+, así como el de 

las citocinas de tipo 1, en el curso de la ehrlichiosis, al observar que ratones deficientes en 

células CD4+, CD8+ o moléculas del CMH de clase II desarrollaron una inmunidad 

protectora tras la infección por E. muris y permanecieron, por tanto, protegidos frente a la 

posterior infección con IOE del mismo modo que ocurría en los ratones normales 

(Bitsaktsis et al. 2007). La habilidad de los ratones para eliminar la bacteria o inducir 

respuesta protectora en ausencia de células TCD4+sugiere que las células Th podrían no 

ser esenciales (Bitsaktsis et al. 2007).  

 

No obstante, la hipótesis de que una respuesta inmunitaria mediada por células es 

necesaria para la resistencia ehrlichial está apoyada también por la observación de la 

formación de granulomas en el hígado de los ratones infectados por E. chaffeensis, que 

actúa impidiendo la diseminación bacteriana (Ganta et al. 2002).  

 

Por otra parte, aunque por lo general se ha asumido que los anticuerpos no juegan 

ningún papel en la defensa del hospedador frente a las infecciones ehrlichiales, cada vez 

más datos apuntan a que esta afirmación es errónea (Kaylor et al. 1991, Messick & 

Rikihisa 1994, Lee & Rikihisa 1997, Sun et al. 1997, Casadevall 1998, Winslow et al. 

2000, Feng & Walker 2004, Yager et al. 2005, Bitsaktsis et al. 2007). De hecho, los 

patógenos intracelulares para los que los anticuerpos no hayan mostrado algún tipo de 

protección parecen ser una minoría (Casadevall 1998).  

 

En la infección por E. canis se desarrollan anticuerpos específicos IgM e IgA tras 

4-7 días, mientras que las IgG, predominantemente IgG2 (Harrus et al. 2001), comienzan a 

detectarse en la sangre de los perros infectados a los 15 días postinfección (Weisiger et al. 

1975), aunque la aparición inicial de estos anticuerpos puede depender de la dosis infectiva 

(Rikihisa et al. 1992). 

 



Revisión bibliográfica 

 

86 

En cuanto al papel de estos anticuerpos en la protección frente a la ehrlichiosis, éste 

aún no ha sido totalmente aclarado. Se ha observado que la transferencia de anticuerpos 

y/o suero inmune frente a diversas especies de la familia Anaplasmataceae, como N. 

risticii , A.phagocytophilum y E. chaffeensis, permite dotar a los animales infectados de una 

inmunidad protectora sustancial transitoria, aunque no completa, y una disminución en la 

carga rickettsial (Kaylor et al. 1991, Sun et al. 1997, Winslow et al. 2000). Asimismo, los 

resultados de Feng y Walker presentados en 2004 han confirmado que la inmunidad 

protectora desarrollada en ratones frente al agente ehrlichial E. muris está mediada por una 

combinación tanto de respuestas celulares como de respuestas humorales, con la síntesis de 

anticuerpos específicos frente a antígenos de esta bacteria (Feng & Walker 2004). Por otra 

parte, es importante destacar que los linfocitos B parecen no limitarse a la síntesis de 

inmunoglobulinas, sino que también son capaces de ejercer otras funciones en la 

protección del hospedador en las infecciones ehrlichiales, como pueden ser la síntesis de 

citocinas que modulen la respuesta inflamatoria o la estimulación de la expansión y 

activación de las células T CD4+ (Yager et al. 2005, Bitsaktsis et al. 2007).  

 

El modo en que los anticuerpos frente a Ehrlichia spp. pueden actuar en la 

eliminación de la infección son variables. Los agentes ehrlichiales van a requerir un paso 

por el espacio extracelular antes de penetrar en las células, por lo que, en este momento, las 

inmunoglobulinas pueden inducir la destrucción de los microorganismos por la vía clásica 

de deposición del complemento y/o por opsonización (Messick & Rikihisa 1994, Winslow 

et al. 2000). Además, pueden interferir con la infectividad celular, al contribuir a la 

neutralización de la bacteria e impedir su unión e internalización en la célula hospedadora 

(Messick & Rikihisa 1994, Winslow et al. 2000). Una vez que la infección de la célula 

hospedadora se ha producido, los anticuerpos pueden actuar estimulando la citolisis de 

dicha célula (Winslow et al. 2000) e, incluso, ejerciendo un efecto inhibidor de la 

replicación intracelular del agente y estimulando actividades bactericidas (Messick & 

Rikihisa 1994). Asimismo, se ha observado que los anticuerpos específicos frente a E. 

chaffeensis y, más concretamente, los inmunocomplejos formados por la unión de las 

inmunoglobulinas con las bacterias, son responsables de la producción de citocinas 

proinflamatorias en los animales infectados, lo que puede causar un daño temporal en el 

hospedador pero que también contribuye a la puesta en funcionamiento de mecanismos 

antiehrlichiales mediante la activación de respuestas inmunitarias protectoras (Lee & 

Rikihisa 1997). 

 

Por lo tanto, los datos de estos estudios en conjunto muestran que los anticuerpos y 

los linfocitos B pueden jugar un papel significativo en la eliminación de estas bacterias 

intracelulares obligadas durante la infección activa, aunque la inmunidad celular es 

necesaria para la eliminación completa de la bacteria, por lo que se requiere la 



Revisión bibliográfica 

 

87 

participación de forma organizada de todas las ramas de la inmunidad en la lucha frente a 

estos agentes intracelulares obligados (Winslow et al. 2000).  

 

Sin embargo, el papel que desempeñan los anticuerpos en la infección por E. canis 

en concreto está menos claro. Así, los resultados obtenidos por Hess y colaboradores 

parecen indicar que los anticuerpos generados en la infección por E. canis en el perro no 

juegan un papel importante en la eliminación del agente, al no haberse observado 

diferencias en los títulos de anticuerpos entre los perros que fueron capaces de eliminar al 

agente del torrente sanguíneo y los que desarrollaron una infección persistente (Hess et al. 

2006). Además, se ha observado que en perros infectados experimentalmente con E. canis, 

la persistencia de títulos de anticuerpos altos tras el tratamiento y eliminación del agente no 

mostró un valor protector cuando estos perros fueron inoculados con cepas de E. canis 

homólogas o heterólogas. Incluso, al reinfectar con cepas heterólogas a estos animales que 

mantenían títulos elevados, se desarrollaron cuadros más graves en comparación con el 

desafío con cepas homólogas (Breitschwerdt et al. 1998a). 

 

En resumen y para facilitar la comprensión de la inmunidad desarrollada en el curso 

de la infección por Ehrlichia spp., los conocimientos actuales conducen a pensar que las 

células T CD4+ juegan un papel dominante en la inmunidad protectora a través de su 

producción de citocinas de tipo 1 y el desarrollo de una inmunidad mediada por células. En 

esta inmunidad protectora participan, no obstante, otros componentes del sistema 

inmunitario, como las células TCD8+ y la síntesis de anticuerpos por los linfocitos B. 

 
Inmunopatogenia de la EMC: 

 

Aunque las respuestas inmunitarias desarrolladas frente a las agresiones suelen, y 

en principio deberían, ser beneficiosas, no siempre se consigue este objetivo, ya que 

pueden influir en el curso de las enfermedades sin lograr su curación e, incluso, pueden 

llegar a agravar el proceso (Tizard 2009a). De hecho, en muchas infecciones, la lesión y la 

sintomatología de la enfermedad pueden deberse a la respuesta del hospedador frente al 

microorganismo y a sus productos, más que al efecto del propio microorganismo (Abbas et 

al. 2008f). 

 

En el caso de la EMC parece que la respuesta inmunitaria desarrollada no sólo no 

es eficaz, sino que puede ser la causa directa tanto del cuadro clínico como de las lesiones 

generadas (Kakoma et al. 1978, Reardon & Pierce 1981b, Codner et al. 1985, Harrus et al. 

1999). La excesiva producción de anticuerpos junto con una respuesta celular disminuida 

parece influir decisivamente en la patogenia de la enfermedad (Reardon & Pierce 1981a, 

Harrus et al. 1999). 



Revisión bibliográfica 

 

88 

Algunos de los hallazgos que conducen a pensar que los mecanismos inmunitarios 

desarrollados por el hospedador en la EMC se encuentran directamente implicados en la 

patogenia de la enfermedad son la presencia de extensos infiltrados de células plasmáticas 

en órganos parenquimatosos y en la médula ósea, el desarrollo de 

hipergammaglobulinemia policlonal que no se correlaciona con los títulos de anticuerpos 

específicos frente a E. canis y la detección de anticuerpos antiplaquetarios y pruebas de 

autoaglutinación y de Coomb’s positivas en los perros infectados experimentalmente 

(Reardon & Pierce 1981a, Harrus et al. 1996a, Harrus et al. 1999, Neer & Harrus 2006). 

Además, parece existir una disparidad entre el bajo número de microorganismos que se 

encuentran en la sangre y en los tejidos del hospedador en la infección por diferentes 

especies ehrlichiales y el número relativamente elevado de lesiones anatomopatológicas 

inducidas (Rikihisa 1999, Lepidi et al. 2000), especialmente en el hígado, donde se ha 

descrito la existencia de muerte celular en hepatocitos sin ninguna evidencia de infección 

ehrlichial (Lepidi et al. 2000), lo que conduce a especular que la patogenia de estas 

enfermedades no está causada directamente por el agente, sino que está mediada por el 

propio hospedador (Rikihisa 1999, Lepidi et al. 2000, Martin et al. 2001, Stevenson et al. 

2006). 

  

Como se ha descrito previamente en esta revisión bibliográfica, algunos de los 

signos clínicos observados en la ehrlichiosis canina se relacionan con complicaciones de la 

enfermedad, entre las que destaca el daño renal, que parece ser inmunomediado (Cohn 

2003). Durante la fase aguda de la enfermedad se ha documentado la presencia de una 

nefropatía perdedora de proteínas caracterizada por la presencia de infiltrados 

perivenulares e intersticiales de linfocitos y células plasmáticas localizados principalmente 

en la corteza renal y lesiones glomerulares mínimas debidas al depósito de 

inmunocomplejos, lo que sugiere la implicación de la respuesta inmunitaria del hospedador 

(Codner et al. 1992a, Codner & Maslin 1992b). En la fase crónica de la ehrlichiosis 

monocítica canina se puede observar también la existencia de daño renal, aunque en este 

caso se asocia con el desarrollo de una glomerulonefritis con síndrome nefrótico (Frank & 

Breitschwerdt 1999, Neer & Harrus 2006). 

 

Otros signos clínicos que se han asociado a menudo con la respuesta inmunitaria 

del hospedador más que con la acción directa del agente son los signos locomotores, 

debidos a polimiositis o a mono o poliartritis por hemartrosis o deposición de 

inmunocomplejos, aunque por lo general estos signos son más frecuentes en infecciones 

por especies granulocíticas, como E. ewingii o A. phagocytophilum (Neer & Harrus 2006). 

 

Por otra parte, varios de los signos clínicos más frecuentes en esta enfermedad, 

como son la fiebre, anorexia o depresión, pueden estar relacionados de forma directa con el 



Revisión bibliográfica 

 

89 

incremento de las concentraciones séricas de ciertas citocinas, como IL-1, IL-8 o el TNF-α, 

que son inducidas en un intento de resolver la infección (Unver et al. 2006, Tizard 2009o). 

Se ha documentado que la secreción de ciertas citocinas en el curso de la infección por 

Ehrlichia spp. puede contribuir al daño tisular inflamatorio (Lee & Rikihisa 1996, Lee & 

Rikihisa 1997, Dumler et al. 2000).  

 

En el curso de la EMC la alteración hematológica más frecuentemente descrita es la 

trombocitopenia (Neer & Harrus 2006). Así, suele observarse la presencia de 

trombocitopenia y anemia y leucopenia moderadas durante la fase aguda de la enfermedad, 

trombocitopenia moderada durante la fase subclínica y pancitopenia durante la fase crónica 

grave (Harrus et al. 1997b). Estas alteraciones hematológicas parecen ser una de las 

principales consecuencias negativas de la respuesta del hospedador frente a la infección 

por E. canis. Así, la trombocitopenia se puede atribuir a diferentes mecanismos en los 

diferentes estadios de la enfermedad, y dichos mecanismos pueden actuar solos o 

combinados entre sí (Waner et al. 1995). Se ha observado un incremento en el consumo de 

plaquetas debido a cambios inflamatorios en el endotelio vascular sanguíneo (Woody & 

Hoskins 1991) así como un aumento en el secuestro esplénico de las plaquetas (Woody & 

Hoskins 1991), que se producen principalmente durante la fase aguda de la enfermedad, 

aunque no se limitan a esta fase (Kakoma et al. 1978). Además, se ha identificado un factor 

inhibidor de la migración plaquetaria que impide la formación de pseudópodos en estas 

células, que se redondean y tienden a agruparse, lo que puede interferir con la entrada de 

las plaquetas en el sistema circulatorio, con el consiguiente descenso de sus recuentos 

sanguíneos (Kakoma et al. 1978). Por otra parte, durante la ehrlichiosis monocítica canina 

se produce un incremento en la destrucción plaquetaria, principalmente en el bazo, lo que 

conduce a un considerable descenso en su vida media (Smith et al. 1975). 

 

El hallazgo de la existencia de anticuerpos antiplaquetarios en el suero de perros 

con infección tanto experimental como natural por E. canis es indicativo de la existencia 

de un mecanismo de destrucción inmunológica de estas células (Waner et al. 1995, Harrus 

et al. 1996b, Grindem et al. 1999). Estos anticuerpos pueden participar también en las 

disfunciones plaquetares observadas en el curso de la ehrlichiosis monocítica canina 

(Harrus et al. 1996b). Se han detectado IgG ligadas a plaquetas en perros infectados 

experimentalmente por E. canis de forma tan temprana como a los 3 días postinfección 

(Waner et al. 2000a) y se ha documentado la existencia de anticuerpos antiplaquetarios en 

otras enfermedades infecciosas causadas por especies relacionadas, como, por ejemplo, por 

Rickettsia rickettsii, agente causal de la Fiebre de las Montañas Rocosas (Grindem et al. 

1999). Asimismo, en medicina humana se ha descrito la presencia de anticuerpos 

antiplaquetarios en el 80% de las muestras séricas de pacientes con ehrlichiosis 

granulocítica humana (Wong & Thomas 1998). 



Revisión bibliográfica 

 

90 

La existencia de anticuerpos antieritrocitarios parece participar de la misma forma 

en la anemia observada en la infección por E. canis (Frank & Breitschwerdt 1999). 

 

Durante la fase crónica de la ehrlichiosis monocítica canina se cree que el principal 

factor responsable de la trombocitopenia es un descenso en la síntesis de plaquetas debido 

a una hipoplasia de la médula ósea (Woody & Hoskins 1991). Dicha hipoplasia de la 

médula ósea parece ser la causante de la pancitopenia observada durante esta fase (Harrus 

et al. 1999).  

 

Por otra parte, recientemente se ha descrito en un modelo experimental de infección 

por E. muris en ratones la existencia de alteraciones en la actividad de las células 

progenitoras en la médula ósea, así como el desarrollo de una hematopoyesis extramedular 

(MacNamara et al. 2009). Estos hallazgos sugieren que las citopenias observadas en el 

curso de las ehrlichiosis monocíticas pueden ser el resultado de una funcionalidad 

inadecuada de las células progenitoras sanguíneas por estrés hematopoyético inducido por 

la infección, así como del secuestro de éstas por el bazo (MacNamara et al. 2009). 

 

Debido a la importancia del bazo en la patogenia de numerosas enfermedades, se 

llevó a cabo un estudio en el que se evaluó el papel que este órgano desempeña en la 

ehrlichiosis monocítica canina mediante la realización de una esplenectomía en perros 

experimentalmente infectados por E. canis, confirmándose la aparición de unos signos 

clínicos y hematológicos más leves en los perros esplenectomizados en comparación con 

los perros intactos (Harrus et al. 1998c). Estas diferencias sugieren que en esta enfermedad 

se encuentran implicados ciertos mecanismos inmunológicos y que el bazo juega un papel 

central en la patogenia de la ehrlichiosis canina, probablemente mediante la liberación de 

mediadores inflamatorios esplénicos responsables de los signos clínicos observados y 

mediante la producción de elevadas cantidades de anticuerpos, ya que se trata de uno de los 

principales órganos productores de inmunoglobulinas (Harrus et al. 1998c). 

 

Por otra parte, se ha sugerido que E. canis es capaz de inducir en el perro un cierto 

grado de inmunosupresión, que se manifiesta principalmente con alteraciones en la 

inmunidad mediada por células (Greene 1995) y que podría ser responsable de la elevada 

frecuencia de concurrencias con otras patologías descrita en la ehrlichiosis canina (Frank & 

Breitschwerdt 1999, Neer & Harrus 2006). 

 

Los resultados obtenidos en estudios experimentales de infección por A. 

phagocytophilum en ovejas han demostrado un efecto inmunosupresor de este agente 

(Woldehiwet 1987a, Woldehiwet 1987b, Woldehiwet 1991, Larsen et al. 1994, Gokce & 

Woldehiwet 1999, Whist et al. 2003). Las ovejas infectadas muestran una severa 



Revisión bibliográfica 

 

91 

leucopenia debida a una linfocitopenia  temprana, debida a un descenso tanto de los 

linfocitos T CD4+, T CD8+ y Tγδ como de los B (Woldehiwet 1991, Whist et al. 2003), y 

neutropenia y trombocitopenia prolongadas (Woldehiwet 1987b). Se ha observado que este 

agente predispone a los animales al padecimiento de infecciones bacterianas y víricas más 

graves (Larsen et al. 1994) no sólo por la disminución en el número de células defensivas, 

sino también porque provoca alteraciones en las funciones de estas células (Woldehiwet 

1987a, Woldehiwet 1987b, Larsen et al. 1994). La infección por A. phagocytophilum en 

ovejas se manifiesta tanto por una alteración en la respuesta humoral, con un descenso en 

la síntesis de anticuerpos en los animales infectados tras la inmunización con diferentes 

antígenos (Larsen et al. 1994, Whist et al. 2003) como por alteraciones en las respuestas 

inmunitarias celulares, con una reducida reactividad linfocitaria a la estimulación por 

mitógenos o antígenos (Woldehiwet 1987a, Gokce & Woldehiwet 1999, Whist et al. 2003). 

Además, aunque se ha descrito un descenso inicial en el número de linfocitos T CD8+, 

posteriormente se produce una proliferación de dicha subpoblación, llevando a una 

inversión del índice linfocitario CD4:CD8 (Whist et al. 2003). En medicina humana se ha 

observado que los pacientes afectados por ehrlichiosis aguda causada por A. 

phagocytophilum muestran una linfocitopenia predominantemente originada por apoptosis 

de los linfocitos Tγδ (Caldwell et al. 1996). 

 

La infección por N. risticii en ratones parece también provocar de forma dosis 

dependiente una disminución marcada y aguda en las respuestas proliferativas in vitro de 

las células esplénicas ante la estimulación por mitógenos, así como una disminución en la 

secreción de IL-2 (Rikihisa et al. 1987). 

 

Por otra parte, en la infección por E. chaffeensis se ha descrito un posible efecto 

inmunosupresor de algunas de la citocinas secretadas, como IL-10 (Lee & Rikihisa 1996). 

 

Dada la similitud existente entre estas especies y E. canis, es probable que en el 

curso de la ehrlichiosis monocítica canina puedan desarrollarse algunas de las anomalías 

inmunosupresoras descritas en otros animales o en el hombre. Así, se han observado 

alteraciones en las subpoblaciones linfocitarias T CD4+ y CD8+ en la sangre de perros con 

ehrlichiosis tras la infección natural, que conducen a una inversión del índice CD4:CD8 

(Frank & Breitschwerdt 1999, Heeb et al. 2003, Lorente et al. 2008). Heeb y colaboradores 

en 2003 describieron el caso clínico de un perro con infección natural por E. canis que 

presentaba alteraciones marcadas en las subpoblaciones de linfocitos T, con predominancia 

de los linfocitos TCD8+ y un descenso en los linfocitos TCD4+, con lo que el ratio 

CD4:CD8 se encontraba invertido (Heeb et al. 2003). En este caso, se describía la 

presencia de otra alteración en el sistema inmunitario: se observó la existencia de una 



Revisión bibliográfica 

 

92 

linfocitosis granular grande, que había sido descrita previamente en otros estudios de 

ehrlichiosis monocítica canina (Heeb et al. 2003, Neer & Harrus 2006). 

 

A pesar de que estas alteraciones en las poblaciones linfocitarias en los perros 

infectados por E. canis, junto con la elevada frecuencia de concurrencias observadas en 

estos perros y las alteraciones inmunitarias descritas en otras especies animales con 

infecciones rickettsiales relacionadas podrían indicar la existencia de una inmunosupresión 

durante el curso de la ehrlichiosis monocítica canina, los conocimientos existentes por el 

momento no permiten confirmar esta hipótesis. De hecho, Hess y colaboradores han 

descrito recientemente la ausencia de cambios inmunológicos en la especie canina tras la 

infección experimental por E. canis, si bien en este estudio se observó al inicio de la 

infección una linfocitosis TCD8+ que posteriormente se resolvió (Hess et al. 2006). Sin 

embargo este trabajó se desarrolló únicamente durante las fases aguda y subaguda de la 

infección, por lo que no es posible descartar el desarrollo de alteraciones en los 

componentes del sistema inmunitario canino en fases más avanzadas de la enfermedad, 

como sugieren los propios autores (Hess et al. 2006).  

 

Por otra parte, el incremento en la subpoblación de linfocitos TCD8+ ha sido 

descrito en el curso de la infección por especies ehrlichiales y se ha asociado en ocasiones 

con la inmunopatogenia de la enfermedad. Así, se ha sugerido que las células T CD8+ 

pueden ser responsables directamente del desarrollo de una enfermedad fatal en ratón tras 

la infección con IOE (Bitsaktsis & Winslow 2006, Ismail et al. 2007). Las células T CD8+ 

pueden ser capaces de mediar esta respuesta fatal iniciando directamente respuestas 

inflamatorias patológicas dependientes de TNF-α o ejerciendo una acción 

inmunosupresora, al inhibir la acción de los linfocitos T CD4+ (Bitsaktsis & Winslow 

2006). Así, se ha descrito que las células T CD8+ median el desarrollo de un shock tóxico 

inducido por Ehrlichia que se asocia con una sobreproducción de IL-10 y TNF-α y 

apoptosis de células T CD4+ (Ismail et al. 2007). 

 

Finalmente, cabe destacar que la respuesta inmunitaria individual del hospedador 

también parece ser esencial en el desarrollo del cuadro clínico. En concreto, se ha descrito 

que el Pastor Alemán podría ser una raza más susceptible a desarrollar formas de EMC 

más graves y con peor pronóstico que otras razas (Nyindo et al. 1980, Harrus et al. 1997b, 

Neer & Harrus 2006). Las variaciones en la susceptibilidad a esta enfermedad podrían 

deberse a diferencias raciales en la habilidad para desarrollar una respuesta inmunitaria 

adecuada. En este sentido, se ha observado que los Pastores Alemanes presentan una 

respuesta inmunitaria celular frente a E. canis deprimida en comparación con la 

desarrollada por perros de raza Beagle (Nyindo et al. 1980). 

 



Revisión bibliográfica 

 

93 

 

2.4. LA DOXICICLINA 

 

 
El sistema inmunitario puede verse afectado por una gran diversidad de fármacos 

que actúan principalmente a través de mecanismos inmunosupresores, inmunoestimulantes 

y de generación de tolerancia inmunitaria (Krensky et al. 2007). La utilización de estas 

propiedades en la regulación de las respuestas inmunitarias puede resultar en muchas 

ocasiones beneficiosa en el tratamiento de diferentes condiciones patológicas o en la 

prevención del rechazo inmunitario de órganos trasplantados (Krensky et al. 2007, Rang et 

al. 2008b). 

 

Los inmunosupresores de mayor importancia en la actualidad pueden ser 

clasificados en cuatro categorías principales: los glucocorticoides, los inhibidores de la 

calcineurina (como la ciclosporina o el tacrolimus), los antiproliferativos/antimetabólicos 

de las células inmunitarias (como el sirolimus, la azatioprina o el micofenolato de 

mofetilo) y los agentes biológicos o preparados de anticuerpos monoclonales o 

policlonales dirigidos a células T (como la globulina antitimocítica o el anticuerpo 

monoclonal anti-CD3 antihumano de tipo IgG2a murino) (Krensky et al. 2007, Rang et al. 

2008b).  

 

Estos fármacos inmunosupresores presentan una serie de efectos indeseables, como 

el riesgo de infecciones por agentes oportunistas o el desarrollo de neoplasias. Esto ha 

hecho que a menudo se empleen en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias o en 

los trasplantes de órganos otras sustancias que lo que permiten es obtener tolerancia 

inmunitaria evitando la reacción específica dirigida a un antígeno. A modo de ejemplo, 

podemos destacar que es posible inducir tolerancia mediante la inhibición de la señal 

coestimulante en la presentación antigénica a través del empleo de la molécula de proteína 

de fusión de tipo recombinante, CTLA4Ig, y anticuerpos monoclonales anti-CD80, CD86 o 

ambos (Krensky et al. 2007). 

 

Las sustancias que son capaces de ejercer un efecto inmunoestimulador y, por tanto, 

ser empleadas en el tratamiento de infecciones o inmunodeficiencias, son por lo general 

menos conocidas y estudiadas. Entre ellas podemos destacar las citocinas recombinantes 

(interferones, IL-2...). Asimismo, se pueden incluir en este grupo de fármacos con 

propiedades inmunoestimulantes las vacunas, que permiten obtener una inmunización 

activa frente a antígenos concretos, y las inmunoglobulinas, administradas para lograr una 

inmunización pasiva (Krensky et al. 2007). 



Revisión bibliográfica 

 

94 

Las sustancias mencionadas por el momento son fármacos empleados precisamente 

por sus efectos sobre la respuesta inmunitaria. Sin embargo, cada vez más fármacos que no 

han sido tradicionalmente considerados ni inmunosupresores, ni inmunoestimulantes, ni 

que induzcan tolerancia inmunitaria, han mostrado poseer efectos no específicos sobre el 

sistema inmunitario. 

 

Entre estas sustancias cabe destacar un amplio grupo de agentes antimicrobianos, 

que incluyen agentes β-lactámicos, aminoglucósidos, macrólidos, lincosamidas, 

fluoroquinolonas y tetraciclinas, y que pueden actuar sobre el sistema inmunitario 

principalmente a través de tres mecanismos (Jiménez-Valera et al. 1997, Hamilton-Miller 

2001, Pasquale & Tan 2005, Tauber & Nau 2008): 

 

- Actuando directamente sobre los componentes del sistema inmunitario. 

- Induciendo el desarrollo de cambios sobre la superficie de los microorganismos 

patógenos, haciendo que sean más susceptibles a los mecanismos efectores de la 

inmunidad. 

- Causando la lisis de los microorganismos, con lo que se liberan componentes 

microbianos que pueden actuar directamente sobre el sistema inmunitario del 

hospedador. 

 

A continuación nos centraremos en los aspectos más relevantes de uno de estos 

fármacos antimicrobianos, la doxiciclina, y la familia a la que pertenece, las tetraciclinas.  

 

Las tetraciclinas son un grupo de fármacos con actividad bacteriostática que fueron 

aislados a partir de Streptomyces aureofaciens y descritas en 1948 por Benjamin M. 

Duggar (Duggar 1948). Se trata de un grupo de compuestos anfóteros que derivan de la 

naftacenecarboxamida policíclica, núcleo tetracíclico, de donde reciben su nombre (Riviere 

& Spoo 2001, Chambers 2007).  

 

Desde su descubrimiento la molécula original ha sufrido numerosas modificaciones 

estructurales, dando lugar a otras tetraciclinas semisintéticas con propiedades 

farmacocinéticas y actividades antimicrobianas diferentes (Riviere & Spoo 2001).  

 

Una de las tetraciclinas de mayor relevancia en la actualidad es la doxiciclina, 

tetraciclina semisintética que es sintetizada a partir de la oxitetraciclina o la metaciclina y 

que presenta una mayor liposolubilidad que otros miembros de su familia, lo que le 

permite una mayor penetración dentro de las células, confiriéndole una mayor actividad 

frente a microorganismos intracelulares (Riviere & Spoo 2001). 

 



Revisión bibliográfica 

 

95 

 

2.4.1. EFECTOS EN LOS MICROORGANISMOS PATÓGENOS Y 

MECANISMO DE ACCIÓN  

 
De forma general, las tetraciclinas son antibióticos bacteriostáticos que poseen 

actividad contra una gran variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas, aerobias y 

anaerobias, intracelulares y extracelulares (Riviere & Spoo 2001, Chambers 2007, Rang et 

al. 2008a). Asimismo, son eficaces frente a algunos agentes patógenos resistentes a 

antimicrobianos activos contra la pared bacteriana, como ciertos agentes pertenecientes al 

Orden Rickettsiales (Chambers 2007, Rang et al. 2008a). Debido a su actividad 

antimicrobiana de amplio espectro, estos fármacos se encuentran entre los antibióticos más 

prescritos tanto en medicina humana como en veterinaria.  

 

Además, diversos estudios en el hombre han mostrado que la doxiciclina puede 

poseer cierta eficacia en el tratamiento de algunas enfermedades parasitarias causadas por 

protozoos, como la malaria o la leishmaniosis cutánea (Dahl et al. 2006, Masmoudi et al. 

2008, Briolant et al. 2010, Griffin et al. 2010). Se ha sugerido, incluso, que una 

combinación de doxiciclina e ivermectina puede ser eficaz en el tratamiento de una 

nematodosis, la causada por Dirofilaria immitis en el perro (Grandi et al. 2010). 

 

Estas sustancias ejercen su acción antibacteriana mediante la unión a la subunidad 

ribosomal 30S de los microorganismos sensibles, con lo que impiden la unión del ARNt 

aminoacílico al sitio aceptor en el complejo ARNm-ribosoma e inhiben así la síntesis 

proteica y, por tanto, el crecimiento y multiplicación de los microorganismos (Hash et al. 

1964, Day 1966, Geigenmuller & Nierhaus 1986, Riviere & Spoo 2001, Chambers 2007). 

 
2.4.2. FARMACOCINÉTICA  

 
La administración de la doxiciclina y demás tetraciclinas puede realizarse por vía 

intravenosa, pero, en general, la administración por vía oral es la ruta preferida en la 

mayoría de los animales (Riviere & Spoo 2001). La absorción en el tracto gastrointestinal 

puede variar dependiendo de la especie animal y del tipo de formulación empleada, si bien 

en el caso de la doxiciclina y la minociclina la absorción es prácticamente del cien por cien 

(Chambers 2007). Sin embargo, es importante tener en cuenta que estos compuestos quelan 

con facilidad los cationes bivalentes, por lo que su absorción disminuye si se administran 

junto con productos lácteos, sales de calcio, magnesio, hierro o zinc, geles de hidróxido de 

aluminio, subsalicilato de bismuto, etc. (Riviere & Spoo 2001, Chambers 2007). 

 



Revisión bibliográfica 

 

96 

La vida media de la doxiciclina varía en las diferentes especies animales, 

habiéndose descrito en la especie canina una vida media de 10 a 12 horas (Wilson et al. 

1988), algo inferior a la descrita en el hombre (de 16 a 18 horas) (Chambers 2007) y muy 

superior a la del ratón, de tan solo 4 horas (Bellahsene & Forsgren 1985). 

 

Una vez absorbidas, las diferentes tetraciclinas se unen a las proteínas plasmáticas y 

se distribuyen extensamente en la mayoría de los tejidos, acumulándose en las células 

reticuloendoteliales de hígado, bazo, médula ósea, riñones y en los huesos y dentina y 

esmalte de los dientes en crecimiento (Riviere & Spoo 2001, Chambers 2007, Rang et al. 

2008a). A pesar de la buena distribución descrita para las tetraciclinas, existen diferencias 

entre los distintos compuestos de este grupo de antimicrobianos y la distribución de cada 

una de estas sustancias en concreto dependerá de su solubilidad lipídica, lo que provoca 

que algunas tetraciclinas penetren mejor en ciertos tejidos que otras. Este es el caso de la 

doxiciclina y de la minociclina, que poseen una liposolubilidad cinco a diez veces mayor 

que el resto de tetraciclinas y, por tanto, penetran mejor en los tejidos (como cerebro, 

líquido cefalorraquídeo y próstata) y poseen un mayor volumen de distribución y mejores 

propiedades antimicrobianas globales (Riviere & Spoo 2001). 

 

La excreción de la doxiciclina se efectúa en su mayor parte con las heces en una 

forma inactiva, a diferencia de lo que se observa en otras tetraciclinas, en las que 

aproximadamente el 60% de la dosis es eliminada por filtración glomerular (Riviere & 

Spoo 2001, Chambers 2007) . Esta característica es la responsable de que la doxiciclina 

ejerza un menor número de efectos adversos, o que produzca efectos secundarios menos 

marcados que otros miembros de su familia. En concreto, se ha observado que este 

fármaco induce menos efectos gastrointestinales que otras tetraciclinas, siendo el efecto 

secundario más comúnmente descrito para esta familia antimicrobiana tanto en animales 

como en el hombre la aparición de una irritación gástrica e intestinal. No obstante, se ha 

descrito que, en ocasiones, la doxiciclina puede provocar nauseas y vómitos en perros y 

gatos, por lo que se recomienda su administración junto con alimento, lo que reduce este 

efecto adverso. Por otra parte, el uso de la mayoría de las tetraciclinas está desaconsejado 

en animales con insuficiencia renal, precisamente por esa eliminación por filtración 

glomerular descrita previamente y que no comparte la doxiciclina. La eliminación de la 

doxiciclina en forma de conjugado inactivo con las heces hace que pueda ser empleada 

incluso en perros con una afectación renal (Riviere & Spoo 2001).  

 

Otros efectos adversos de las tetraciclinas que cabe destacar son la aparición de 

decoloración de los dientes en crecimiento si son administradas durante el embarazo o 

durante los primeros meses de vida, debido a la quelación del calcio en la dentina o el 

esmalte, y el retardo del desarrollo óseo, aunque la doxiciclina parece ejercer estos efectos 



Revisión bibliográfica 

 

97 

de forma mucho menos probable que otras tetraciclinas (Riviere & Spoo 2001). También 

se ha descrito el desarrollo de fototoxicidad en el hombre tras la administración de estos 

fármacos y, probablemente, también puede aparecer este efecto en otras especies animales. 

Otros riesgos de la administración de tetraciclinas son las superinfecciones y, si son 

administradas por vía intravenosa rápida, el colapso circulatorio (Riviere & Spoo 2001). 

 

Como se ha comentado, estas sustancias poseen unas excelentes propiedades 

antimicrobianas para un amplio espectro de agentes infecciosos y, sin embargo, como 

ocurre en el caso de otros antibióticos, algunas bacterias han sido capaces de desarrollar 

mecanismos de resistencia frente a ellas, que se transmiten generalmente a través de 

plásmidos o transposones (Roberts 1996, Schwarz & Chaslus-Dancla 2001). Entre los 

diferentes mecanismos de resistencia a la acción de las tetraciclinas desarrollados destacan 

el eflujo dependiente de energía del fármaco, que es mediado por proteínas 

transmembrana, la protección del ribosoma de la actuación de la tetraciclina, en la que 

participan diferentes tipos de proteínas, y la inactivación enzimática de las tetraciclinas 

(Speer et al. 1992, Roberts 1996, Taylor & Chau 1996, Schwarz & Chaslus-Dancla 2001). 

 
2.4.3. EFECTOS NO ANTIMICROBIANOS 

 
Como se ha comentado previamente, la excelente actividad antimicrobiana de la 

doxiciclina y de otras tetraciclinas no es la única característica que ha hecho que sean tan 

populares, sino que, de forma temprana tras su descubrimiento, se comenzaron a describir 

otras propiedades de estos fármacos que son independientes de su efectos antimicrobianos 

y que hacen que en la actualidad existan más de 130 ensayos clínicos en marcha evaluando 

su posible empleo como inmunomoduladores o antiinflamatorios en patologías tan dispares 

como la artritis reumatoide, la periodontitis, enfermedades dermatológicas de base 

inmunomediada o ciertos tipos de neoplasias (Tauber & Nau 2008, Griffin et al. 2010). 

 

Ya en 1950 se comenzaron a describir en la bibliografía ciertos efectos de las 

tetraciclinas sobre el sistema inmunitario tanto innato como adaptativo, considerándose en 

un principio estas características como un efecto secundario indeseable de aquellos 

antimicrobianos que habían sido descubiertos recientemente (Muñoz & Geister 1950, 

Forsgren et al. 1974, Thong & Ferrante 1979). Se observó que algunas funciones de los 

leucocitos polimorfonucleares podían verse inhibidas por las tetraciclinas, como la 

quimiotaxis, la fagocitosis, la degranulación o la destrucción de los microorganismos 

fagocitados (Forsgren et al. 1974, Forsgren & Schmeling 1977, Welch et al. 1981, Gabler 

& Creamer 1991). También se describió para las tetraciclinas un efecto inhibidor de la 

generación de radicales libres de oxígeno por parte de los neutrófilos (Gabler & Creamer 



Revisión bibliográfica 

 

98 

1991), lo que influiría en los mecanismos de eliminación de los agentes patógenos. Se ha 

sugerido que estos efectos inhibidores sobre las funciones de los neutrófilos podrían estar 

mediados, al menos en parte, por la quelación de cationes divalentes, especialmente Mg2+ y 

Ca2+ (Kloppenburg et al. 1995a). 

 

Las tetraciclinas también ejercen algunos efectos sobre la proliferación y actividad 

de los linfocitos sanguíneos. Así, Thong y Ferrante en 1979 observaron en estudios 

experimentales in vitro que la doxiciclina y, en menor medida, la tetraciclina y la 

oxitetraciclina eran capaces de ejercer un potente efecto inhibidor de las respuestas 

linfoproliferativas inducidas por mitógenos en linfocitos humanos (Thong & Ferrante 

1979). En modelos in vivo, se ha descrito una disminución de las respuestas de base celular 

en ratones a los que se les habían administrado tetraciclinas, efecto especialmente marcado 

con la doxiciclina (Thong & Ferrante 1980), así como una inhibición de la proliferación de 

las células T en ratas tras la administración de oxitetraciclina, no observándose este efecto 

en la población de células B sanguíneas (Van den Bogert & Kroon 1982).  

 

Posteriormente, se ha descrito una inhibición dosis-dependiente de la proliferación 

de células T tras la adición de minociclina o doxiciclina en cultivos celulares que se 

acompaña de una reducción en la producción de diferentes citocinas por parte de estas 

células, concretamente de TNF-α, IFN-γ e IL-2, así como de una disminución en la 

respuesta frente a IL-2 en los linfocitos T (Kloppenburg et al. 1995b). Otras citocinas cuya 

síntesis parece resultar afectada por las tetraciclinas son la IL-1 y la IL-6 (Milano et al. 

1997, Zanjani et al. 2006). Del mismo modo, se ha descrito una disminución en los niveles 

en sangre de las citocinas derivadas de células T IFN-γ e IL-10, así como de la citocina 

inflamatoria TNF-α en pacientes con infección por Orientia tsutsugamushi tras la 

administración terapéutica de doxiciclina (Chung et al. 2008). No obstante, es importante 

señalar que los efectos que estas sustancias ejercen sobre la síntesis de estos mediadores 

inmunitarios no son iguales en todos los tipos celulares, habiéndose descrito, al contrario 

que para los linfocitos T, un efecto inmunoestimulante para los monocitos/macrófagos 

(Kloppenburg et al. 1996). 

 

El mecanismo por el que se produce esta inhibición de las funciones linfocitarias no 

se encuentra claramente definido, habiéndose propuesto varias hipótesis que podrían 

explicarlo. Así, se ha sugerido que la interferencia en la síntesis proteica mitocondrial (Van 

den Bogert & Kroon 1982) o el efecto de las tetraciclinas como agentes quelantes de 

cationes divalentes sobre los niveles intracelulares de calcio en los linfocitos (Kloppenburg 

et al. 1995b) pueden estar relacionados con esta inhibición. Por otra parte, se ha observado 

que la doxiciclina es capaz no solo de inhibir la proliferación de los linfocitos T, sino 



Revisión bibliográfica 

 

99 

también de inducir la eliminación de estas células mediante apoptosis mediada por la 

interacción Fas/Fas ligando (Liu et al. 1999). 

 

La actividad de las tetraciclinas sobre las poblaciones linfocitarias no se centra 

únicamente en los linfocitos T. En este sentido, Kuzin y colaboradores describieron en 

2001 que la doxiciclina presenta efectos específicos sobre los linfocitos B, bloqueando 

selectivamente algunas de las actividades características de los linfoblastos activados y de 

las células B diferenciadas. Así, se ha descrito que la doxiciclina es capaz de suprimir la 

secreción de inmunoglobulinas y el cambio de clase en las células B in vitro (Kuzin et al. 

2001). Sin embargo, la influencia de las tetraciclinas sobre la síntesis de inmunoglobulinas 

in vivo es controvertida, habiéndose descrito tanto una supresión de la síntesis de 

anticuerpos (Bellahsene & Forsgren 1985) como la ausencia de efecto de estas sustancias 

sobre las respuestas humorales en modelos experimentales (Thong & Ferrante 1980). 

 

Entre todas las propiedades no antimicrobianas de las tetraciclinas probablemente la 

mejor caracterizada sea su habilidad para inhibir a las metaloproteinasas (MMPs), familia 

de endopeptidasas dependientes de zinc que están implicadas en numerosos procesos 

fisiológicos, como el desarrollo embrionario y la remodelación de tejidos, pero cuya 

desregulación participa también en la patogenia de ciertos procesos patológicos, entre ellos 

las neoplasias, la enfermedad periodontal y la artritis reumatoide (Griffin et al. 2010). Las 

MMPs se han clasificado históricamente en función de la especificidad de su sustrato en 

colagenasas (que incluyen, entre otras, las MMP-1, 8 y 13), gelatinasas (MMP-2 y 9), 

estromelisinas (MMP-3, 7, 10 y 11) y matrilisinas, pero actualmente se clasifican en 

función de la estructura de la enzima en cinco grupos de MMPs secretadas y tres de MMPs 

asociadas a la membrana (MT-MMP) (Egeblad & Werb 2002). 

 

Desde los estudios de Golub y colaboradores a principios de los años 80 en los que 

se describía la actividad de la minociclina como inhibidora de la colagenolisis en las encías 

de ratas con diabetes inducida experimentalmente y en fluido gingival de pacientes con 

enfermedad inflamatoria periodontal (Golub et al. 1983), numerosos estudios han 

demostrado esta actividad supresora de las tetraciclinas sobre diferentes MMPs, como 

MMP-2, 8, 9, 12 o 13 (Golub et al. 1987, Suomalainen et al. 1992, Hanemaaijer et al. 

1997, Seftor et al. 1998a, Golub et al. 2001, Lee et al. 2001, Grenier et al. 2002, Fiotti et al. 

2009, Roomi et al. 2010). Se ha observado que estos fármacos son capaces de inhibir la 

actividad de MMPs intersticiales de una gran variedad de fuentes celulares y tisulares, 

como las originadas en neutrófilos, macrófagos, osteoblastos, condrocitos o células 

tumorales, o las que se hallan en piel o córnea (Kloppenburg et al. 1995a). Sin embargo, se 

ha sugerido que las enzimas que parecen estar implicadas de forma más directa en los 



Revisión bibliográfica 

 

100 

procesos fisiológicos de remodelado y reparación tisular, como la MMP-1, podrían ser más 

resistentes al efecto inhibidor de las tetraciclinas (Suomalainen et al. 1992).  

 

El mecanismo por el que las tetraciclinas son capaces de inhibir las MMPs no ha 

sido aún completamente dilucidado aunque se cree que ejercen sus efectos antiproteolíticos 

tanto por la inhibición directa de las MMPs como por la inhibición de su expresión (Griffin 

et al. 2010). La inhibición directa de las MMPs parece estar mediada por la interacción 

entre la molécula de la tetraciclina e iones metálicos en la propia MMP, ya que la 

supresión de estas enzimas puede revertirse por la adición de Ca2+ o Zn2+ (Golub et al. 

1983, Golub et al. 1987, Griffin et al. 2010). Se ha observado que las tetraciclinas 

modificadas químicamente (CMT), que han perdido su capacidad antimicrobiana al 

eliminarse el grupo dimetilamino de la posición C4 del anillo A, mantienen sus 

propiedades antiproteolíticas, por lo que ambas propiedades parece que son independientes 

entre sí y dependen de regiones diferentes de la molécula del fármaco (Golub et al. 1987, 

Acharya et al. 2004). Esta característica podría ser beneficiosa de cara a la utilización a 

largo plazo del grupo de las tetraciclinas en enfermedades no infecciosas, ya que mediante 

el empleo de estas CMT sin actividad antibiótica se podría evitar la aparición de 

resistencias bacterianas a estas sustancias (Golub et al. 1987). 

 

La eficacia de la inhibición de estas enzimas por una tetraciclina en concreto 

depende tanto de las características de la tetraciclina como de la MMPs y del pH, aunque el 

mecanismo por el que existen estas diferencias es desconocido (Golub et al. 1991, Griffin 

et al. 2010).  

 

La supresión de ciertas MMPs es beneficiosa en muchos procesos patológicos en 

los que la proteolisis de la matriz extracelular contribuye a la patogenia y en las que se han 

encontrado niveles elevados de estas enzimas, como en enfermedades de base inflamatoria 

y/o tumoral (Griffin et al. 2010), lo que ha justificado el estudio del posible empleo de las 

tetraciclinas en un gran número de enfermedades tanto en animales como en el hombre. 

Entre estos estudios destacan los llevados a cabo en modelos de artritis reumatoide y 

osteoartritis, en los que se ha confirmado que en cultivos de células sinoviales reumatoides 

obtenidos de pacientes con esta patología las tetraciclinas (más concretamente doxiciclina, 

CMT-1 y CMT-3) actúan inhibiendo la invasión de la matriz del cartílago por estas células 

y la actividad catalítica de la MMP-8, así como su síntesis al disminuir la expresión de 

mRNA de esta MMP (Hanemaaijer et al. 1997, Seftor et al. 1998a). Asimismo, se ha 

descrito en la bibliografía que el empleo de minociclina en medicina humana en pacientes 

con artritis reumatoide podría ser beneficioso (Tilley et al. 1995, O'Dell et al. 1999), así 

como el uso de doxiciclina para el tratamiento de osteoartritis en el perro (Nganvongpanit 

et al. 2009).  



Revisión bibliográfica 

 

101 

Son también numerosos los trabajos llevados a cabo en medicina humana 

evaluando el papel de las tetraciclinas en el tratamiento de enfermedades inflamatorias 

periodontales, habiéndose mostrado resultados favorables a este respecto, con disminución 

de la colagenolisis en los tejidos blandos y disminución de la resorción ósea (Golub et al. 

1983, Golub et al. 2001, Grenier et al. 2002, Golub et al. 1991, Ramamurthy et al. 1998b). 

 

En cuanto al posible empleo de las tetraciclinas en terapias anticancerígenas, hasta 

el momento se han documentado resultados prometedores en la reducción de la capacidad 

invasiva y de metástasis en líneas celulares humanas de melanoma, adenocarcinoma de 

colon, fibrosarcoma y cáncer cervical y ovárico, así como en modelos experimentales in 

vivo de cáncer de mama (Seftor et al. 1998b, Lee et al. 2001, Duivenvoorden et al. 2002, 

Roomi et al. 2010). 

 

Por otra parte, se ha observado en modelos experimentales de úlceras corneales 

estériles en conejo que la administración de tetraciclina sistémica es capaz de reducir dicha 

ulceración (Seedor et al. 1987). Asimismo, la aplicación tópica de las tetraciclinas podría 

ser beneficiosa en el tratamiento de heridas crónicas, al haberse detectado una 

normalización de la curación de las heridas en ratas diabéticas tras la aplicación de CMT-2 

(Ramamurthy et al. 1998a). Otros trabajos que cabe destacar evalúan el papel 

neuroprotector de estas sustancias en patologías neurodegenerativas, así como su uso en el 

tratamiento temprano de patologías cardiacas (Zanjani et al. 2006, Familian et al. 2007, 

Rizzi et al. 2010). 

 

Además de esta actividad sobre las metaloproteinasas, se ha constatado que las 

tetraciclinas presentan otras propiedades que pueden ayudar a sus efectos antiinflamatorios 

e inmunomoduladores. En este sentido, se ha observado que las tetraciclinas dan lugar a 

una disminución específica de los niveles de la sintasa de óxido nítrico (NOS) al inhibir la 

expresión de ARNm de NOS, así como a una disminución en la producción de NO. Se ha 

sugerido que esta habilidad de las tetraciclinas para actuar sobre el NO podría ser la 

responsable, al menos de forma parcial, de la amplia variedad de propiedades que han 

demostrado poseer estas sustancias (Amin et al. 1996, Milano et al. 1997, Amin et al. 

1997, D'Agostino et al. 1998). Además, ciertas CMT son capaces de inhibir no sólo la 

producción de NO, sino también de prostaglandina E2 en diferentes tipos celulares 

activados (Patel et al. 1999). A estos efectos sobre el NO y prostaglandina habría que 

añadir los efectos descritos previamente de las tetraciclinas sobre otros mediadores 

proinflamatorios, como TNF-α, IL-1 o IL-6, por parte de las células del sistema 

inmunitario (Kloppenburg et al. 1995b, Milano et al. 1997). 

 



Revisión bibliográfica 

 

102 

A pesar de la descripción en la bibliografía de esta amplia variedad de propiedades 

de la doxiciclina y demás tetraciclinas y de la existencia de un elevado número de trabajos 

en marcha evaluando estas sustancias para su empleo basado en sus funciones no 

antimicrobianas en patologías inflamatorias, inmunomediadas o tumorales en medicina 

humana, en veterinaria las referencias bibliográficas que pueden encontrarse se centran 

básicamente en el empleo de estas sustancias por su papel como antimicrobianos.  

 



 

103 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3. OBJETIVOS 
 

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

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Objetivos

 

105 

 

 

 

Los conocimientos existentes en la actualidad sobre la inmunopatogenia y la 

respuesta inmunitaria desarrollada en perros infectados por E. canis son escasos y, en 

algunos casos, contradictorios. Este hecho nos condujo al inicio de este trabajo de 

investigación a proponernos como principal objetivo la caracterización de las poblaciones 

linfocitarias en los perros afectados por esta enfermedad. 

 
Sin embargo, debido a la existencia de un escaso número de trabajos previos que 

hubiesen evaluado las subpoblaciones linfocitarias en el perro y a la ausencia de unos 

valores de referencia que pudiesen servir de ayuda a la hora de analizar las alteraciones de 

estas poblaciones celulares en diversas enfermedades, se hizo imprescindible comenzar el 

estudio estableciendo unos valores de referencia propios para el inmunofenotipo en la 

especie canina. Asimismo, fue necesario evaluar si estos valores podían estar influenciados 

por ciertas variables, como la edad, la raza o el sexo. El establecimiento de dichos valores 

de referencia permitiría valorar si los perros con EMC mostraban alguna modificación en 

comparación con los perros sanos, así como evaluar las alteraciones más frecuentes de las 

poblaciones linfocitarias en perros con otras enfermedades, tales como patologías 

oncológicas, traumatológicas, digestivas o mucocutáneas (incluyendo en estas últimas las 

enfermedades oftalmológicas, dermatológicas y de la cavidad oral). 

 
Además, y dado que se trataba de estudiar el sistema inmunitario en la especie 

canina, se consideró necesario evaluar, además del inmunofenotipo, la síntesis de citocinas, 

en concreto IFN-γ y TNF-α, clásicamente consideradas citocinas de las respuestas 

inmunitarias de tipo 1, e IL-6 e IL-10, consideradas citocinas de las respuestas de tipo 2.  

 
Por otra parte, con la finalidad de evaluar la respuesta inmunitaria desarrollada en el 

curso del tratamiento de la EMC, perros diagnosticados de esta enfermedad fueron tratados 

con doxiciclina a la dosis y con la duración del tratamiento recomendadas por el Grupo de 

Estudio de Enfermedades Infecciosas del Colegio Americano de Medicina Interna 

Veterinaria (ACVIM), es decir, 10 mg/kg/24horas durante 28 días, y fueron sometidos a 

una serie de controles periódicos para poder evaluar a corto y medio plazo (hasta 6 meses) 

la evolución de sus poblaciones linfocitarias y de la síntesis de citocinas. En el caso de 

haberse observado alteraciones en el inmunofenotipo o concentración de citocinas en 

sangre de estos perros, la realización de estos controles permitiría evaluar si estas 

alteraciones se normalizaban o no tras la terapia, o bien acontecían otras modificaciones. 



Objetivos 

 

106 

 A su vez, y debido a la descripción de que la doxiciclina podría poseer efectos 

inmunomoduladores, se decidió llevar a cabo estos mismos controles periódicos en un 

grupo de perros sanos a los que se les administraría este fármaco a la misma dosis y 

durante el mismo tiempo que lo previsto para los perros con EMC, con el fin de comprobar 

si estos potenciales efectos sobre el sistema inmunitario se reflejaban en las poblaciones 

linfocitarias y en la síntesis de citocinas. De esta forma nos proponíamos evaluar el efecto 

de la doxiciclina sobre el sistema inmunitario (inmunofenotipo y síntesis de citocinas) 

tanto en perros sanos como en perros con ehrlichiosis y comparar esta respuesta entre 

ambos grupos. 

 
Por lo tanto, podemos concretar los objetivos específicos planteados en este trabajo 

de investigación en los siguientes: 

 
1. Establecer los valores de referencia de las subpoblaciones linfocitarias sanguíneas 

(inmunofenotipo) en la especie canina mediante el empleo de citometría de flujo y 

determinar la concentración en sangre periférica de las citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-6 e 

IL-10. 

 
2. Evaluar las posibles variaciones existentes en el inmunofenotipo y concentración de 

dichas citocinas en la especie canina en función de variables fisiológicas como la edad, 

el sexo o la raza. 

 
3. Caracterizar el inmunofenotipo y determinar la concentración plasmática de IFN-γ, 

TNF-α, IL-6 e IL-10 en perros con EMC. 

 
4. Evaluar la posible existencia de diferencias en el inmunofenotipo y la concentración de 

dichas citocinas entre los perros con EMC y los perros sanos. 

 
5. Evaluar las posibles diferencias existentes en el inmunofenotipo y concentración 

plasmática de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10 entre las fases subclínica y clínicas (aguda o 

crónica) de la enfermedad.  

 
6. Comparar los valores del inmunofenotipo y de los parámetros biopatológicos rutinarios 

en los perros con EMC con los valores obtenidos en perros con otras enfermedades. 

 



Objetivos 

 

107 

7. Evaluar la evolución a lo largo del tiempo del inmunofenotipo, secreción de citocinas y 

valores hematológicos y de la bioquímica sanguínea en perros sanos tras la 

administración de doxiciclina (durante 28 días a dosis 10 mg/kg/24horas). 

 
8. Valorar la evolución a lo largo del tiempo del inmunofenotipo, secreción de citocinas, 

valores hematológicos y de la bioquímica sanguínea en perros con EMC tras el 

tratamiento con doxiciclina y compararla con la evolución en perros sanos. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

108 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

109 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4. MATERIALES Y MÉTODOS 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

110 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Materiales y métodos 

 

111 

 

4.1. PLAN DE TRABAJO 

 

 
Con la finalidad de alcanzar los objetivos descritos previamente se estableció el 

siguiente plan de trabajo, que se describirá en forma de bloques para facilitar su 

comprensión: 

 
En primer lugar, fue necesario seleccionar los animales que se incluirían en los 

diferentes grupos (perros sanos, con ehrlichiosis o con otras patologías). Dicha selección 

de animales se llevó a cabo de forma secuencial en el tiempo, alargándose este estudio 

longitudinal durante más de dos años. 

 
La inclusión de los animales en un grupo o en otro se basó en una serie de criterios 

de inclusión o exclusión que se describirán con detalle posteriormente, pero entre los que 

cabe destacar el papel fundamental de las técnicas de diagnóstico de ehrlichiosis 

empleadas. Asimismo, debido a que nuestra zona geográfica es una zona considerada como 

endémica para la leishmaniosis canina, otra enfermedad que se ha descrito que puede 

alterar el sistema inmunitario de los perros afectados, todos los animales de este trabajo, 

independientemente del grupo en el que finalmente fuesen incluidos, debían ser 

considerados negativos para esta patología.  

 
En los controles realizados a cada uno de los perros del estudio se llevaron a cabo 

una anamnesis y exploración física completas y la extracción de muestras de sangre para la 

realización de hematología y bioquímica sanguíneas, citometría de flujo, IFI y PCR frente 

a E. canis y L. infantum y determinación de la concentración de las citocinas IFN-γ, IL-6, 

IL-10 y TNF-α. 

 
Con los resultados obtenidos se procedió, en primer lugar, al establecimiento de 

unos valores de referencia para los parámetros biopatológicos analizados en los perros 

sanos de nuestro trabajo para, a continuación, determinar los valores medios de estos 

mismos parámetros en los perros con EMC y los perros con otras patologías.  

 
Todos estos resultados permitieron realizar posteriormente un estudio comparativo 

de la hematología y la bioquímica sanguíneas, el inmunofenotipo y la concentración de las 

citocinas plasmáticas mencionadas entre los diferentes grupos de animales. 

 



Materiales y métodos 

 

112 

 
Además, debido a los potenciales efectos inmunomoduladores atribuidos a la 

doxiciclina, se planteó la realización de un ensayo clínico mediante el cual se trataría de 

evaluar el efecto de la administración de este fármaco sobre el sistema inmunitario canino, 

tanto en perros afectados de EMC, enfermedad en la que está indicado el tratamiento con 

doxiciclina, como en perros sanos. 

 
Para ello, se organizó el plan de tratamiento con doxiciclina en los perros con EMC 

y en los perros sanos a los que se podría administrar el fármaco, así como los controles a 

realizar para poder evaluar posteriormente la evolución de los diferentes parámetros 

analizados en este estudio a lo largo del tiempo. En total, de cada uno de los animales a los 

que se les administró doxiciclina, se llevaron a cabo 4 controles (los días 0, 30, 90 y 180, 

considerando como día 0 el día del inicio del tratamiento). En dichos controles se 

realizaron una anamnesis y exploración física completas, así como la extracción de 

muestras de sangre, para la determinación de los parámetros biopatológicos estudiados en 

este trabajo. 

 
Con los datos referentes a los controles realizados a lo largo del tiempo se llevó a 

cabo un estudio del efecto de la administración de doxiciclina sobre el inmunofenotipo, la 

concentración de citocinas plasmáticas, la hematología y la bioquímica sanguíneas en los 

perros sanos, así como una evaluación de las respuestas de los citados parámetros en los 

perros con ehrlichiosis tras el tratamiento con este fármaco.  

 
Posteriormente, se comparó la evolución de estos parámetros entre los perros sanos 

y los perros con ehrlichiosis tras la administración de doxiciclina. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Materiales y métodos 

 

113 

 

 

4.2. ANIMALES 

 
 

En este trabajo de investigación han sido incluidos finalmente un total de 167 

perros de diferentes procedencias. La selección de los animales y la recogida de muestras 

comenzaron en noviembre de 2007 y finalizaron en marzo de 2010.  

 

En todo momento se contó con el consentimiento informado de los propietarios y/o 

responsables de todos los animales y se cumplieron los requisitos deontológicos y éticos 

para la realización del estudio, habiéndose obtenido el informe favorable del Comité de 

Experimentación Animal (CEA) de la Universidad Complutense de Madrid (UCM). 

 
Entre los animales incluidos en el estudio, 13 pertenecían al animalario de la 

Facultad de Veterinaria de la UCM y 101 procedían de diferentes consultas del Hospital 

Clínico Veterinario Complutense (HCVC), a donde habían acudido para ser atendidos por 

diversos motivos médicos o quirúrgicos.  

 
18 animales pertenecían a propietarios particulares que habían decidido participar 

en el estudio de forma voluntaria.  

 
Otros 16 perros procedían de las siguientes clínicas veterinarias privadas 

colaboradoras: Clínica Veterinaria El Mundo Animal, de Villanueva de la Vera, Cáceres; 

Clínica Veterinaria Viñas Viejas, de Boadilla del Monte, Madrid; y Centro Médico 

Veterinario Los Álamos, de Torrelodones, Madrid.  

 
Asimismo, se contó con la participación de la Unidad de Guías Caninos de la 

Policía Nacional, que permitió la inclusión en este estudio de un total de 12 animales.  

 
Por último, otros 7 perros procedían de las siguientes sociedades protectoras de 

animales de la Comunidad Autónoma de Madrid: Perrikus-Asociación en Defensa de los 

Animales Sierra Norte, Asociación Nacional de Amigos de los Animales (ANAA) y 

Asociación para la Liberación y Bienestar Animal (ALBA). 

 
Cada uno de estos animales fue incluido en uno de los tres grupos establecidos en 

este trabajo: grupo de perros sanos, grupo de perros con EMC y grupo de perros atendidos 



Materiales y métodos 

 

114 

por diversas enfermedades diferentes a la EMC. Los criterios empleados en la clasificación 

de los animales en un grupo u otro se detallarán a continuación, en el aparatado 4.3.4. de 

los Materiales y Métodos de la presente tesis doctoral.  

 

 

 

 

4.3. PROTOCOLO DIAGNÓSTICO Y CRITERIOS DE 

CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES      

 

 
Con el fin de clasificar a los animales del estudio en los grupos mencionados, se 

llevó a cabo una anamnesis detallada a los propietarios o responsables de los animales y/o 

se consultaron sus historiales médicos.  

 
Además se realizaron una exploración física completa y una toma de muestras 

sanguíneas para su posterior procesamiento para la realización de una analítica completa, 

IFI frente a E. canis y L. infantum, PCR frente a ambos agentes, citometría de flujo para la 

determinación del inmunofenotipo y, en el caso de los perros sanos y en aquellos con EMC 

a los que se administró doxiciclina, ELISAs comerciales para la determinación de la 

concentración en sangre de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α.  

 
4.3.1. ANAMNESIS 

 
En todos los animales se llevó a cabo una detallada recogida de datos y una 

completa anamnesis para obtener la máxima información acerca de los signos clínicos y 

tratamientos recibidos con anterioridad, para asegurar su correcta inclusión en los 

diferentes grupos. 

 
Se prestó especial atención a los datos epidemiológicos o clínicos referentes a la 

raza del animal, su edad, el sexo, frecuencia de presentación de parásitos externos, aptitud 

y hábitat, motivo de consulta, sintomatología principal, diagnósticos previos de 

enfermedades infecciosas o parasitarias (especialmente ehrlichiosis o leishmaniosis), 

tratamientos recibidos (especialmente tratamientos con doxiciclina u otras tetraciclinas), 

etc.  

 

 



Materiales y métodos 

 

115 

4.3.2. EXPLORACIÓN FÍSICA  

 
En todos los casos se llevó a cabo una exploración física completa, en la que se 

valoraron la coloración de las mucosas, el tiempo de relleno capilar y el grado de 

hidratación, se exploraron los nódulos linfáticos, se tomó la temperatura rectal y se 

realizaron una auscultación cardíaca y pulmonar y una palpación abdominal. En algunos 

casos fue necesaria la realización de otras exploraciones más específicas, como, por 

ejemplo, una exploración traumatológica o neurológica completas.  

 

Asimismo, en algunos de los animales, principalmente en aquellos que fueron 

atendidos en el HCVC o en las clínicas veterinarias privadas colaboradoras por la 

presentación de sintomatología clínica diversa, fue necesario realizar pruebas 

complementarias, según necesidad, como radiografías, ecografías, análisis coprológicos, 

citologías, biopsias, etc., cuyos resultados fueron recogidos y condujeron al diagnóstico de 

patologías oncológicas, mucocutáneas, traumatológicas o digestivas. 

 

 

4.3.3. TOMA DE MUESTRAS SANGUÍNEAS 

 
De cada uno de los perros incluidos en el estudio se obtuvo una muestra sanguínea 

mediante punción de la vena cefálica o yugular. La sangre obtenida se recogió en tres 

tubos, dos con el anticoagulante EDTA (tetra-acetato de etilenediamida) y uno con 

heparina.  

 

Una de las muestras en EDTA se empleaba para la realización de la incubación con 

los anticuerpos monoclonales conjugados con sondas fluorescentes para su posterior 

análisis en el citómetro de flujo. La otra muestra en EDTA se empleaba para la realización 

de una hematología y posterior extracción de ADN para pruebas moleculares. 

 

La muestra sanguínea mantenida en tubos con heparina era centrifugada para la 

separación del plasma a 2500 rpm durante 20 minutos para la realización de la bioquímica 

sanguínea y las pruebas serológicas para la detección de anticuerpos frente a E. canis y L. 

infantum. Asimismo, esta muestra era empleada para la realización de los ELISAs para la 

determinación de la concentración plasmática de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10. 

 

En el apartado número 4.5. del capítulo de materiales y métodos de esta tesis 

doctoral, se detallarán las técnicas utilizadas para la realización de este estudio a partir de 

las muestras sanguíneas obtenidas en cada control. 



Materiales y métodos 

 

116 

 

4.3.4. CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES  

 
De acuerdo con el plan de trabajo establecido al inicio de este estudio, los animales 

incluidos debían ser clasificados en tres grupos. Los criterios de inclusión empleados para 

cada uno de los citados grupos se describen a continuación: 

 
� Grupo 1: perros sanos

 
Los criterios de inclusión de los animales en este grupo fueron: 

 

• No presentar sintomatología clínica de enfermedad ni alteraciones en la 

exploración física. 

• No observarse alteraciones en su analítica sanguínea. 

• Presentar un resultado serológico negativo frente a E. canis, es decir, presentar 

títulos de anticuerpos determinados mediante IFI frente a este agente inferiores 

a 1:80, punto de corte empleado para el diagnóstico de esta enfermedad en 

nuestro laboratorio.  

• No observarse amplificación de ADN de Ehrlichia/Anaplasma/Neorickettsia 

spp. mediante PCR a partir de sus muestras sanguíneas.   

• Presentar un resultado serológico negativo frente a L. infantum (títulos 

obtenidos mediante IFI inferiores a 1:100) y no mostrarse amplificación de 

ADN de este agente mediante PCR en sus muestras sanguíneas. 

• No haber sido diagnosticados con anterioridad de EMC ni leishmaniosis canina 

ni haber padecido patologías importantes a lo largo de su vida.  

• Asimismo, no debían haber recibido ningún tratamiento con tetraciclinas con 

anterioridad. 

 
12 de los animales incluidos en el Grupo 1 de este estudio serían seleccionados para 

llevar a cabo el ensayo clínico de administración de doxiciclina, como se detallará 

posteriormente. En estos animales, tras la obtención del consentimiento informado de sus 

propietarios y/o responsables, debía asegurarse la administración del fármaco a la dosis y 

durante el tiempo que se describe en el apartado 4.4.1. y debía disponerse al final del 

estudio de todos los controles clínicos y laboratoriales descritos en el apartado 4.4.2. En los 

demás animales incluidos en este grupo sólo se realizó un único control clínico y 

laboratorial. 

 



Materiales y métodos 

 

117 

 

� Grupo 2: perros con EMC

 

Los criterios seguidos para la inclusión de los animales en el Grupo 2 fueron: 

 

• Presentar un resultado serológico positivo mediante IFI frente a E. canis y/o 

mostrar amplificación de ADN de E. canis mediante PCR.  

• Presentar un resultado serológico negativo frente a L. infantum (títulos 

obtenidos mediante IFI inferiores a 1:100) y no mostrar amplificación de ADN 

de este agente mediante PCR en sus muestras sanguíneas. 

• No haber sido diagnosticados con anterioridad de EMC ni leishmaniosis canina.  

• No haber recibido ningún tratamiento con tetraciclinas con anterioridad. 

 

Por otra parte, entre los perros que cumplieron con los criterios de inclusión 

descritos para el Grupo 2 del estudio se trató de hacer una subclasificación en base a la fase 

de la enfermedad en la que se encontrasen. Debido a la dificultad existente en la infección 

natural por E. canis para diferenciar las tres fases típicamente descritas para la enfermedad 

(aguda, subclínica y crónica) (Woody & Hoskins 1991), se decidió diferenciar entre 

aquellos perros que se encontraban en la fase subclínica (es decir, eran asintomáticos) y los 

que se encontraban, por el contrario, en una fase clínica (sin diferenciar entre aguda o 

crónica). 

 

Todos los animales con EMC incluidos en este estudio serían sometidos al 

tratamiento con doxiciclina recomendado por el Grupo de Estudio de Enfermedades 

Infecciosas del Colegio Americano de Medicina Interna Veterinaria (ACVIM) para hacer 

frente a la infección por E. canis. Sin embargo, se estableció que sólo aquellos perros con 

EMC tratados con doxiciclina de los que se pudo disponer al final del estudio de todos los 

controles clínicos y laboratoriales que se describen en el apartado 4.4.2. (días 0, 30, 90 y 

180) serían incluidos en el ensayo clínico del efecto de la administración de este fármaco 

en el perro. 

 

� Grupo 3: perros afectados por otras patologías

 

Este grupo está constituido por los perros atendidos por diversas enfermedades 

diferentes a la EMC y en todos ellos había sido necesaria la obtención de una muestra 

sanguínea, por diferentes motivos médicos o quirúrgicos. En todos los animales incluidos 

en este grupo sólo se llevó a cabo un único control clínico y laboratorial. 

 

 



Materiales y métodos 

 

118 

Los criterios que se siguieron para incluir a los animales en el Grupo 3 son: 

 

• Presentar un resultado serológico mediante IFI negativo frente a E. canis y L. 

infantum.  

• No observarse amplificación de ADN de Ehrlichia spp. ni de Leishmania spp. 

mediante PCR a partir de sus muestras sanguíneas.   

• No haber sido diagnosticados con anterioridad de EMC ni leishmaniosis canina  

• No haber recibido ningún tratamiento con tetraciclinas con anterioridad.  

• Presentar sintomatología clínica y alteraciones laboratoriales compatibles con 

enfermedades que pudieran ser clasificadas en alguna de las siguientes 

categorías: mucocutáneas (cuando se trataba de enfermedades oftalmológicas, 

dermatológicas o de afectación de la cavidad oral), oncológicas, digestivas o 

traumatológicas.  

 
 

 

4.4. ENSAYO CLÍNICO: ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA 

 

 
De acuerdo con el plan de trabajo de esta tesis doctoral, los animales con EMC 

fueron sometidos a un protocolo de tratamiento con doxiciclina y controlados de forma 

periódica para poder evaluar su respuesta y la evolución de los parámetros laboratoriales 

estudiados durante 6 meses. Del mismo modo, 12 de los perros del Grupo 1 de animales 

sanos recibieron doxiciclina a la misma dosis y durante el mismo tiempo que los perros 

con EMC y se realizó el mismo seguimiento, para poder disponer así de un grupo de perros 

control en el ensayo clínico y evaluar si la doxiciclina es capaz de ejercer efectos 

inmunomoduladores en la especie canina. 

 

 

4.4.1. PROTOCOLO DE TRATAMIENTO CON DOXICICLINA  

 

Los perros que durante la realización de este estudio fueron diagnosticados de 

ehrlichiosis fueron tratados según el protocolo habitualmente recomendado por el Servicio 

de Diagnóstico de Ehrlichiosis y Leishmaniosis Canina de la Facultad de Veterinaria de la 

Universidad Complutense de Madrid, que coincide con el protocolo de elección descrito 

por el Grupo de Estudio de Enfermedades Infecciosas del Colegio Americano de Medicina 

Interna Veterinaria para esta enfermedad: doxiciclina a dosis de 10 mg por kilogramo de 



Materiales y métodos 

 

119 

peso cada 24 horas, administrada durante 28 días. Así, se administró “Doxiciclina Normon 

100 mg grageas” (Genéricos Normon, Madrid, España) o “Ronaxan® comprimidos” 

(Merial laboratorios, Barcelona, España), en función del peso del animal al inicio del 

tratamiento.  

 

Además, debido a las características de esta tetraciclina, se recomendaba en todos 

los casos la administración del fármaco con alimento, para minimizar los efectos 

secundarios sobre el sistema gastrointestinal, evitando siempre la administración con 

productos lácteos.  

 

El comienzo de la administración de doxiciclina a cada animal era considerado el 

punto de inicio del estudio en ese caso (o día 0).  

 

El fármaco fue administrado siguiendo este mismo protocolo en el grupo control de 

perros sanos.  

 

 

4.4.2. PLANIFICACIÓN DE LOS CONTROLES  

 

Todos los animales incluidos en el ensayo clínico, es decir, los perros sanos a los 

que se les administró doxiciclina y los perros con EMC tratados con este fármaco, fueron 

sometidos a una serie de controles programados. En dichos controles, como se ha descrito 

previamente, se realizaba una anamnesis completa, una exploración física y una toma de 

muestras sanguíneas para la realización de una analítica sanguínea (con hematología, 

bioquímica y proteinograma), IFI frente a Ehrlichia spp. y Leishmania spp., PCR frente a 

ambos agentes, estudio inmunofenotípico mediante citometría de flujo y determinación 

mediante ELISA de la concentración plasmática de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10. 

 

En concreto, en todos estos animales se llevaron a cabo 4 controles a lo largo del 

estudio: 

 

• Día 0: se corresponde con el momento del inicio del tratamiento con 

doxiciclina. La toma de muestras sanguíneas se realizó en todos los casos antes 

de la administración del fármaco. 

• Día 30: se trata del control realizado al finalizar el tratamiento con doxiciclina.  

• Día 90: control llevado a cabo 3 meses después del inicio del tratamiento. 

• Día 180: se trata del último control y se llevó a cabo transcurridos 6 meses del 

inicio del tratamiento con doxiciclina. 

 



Materiales y métodos 

 

120 

En este ensayo clínico del efecto de la administración de doxiciclina en la especie 

canina fueron excluidos todos aquellos perros del Grupo 2 (perros con EMC) de los que, a 

pesar de la planificación inicial de los controles descritos, no se pudo disponer de un 

seguimiento completo. 

 

 

 

 

4.5. TÉCNICAS LABORATORIALES EMPLEADAS 

 

 
A partir de las muestras sanguíneas recogidas de cada animal en los 

correspondientes controles, se realizaron una analítica completa, una IFI frente a E. canis y 

L. infantum, una PCR frente a ambos agentes, un estudio inmunofenotípico mediante 

citometría de flujo y una serie de ELISAs comerciales para la determinación de la 

concentración en sangre de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α.  

 

A continuación se describirá la metodología empleada en el procesamiento de las 

muestras. 

 
4.5.1. HEMATOLOGÍA Y BIOQUÍMICA SANGUÍNEA   

 
En el estudio de las muestras sanguíneas de los perros del estudio, los parámetros 

que fueron evaluados son los siguientes: 

 

• Parámetros hematológicos: hematocrito, hemoglobina, recuento de glóbulos 

rojos, volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media 

(HCM), concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM), recuento 

de glóbulos blancos, fórmula leucocitaria y recuento plaquetar. En la realización 

de la hematología se ha empleado el citómetro de flujo ADVIA® 120 (Siemens 

Healthcare Diagnosis, Barcelona, España). 

 

• Parámetros bioquímicos: medición de los valores plasmáticos de glucosa, urea, 

creatinina, proteínas totales y ALT. En la determinación de los valores de 

glucosa, urea, creatinina y ALT se emplearon técnicas enzimáticas 

colorimétricas (Bradford Diagnostics, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, 

USA, y Thermo Scientific, Madrid, España) y, en el caso de las proteínas 

totales, se realizó una determinación colorimétrica basada en el principio de la 



Materiales y métodos 

 

121 

reacción de Biuret (Bradford Diagnostics, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, 

USA). Asimismo, se realizó un estudio de separación electroforética de las 

proteínas para la determinación del proteinograma, mediante el empleo de una 

técnica de electroforesis en gel de agarosa (Hydrasys®, Sebia Hispania S.A., 

París, Francia).  

 

Los valores de referencia para la especie canina de la hematología, análisis 

bioquímico y proteinograma empleados en este estudio quedan reflejados en la Tabla 6. 

  
Tabla 1: Valores hematológicos, bioquímicos y del proteinograma de referencia para la especie canina 

 

Parámetros hematológicos 
Valores de referencia para la 

especie canina 

Hematocrito (%) 40,00-63,00 

Hemoglobina (g/dl) 13,00-21,00 

Glóbulos rojos x 106/µl 5,70-8,90 

VCM (fl) 64,00-78,00 

HCM (pg) 21,00-26,00 

CHCM (g/dl) 30,00-36,00 

Plaquetas x 103/µl 150,00-337,00 

Leucocitos x 103/µl 4,60-17,40 

Neutrófilos /µl (%) 3000-11500 (45,00-76,00) 

Linfocitos /µl (%) 1000-4800 (16,00-45,00) 

Monocitos /µl (%) 150-1350 (1,00-8,00) 

Eosinófilos /µl (%) 100-1250 (1,00-10,00) 

Basófilos /µl (%) 0-100 (0,00-2,00) 

Parámetros bioquímicos  

Glucosa (mg/dl) 19,00-124,00 

Urea (mg/dl) 8,00-33,00 

Creatinina (mg/dl) 0,70-1,60 

ALT (GPT) (U/l) 28,00-78,00 

Proteinograma  

Proteínas totales (g/dl) 5,00-7,00 

Albúmina g/dl (%) 2,3-3,4 (41,00-60,00) 

Alfa 1 g/dl (%) 0,13-0,38 (2,5-5,50) 

Alfa 2 g/dl (%) 0,62-1,60 (12,50-23,50) 

Beta g/dl (%) 0,60-1,80 (12,00-26,00) 

Gamma g/dl (%) 0,25-0,90 (5,00-13,00) 

Ratio Albúmina/Globulinas (A/G) 0,7-1,5 

 



Materiales y métodos 

 

122 

4.5.2. DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO: INMUNOFLUORESCENCIA 

INDIRECTA (IFI)  

 
El plasma obtenido de las muestras de cada animal mediante centrifugación de la 

sangre con heparina fue empleado para la realización de un análisis serológico mediante la 

técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) en el Servicio de Diagnóstico de 

Ehrlichiosis y Leishmaniosis Canina de la Facultad de Veterinaria de la Universidad 

Complutense de Madrid. 

 

Esta técnica tiene como finalidad la detección de la presencia de una respuesta 

inmunitaria humoral frente a un agente patógeno en concreto. Para lograr este objetivo 

debe detectarse la presencia de anticuerpos en el animal frente a dicho agente, buscándose 

en este caso la detección de anticuerpos frente a E. canis y/o L. infantum. 

 

4.5.2.1. Antígenos empleados 

 

Para la detección de anticuerpos frente a E. canis se empleó como antígeno el 

sobrenadante de la línea celular macrofágica canina DH82 (ATCC® number: CRL-10389) 

infectada con E. canis cepa Madrid, aislada por nuestro grupo de trabajo (número de 

acceso en GenBank: AY394465) (Imagen 1). El porcentaje de células infectadas en el 

cultivo era como mínimo de un 50% para su empleo en la técnica de IFI. 

 

             
 

 

 

 

En el caso del diagnóstico serológico de L. infantum, el antígeno empleado procedía 

de un cultivo de promastigotes de L. infantum L-75 en medio NNN. 

 

Imagen 1: Imagen de microscopio óptico de infección de la línea celular DH82 por E. canis, 
cepa Madrid, con tinción May-Grünwald-Giemsa (100X)  



Materiales y métodos 

 

123 

En ambos casos, el antígeno se obtuvo a partir del sobrenadante o fase líquida de 

los cultivos y se purificó mediante sucesivos lavados con PBS (phosphate buffer solution) 

y posterior centrifugación a 150 g durante 10 minutos a 22 ºC. Tras el último lavado se 

resuspendió el precipitado en PBS para obtener una solución limpia. Tras comprobar la 

densidad celular en el microscopio, se colocaron 20 µl de antígeno en cada pocillo de los 

portas esmerilados especiales para inmunofluorescencia que constan de 18 pocillos de 4 

mm de diámetro (Cell-line®, Cultek S.L.U., Madrid, España) (Imagen 2). Tras depositar el 

antígeno en los pocillos, se dejaron secar al aire y posteriormente se congelaron los portas 

a -20 ºC hasta su empleo. En el momento de su uso se descongelaban previamente a 

temperatura ambiente durante unos 30-45 minutos. 

 

 
Imagen 2: Portaobjetos para inmunofluorescencia indirecta 

 
4.5.2.2. Técnica 

 

El protocolo de la técnica de IFI empleada fue similar para ambos agentes, E. canis 

y L. infantum, sólo variando de una a otra el antígeno utilizado en la preparación de los 

portas, las diluciones seriadas de las muestras plasmáticas de los perros y los puntos de 

corte. 

 

El protocolo de IFI que se sigue en nuestro laboratorio comprende los siguientes 

pasos: 

 

• En primer lugar se realizan las diluciones seriadas en microplacas de las 

muestras plasmáticas problema en PBS a pH 7,2. Las diluciones empleadas 

inicialmente para la IFI frente a E. canis son de 1:40, 1:80, 1:160 y 1:320, y 

frente a L. infantum son de 1:50, 1:100, 1:200 y 1:400.  

• A continuación, dichas diluciones se enfrentan con el antígeno que había sido 

depositado en los portas de la forma antes descrita y en cada porta se incluye, 

además, un control negativo y un control positivo previamente contrastados, 

procedentes de la seroteca del Servicio de Diagnóstico de Ehrlichiosis y 



Materiales y métodos 

 

124 

Leishmaniosis Canina de la Facultad de Veterinaria de la Universidad 

Complutense de Madrid. 

• Posteriormente, se incuban los portaobjetos en estufa a 37 ºC durante 30 

minutos. Transcurrido este tiempo, los portas se someten a tres lavados de 5 

minutos en PBS a pH de 7,2 en agitación, permitiendo después su secado. 

• Una vez secos los portas, se añaden a cada pocillo 20 µl de un anticuerpos 

secundario anti-IgG de perro obtenido en conejo que se encuentra conjugado 

con un compuesto fluorescente, el isotiocianato de fluoresceína (FITC) (Jackson 

Immunoresearch Laboratories, Inc., Suffolk, Reino Unido) a una dilución de 

1:100 en PBS a pH de 7,2. Se emplea como contraste azul de Evans a una 

concentración final de 1:1000. 

• Los portas vuelven a incubarse durante 30 minutos en estufa a 37 ºC para, una 

vez finalizada esta incubación, retirarse los restos de conjugado de cada pocillo 

y realizarse nuevamente tres lavados con PBS a pH de 7,2. 

• Tras este último paso, se dejan secar los portas a temperatura ambiente en 

oscuridad. A continuación, se montan los portas para su lectura, depositando 

unas gotas de glicerina tamponada comercial (Fluoprep®, Biomérieux, Madrid, 

España) y, sobre ellas, un cubreobjetos. 

• La lectura de los portas se realiza empleando un microscopio de 

epifluorescencia Olympus BH-2® (Olympus Imaging America Inc., Center 

Valley, Pennsylvania, Estados Unidos) con filtro azul, utilizando el objetivo de 

40x aumentos (Imagen 3). Se comienza observando los pocillos con los 

controles para comprobar su positividad o negatividad y, a continuación, se leen 

las muestras problema. El título de anticuerpos es la máxima dilución a la que 

se detecta una fuerte fluorescencia. 
 

 
         Imagen 3: Microscopio de epifluorescencia 



Materiales y métodos 

 

125 

 
4.5.2.3. Puntos de corte 

 
El punto de corte empleado en el Servicio de Diagnóstico de Ehrlichiosis y 

Leishmaniosis Canina de la Facultad de Veterinaria de la Universidad Complutense de 

Madrid para considerar a un animal seropositivo frente a E. canis es de 1:80 (Aguirre et al. 

2009).  

 

      
 

 

 

 
En el caso de L. infantum, el punto de corte empleado es de 1:100 (Tesouro 1984).  

 

      
 

 

 

 

 

 

 

Imagen 4: Imágenes tomadas con el microscopio de epifluorescencia en las que se muestra un 
resultado positivo de la IFI frente a E. canis (imagen de la izquierda) y un resultado negativo 
frente a este mismo agente (imagen de la derecha). 

Imagen 5: Imágenes tomadas con el microscopio de epifluorescencia en las que se muestra un 
resultado positivo de la IFI frente a L. infantum (imagen de la izquierda) y un resultado negativo 
frente a este mismo agente (imagen de la derecha). 



Materiales y métodos 

 

126 

4.5.3. DIAGNÓSTICO MOLECULAR: REACCIÓN EN CADENA DE LA 

POLIMERASA (PCR)  

 
En este estudio se ha buscado la amplificación de ciertas regiones del ADN de E. 

canis y/o de L. infantum. 

 

Debido a la elevada sensibilidad de esta técnica, es importante emplear una serie de 

medidas preventivas de control del procedimiento completo, desde la extracción de ADN 

hasta la purificación del ADN amplificado, que eviten la contaminación de las muestras 

con ADN externo a ellas. Para ello, nos hemos ajustado en la medida de lo posible a las 

recomendaciones de varios autores (Kwok & Higuchi 1989, Newton 1995).  

 

 

4.5.3.1. Extracción de ADN 

 

Para llevar a cabo la extracción de ADN, se empleaban 200 µl de la muestra de 

sangre con el anticoagulante EDTA y el kit comercial “UltraCleanTM DNA BloodSpin 

Kit” (Mo Bio Laboratories, Inc., Carlsbad, California, Estados Unidos), según las 

indicaciones del fabricante. El ADN extraído se encontraba en un volumen final de 200 µl. 

 

Como control positivo de la reacción se empleaba el ADN obtenido a partir del 

sobrenadante o fase líquida de los cultivos (de la línea celular DH82 infectada con E. canis 

y del cultivo de promastigotes de L. infantum en NNN). La extracción de dicho ADN se 

realizaba con el mismo kit descrito para las muestras sanguíneas y siguiendo el mismo 

protocolo. 

 

Como control negativo de la reacción se empleaba agua estéril para inyectable (B. 

Braun Medical, S.A., Barcelona, España). 

 

 

4.5.3.2. Control de la extracción de ADN 

 

Una vez obtenido el ADN de cada una de las muestras de sangre de los perros, se 

hacía necesaria la comprobación de la correcta realización del procedimiento, lo que 

implicaría la presencia de ADN en las muestras obtenidas tras la extracción, así como la 

ausencia de inhibidores de la reacción de la PCR en ellas. 

 

 



Materiales y métodos 

 

127 

Como control de la reacción de extracción, se realizó una PCR con los cebadores 

que amplifican el gen gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GADPH) (Barber et al. 

2005, Birkenheuer et al. 2003), cuyo procedimiento se describirá más adelante en este 

apartado de materiales y métodos. Este gen pertenece a los genes denominados genes de 

mantenimiento celular o housekeeping, que codifican proteínas que son esenciales para la 

fisiología y funcionamiento celular. 

 

 

4.5.3.3. Cuantificación  y valoración de la calidad del ADN 

 

Una vez determinada la presencia de ADN en las muestras y la ausencia de 

inhibidores de la PCR, se realizó la cuantificación de la concentración de ADN de cada una 

en la Unidad de Genómica de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad 

Complutense de Madrid. Para ello se empleó la tecnología NanoDropTM (Thermo 

Scientific, Delaware, Estados Unidos), mediante la medida de la absorbancia de la luz 

ultravioleta a las longitudes de onda 260 nm y 280 nm. La lectura a 260 nm nos indica la 

concentración de ADN de la muestra, siendo la concentración idónea para la realización 

posterior de la PCR de 10-40 ng/µl. La relación entre las lecturas a 260 y a 280 nm 

(relación ADN/proteínas), permite estimar la pureza del ADN y excluir la existencia de 

contaminación proteica de la muestra. Para poder considerar que la muestra de ácido 

nucleico es óptima para su empleo en la PCR, la relación 260/280 debe encontrarse entre 

1,6 y 2. 

 

 

4.5.3.4. Procesamiento de las muestras mediante PCR 

 

Cada muestra de ADN, tras la comprobación de que contaba con una calidad 

óptima, era sometida a un análisis mediante PCR para la detección de ADN de Ehrlichia 

spp., Anaplasma spp., Neorickettsia spp. y Leishmania spp. En la PCR empleada como 

control de la extracción de ADN se emplearon los cebadores específicos para el gen 

GAPDH, esperándose en todos los casos un resultado positivo o de amplificación, lo que 

indicaría la existencia de ADN amplificable y la ausencia de inhibidores de la reacción de 

PCR. Los cebadores empleados en esta reacción fueron el GAPDH-1 (5’-

CCTTCATTGACCTCAACTACAT) y el GAPDH-2 (5’-

CCAAAGTTGTCATGGATGACC) (Birkenheuer et al. 2003), que fueron preparados 

previamente a una concentración de 30 µM, siendo la concentración en la solución final de 

0,6 µM, al añadirse de cada uno de ellos 0,3 µl en un volumen final de reacción de 15 µl. 

En esta reacción se emplearon como premezcla 4 µl de agua, 7,5 µl de Premix Taq® 



Materiales y métodos 

 

128 

(Takara Ex Taq TM Version, compuesta por la enzima Takara a 1,25 U/25µl, una mezcla 

de dNTPs a concentración 2X, 0,4mM, y buffer de reacción concentrado a 2X, que incluye 

4mM de Magnesio), 0,3 µl de cada cebador y 0,3 µl de ADN. El protocolo empleado en la 

realización de la PCR de housekeeping fue de 1 ciclo a 95ºC durante 1 minuto, seguido de 

45 ciclos consistentes en 4 segundos a 94ºC, 4 segundos a 57ºC y 3 segundos a 72ºC, para 

finalizar con 1 ciclo de 1 minuto de duración a 72ºC. 

 
En el caso de Ehrlichia spp., Anaplasma spp. y  Neorickettsia spp. se realizó una 

única PCR convencional que emplea unos cebadores capaces de amplificar todas estas 

especies de la familia Anaplasmataceae. Estos cebadores son el GEP-s (5’-

CTGGCGGCAAGCYTAACACATGCAAGTCGAACGGA) y el GEP-as (5’-

CTTCTRTRGGTACCGTCATTATCTTCCCYAYTG), que tienen como diana la porción 

16S del ARN ribosómico (Eddlestone et al. 2007). La premezcla de reactivos empleados 

en esta reacción contenía 7,5 µl de agua, 12,5 µl de la Premix Taq®, 0,25 µl de cada 

cebador y 5 µl de ADN, obteniéndose un volumen final de 25 µl. Los cebadores se 

preparaban a una concentración de 50 µM, con lo que su concentración en la solución final 

era de 0,5 µM. El protocolo que se empleó en esta reacción consistió en 1 ciclo de 2 

minutos de duración a 95ºC, seguido de 55 ciclos consistentes en 10 segundos a 94ºC, 10 

segundos a 66ºC y 10 segundos a 72ºC, para finalizar con 1 ciclo de 1 minuto de duración 

a 72ºC. 

 
En aquellos casos en los que se produjese amplificación en la reacción anterior, se 

realizaba una nueva PCR a nivel de especie, con el fin de detectar en este caso ADN de E. 

canis, mediante el empleo de unos cebadores más específicos. Estos cebadores son: E. 

canis-s (5’-CAATTATTTATAGCCTCTGGCTATAGGAA) y SEP-as (5’-

CTTCTRTRGGTACCGTCATTATCTTCCCY), que tienen como diana la porción 16S del 

ARN ribosómico (Beall et al. 2008). En este caso, se empleó como premezcla de los 

reactivos 7 µl de agua, 12,5 µl de Premix Taq®, 0,50 µl de cada cebador (concentración en 

la solución final de 1µM) y 5 µl de ADN para llevar a cabo un protocolo consistente en 1 

ciclo inicial a 95ºC durante 2 minutos, seguido de 55 ciclos de 10 segundos a 94ºC, 10 

segundos a 58ºC y 10 segundos a 72ºC, para finalizar con un ciclo de 1 minuto de duración 

a 72ºC. 

 
Para la amplificación de ADN de Leishmania spp. se realizó también una PCR 

convencional empleando unos cebadores capaces de amplificar una porción del ADN del 

kinetoplasto de L. infantum (Lachaud et al. 2002). Estos cebadores son LSH-1 (5’-

CTTTTCTGGTCCCGCGGGTAGG) y LSH-2 (5’-CCACCTGGCCTATTTTACACCA), 

que corresponden a los denominados por otros autores como RV1 y RV2, respectivamente 



Materiales y métodos 

 

129 

(Lachaud et al. 2002). A partir de los protocolos empleados por Lachaud y colaboradores y 

Fichoux y colaboradores (le Fichoux et al. 1999, Lachaud et al. 2002) se realizaron 

cambios en distintas variables, como son la concentración de cebadores a emplear, la 

cantidad de Taq a incluir en la premezcla, la concentración de los dNTP’s y la temperatura 

de anillamiento, para determinar finalmente que la reacción era más específica empleando 

31,8 µl de agua, 5 µl de buffers de reacción, 1 µl de dNTP´s a concentración de 200 µM, 

0,5 µl de cada cebador a una concentración de 1µM, 1,2 µl de Taq y 10µl de ADN. El 

protocolo seguido en esta reacción consistió en 1 ciclo inicial de 4 minutos de duración a 

94ºC de temperatura, seguido por 55 ciclos de 30 segundos a 94ºC, 30 segundos a 59ºC y 

30 segundos a 72ºC, para finalizar con un ciclo de 10 minutos de duración a 72ºC. 

 
En todos los casos se emplearon en estas reacciones los termocicladores 

MasterCycler® Personal y/o el MasterCycler® ep Gradient (Eppendorf, Alemania) 

(Imagen 6).  

 

                        
 

 

 

 

Para la lectura de los resultados, el producto de la reacción de cada PCR se 

mezclaba con un tampón de carga compuesto por azul de bromofenol al 5%, xilencyanol al 

0,25% y glicerol al 30%, para añadirse a continuación la mezcla resultante a un pocillo del 

gel de electroforesis consistente en 100 ml de TAE 1X (Trizma® Base, de Sigma®, 

España, Ácido Acético Glacial purísimo, de Panreac Química, S.A., España, y EDTA a 0,5 

M y pH 8), con agarosa (Laboratorios Conda, España) y 2µl de Bromuro de Etidio (Fisher 

Biotech, Wembley, Australia). La cantidad de agarosa empleada varió entre 1,5 y 2 g 

según el tamaño de fragmento de ADN esperado en cada reacción. Para poder determinar 

el tamaño de la banda amplificada en cada caso se empleó un marcador de 100 pares de 

bases (Fermentas, Inc, Glen Burnie, Maryland, Estados Unidos) y la lectura del gel se 

Imagen 6:Termocicladores empleados en la realización de las PCRs. A: Termociclador MasterCycler 
® Personal. B: Termociclador MasterCycler® ep Gradient 



Materiales y métodos 

 

130 

realizó mediante la visualización en el transiluminador de luz ultravioleta de Vilber 

Lourmat (Francia).  

 
En los casos en los que se obtenía amplificación tras la realización de la PCR 

correspondiente se procedía a la purificación del ADN empleando el kit “BioClean 

Columns” (Biotools Labs, S.A., Madrid, España) para su posterior secuenciación en 

Secugen (campus del CSIC de la Ciudad Universitaria de Madrid) utilizando el 

secuenciador de ADN automático ABI3100, BigDye® Terminator versión 3.1 (Applied 

Biosystems, Inc, Foster City, California, Estados Unidos).  

 

 

 
4.5.4. CITOMETRÍA DE FLUJO  

 
Los estudios de citometría de flujo se llevaron a cabo a partir de las muestras 

sanguíneas de cada perro recogidas en tubos con el anticoagulante EDTA. El procesado de 

las muestras fue llevado a cabo en todos los casos en los que fue posible en las primeras 2 

horas tras su extracción. En algunos casos en los que no pudo ser realizado el marcaje de 

los linfocitos con los anticuerpos monoclonales en el período de tiempo descrito, las 

muestras fueron mantenidas en refrigeración hasta su procesado, siempre dentro de un 

período máximo de 12 horas tras su recogida, siguiendo las indicaciones de Faldyna y 

colaboradores (Faldyna et al. 2001) y la experiencia previa de nuestro grupo de 

investigación en este tipo de procesamiento (datos sin publicar). 

 
El análisis posterior de las muestras en el citómetro de flujo fue realizado en el 

Centro de Ayuda a la Investigación de Citometría de Flujo y Microscopía Confocal de la 

Universidad Complutense de Madrid, empleando para ello un citómetro de flujo 

FACSCalibur® (Becton-Dickinson, San José, CA). 

 

 

4.5.4.1. Anticuerpos monoclonales empleados 

 
Los anticuerpos monoclonales empleados en la realización de este estudio fueron 

suministrados por “AbD Serotec” (Oxford, Reino Unido). Debido a la necesidad de 

enfrentar varios de estos anticuerpos para poder determinar las poblaciones linfocitarias 

que se describirán más adelante en esta tesis, fue necesario emplear diferentes 

fluorocromos (en concreto FITC, PE y Alexa Fluor® 647) que se conjugaron con los 



Materiales y métodos 

 

131 

diferentes anticuerpos. Era necesario que los anticuerpos monoclonales que fuesen a 

emplearse de forma conjunta en el marcaje de alguno de los tubos con la muestra problema 

estuviesen conjugados con fluorocromos diferentes, cuyas fluorescencias no interfiriesen 

entre sí, permitiendo su diferenciación en la lectura del citómetro.  

 
Los anticuerpos monoclonales utilizados, así como los fluorocromos con los que se 

conjugaron y el fenotipo de los linfocitos que identifican, se han reflejado en la Tabla 2. 

 
Tabla 2: Anticuerpos monoclonales empleados en el estudio de citometría de flujo 

 

Especificidad Descripción Anticuerpo (clon) 

Fenotipo 

linfocitario 

reconocido 

Conjugado con el 

fluorocromo 

CD3 
IgG1 de ratón anti 

CD3 canino 
CA17.2A12 Linfocitos T FITC 

CD4 
IgG2a de rata anti 

CD4 canino 
YKIX302.9 Linfocitos Th PE 

CD8 
IgG1 de rata anti 

CD8 canino 
YCATE55.9 Linfocitos Tc Alexa Fluor® 647 

CD21 
IgG1 de ratón anti 

CD21 canino 
CA2.1D6 Linfocitos B PE 

CMH clase II 

IgG2a de rata anti 

CMH de clase II 

canino 

YKIX334.2 

Expresión de 

CMHII en 

superficie 

FITC 

 

 

 

4.5.4.2. Procesado de las muestras 

 
Mediante el empleo de la citometría de flujo en el inmunofenotipaje se han 

enfrentado la población de células problema, cuyas características se desconocían para 

cada caso, y una combinación de anticuerpos monoclonales conjugados con diferentes 

fluorocromos. En concreto, en la realización de este estudio, cada muestra fue expuesta a 

cuatro combinaciones de diferentes anticuerpos monoclonales, con el objetivo de poder 

determinar las subpoblaciones linfocitarias T, Th y Tc, y B, así como valorar la expresión 

de las moléculas del CMH de clase II en su superficie. 

 

 



Materiales y métodos 

 

132 

Tras la contrastación de la metodología descrita por el fabricante de los anticuerpos 

monoclonales mediante la realización de numerosas pruebas por nuestro equipo de trabajo 

y la adaptación de la técnica según las necesidades y condiciones de nuestro laboratorio, se 

determinaron las condiciones en las que se obtenían los mejores resultados en el 

inmunofenotipaje a partir de sangre canina.  

 
El protocolo empleado en este estudio en el marcaje linfocitario consistió en: 

 
• Para cada muestra sanguínea se empleaban cuatro tubos de citometría de flujo, 

en cada uno de los cuales eran añadidos 100 µl de sangre.  

 
• A continuación se añadían los anticuerpos monoclonales de forma que en el 

tubo 1 se enfrentasen las células con los anticuerpos anti-CD3, anti-CD4 y anti-

CD8; en el tubo 2 se añadía en un principio solamente el anticuerpo anti-CD3, 

aunque en un paso posterior se añadía también el anti-CD21, para evitar 

problemas de inespecificidad descritos por el fabricante al enfrentar los 

anticuerpos anti-CD3 y anti-CD21 de forma simultánea; en el tubo 3 se 

enfrentaban las células con los anticuerpos anti-CMHII y anti-CD21; y en el 

tubo 4 las células no eran enfrentadas con ningún anticuerpo, a modo de 

control. En la Tabla 3 queda reflejado el panel de anticuerpos que se añadían a 

cada tubo a lo largo del protocolo. Tras la incorporación de los anticuerpos, se 

procedía a una incubación a oscuras de 30 minutos de duración. 

 
Tabla 3: Panel de anticuerpos empleados en el estudio en cada tubo de citometría de flujo 

 

Nº de tubo 

Anticuerpos 

añadidos en la 

primera incubación 

Anticuerpos 

añadidos en la 

segunda incubación 

Moléculas de 

superficie 

detectadas en el 

tubo 

1 

3 µl de anti-CD3, 5 

µl de anti-CD4 y 5 µl 

de anti-CD8 

_____ CD3, CD4 y CD8 

2 3 µl de anti-CD3 2 µl de anti-CD21 CD3 y CD21 

3 
5 µl de anti-CMHII y 

2 µl de anti-CD21 
_____ CMHII y CD21 

4 _____ _____ _____ 

 

 
 



Materiales y métodos 

 

133 

 

• En los tubos 1, 3 y 4, una vez finalizada la primera incubación, se añadía una 

solución de eritrolisis (Erytrholyse red blood cell lysing buffer, de AbD Serotec, 

Oxford, Reino Unido) para permitir el análisis posterior únicamente de 

leucocitos. Se dejaba actuar a este buffer de lisis eritrocitaria durante 10 

minutos para, a continuación, centrifugar a 400g durante 5 minutos y realizar un 

lavado con una solución de PBS con un 1% de albúmina sérica bovina (BSA, 

Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) y un 0,36% de glucosa (PBS/BSA).  

 
• En el tubo 2, una vez transcurrido el tiempo de la primera incubación de los 

anticuerpos monoclonales, se realizaba un lavado con la solución de PBS/BSA, 

seguido de una centrifugación a 400g durante 5 minutos. El sobrenadante, en el 

que estaría incluido el anticuerpo anti-CD3 que no se hubiese unido a las 

células, era eliminado y las células decantadas eran resuspendidas en 100 µl de 

la solución de PBS/BSA, para añadirles a continuación el anticuerpo anti-CD21 

y comenzar la segunda incubación de 30 minutos de duración. 

 
• Finalizada la segunda incubación del tubo 2, se procedía a realizar la eritrolisis 

y lavado posterior de la muestra de la misma forma recientemente descrita que 

para los tubos 1,3 y 4. 

 
• Finalmente, se añadía a cada uno de los tubos (1, 2, 3 y 4) 100 µl de un fijador 

celular especial para citometría de flujo (BD CellFixTM, de Becton Dickinson, 

Bélgica), para su posterior análisis en el Centro de Ayuda a la Investigación de 

Citometría de Flujo y Microscopía Confocal de la Universidad Complutense de 

Madrid. 

 

 

4.5.4.3. Análisis de los datos e inmunofenotipaje 

 
Una vez procesadas las muestras, el análisis de las poblaciones leucocitarias era 

realizado mediante el empleo de un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton-Dickinson, 

San José, CA), que cuenta con dos fuentes de excitación: un láser de argón de 15 mW que 

emite a 488nm y un diodo láser rojo que emite a 635 nm. 

 

 

 



Materiales y métodos 

 

134 

 

Los parámetros analizados para cada célula fueron: 

 

• Dispersión frontal de luz (FSC): como se ha descrito en la revisión 

bibliográfica, este parámetro puede considerarse proporcional al tamaño de la 

célula o partícula analizada.  

 

• Dispersión lateral de luz (SSC): nos da una idea de la granularidad o 

complejidad de la partícula analizada.  

 
• Fluorescencia verde (log FL1): en este estudio, la cantidad de fluorescencia 

verde emitida por las células estará directamente relacionada con la cantidad de 

anticuerpos monoclonales conjugados con FITC que se hayan unido a ella (anti-

CD3 o anti-CMHII). Así, por ejemplo, si una célula del tubo 1 es un linfocito T, 

se unirán a sus moléculas de superficie CD3 (que forman parte del complejo del 

receptor de las células T) los anticuerpos monoclonales anti-CD3, que se 

encuentran conjugados con FITC, de forma que, al incidir sobre ella el haz de 

luz láser a 488nm, se excitará este fluorocromo y el citómetro detectará la 

fluorescencia resultante, de color verde, en el detector FL1, que recoge la 

emisión de fluorescencia a 530/30 nm. 

 

• Fluorescencia amarilla-anaranjada (log FL2): en este estudio, la cantidad de 

fluorescencia naranja emitida por las células será proporcional a la cantidad de 

anticuerpos conjugados con PE que se hayan unido a su superficie (anti-CD4 y 

anti-CD21). El detector FL2 recoge la emisión de fluorescencia a 582/42 nm. 

 

• Fluorescencia rojo lejano (Log FL4): en este estudio, la cantidad de 

fluorescencia de color rojo lejano emitida por las células será proporcional a la 

cantidad de anticuerpos conjugados con Alexa Fluor® 647 que se hayan unido a 

su superficie (anti-CD8) y será recogida por el detector FL4, a 661/16 nm. 

 
Los parámetros fueron adquiridos en forma de histogramas mono y biparamétricos 

y en modo lista. Mediante el empleo de diferentes programas informáticos (como el 

CellQuest®, el WinMDI versión 2.8 o el Summit® version 3.1) fue posible analizar 

posteriormente los resultados de cada uno de los tubos procesados. 

 

 



Materiales y métodos 

 

135 

En el estudio de nuestros resultados se realizaba en primer lugar una clasificación 

de las células en función de sus características de dispersión de la luz (SSC y FSC). En el 

histograma biparamétrico de la Imagen 7 puede observarse la distribución de los leucocitos 

en función de sus características de dispersión de la luz: 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

A partir de estas representaciones era posible delimitar o acotar la región de los 

linfocitos (Imagen 8). 

 

  
 

 

A partir de los eventos acotados en esa región o ventana se realizaban a 

continuación las evaluaciones de los parámetros de fluorescencia. En las siguientes figuras 

Linfocitos 

Monocitos 

Granulocitos 

Imagen 7: Propiedades de 
dispersión de la luz de las células 
analizadas mediante citometría de 
flujo a partir de sangre periférica 
canina.  

Imagen 8: Acotamiento o 
delimitación de la región de los 
linfocitos en base a sus 
propiedades de dispersión de la 
luz en un análisis de citometría de 
flujo de sangre canina 

Linfocitos 



Materiales y métodos 

 

136 

(Imagen 9) se muestra un ejemplo de análisis mediante citometría de flujo del tubo número 

1 de uno de los perros incluidos en el estudio: 

 
A                                                                                     B 

  
C 

 
Gracias a los anticuerpos monoclonales empleados en este estudio hemos podido 

evaluar las poblaciones linfocitarias caninas que se describen a continuación: 

 

� Los linfocitos T están representados por aquellas células presentes en la región de

los linfocitos (por sus características de tamaño y complejidad celular), a los que se 

unen los anticuerpos monoclonales anti-CD3. Por tanto, el porcentaje de esta 

población se puede calcular mediante la suma de los linfocitos CD3+CD4+ y 

CD3+CD4- o por la suma de CD3+CD8+ y CD3+CD8-, en el tubo 1, o bien 

mediante el cálculo del porcentaje de los linfocitos CD3+CD21- del tubo 2. En 

CD3+ CD4+ CD3-CD4+ 

CD3+ CD4- CD3-CD4- 

CD3+ CD8+ 

CD3+ CD8- CD3-CD8- 

CD4-CD8+ CD4+CD8+ 

CD4-CD8- 

Imagen 9: Representaciones 
biparamétricas de la emisión de 
fluorescencia en la población linfocitaria 
delimitada previamente en base a sus 
características de dispersión de la luz.  
A: Imagen en la que se enfrenta la 
fluorescencia obtenida en FL-1 (por la 
emisión de FITC unido al anticuepo anti-
CD3) y en FL-2 (por la emisión de PE, 
unido al anticuerpo anti-CD4). B: Imagen 
en la que se enfrenta la fluorescencia 
obtenida en FL-1 y en FL-4 (por la emisión 
de Alexa Fluor 647, unido al anticuerpo 
anti-CD8). C: Imagen en la que se enfrenta 
la fluorescencia obtenida en FL-2 con la 
obtenida en FL-4. 

CD3-CD8+ 

CD4+CD8- 



Materiales y métodos 

 

137 

nuestro estudio, el cálculo del porcentaje de linfocitos T CD3+ se ha realizado 

hallando la media entre estos valores. Dentro de la población de linfocitos T, hemos 

podido evaluar las siguientes subpoblaciones: 

o Los linfocitos Th son aquellos que resultan marcados como CD3+CD4+. 

o Los linfocitos Tc están representados por los CD3+CD8+. 

 

� Los linfocitos B están representados por las células marcadas como CD21. En

concreto, en nuestro estudio se ha calculado el porcentaje de linfocitos B presentes 

en cada muestra hallando la media entre el valor de linfocitos CD3-CD21+ 

obtenidos en el tubo 2 y el valor de los linfocitos marcados con CD21 en el tubo 3. 

  

� Los linfocitos no T y no B serían las células NK, según la definición (Glimcher et

al. 1977, Abbas et al. 2008g, Tizard 2009s), por lo que en principio deberían ser 

considerados los linfocitos CD3-CD21-. Sin embargo, al no haber empleado en este 

estudio un marcador general de linfocitos, no podemos asegurar que en esa 

población de linfocitos doble negativos no exista algún resto celular de pequeño 

tamaño (como restos de eritrocitos que no hayan sido totalmente eliminados con los 

lavados con PBS/BSA), lo que debe ser tenido en cuenta en la interpretación de los 

resultados. 

 

� Los linfocitos marcados con CMHII no corresponden a ninguna población en

concreto de linfocitos en el caso de la especie canina, siendo expresada esta 

molécula en la práctica totalidad de las células mononucleares (Byrne et al. 2000). 

 

 

Una vez calculado el porcentaje de cada una de las poblaciones linfocitarias de interés, 

se calculó el valor absoluto de dichas poblaciones en relación al número total de linfocitos 

presentes en cada mililitro de la muestra.  

 
Por tanto, al finalizar el estudio inmunofenotípico de cada muestra sanguínea se 

disponía de información referente a los números absolutos y los números relativos 

expresados en porcentaje de linfocitos de las siguientes subpoblaciones linfocitarias: 

linfocitos T, linfocitos Th y Tc, linfocitos B y linfocitos que expresan CMHII. 

 

 

 

 

 

 



Materiales y métodos 

 

138 

4.5.5. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN PLASMÁTICA DE 

CITOCINAS MEDIANTE ELISA  

 
A partir de las muestras de plasma de los animales de los Grupos 1 y 2 que fueron 

incluidos en el ensayo clínico de administración de doxiciclina, se llevó a cabo la 

determinación de los niveles de cuatro citocinas en sangre: IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α.  

 

4.5.5.1. Protocolo de procesado de las muestras 

 

En este estudio se ha empleado el ELISA como método de detección de las 

citocinas características de las respuestas de tipo 1 IFN-γ y TNF-α, y las citocinas de las 

respuestas de tipo 2 IL-6 e IL-10. En la revisión bibliográfica de la presente tesis doctoral 

ya se han descrito las funciones de cada una de estas citocinas. 

 

En concreto, se han utilizado kits comerciales de R&D Systems (Minneapolis, 

Estados Unidos) consistentes en técnicas ELISA en sandwich cuantitativas, que cuentan 

con una placa de 96 pocillos en los que se encuentran unidos anticuerpos específicos frente 

a la citocina canina de interés en cada caso. Una vez añadidas las muestras de plasma, la 

cantidad de la citocina que está siendo evaluada en la muestra del perro quedará ligada a 

los anticuerpos unidos a la placa. Tras un lavado que permite eliminar todas aquellas 

sustancias que no se hayan unido al anticuerpo, se añadirá un nuevo anticuerpo específico 

de la citocina que se encuentra unido a una enzima (o al que se unirá una enzima en un 

paso posterior, dependiendo del kit empleado). Se realiza de nuevo un lavado para eliminar 

los anticuerpos no unidos y, posteriormente, se añade un sustrato que inicia la reacción 

enzimática. Esta reacción da lugar a la generación de una sustancia coloreada. La 

intensidad del color generado en cada muestra es proporcional a la cantidad de citocina 

canina ligada en el paso inicial del ELISA y dicha intensidad de color es medida mediante 

espectrofotometría, como se verá a continuación. 

 

En el estudio inmunoenzimático de la concentración de IFN-γ se ha empleado el kit 

comercial “Quantikine ® Canine IFN-γ Immunoassay” (R&D Systems, Inc., Minneapolis, 

Estados Unidos). La técnica y el protocolo empleados son los recomendados por el 

fabricante. Cada una de las muestras fue analizada por duplicado y se empleó como control 

positivo una solución de IFN-γ recombinante canino con una concentración de 322-537 

pg/ml que fue suministrada por el fabricante y que también fue añadida a la placa del kit 

por duplicado (“Canine IFN-γ Control”, R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados 

Unidos). Con la finalidad de poder extrapolar los datos de la concentración de IFN-γ de 

cada muestra a partir de los datos obtenidos de la absorbancia, se realizó para cada una de 



Materiales y métodos 

 

139 

las placas de 96 pocillos una curva patrón a partir de una solución de 4000 pg/ml de 

concentración de la citocina, empleando para la realización de la curva las diluciones de 

4000 pg/ml, 2000 pg/ml, 1000 pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62,5 pg/ml y una 

última solución standard de 0 pg/ml de concentración. En esta curva se han empleado los 

reactivos suministrados por el fabricante “Canine IFN-γ Standard” y el “Calibrator Diluent 

RD6-12” (R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos). 

 

 

 

Para el cálculo de la concentración de la IL-6 se utilizó el kit “Quantikine ® Canine 

IL-6 Immunoassay” (R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos). Cada muestra fue 

analizada por duplicado y se empleó el control positivo suministrado por el fabricante 

(“Canine IL-6 Control”, R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos), a una 

concentración de 206-343 pg/ml. La curva patrón se elaboró con las absorbancias 

detectadas para las soluciones de IL-6 a concentración de 2000 pg/ml, 1000 pg/ml, 500 

pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62,5 pg/ml, 31,3 pg/ml y 0 pg/ml, a partir de los productos 

“Canine IL-6 Standard” y “Calibrator Diluent RD5T” (R&D Systems, Inc., Minneapolis, 

Estados Unidos). 

 

La concentración de IL-10 para cada muestra fue determinada utilizando el kit de 

ELISA comercial “Quantikine ® Canine IL-10 Immunoassay” (R&D Systems, Inc., 

Minneapolis, Estados Unidos). En este caso se realizó una modificación respecto a las 

indicaciones del fabricante, ya que en el protocolo del kit comercial se indica la necesidad 

de diluir las muestras de plasma canino a la mitad de su concentración inicial. Sin 

embargo, al evaluar muestras plasmáticas de perros en nuestro laboratorio se detectaron 

concentraciones de esta citocina más bajas de lo esperado, por lo que las muestras de 

plasma de los perros sanos y de los perros con EMC de nuestro estudio no fueron diluidas. 

Los demás pasos del protocolo fueron llevados a cabo según las indicaciones del 

fabricante. Cada muestra fue analizada por duplicado y se empleó como solución control el 

“Canine IL-10 Control” (R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos), de 127-212 

pg/ml de concentración. La curva patrón se realizó a partir de los datos de absorbancia 

obtenidos de las diluciones de la solución “Canine IL-10 Standard” con el diluyente 

“Calibrator Diluent RD6-12”, ambos de R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos, 

Imagen 10: Fotografía de los pocillos que contienen diferentes concentraciones conocidas de 
IFN-γ para la realización de la curva patrón de esta citocina. 



Materiales y métodos 

 

140 

empleándose las concentraciones 1000 pg/ml, 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62,5 

pg/ml, 31,2 pg/ml, 15,6 pg/ml y 0 pg/ml. 

 

En el caso de la lectura de la concentración de TNF-α a partir de las muestras de 

plasma de los perros de los Grupos 1 y 2 que fueron incluidos en el ensayo clínico de 

administración de doxiciclina, se empleó el kit comercial “Quantikine ® Canine TNF-α 

Immunoassay” (R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos). Al igual que en los 

casos anteriores, se analizó cada muestra problema por duplicado y se empleó un control 

positivo evaluado también por duplicado. En este caso el control positivo era una solución 

de TNF-α recombinante canino a una concentración de 43-75 pg/ml (“Canine TNF-α 

Control”, R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos). La curva patrón se realizó a 

partir de los reactivos suministrados por el fabricante (“Canine TNF-α Standard” y 

“Calibrator Diluent RD5-17”, R&D Systems, Inc., Minneapolis, Estados Unidos), 

empleando las diluciones de 500 pg/ml, 250 pg/ml, 125 pg/ml, 62,5 pg/ml, 31,2 pg/ml, 

15,6 pg/ml, 7,8 pg/ml y 0 pg/ml. 

 
4.5.5.2. Lectura de la absorbancia  

 

Una vez llevado a cabo el procesado de las muestras, se realizaba la lectura de la 

densidad óptica o absorbancia de cada una, siempre en un tiempo máximo de 30 minutos 

una vez finalizado el protocolo de procesado, siguiendo las recomendaciones del 

fabricante.  

 

La lectura de las absorbancias se realizaba a 450 nm de longitud de onda en el 

espectrofotómetro Thermo Scientific Multiskan® FC (Thermo Fisher Scientific, Vantaa, 

Finlandia) (Imagen 11). Con el objetivo de asegurar unas lecturas lo más exactas posibles, 

a las medidas de la absorbancia a 450 nm se sustraía el resultado de las absorbancias a 540 

nm. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 Imagen 11: A: Espectrofotómetro Thermo Scientific Multiskan® FC. B: Placa comercial de ELISA 
empleada en este estudio 

A B 



Materiales y métodos 

 

141 

4.5.5.3. Cálculo de la concentración de las citocinas para cada muestra 

 

Con la finalidad de calcular la concentración de cada una de las citocinas presentes 

en las muestras de los perros sanos y de los perros con EMC incluidos en el ensayo clínico 

de administración de doxiciclina, una vez determinada la diferencia de la absorbancia a 

450 y a 540 nm de longitud de onda, se calculó la media de las lecturas de absorbancia de 

cada muestra (a partir de los resultados obtenidos por duplicado para cada una, como se 

describió previamente).  

 

A partir de las medidas de absorbancia de las diluciones empleadas para la 

realización de la curva patrón, pudieron crearse las curvas correspondientes para cada 

citocina, obteniéndose en todos los casos un coeficiente de regresión superior a 0,99. Las 

medias de la absorbancia de cada muestra se pudieron relacionar con un valor de 

concentración de la citocina evaluada en cada caso a partir de la curva patrón 

correspondiente. Para llevar a cabo estas curvas patrón, así como para la posterior 

extrapolación de las concentraciones de cada citocina para cada muestra, se empleó el 

programa informático Thermo Scientific SkanIt® Software, versión 2.5 (Thermo Fisher 

Scientific, Vantaa, Finlandia).  

 

 

 

 

4.6. ESTUDIO ESTADÍSTICO 

 
 

Todos los resultados obtenidos en este trabajo fueron analizados estadísticamente 

por el Departamento de Apoyo a la Investigación del Área de Informática y 

Comunicaciones de la Universidad Complutense de Madrid, empleando para ello el 

programa informático SPSS 17.0 para Windows (SPSS, 2007). 

 

Por una parte, se ha realizado una estadística descriptiva de todos los resultados 

obtenidos. Dicha estadística descriptiva nos ha permitido, entre otras cosas, determinar las 

características de nuestra población de estudio y establecer unos valores de referencia para 

las diferentes variables cuantitativas analizadas, entre las que cabe destacar aquellas que 

nos han permitido caracterizar el inmunofenotipo en los perros sanos. Por otra parte, se ha 

realizado una estadística analítica que nos ha permitido evaluar la posible existencia de 

asociaciones estadísticamente significativas entre diferentes características de la población 

en estudio y las variables analizadas, así como evaluar la evolución de dichas variables en 



Materiales y métodos 

 

142 

el tiempo tras el tratamiento con doxiciclina tanto en los perros sanos como en los perros 

con EMC incluidos en el ensayo clínico. 

 

En función de los objetivos concretos en cada caso y de las características de las 

variables analizadas, se han empleado diferentes métodos estadísticos, que serán descritos 

a continuación: 

 

• Estadística descriptiva de las variables cuantitativas (mediante el procedimiento 

DESCRIPTIVE). Este análisis ha permitido hacer una descripción de las 

“muestras” en cuanto a su media, desviación estándar, valor máximo, valor 

mínimo, mediana, desviación estándar de la media, etc. (Ferrán Aranaz 1996). 

• Estadística descriptiva de las variables cualitativas (procedimiento 

FREQUENCIES), con la obtención de frecuencias y porcentajes de las 

categorías establecidas para cada variable cualitativa (Ferrán Aranaz 1996).  

• Test de Kolmogorov-Smirnov para una muestra (procedimiento NPAR 

TESTS): permite determinar si las variables cuantitativas del estudio provienen 

de una distribución normal (Ferrán Aranaz 1996). 

• Tablas de contingencia para evaluar la relación entre variables cualitativas 

(procedimiento CROSSTABS): con la finalidad de contrastar la independencia 

o influencia entre dos variables cualitativas se empleó  el test de la chi cuadrado 

de Pearson (χ2) (Everitt 1992, Ferrán Aranaz 1996).  

• Análisis de la varianza (ANOVA), procedimiento ONEWAY, para la 

comparación de múltiples medias. Cuando el valor global de la F de Snedecor 

es significativo nos indica que las medias en los grupos no son iguales. Se ha 

empleado, además, el test de Bonferroni, que realiza comparaciones de 

múltiples medias, ordenando las medias de menor a mayor y compara las 

diferencias entre pares (menor-mayor), conectando los grupos que no difieren 

significativamente. De esta manera, halla subconjuntos de medias no 

significativamente diferentes: si dos medias se agrupan en un mismo 

subconjunto no son diferentes significativamente. En caso contrario, serán 

diferentes significativamente (Ferrán Aranaz 1996, Sánchez et al. 1996).  

• Test de la t de Student (procedimiento T-TEST): se ha empleado para la 

comparación de dos medias en las variables cuantitativas, asumiendo o no 

igualdad de varianzas (método paramétrico). La igualdad de varianzas se 

contrasta con el test de Levene (lo que nos indicará si es mas adecuado el test 

asumiendo varianzas iguales o desiguales) (Ferrán Aranaz 1996). 

• Análisis de medidas repetidas (procedimiento GLM): se ha utilizado para 

evaluar la evolución en el tiempo de las variables analizadas en el estudio en los 



Materiales y métodos 

 

143 

grupos de perros para los que se dispone de seguimiento tras la administración 

de la doxiciclina (aquellos perros que se han incluido en el ensayo clínico de la 

administración del fármaco) o, dicho de otra forma, se ha empleado para el 

análisis del comportamiento de los grupos de un factor inter-sujetos (que, en 

nuestro caso es el que los perros pertenezcan al Grupo 1 de perros sanos o al 

Grupo 2 de perros con EMC) en un factor intra-sujeto (tiempo, evolución en el 

tiempo de las variables tras la administración de doxiciclina) (Ferrán Aranaz 

1996). 

 

Las diferencias se consideraron significativas para un valor de p<0,05. Para una 

distribución normal, los residuos brutos debían ser superiores a 1,96 e inferiores a -1,96, 

para que la frecuencia fuera estadísticamente superior o inferior, respectivamente. 



 

144 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

145 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5. RESULTADOS 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

146 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Resultados 

 

147 

 

5.1. CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES 

 
 

Los 167 animales fueron incluidos en los tres grupos descritos previamente: Grupo 

1 o grupo de perros sanos; Grupo 2 o grupo de perros con EMC; y Grupo 3 o grupo de 

perros con otras patologías, diferentes a la EMC. 

 

� Grupo 1 

 

Está formado por todos aquellos perros sanos del estudio y cuenta con un total de 

47 animales que cumplían los criterios de inclusión para este grupo descritos en el 

apartado 4.3.4. del capítulo de materiales y métodos de la presente tesis doctoral. En la 

tabla 4 se ha reflejado la relación de perros incluidos en este grupo, que han sido 

identificados con los números de registro 1 a 47. 

 
Tabla 4: Relación de los perros sanos incluidos en el estudio (Grupo 1) 

 

NºREGISTRO Raza 
Edad 
(años) 

Sexo 
Peso 
(kg) 

Tipo de 
patología 

1 Mestizo 5 Macho 30 Ninguna 
2 Mestizo 5 Macho 30 Ninguna 

3 
West Highland 
White Terrier 

7 Hembra 8,5 Ninguna 

4 
West Highland 
White Terrier 

5 Macho 11 Ninguna 

5 Beagle 2 Macho 14 Ninguna 
6 Beagle 2 Macho 14 Ninguna 
7 Beagle 2 Hembra 13 Ninguna 
8 Beagle 2 Hembra 13 Ninguna 
9 Beagle 2 Hembra 13 Ninguna 
10 Beagle 2 Hembra 13 Ninguna 
11 Labrador retriever 6 Hembra 26 Ninguna 
12 Mastín español 1,5 Hembra 40 Ninguna 
13 Mestizo 0,5 Hembra 14,3 Ninguna 
14 Boxer 0,5 Macho 21,1 Ninguna 
15 Boxer 0,5 Macho 20 Ninguna 
16 Mestizo 0,5 Hembra 17 Ninguna 
17 Galgo español 1,5 Hembra 23 Ninguna 
18 Galgo español 4 Hembra 25 Ninguna 
19 Galgo español 4 Hembra 25 Ninguna 
20 Galgo español 4 Macho 25 Ninguna 
21 Galgo español 4 Hembra 25 Ninguna 
22 Galgo español 4 Hembra 25 Ninguna 
23 Galgo español 4 Hembra 25 Ninguna 
24 Galgo español 4 Macho 25 Ninguna 
25 Galgo español 4 Hembra 25 Ninguna 
26 Galgo español 4 Macho 25 Ninguna 
27 Galgo español 4 Macho 25 Ninguna 



Resultados 

 

148 

28 Galgo español 4 Macho 25 Ninguna 
29 Galgo español 4 Macho 25 Ninguna 
30 Pastor Alemán 4 Hembra 35 Ninguna 
31 Pastor Alemán 8 Hembra 35 Ninguna 
32 Pastor Alemán 7 Macho 35 Ninguna 
33 Pastor Alemán 8 Hembra 35 Ninguna 
34 Pastor Alemán 6 Macho 35 Ninguna 
35 Pastor Alemán 3,5 Hembra 35 Ninguna 
36 Pastor Alemán 6 Macho 35 Ninguna 
37 Pastor Alemán 4,5 Macho 35 Ninguna 
38 Pastor Alemán 5 Macho 35 Ninguna 
39 Pastor Alemán 7,5 Macho 35 Ninguna 
40 Pastor Alemán 3 Macho 35 Ninguna 
41 Beagle 0,7 Macho 11 Ninguna 
42 Beagle 0,7 Macho 11 Ninguna 
43 Beagle 0,7 Macho 11 Ninguna 
44 Beagle 0,7 Macho 11 Ninguna 
45 Beagle 0,7 Hembra 11 Ninguna 
46 Beagle 0,7 Hembra 11 Ninguna 
47 Beagle 0,7 Hembra 11 Ninguna 

 

 

� Grupo 2 

 

El Grupo 2 está constituido por los perros incluidos en el estudio que fueron 

diagnosticados de EMC  y cuenta con un total de 37 animales. Todos ellos cumplían los 

criterios de inclusión descritos para los perros con EMC en el apartado 4.3.4. de esta tesis 

doctoral. En la Tabla 5 se ha reflejado la relación de perros incluidos en el Grupo 2 de este 

estudio, identificados con los números de registro 48 a 84. 

 
Tabla 5: Relación de perros con EMC incluidos en el estudio (Grupo 2) 

 

NºREGISTRO Raza 
Edad 
(años) 

Sexo Peso (kg) 
Tipo de 

patología 
48 Caniche 8 Hembra 7 EMC 
49 Bulldog inglés 2,5 Hembra 27 EMC 

50 
Cocker spaniel 

inglés 
10 Hembra 11 EMC 

51 Teckel 4 Macho 8,5 EMC 
52 Setter irlandés 12 Hembra 28 EMC 
53 Spaniel Bretón 3 Macho  EMC 
54 Sabueso 10 Hembra 38 EMC 
55 Mestizo 7 Hembra 10 EMC 
56 Mastín español 4 Hembra 60 EMC 
57 Mastín español 3 Macho 60 EMC 
58 Mastín español 5 Hembra 40 EMC 
59 Mestizo 10 Macho 10 EMC 

60 
Labrador 
retriever 

7 Macho 30 EMC 

61 
Labrador 
retriever 

3 Hembra 30 EMC 

62 Sabueso 9 Macho 30 EMC 



Resultados 

 

149 

63 Podenco 6 Hembra 18 EMC 
64 Mestizo 10 Hembra 10 EMC 
65 Mestizo 6 Hembra 21,8 EMC 
66 Mestizo 3,5 Macho 35 EMC 
67 Mestizo 3 Hembra 10 EMC 
68 Teckel 9 Hembra 6,7 EMC 

69 
Yorkshire 

Terrier 
9 Macho 1,8 EMC 

70 Pastor Alemán 2 Macho 26 EMC 

71 
Labrador 
Retriever 

4 Hembra 31 EMC 

72 Mastín Español 5 Macho 40,2 EMC 

73 
Cocker Spaniel 

Inglés 
9 Macho 13,5 EMC 

74 Mestizo 1 Macho 15 EMC 
75 Teckel 5 Hembra 10 EMC 
76 Galgo Español 2 Hembra 25 EMC 
77 Mestizo 2 Hembra 45 EMC 
78 Mastín Español 0,6 Macho 30 EMC 

79 
Cocker Spaniel 

Inglés 
9 Macho 17,2 EMC 

80 Mastín Español 1 Hembra 40 EMC 
81 Boxer 8 Macho 43 EMC 
82 Mestizo 0,5 Macho 15 EMC 
83 Mestizo 5 Hembra 15 EMC 
84 Bulldog Inglés 11 Hembra 25 EMC 

 

 

 

� Grupo 3

 

El Grupo 3 de este estudio está constituido por los perros que fueron atendidos por 

diversas enfermedades diferentes a la EMC y en él se incluyen un total de 83 animales 

que han sido identificados con los números de registro 85 a 167 (Tabla 6). 

 
Tabla 6: Relación de perros incluidos en el Grupo 3 del estudio 

 

NºREGISTRO Raza 
Edad 
(años) 

Sexo 
Peso 
(kg) 

Tipo de 
patología 

85 Yorkshire Terrier 10 Macho 4,5 Mucocutánea 
86 Boxer 11 Macho 30 Traumática 
87 Bulldog Inglés 0,66 Macho 12,3 Mucocutánea 
88 Shar Pei 1 Macho 19,5 Mucocutánea 
89 Mestizo 1 Macho 9,9 Mucocutánea 
90 Mestizo 1 Hembra 25 Traumática 

91 
West Highland 
White Terrier 

0,33 Macho 4,8 Digestiva 

92 Mestizo 8 Macho 51 Mucocutánea 

93 
Cocker Spaniel 

Inglés 
10 Macho 23 Mucocutánea 

94 Mestizo 4 Macho 24,8 Mucocutánea 
95 Boxer 6 Macho 37,4 Traumática 
96 Golden Retriever 4 Hembra 27,5 Mucocutánea 



Resultados 

 

150 

97 
Cocker Spaniel 

Inglés 
12 Macho 16,2 Mucocutánea 

98 
Cocker Spaniel 

Americano 
5 Macho 15,5 Mucocutánea 

99 
Cocker Spaniel 

Inglés 
3 Hembra 14 Traumática 

100 
Labrador 
Retriever 

10 Hembra 31,4 Oncológica 

101 Mestizo 12 Hembra 27 Mucocutánea 
102 Husky Siberiano 12 Macho 36,6 Oncológica 
103 Lakeland Terrier 12 Hembra 6 Oncológica 
104 Braco Alemán 2 Hembra 27 Digestiva 
105 Mestizo 8 Hembra 5,4 Oncológica 
106 Pastor Alemán 7,5 Macho 47,6 Mucocutánea 
107 Shar Pei 7 Hembra 25,2 Mucocutánea 

108 
West Highland 
White Terrier 

1 Hembra 8,9 Traumática 

109 Mestizo 12 Hembra 25,9 Oncológica 
110 Bulldog Inglés 3 Macho 26,7 Digestiva 
111 Caniche 12 Macho 8,9 Mucocutánea 
112 Beagle 2 Macho 15,8 Traumática 
113 Boxer 3,5 Hembra 24 Oncológica 
114 Mestizo 0,66 Hembra 25 Traumática 
115 Bobtail 6,5 Hembra 37,7 Oncológica 
116 Dálmata 10,5 Macho 27,5 Oncológica 
117 Pastor Alemán 5,5 Macho 31 Oncológica 
118 Mestizo 7 Macho 52 Traumática 

119 
West Highland 
White Terrier 

3 Macho 7,9 Traumática 

120 Mestizo 9 Macho 40 Oncológica 
121 Golden Retriever 11 Macho 30 Oncológica 
122 Chow Chow 2 Hembra 30 Mucocutánea 
123 Mestizo 9 Hembra 28,7 Digestiva 
124 Yorkshire Terrier 1 Macho 5,4 Traumática 

125 
Schnauzer 
Miniatura 

9 Hembra 7,9 Oncológica 

126 
Labrador 
Retriever 

1 Macho 32,6 Traumática 

127 Boxer 10 Hembra 22,4 Oncológica 
128 Mestizo 11 Hembra 22,8 Oncológica 
129 Husky Siberiano 12 Macho 26,7 Mucocutánea 
130 Boxer 6 Hembra 30 Oncológica 

131 
West Highland 
White Terrier 

12 Hembra 7,5 Oncológica 

132 
Cocker Spaniel 

Inglés 
13 Macho 15,5 Oncológica 

133 Mestizo 10 Hembra 22,3 Oncológica 
134 Fox Terrier 11 Macho 11,8 Digestiva 
135 Mestizo 9 Macho 59,9 Oncológica 
136 Pastor Alemán 8 Macho 30 Digestiva 

137 
West Highland 
White Terrier 

4 Macho 9,5 Digestiva 

138 Pastor Alemán 1 Macho 29,3 Traumática 

139 
West Highland 
White Terrier 

6 Hembra 7,9 Traumática 

140 
Cocker Spaniel 

Inglés 
9 Hembra 11,4 Oncológica 

141 Labrador Retr. 6 Hembra 30 Traumática 



Resultados 

 

151 

142 Dálmata 1 Hembra 19,1 Digestiva 
143 Rottweiler 4 Macho 42,7 Mucocutánea 

144 
Cocker Spaniel 

Inglés 
12 Macho 15,1 Traumática 

145 Mestizo 14 Hembra 12,2 Oncológica 
146 Husky Siberiano 11 Hembra 27,3 Digestiva 
147 Mestizo 14 Hembra 7 Oncológica 
148 Yorkshire Terrier 1 Macho 2,3 Digestiva 
149 Bulldog Inglés 5 Macho 31 Digestiva 
150 Mestizo 12 Macho 6,6 Digestiva 
151 Maltés 3 Macho 3,9 Digestiva 

152 
Alaskan 

Malamute 
1 Hembra 24 Digestiva 

153 Cairn Terrier 9 Hembra 5,1 Digestiva 
154 Golden Retriever 3 Hembra 27,2 Digestiva 
155 Bulldog Francés 2 Hembra 13 Traumática 
156 Spaniel Bretón 13 Hembra 22 Oncológica 
157 Maltés 6 Hembra 3,8 Oncológica 
158 Bulldog Inglés 8 Hembra 27 Oncológica 

159 
Cocker Spaniel 

Americano 
11 Hembra 12,2 Oncológica 

160 Chow Chow 6 Hembra 19 Digestiva 
161 Mestizo 7 Macho 36 Digestiva 

162 
Cocker Spaniel 

Inglés 
10 Hembra 14 Oncológica 

163 Pastor Alemán 2 Macho 27,6 Digestiva 
164 Doberman 7 Macho 23,7 Digestiva 
165 Mestizo 10 Macho 15,2 Oncológica 
166 Mestizo 7 Macho 30 Traumática 
167 Pastor Alemán 4 Macho 35 Mucocutánea 

 

 

 

5.2. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS 

 
 

Como se ha descrito previamente, la población de perros sanos de este estudio está 

constituida por 47 animales, que han sido incluidos en el Grupo 1.  

 

5.2.1. DESCRIPCIÓN ESTADÍSTICA DE LA POBLACIÓN DE PERROS 

SANOS 

 

5.2.1.1. Distribución en función del sexo 

 

La distribución de los perros sanos objeto de nuestro estudio en función del sexo 

queda reflejada en la tabla 7 y gráfico 1. 

 



Resultados 

 

152 

Los animales sanos incluidos en el estudio eran en un 51,06% machos y en un 

48.94% hembras.  

 
Tabla 7 y gráfico 1: Distribución de los 47 animales sanos en función del sexo 

 

 

 

Sexo 
Número de 

animales 
Porcentaje 

Macho 24 51,06 

Hembra 23 48,94 

51,06% 48,94%

0

10

20

30

40

50

P
o

rc
en

ta
je

 d
e 

an
im

al
es

Macho

Hembra

 

5.2.1.2. Distribución en función de la edad 

 

La edad media de los perros sanos incluidos en este estudio es de 3,41 años, siendo 

el mínimo de 5 meses y el máximo de 8 años. 

 

Los 47 perros sanos del Grupo 1 fueron clasificados en 3 grupos según su edad: 

cachorros (aquellos animales que tenían menos de 1 año al inicio del estudio); jóvenes 

(animales de más de 1 año hasta 3,5 años); y adultos (de 4 a 8 años). 

 

En la tabla 8 y gráfico 2 puede observarse la distribución de los animales de esta 

población en función de estos grupos de edad. 

 
Tabla 8 y gráfico 2: Distribución de los perros sanos en función de los grupos de edad establecidos 

 

 

Grupo de 

edad 

Número de 

perros 
Porcentaje 

Cachorro 11 23,40 

Joven 10 21,27 

Adulto 26 55,31 11 10

26

0

5

10

15

20

25

30

N
ú

m
er

o
 d

e
 a

n
im

al
es

Cachorro

Joven

Adulto

 

 



Resultados 

 

153 

 
5.2.1.3. Distribución en función de la raza 

 

La distribución de los 47 perros sanos incluidos en este estudio en función de su 

raza puede observarse en la tabla 9 y en el gráfico 3. 

 
Tabla 9 y gráfico 3: Distribución de los perros sanos en función de la raza 

 

Raza 

Número 

de 

perros 

Porcentaje 

Beagle 13 27,65% 

Pastor Alemán 11 23,40% 

Galgo 13 27,65% 

Mestizo 4 

West 

Highland 

White 

Terrier 

2 

Boxer 2 

Labrador 

Retriever 
1 

Otras 

razas 

Mastín 

Español 
1 

21,27% 

 

21,27%

27,65% 23,40%

27,65%

Beagle

Pastor Alemán

Galgo

Otras razas

 

 

5.2.2. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS BIOPATOLÓGICOS DE LA 

POBLACIÓN DE PERROS SANOS 

 

Las variables estudiadas para los 47 perros incluidos en la población de perros 

sanos de este estudio incluyen variables de la analítica sanguínea básica (hematología y 

bioquímica), proteinograma, inmunofenotipo caracterizado mediante citometría de flujo y 

concentración plasmática de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10, si bien estas últimas 

determinaciones de la concentración de dichas citocinas no han podido realizarse en todos 

los casos. 

 

5.2.2.1. Analítica sanguínea básica y proteinograma  

 

Tras la toma de muestras de sangre de cada perro se realizó una analítica sanguínea 

básica que incluyó la realización de un estudio hematológico completo, medición de la 



Resultados 

 

154 

glucemia, valoración de urea y creatinina y determinación de ALT (o GPT). Los resultados 

obtenidos se reflejan en las tablas 10 y 11. 

 
Tabla 10: Valores de la hematología de los perros sanos del estudio. A: Eritrograma, índices eritrocitarios y 

serie plaquetar. B: Recuento y fórmula leucocitarios. 

 
Intervalo de confianza para 

la media al 95% 
 
 

A:  
Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Glóbulos rojos 
x106/µl 

7,355 0,829 0,122 7,109 7,602 5,89 8,79 

Hemoglobina 
(g/dl) 

17,58 2,166 0,323 16,93 18,24 14 22 

Hematocrito (%) 52,404 5,74 0,855 50,68 54,129 40,9 64 

V.C.M. (fl) 71,028 2,232 0,329 70,365 71,691 67 75 

H.C.M. (pg) 23,898 0,82 0,125 23,645 24,15 22,4 25,6 

C.H.C.M. (g/dl) 33,55 1,205 0,178 33,2 33,91 31 36 

Plaquetas x103/µl 246,47 75,667 11,539 223,18 269,75 132 415 

 

 
Intervalo de confianza para 

la media al 95% 
 
 

B: 
Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Leucocitos 
x103/µl 

9,58 2,87 0,43 8,71 10,45 3,81 16,76 

Neutrófilos/µl 5612,36 1876,99 282,97 5041,70 6183,02 2355,28 10055,76 

Neutrófilos (%) 59,71 8,05 1,19 57,32 62,10 44,80 73,50 

Linfocitos/µl 2839,46 955,31 140,85 2555,78 3123,16 941,07 4776,00 

Linfocitos (%) 29,22 7,26 1,06 27,09 31,36 16,00 42,50 

Monocitos/µl 538,57 224,07 33,04 472,03 605,11 208,00 1026,72 

Monocitos (%) 5,21 1,44 0,22 4,77 5,65 2,90 9,30 

Eosinófilos/µl 459,41 346,18 52,79 352,87 565,95 22,36 1541,33 

Eosinófilos (%) 4,77 3,25 0,49 3,78 5,76 0,30 11,40 

Basófilos/µl 11,07 9,23 1,34 8,36 13,78 0,00 37,00 

Basófilos (%) 0,11 0,08 0,01 0,08 0,13 0,00 0,00 

 

 

 



Resultados 

 

155 

 

Tabla 11: Valores de la bioquímica sanguínea de los perros sanos 

 

Intervalo de confianza para la 

media al 95% 
 

 
Media 

Desviación 

típica 

Error 

típico 
Límite inferior  Límite superior 

Mínimo Máximo 

Glucosa (mg/dl) 74,570 21,719 3,168 68,200 80,950 51 121 

Urea (mg/dl) 20,255 7,973 1,163 17,914 22,596 6,2 40,0 

Creatinina 

(mg/dl) 
0,840 0,151 0,022 0,795 0,885 0,5 1,2 

GPT (U/l) 48,630 20,412 3,010 42,570 54,690 16 108 

 

El estudio electroforético de las proteínas de los 47 perros sanos incluidos en el 

estudio ofreció el siguiente resultado (tabla 12): 

 
Tabla 12: Resultados del proteinograma de la población de perros sanos 

 

Intervalo de confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite inferior  Límite superior 

Mínimo Máximo 

Proteínas totales 
(g/dl) 

6,194 0,640 0,093 6,006 6,382 5,2 8,0 

Albúmina (%) 53,578 4,581 0,683 52,201 54,954 43,0 62,1 

Albúmina (g/dl) 3,276 0,285 0,042 3,190 3,362 2,7 3,7 

Globulinas (g/dl) 2,85 0,474 0,071 2,71 3,00 2 4 

α1-globulinas 
(%) 

4,584 0,742 0,113 4,355 4,813 3,30 6,40 

α1-globulinas 
(g/dl) 

0,281 0,040 0,006 0,269 0,293 0,190 0,350 

α2-globulinas 
(%) 

12,612 2,485 0,370 11,865 13,358 7,90 17,40 

α2-globulinas 
(g/dl) 

0,771 0,186 0,028 0,715 0,828 0,410 1,110 

β-globulinas (%) 21,908 3,250 0,479 20,943 22,874 16,60 29,70 

β-globulinas 
(g/dl) 

1,332 0,241 0,036 1,260 1,405 0,950 1,840 

γ-globulinas (%) 7,325 2,213 0,333 6,652 7,997 3,80 12,40 

γ-globulinas 
(g/dl) 

0,472 0,183 0,027 0,418 0,527 0,220 1,020 

Cociente A/G 1,162 0,201 0,030 1,100 1,223 0,750 1,540 

 



Resultados 

 

156 

 

 

5.2.2.2. Inmunofenotipo 

 
Como se ha descrito en el apartado de materiales y métodos, a partir de las muestras 

de sangre recogidas con el anticoagulante EDTA se procedió a realizar el estudio del 

inmunofenotipo a través del marcaje de los linfocitos caninos con los anticuerpos 

monoclonales anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD21 y anti-CMHII y su posterior 

análisis en un citómetro de flujo. Los resultados obtenidos en el estudio inmunofenotípico 

de la población de perros sanos incluidos en nuestro estudio se han reflejado en las tablas 

13A y 13B. 

 
Tabla 13: Valores resultantes del inmunofenotipaje en la población de perros sanos del estudio. A: 
Resultados en valores porcentuales de las diferentes poblaciones linfocitarias y cociente CD4/CD8. B: 
Resultados en valores absolutos respecto al total de linfocitos. 

 
Intervalo de confianza para la 

media al 95% 
A: Media 

Desviación 

típica 

Error 

típico Límite 

inferior 

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

% de linfocitos T 

(CD3+) 
65,698 5,884 0,897 63,887 67,509 55,590 80,130 

% de linfocitos Th 

(CD3+CD4+) 
37,916 4,829 0,719 36,466 39,367 29,20 47,00 

% de linfocitos Tc 

(CD3+CD8+) 
19,754 7,109 1,059 17,618 21,890 7,350 35,30 

% de linfocitos B 

(CD21+) 
18,410 6,958 1,037 16,320 20,501 4,930 31,730 

% de linfocitos 

CMHII+ 
89,016 5,202 0,775 87,453 90,579 78,70 97,200 

% de linfocitos CD3-

CD21- 
15,154 4,887 0,728 13,685 16,622 6,850 27,540 

Cociente CD4/CD8 2,092 0,962 0,143 1,803 2,381 0,770 4,100 

 

 

 

 

 



Resultados 

 

157 

Intervalo de confianza para 

la media al 95% 
B: Media 

Desviación 

típica 

Error 

típico Límite 

inferior 

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Linfocitos T 

(CD3+)/µl 
1869,252 547,670 81,641 1704,714 2033,791 933,620 3083,380 

Linfocitos Th 

(CD3+CD4+)/µl 
1080,149 400,130 58,364 962,667 1197,632 290,130 1986,810 

Linfocitos Tc 

(CD3+CD8+)/µl 
506,199 171,441 26,144 453,437 558,960 189,840 844,610 

Linfocitos B 

(CD21+)/µl 
527,574 318,707 47,510 431,823 623,324 39,040 1198,290 

Linfocitos 

CMHII+/ µl 
2538,804 977,528 144,128 2248,514 2829,094 849,690 4642,270 

Linfocitos 

CD3-CD21-/µl 
417,554 167,206 24,925 367,319 467,789 128,230 896,700 

 

 

5.2.2.3. Concentración plasmática de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10 

 

En la tabla 14 se muestran los resultados obtenidos mediante ELISA de las 

concentraciones plasmáticas de las citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10, indicando el 

número de perros (N) del que se dispone de cada valor. 

 
Tabla 14: Valores de concentración de las citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10 en sangre periférica de la 

población de perros sanos del estudio 

 
Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media N 
Desviación 

típica 
Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Concentración 
IFN-γ (pg/ml) 

47,851 19 26,552 6,091 35,053 60,649 9,06 103,24 

Concentración  
IL-6 (pg/ml) 

47,089 16 35,338 8,834 28,258 65,919 0,00 117,506 

Concentración  
IL-10 (pg/ml) 

0,550 29 1,713 0,318 0,00 1,200 0,00 8,00 

Concentración 
TNF-α (pg/ml) 

13,201 20 13,291 2,972 6,981 19,422 0,00 48,56 

 



Resultados 

 

158 

5.2.3. ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE LA EDAD, EL SEXO Y LA  

RAZA SOBRE LAS VARIABLES ANALIZADAS EN LA POBLACIÓN DE 

PERROS SANOS 

 

A continuación se reflejan los resultados obtenidos de la influencia del sexo, la 

edad y la raza sobre los parámetros estudiados que se encuentran más directamente 

relacionados con el sistema inmunitario, como son la fórmula leucocitaria, el 

proteinograma, el inmunofenotipo y la concentración de citocinas.  

 

En la presente memoria únicamente indicaremos las relaciones que han resultado 

ser estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95%. 

 

5.2.3.1. Sexo 

 

En relación con el sexo del animal, no se encontraron diferencias estadísticamente 

significativas entre los machos y las hembras para ninguna de las variables analizadas. 

 

5.2.3.2. Edad 

 

En cuanto a la edad del animal, se observó la existencia de relaciones 

estadísticamente significativas entre el grupo de edad al que pertenecían los animales sanos 

del estudio (cachorro, joven y adulto) y ciertas variables. En concreto, se hallaron 

relaciones estadísticamente significativas entre la edad del animal y las siguientes 

variables: 

 

� Porcentaje de neutrófilos: en este estudio, se ha observado la existencia de una

relación estadísticamente significativa para un nivel de confianza del 95% entre 

la edad del perro y su porcentaje de neutrófilos en sangre periférica (p=0,001). 

En la tabla 15 quedan detallados los resultados de esta variable en los tres 

grupos de edad. 

 

Gracias al empleo del test de Bonferroni, que realiza comparaciones de 

múltiples medias, hemos podido determinar entre qué grupos de edad en 

concreto existen diferencias estadísticamente significativas para esta variable. 

Así, se observa que el porcentaje de neutrófilos aumenta significativamente con 

la edad, de modo que los cachorros presentan un menor valor porcentual de 

estas células (53,17%) que los adultos (63,13%) en la población de perros sanos 

estudiada. 



Resultados 

 

159 

Tabla 15: Porcentaje de neutrófilos en función de le edad en perros sanos 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95%  Media Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 53,170 6,907 2,184 48,228 58,112 44,8 68,0 

Joven 57,340 7,484 2,366 51,986 62,694 45,0 70,1 

Adulto 63,131 6,907 1,354 60,341 65,921 47,2 73,5 

Neutrófilos 
(%) 

Total 59,707 8,047 1,186 57,317 62,096 44,8 73,5 

 

 

� Valor absoluto y relativo de linfocitos: en la población de perros sanos incluida

en este estudio, se ha observado la existencia de una relación estadísticamente 

significativa para un nivel de significación del 95% entre la edad del animal y el 

valor, tanto porcentual como absoluto, de linfocitos que poseen en sangre 

periférica (p=0,001 y p=0,003, respectivamente). En la tabla 16 pueden 

observarse los resultados obtenidos para estas variables del estudio en los tres 

grupos de edad establecidos. 

 

En concreto, el test de Bonferroni indica que la población de perros sanos 

incluida en el grupo de los cachorros mostró un mayor porcentaje de linfocitos 

en sangre periférica (35,73%) que el grupo de adultos (26,56%). En cuanto al  

valor absoluto, los cachorros presentan un mayor número de linfocitos/µl 

(3702,07/µl) que los jóvenes (2718,15/µl) y que los adultos (µl).  

 

 
Tabla 16: Valores relativos y absolutos de linfocitos en sangre periférica de la población de perros sanos 

del estudio en función de su edad 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 35,773 5,607 1,690 32,006 39,540 23,2 41,1 

Joven 28,940 6,400 2,023 24,362 33,518 19,1 39,8 

Adulto 26,562 6,596 1,293 23,897 29,226 16,0 42,5 

Linfocitos 
(%) 

Total 29,223 7,264 1,059 27,090 31,356 16,0 42,5 



Resultados 

 

160 

Cachorro 3702,079 538,681 170,346 3316,729 4087,428 2571,93 4381,92 

Joven 2718,159 841,483 266,100 2116,198 3320,120 1598,20 4776,00 

Adulto 2554,353 946,190 185,563 2172,178 2936,528 941,07 4616,04 
Linfocitos/µl 

Total 2839,468 955,313 140,853 2555,775 3123,161 941,07 4776,00 

 

 

� Valor absoluto y relativo de las gamma globulinas: se ha observado que los

valores absolutos y relativos de las γ-globulinas en los perros sanos se 

encuentran influenciados, para un nivel de significación del 95%, por la edad 

del animal (p=0,001 y p=0,000, respectivamente). En la tabla 17 se han 

reflejado los resultados de los valores porcentuales y absolutos de las γ-

globulinas obtenidos en los tres grupos de edad estudiados en la población de 

perros sanos del estudio. 

 

En concreto, se observa que los cachorros presentan menores valores tanto 

absolutos como relativos de γ-globulinas (0,3009 g/dl y 5,191%) que los 

jóvenes (0,4944 g/dl y 8,078%) y los adultos (0,5277 g/dl y 8,020%). 

 
Tabla 17: Valores porcentuales y absolutos de globulinas en los perros sanos del estudio en función del 

grupo de edad al que pertenezcan 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 5,191 1,202 0,362 4,383 5,999 3,8 7,7 

Joven 8,078 1,707 0,569 6,766 9,390 5,8 10,9 

Adulto 8,020 2,147 0,438 7,113 8,927 4,1 12,4 

γ-globulinas 
(%) 

Total 7,325 2,213 0,333 6,652 7,997 3,8 12,4 

Cachorro 0,300 0,069 0,020 0,254 0,347 0,22 0,42 

Joven 0,494 0,110 0,036 0,409 0,579 0,35 0,69 

Adulto 0,537 0,193 0,037 0,459 0,615 0,24 1,02 

γ-globulinas 
(g/dl) 

Total 0,472 0,183 0,027 0,418 0,527 0,22 1,02 

 

 

� Valor absoluto de linfocitos T (CD3+) por µl: se ha observado que la edad del

animal influye de forma estadísticamente significativa para un nivel de 

significación del 95% en el número de linfocitos que expresan CD3 en su 



Resultados 

 

161 

superficie (p=0,029). En la tabla 18 se muestran los resultados obtenidos para el 

valor absoluto de estos linfocitos en sangre periférica en los diferentes grupos 

de edad en la población de perros sanos de nuestro estudio. 

 

Parece existir estadísticamente un mayor número de linfocitos T (CD3+) en 

sangre periférica en los cachorros (2243,30/µl) que en los perros adultos 

(1735,73/µl). 
 

Tabla 18: Valor absoluto de linfocitos T en sangre periférica en los diferentes grupos de edad de los perros 

sanos del estudio 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 2243,306 424,803 128,082 1957,919 2528,693 1590,73 2869,59 

Joven 1778,228 556,670 176,034 1380,009 2176,446 1024,17 3083,38 

Adulto 1735,738 533,821 108,965 1510,325 1961,151 933,62 2778,99 

Linfocitos T 
(CD3+)/µl 

Total 1869,252 547,670 81,641 1704,714 2033,791 933,62 3083,38 

 

 

� Valor porcentual y absoluto de los linfocitos Th (CD3+CD4+): se ha observado

que existe una influencia significativa al 95% de intervalo de confianza de la 

edad del animal sobre el porcentaje de linfocitos Th en sangre periférica 

(p=0,026), así como sobre el valor absoluto de estos linfocitos (p=0,000). En la 

tabla 19 pueden observarse los resultados de porcentajes y valores absolutos de 

linfocitos Th obtenidos para los perros sanos de diferentes edades.  

 

En concreto, el test de Bonferroni ha mostrado que existe un descenso del 

porcentaje de linfocitos Th en los perros adultos (media de porcentaje de 

linfocitos Th en sangre periférica de 36,52%) en comparación con los cachorros 

(media de linfocitos Th: 41,152%).  

 

En cuanto al valor absoluto, se ha observado que las diferencias 

significativas existentes se deben a las diferencias que se observan entre el valor 

de los linfocitos Th que presentan los cachorros (media de 1534,7982/µl) y el 

que presentan los jóvenes (1036,7060µl) y los adultos (904,5073µl), 

observándose un descenso en el número de estos linfocitos con la edad.   



Resultados 

 

162 

Tabla 19: Valores relativos y absolutos de linfocitos Th (CD3+CD4+)  según la edad del animal 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 41,152 4,367 1,316 38,218 44,086 35,10 47,00 

Joven 37,842 3,097 1,032 35,461 40,223 32,90 41,60 

Adulto 36,520 4,978 0,995 34,465 38,575 29,20 45,50 

% de linfocitos Th 
(CD3+CD4+) 

Total 37,916 4,829 0,719 36,466 39,367 29,20 47,00 

Cachorro 1534,79 197,737 59,620 1401,956 1667,640 1167,14 1755,81 

Joven 1036,70 421,363 133,246 735,280 1338,131 581,56 1986,81 

Adulto 904,50 302,067 59,240 782,499 1026,515 290,13 1482,45 

Linfocitos Th 
(CD3+CD4+)/µl 

Total 1080,14 400,130 58,364 962,667 1197,632 290,13 1986,81 

 

 

� Valor porcentual de linfocitos Tc (CD3+CD8+): los resultados obtenidos

muestran la existencia de una relación estadísticamente significativa entre la 

edad del animal y el porcentaje de linfocitos Tc que presenta en sangre 

periférica (p=0,000). En la tabla 20 se muestran los resultados obtenidos para el 

porcentaje de los linfocitos Tc en los tres grupos de edad. 
 

En este caso se observa la existencia de una diferencia estadísticamente 

significativa entre el porcentaje de linfocitos Tc presentes en sangre periférica 

en los cachorros (media de 12,59%) y en los adultos (23,73%) y, a su vez, entre 

el valor en los jóvenes (18,08%) y los adultos. Parece existir, por tanto, un 

aumento del porcentaje de linfocitos Tc a lo largo del tiempo. 
 

Tabla 20: Resultados porcentuales de linfocitos Tc en los diferentes grupos de edad de los perros sanos 
 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 12,594 3,364 1,014 10,334 14,854 7,350 20,120 

Joven 18,082 5,444 1,721 14,187 21,976 12,140 29,780 

Adulto 23,733 6,158 1,257 21,133 26,334 11,080 35,300 

% de linfocitos Tc 
(CD3+CD8+) 

Total 19,754 7,109 1,059 17,618 21,890 7,350 35,300 



Resultados 

 

163 

 

 

� Cociente CD4/CD8: se ha observado una asociación estadísticamente

significativa para un nivel de confianza del 95% entre la edad del perro y el 

cociente de linfocitos CD4+/CD8+ (p=0,000). En la tabla 21 se muestran los 

resultados del cociente CD4/CD8 obtenidos en la población sana del estudio en 

función de su edad. 

 

Gracias al empleo del test de Bonferroni, se ha observado que el valor del 

cociente CD4/CD8 es superior en los cachorros (3,14) que en los adultos (1,63). 

 
Tabla 21: Cociente CD4/CD8 en los grupos de edad establecidos en la población de perros sanos 

 

Intervalo de confianza para 
la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 3,147 0,622 0,207 2,669 3,626 2,160 3,820 

Joven 2,336 0,795 0,251 1,767 2,904 1,200 3,790 

Adulto 1,633 0,796 0,156 1,312 1,955 0,770 4,100 

Cociente 
CD4/CD8 

Total 2,092 0,962 0,143 1,803 2,381 0,770 4,100 

 

 

 

� Valor absoluto de linfocitos B (CD21+) por µl de sangre periférica: en nuestra

población de estudio se observa una relación estadísticamente significativa para 

un nivel de significación del 95% entre la edad del animal y el número de 

linfocitos B CD21+ por µl de sangre periférica (p=0,039). En la tabla 22 se 

muestran los resultados obtenidos para esta variable en los tres grupos de edad 

establecidos en nuestro estudio. 

 

Al igual que lo observado para los linfocitos T, el valor absoluto de los 

linfocitos B CD21+ parece ser mayor en los cachorros (749,56/µl) que en los 

adultos (441,61/µl). 

 

 

 

 



Resultados 

 

164 

Tabla 22: Valores absolutos de linfocitos B CD21+ en sangre periférica de perros sanos en función de su 

edad 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 749,560 342,638 114,21 486,184 1012,935 261,37 1152,39 

Joven 551,287 298,957 94,538 337,425 765,148 276,64 1198,29 

Adulto 441,612 288,752 56,628 324,982 558,241 39,04 1150,75 

Linfocitos B 
(CD21+)/µl 

Total 527,574 318,707 47,510 431,823 623,324 39,04 1198,29 

 

 

� Valor absoluto de linfocitos en sangre periférica que expresan CMH de clase II

en su superficie: se ha observado que la edad de los perros en la población sana 

está relacionada estadísticamente para un valor de significación del 95% con el 

número absoluto de linfocitos en sangre periférica que expresan las moléculas 

del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II en su superficie 

(p=0,002). En la tabla 23 se muestran los resultados obtenidos en nuestro 

estudio. 

 

Se observa un menor valor de linfocitos que expresan CMHII en su 

superficie en los perros jóvenes (2336,67/µl) y adultos (2258,75/µl) con 

respecto a los cachorros (3469,05/µl). 

 
Tabla 23: Relación del número de linfocitos que expresan CMHII en su superficie en los tres grupos de edad 

establecidos en la población sana 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 

Cachorro 3469,053 643,582 203,51 3008,662 3929,444 2379,03 4410,56 

Joven 2336,673 947,497 299,62 1658,874 3014,471 1305,88 4642,27 

Adulto 2258,758 896,469 175,81 1896,666 2620,850 849,69 4464,63 

Linfocitos 
CMHII+/ µl 

Total 2538,804 977,528 144,12 2248,514 2829,094 849,69 4642,27 



Resultados 

 

165 

 

5.2.3.3. Raza 

 

Para poder evaluar la posible influencia de la raza del animal sobre las diferentes 

variables analizadas, se clasificaron los animales sanos del estudio en 4 categorías: Beagle 

(con 13 animales), Pastor Alemán (11 perros), Galgo Español (13 animales) y Otras razas 

(10 animales). Se hallaron diferencias significativas en varias de las variables analizadas 

relacionadas de forma directa con el sistema inmunitario entre los diferentes grupos de 

razas estudiadas. 

 
En las tablas 24 a 27 se muestran aquellas variables para las que se ha encontrado 

relación estadísticamente significativa al 95% de intervalo de confianza con la raza. 

 
Tabla 24: Valores de la fórmula leucocitaria de los perros sanos en lo que se ha encontrado influencia 

estadísticamente significativa de la raza. Se indica también el valor de p 

 
 

Intervalo de 

confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 

Error 

típico 
Límite 

inferior 

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 
Valor 

de p 

Beagle 52,700 5,065 1,462 49,481 55,919 44,800 62,000 

Galgo 62,862 6,672 1,850 58,829 66,894 53,200 73,400 

Otra 59,090 10,084 3,188 51,876 66,304 45,000 73,500 

Pastor 
Alemán 

64,182 4,898 1,477 60,891 67,473 56,300 72,300 

% de 

neutrófilos 

Total 59,707 8,047 1,186 57,317 62,096 44,800 73,500 

0,001 

Beagle 4626,150 867,192 240,515 4102,116 5150,194 3129,300 6342,600 

Galgo 5351,250 1791,495 496,871 4268,667 6433,847 2453,640 8499,840 

Otra 6020,480 2331,821 777,273 4228,090 7812,884 2355,280 9717,200 

Pastor 
Alemán 

7005,910 1869,150 623,050 5569,153 8442,666 4712,310 10055,700 

Neutrófilos 

/µl 

Total 5612,360 1876,994 282,967 5041,703 6183,021 2355,280 10055,700 

0,021 

Beagle 34,046 5,398 1,497 30,784 37,308 25,700 41,100 

Galgo 27,146 5,953 1,651 23,548 30,744 18,800 35,000 

Otra 31,020 9,538 3,016 24,196 37,844 17,900 42,500 

Pastor 
Alemán 

24,345 4,258 1,283 21,485 27,206 16,000 31,700 

% de 

linfocitos 

Total 29,223 7,264 1,059 27,090 31,356 16,000 42,500 

0,003 



Resultados 

 

166 

Beagle 7,225 2,510 0,724 5,630 8,820 3,400 11,400 

Galgo 1,783 2,036 0,588 0,489 3,077 0,300 5,900 

Otra 4,022 1,845 0,615 2,604 5,441 2,100 8,000 

Pastor 
Alemán 

5,964 3,339 1,007 3,720 8,207 2,200 10,200 

% de 

eosinófilos 

Total 4,770 3,248 0,489 3,783 5,758 0,300 11,400 

0,000 

Beagle 691,216 268,494 74,466 528,966 853,465 362,440 1184,370 

Galgo 146,364 164,131 47,380 42,080 250,648 22,360 475,540 

Otra 413,710 192,960 64,320 265,387 562,032 208,000 808,000 

Pastor 
Alemán 

587,674 437,681 145,893 251,243 924,105 185,460 1541,330 

Eosinófilos 

/µl 

Total 459,410 346,175 52,791 352,873 565,947 22,360 1541,330 

0,000 

 

 

En relación con los parámetros de la fórmula leucocitaria, parece que la raza del 

perro ejerce una influencia sobre los neutrófilos, tanto en su valor relativo como en el 

absoluto (p=0,001 y p=0,021, respectivamente), sobre el porcentaje de linfocitos (p=0,000) 

y sobre los eosinófilos, en valor relativo y absoluto (p=0,000 y p=0,000, respectivamente). 

 

Gracias al empleo del test de Bonferroni se ha podido establecer en cada caso entre 

qué grupos raciales en concreto se encuentran diferencias estadísticamente significativas. 

El efecto de la raza sobre los neutrófilos queda reflejado en un menor valor porcentual y 

absoluto de estás células en los Beagles (52,70% y 4626,155/µl, respectivamente) en 

comparación con los Pastores Alemanes (64,182% y 7005,91/µl, respectivamente). 

Además, el porcentaje de estas células en los Beagles es también inferior al observado en 

los Galgos (62,86%). 

 

El porcentaje de linfocitos en sangre periférica de los perros sanos incluidos en este 

estudio es significativamente superior para un nivel de confianza del 95% en los Beagles 

(34,046%) que en los Pastores Alemanes (24,345%). 

 

En cuento al efecto que parece ejercer la raza sobre los eosinófilos presentes en 

sangre periférica de los perros sanos, se manifiesta en un menor valor porcentual y 

absoluto en los Galgos (1,783% y 146,36 eosinófilos/µl) con respecto a los Beagles 

(7,225% y 691,21 eosinófilos/µl) y los Pastores Alemanes (5,964% y 587,67 

eosinófilos/µl). Además, el porcentaje de estas células en los Beagles es mayor al que 

presentan los perros de otras razas (4,022%). 

 



Resultados 

 

167 

Tabla 25: Valores de las proteínas totales y del proteinograma que han mostrado asociación estadísticamente 

significativa (nivel de significación del 95%) con la raza. Se muestra el valor de p 

 

Intervalo de confianza 
para la media al 95% 

 Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Beagle 6,215 1,573 0,436 5,264 7,166 4,30 8,70 

Galgo 6,450 1,011 0,291 5,807 7,093 4,10 7,70 

Otra 8,068 2,965 0,937 5,947 10,189 3,80 12,40 

Pastor 
Alemán 

9,26 1,798 0,599 7,884 10,649 6,20 11,20 

γ-globulinas 
(%) 

Total 7,325 2,213 0,333 6,652 7,997 3,80 12,40 

0,002 

Beagle 0,373 0,099 0,027 0,313 0,434 0,25 0,54 

Galgo 0,378 0,063 0,018 0,338 0,418 0,24 0,48 

Otra 0,471 0,177 0,056 0,344 0,597 0,22 0,67 

Pastor 
Alemán 

0,693 0,174 0,052 0,576 0,810 0,42 1,02 

γ-globulinas 
(g/dl) 

Total 0,472 0,183 0,027 0,418 0,527 0,22 1,02 

0,000 

Beagle 1,131 0,129 0,035 1,053 1,209 0,84 1,40 

Galgo 1,338 0,178 0,053 1,217 1,458 0,90 1,54 

Otra 1,166 0,203 0,064 1,020 1,311 0,78 1,40 

Pastor 
Alemán 

1,004 0,164 0,051 0,886 1,121 0,75 1,25 

Cociente 
A/G 

Total 1,162 0,201 0,030 1,100 1,223 0,75 1,54 

0,001 

 

La concentración plasmática de γ-globulinas y el cociente Albúmina/Globulinas 

presentan una relación estadísticamente significativa con la raza del animal del estudio, 

como podemos observar en la tabla 25. Los valores de la p de cada una de las variables del 

proteinograma en relación con la raza se muestran también en la citada tabla. 

 

Así, las γ-globulinas (tanto en valor porcentual como en valor absoluto) son 

mayores en los perros de raza Pastor Alemán (9,26% y 0,69 g/dl, respectivamente) que en 

los Beagles (6,21% y 0,37 g/dl, respectivamente) y los Galgos (6,45% y 0,37 g/dl, 

respectivamente), siendo también superior el valor absoluto en los Pastores Alemanes en 

comparación con los perros de otras razas (0,47 g/dl). 

 

El cociente Albúmina/Globulinas es superior en los Galgos (1,33) en comparación 

con los Beagles (1,13) y los Pastores Alemanes (1,00).  

 

 



Resultados 

 

168 

Tabla 26: Valores de las variables del inmunofenotipo que se encuentran bajo la influencia de la raza del 

perro (para un 95% de intervalo de confianza). Se muestra el valor de p 

 
Intervalo de 

confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite 
inferior  

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Beagle 62,388 3,995 1,204 59,703 65,072 55,590 69,240 

Galgo 65,624 6,010 1,735 61,805 69,443 56,230 74,340 

Otra 65,259 6,824 2,158 60,377 70,140 57,300 80,130 

Pastor 
Alemán 

69,869 4,493 1,420 66,654 73,083 62,880 78,580 

% de linfocitos 
T (CD3+) 

Total 65,698 5,884 0,897 63,887 67,509 55,590 80,130 

0,029 

Beagle 13,210 3,398 0,942 11,156 15,264 7,350 19,560 

Galgo 23,104 6,622 1,911 18,896 27,312 12,660 35,300 

Otra 18,451 6,609 2,090 13,723 23,178 11,080 29,580 

Pastor 
Alemán 

25,547 4,294 1,357 22,475 28,618 17,640 29,780 

% de linfocitos 
Tc 

(CD3+CD8+) 

Total 19,754 7,109 1,059 17,618 21,890 7,350 35,300 

0,000 

Beagle 384,010 67,674 18,769 343,121 424,912 283,520 517,270 

Galgo 508,570 208,997 60,332 375,788 641,369 189,840 844,610 

Otra 548,290 118,368 37,431 463,620 632,971 349,600 703,620 

Pastor 
Alemán 

648,550 168,590 59,605 507,609 789,498 430,470 837,290 

Linfocitos Tc 
(CD3+CD8+)/µl 

Total 506,190 171,441 26,144 453,437 558,960 189,840 844,610 

0,003 

Beagle 22,893 5,362 1,547 19,486 26,300 15,730 31,730 

Galgo 17,501 7,570 2,185 12,691 22,311 6,620 29,410 

Otra 18,643 7,876 2,490 13,008 24,277 7,220 29,780 

Pastor 
Alemán 

14,301 4,336 1,307 11,388 17,214 4,930 21,910 

% de linfocitos 
B (CD21+) 

Total 18,410 6,958 1,037 16,320 20,501 4,930 31,730 

0,023 

Beagle 3,009 0,768 0,231 2,492 3,525 1,690 3,820 

Galgo 1,695 0,757 0,210 1,237 2,152 0,870 3,580 

Otra 2,353 0,974 0,308 1,656 3,049 1,250 4,100 

Pastor 
Alemán 

1,409 0,481 0,145 1,086 1,732 0,770 2,290 

Cociente 
CD4/CD8 

Total 2,092 0,962 0,143 1,803 2,381 0,770 4,100 

0,000 

 

 

 

 



Resultados 

 

169 

En el inmunofenotipaje se han hallado también ciertas relaciones estadísticamente 

significativas, para un nivel de confianza del 95%, entre las variables reflejadas en la tabla 

26 y las razas de los perros sanos de nuestro estudio. En concreto, parece que la raza puede 

influir sobre el porcentaje de linfocitos T (CD3+) (p=0,029), sobre el valor porcentual y 

absoluto de linfocitos Tc (CD3+CD8+) (p=0,000 y p=0,003, respectivamente), sobre el 

cociente CD4/CD8 (p=0,000) y sobre el porcentaje de linfocitos B (CD21+) (p=0,023). 

 

Los perros de raza Pastor Alemán parecen poseer un porcentaje mayor de linfocitos 

T (que expresan CD3 en su superficie) (69,86%) que los Beagles (62,38%).  

 

De la misma forma, los Pastores Alemanes muestran mayores valores porcentuales 

y absolutos (25,54% y 648,55/µl) que los Beagles (13,21% y 384,01/µl) para los linfocitos 

Tc (CD3+CD8+). Además, los Pastores Alemanes presentan porcentajes mayores de estos 

linfocitos que los perros de otras razas (18,45%) y el valor porcentual en los Galgos 

(23,10%) es también superior al de los Beagles. 

 

El cociente CD4/CD8 que se ha hallado en los Beagles (3,00) es superior al de los 

Galgos (1,69) y los Pastores Alemanes (1,40). En los Pastores Alemanes este cociente es 

inferior, además, al hallado en otras razas de perros del estudio (2,35). 

 

El porcentaje de linfocitos B CD21+ es superior en los perros de raza Beagle 

(22,89%) que en los Pastores Alemanes (14,30%). 

 
Tabla 5: Valores de la concentración de IL-6 en las diferentes razas de perros sanos. Se muestra el valor de p 

 
Intervalo de 

confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite 
inferior 

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Beagle 58,547 37,973 15,502 18,696 98,398 16,197 117,506 

Otra 71,571 18,053 9,026 42,844 100,298 53,411 91,292 

Pastor 
Alemán 

10,246 8,131 3,636 0,149 20,342 0,000 20,165 

Concentra- 
ción IL-6 
(pg/ml) 

Total 45,920 36,257 9,360 25,840 65,998 0,000 117,506 

0,009 

 

 
Se han hallado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% para el valor de la concentración plasmática de IL-6 en función de la 



Resultados 

 

170 

raza del animal (p=0,009), como puede observarse en la tabla 27.  Así, los perros de raza 

Pastor Alemán muestran una menor concentración de este mediador proteico (10,24 pg/ml) 

que los Beagles (58,54 pg/ml) y que los perros de Otras razas (71,57 pg/ml) del estudio. 

 

 

 

 

5.3. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS CON 

EMC 

 

 
La población de perros con EMC  incluidos en este estudio está constituida por un 

total de 37 animales que se han clasificado en el Grupo 2 siguiendo los criterios de 

inclusión descritos en el apartado de Materiales y Métodos de esta tesis doctoral. 

 
5.3.1. DESCRIPCIÓN ESTADÍSTICA DE LA POBLACIÓN DE PERROS 

CON EMC 

 
5.3.1.1. Distribución en función del sexo 

 

De los 37 perros incluidos en la población de animales con EMC de este estudio, 16 

eran machos y 21 hembras, como puede observarse en la tabla 28 y gráfico 4. 

 
Tabla 28 y gráfico 4: Distribución en función del sexo de los perros con EMC incluidos en el estudio 

 

 

 

Sexo 
Número de 

animales 
Porcentaje 

Macho 16 43,24 

Hembra 21 56,75 

 

43
,2

4%

56
,7

5%

0

10

20

30

40

50

60

P
o

rc
en

ta
je

 d
e 

an
im

al
es

Macho

Hembra

 

 
 



Resultados 

 

171 

 

5.3.1.2. Distribución en función de la edad 

 
La edad media de los perros con EMC incluidos en este estudio es de 5,65 años, 

siendo la edad mínima de 6 meses y la edad máxima de 12 años. 

 

Los 37 perros con EMC incluidos en el estudio fueron clasificados en 4 grupos de 

edad: cachorros (menores de 1 año); jóvenes (animales de más de 1 año hasta 3,5 años); 

adultos (de 4 a 8 años); y geriátricos (de más de 8 años). 

 

En la tabla 29 y gráfico 5 queda reflejada la distribución de la población de perros 

con EMC del estudio en función del grupo de edad en el que se hubiesen incluido. 

 
Tabla 29 y gráfico 5: Distribución de los perros con EMC en función de su edad 
 

 

 

Grupo de 

edad 

Número de 

perros 
Porcentaje 

Cachorro 4 10,81 

Joven 9 24,32 

Adulto 11 29,72 

Geriátrico 13 35,13 4

9
11

13

0

2

4

6

8

10

12

14

N
ú

m
er

o
 d

e 
an

im
al

es

Cachorro

Joven

Adulto

Geriátrico

 

5.3.1.3. Distribución en función de la raza 

 
De los perros con EMC incluidos en este estudio, 10 son mestizos (27,02%),  6 son 

Mastines Españoles (16,21%), 3 son de raza Cocker Spaniel Inglés (8,108%), 3 son de raza 

Labrador Retriever (8,108%), 3 son Teckel (8,108%), 2 son Sabuesos (5,40%), 2 son 

Bulldog Inglés (4,40%), 1 Pastor Alemán (2,70%), 1 Galgo Español (2,70%), 1 Bóxer 

(2,70%), 1 Spaniel Bretón (2,70%), 1 Podenco Ibicenco (2,70%), 1 Setter Irlandés 

(2,70%), 1 Yorkshire Terrier (2,70%) y 1 Caniche (2,70%)  (Tabla 30 y Gráfico 6). 

 

 

 

 



Resultados 

 

172 

Tabla 6 y gráfico 6: Distribución de los perros con EMC en función de su raza 

 

Raza Número de perros 

Mestizo 10 

Mastín Español 6 

Cocker Spaniel Inglés 3 

Labrador Retriever 3 

Teckel 3 

Sabueso 2 

Bulldog Inglés 2 

Pastor Alemán 1 

Galgo Español 1 

Boxer 1 

Spaniel Bretón 1 

Podenco Ibicenco 1 

Setter Irlandés 1 

Yorkshire Terrier 1 

Caniche 1 

 

Bulldog 

Sabueso

Teckel

Labrador Cocker 

Mastín 

Otras Razas Mestizo

Mestizo Mastín Español Cocker Spaniel Inglés

Labrador Retriever Teckel Sabueso

Bulldog Inglés Otras Razas
 

 

 

5.3.1.4. Distribución en función de la fase de la EMC 

 

Como se describió previamente en el apartado 4.3.4. de los Materiales y Métodos 

de esta tesis doctoral, debido a la dificultad existente en la infección natural por E. canis 

para diferenciar entre las fases aguda, subclínica y crónica típicamente descritas para la 

enfermedad (Woody, Hoskins 1991), se decidió clasificar a los perros con EMC en función 



Resultados 

 

173 

de si se encontraban en la fase subclínica (es decir, eran asintomáticos) o si se encontraban, 

por el contrario, en una fase clínica (sin diferenciar entre aguda o crónica). 

 

En este sentido, se han incluido en este trabajo 29 perros en la fase subclínica de la 

EMC (78,37%) y 8 en fase clínica (21,62%). Estos últimos presentaban una sintomatología 

variable, destacando la presencia de apatía (en 4 casos), anorexia (en 3 casos), pérdida de 

peso (en 5 casos) y/o síntomas hemorrágicos (en 4 casos), como epistaxis, presencia de 

petequias y equimosis o estros con sangrado más abundante de lo habitual. 

 
Tabla 31 y gráfico 7: Distribución de los perros con EMC en función de la fase de la enfermedad 

 

 

 

Fase de la EMC Número de animales 

Subclínica 29 

Clínica 8 

 

78
,3

7%

21
,6

2%

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

P
o

rc
e

n
ta

je
 d

e
 a

n
im

a
le

s

Subclínica

Clínica

 

5.3.2. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS BIOPATOLÓGICOS DE LA 

POBLACIÓN DE PERROS CON EMC 

 
De la misma forma ya descrita para los perros sanos del estudio, para los 37 perros 

incluidos en la población de perros con EMC se han analizado las variables de la analítica 

sanguínea básica (hematología y bioquímica), proteinograma, inmunofenotipo y la 

concentración de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α.  

 
5.3.2.1. Analítica sanguínea básica y proteinograma 

 

Las tablas 32 a 34 muestran los resultados obtenidos en la población de perros con 

EMC para las diferentes variables estudiadas de la hematología y bioquímica básicas y 

estudio electroforético de las proteínas. 

 

 

 



Resultados 

 

174 

Tabla 32: Resultados de la hematología sanguínea en perros con EMC. A: resultados de las series eritroide y 

plaquetar. B: resultados de la serie leucocitaria 

 

Intervalo de confianza para 
la media al 95% 

A: Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Glóbulos rojos 
x106/µl 

6,391 1,245 0,204 5,975 6,806 4 9,32 

Hemoglobina 
(g/dl) 

14,62 2,906 0,478 13,65 15,59 8 21 

Hematocrito (%) 45,833 9,127 1,5 42,789 48,876 24 62,6 

V.C.M. (fl) 71,805 5,943 0,977 69,824 73,787 60 81,5 

H.C.M. (pg) 22,876 1,409 0,231 22,406 23,346 19,8 26,2 

C.H.C.M. (g/dl) 32 2,552 0,42 31,15 32,85 29 38 

Plaquetas x103/µl 169,03 88,218 15,64 137,749 200,311 5 433 

 

Intervalo de confianza para 
la media al 95% 

B: Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Leucocitos 
x103/µl 

10,586 6,487 1,066 8,423 12,749 3,9 43,05 

Neutrófilos/µl 6261,994 5307,771 872,592 4492,295 8031,693 2808 35860,65 

Neutrófilos 
(%) 

59,405 14,942 2,456 54,423 64,388 23,5 87 

Linfocitos/µl 3048,683 2509,175 412,505 2212,082 3885,284 480 14960,78 

Linfocitos (%) 29,211 13,936 2,291 24,564 33,857 8 72,1 

Monocitos/µl 486,188 365,296 60,054 364,392 607,984 0 1830 

Monocitos (%) 4,757 2,916 0,479 3,784 5,729 0 13 

Eosinófilos/µl 605,378 517,651 87,499 427,559 783,198 39 1988 

Eosinófilos (%) 5,954 4,712 0,796 4,336 7,573 0,4 15,7 

Basófilos/µ 17,630 20,614 3,389 10,75 24,5 0 62 

Basófilos (%) 0,180 0,223 0,037 0,1 0,25 0 1 

 

 

 

 



Resultados 

 

175 

Tabla 33: Resultados de la bioquímica sanguínea básica de los perros con EMC del estudio 

 

Intervalo de confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite inferior  Límite superior 

Mínimo Máximo 

Glucosa 
(mg/dl) 

90,740 56,565 9,561 71,310 110,170 23 379 

Urea (mg/dl) 25,583 15,501 2,583 20,338 30,828 7,7 70,9 

Creatinina 
(mg/dl) 

0,874 0,3018 0,051 0,768 0,979 0,4 2,0 

GPT (U/l) 53,750 103,232 17,205 18,820 88,680 10 639 

 

El estudio electroforético de las proteínas de los 37 perros con EMC incluidos en el 

estudio ofreció el siguiente resultado (tabla 34): 

 
Tabla 34: Resultados del proteinograma de la población de perros con EMC del estudio 

 

Intervalo de confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite inferior  Límite superior 

Mínimo Máximo 

Proteínas totales 
(g/dl) 

7,275 1,229 0,204 6,859 7,691 5,50 11,0 

Albúmina (%) 39,758 10,000 1,796 36,090 43,426 17,60 59,50 

Albúmina (g/dl) 2,818 0,544 0,097 2,618 3,018 1,50 3,90 

Globulinas (g/dl) 4,490 1,471 0,264 3,950 5,020 3 9 

α1-globulinas 
(%) 

3,872 1,452 0,260 3,339 4,404 1,70 8,50 

α1-globulinas 
(g/dl) 

0,270 0,096 0,017 0,235 0,305 0,14 0,68 

α2-globulinas 
(%) 

8,520 2,953 0,530 7,437 9,603 2,90 17,20 

α2-globulinas 
(g/dl) 

0,601 0,189 0,034 0,532 0,671 0,31 1,16 

β-globulinas (%) 25,837 6,375 1,145 23,499 28,176 11,6 38,90 

β-globulinas 
(g/dl) 

1,846 0,424 0,076 1,6906 2,002 1,07 2,99 

γ-globulinas (%) 22,009 14,807 2,659 16,578 27,440 7,20 61,40 

γ-globulinas 
(g/dl) 

1,751 1,549 0,278 1,1837 2,320 0,48 6,20 

Cociente A/G 0,702 0,293 0,052 0,5951 0,8101 0,21 1,47 



Resultados 

 

176 

5.3.2.2. Inmunofenotipo 

 

Los resultados obtenidos en el estudio inmunofenotípico de la población de perros 

con EMC incluidos en nuestro estudio se han reflejado en las tablas 35A y 35B. 
 

Tabla 35: Valores obtenidos en la población de perros con EMC para las diferentes subpoblaciones 
linfocitarias. A: valores porcentuales de las subpoblaciones linfocitarias y cociente CD4/CD8. B: Valores 
absolutos en función del número de linfocitos/µl en la muestra. 
 

Intervalo de confianza para 
la media al 95% A: Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

% de linfocitos T 
(CD3+) 

72,218 9,049 1,575 69,009 75,427 56,790 91,320 

% de linfocitos Th 
(CD3+CD4+) 

32,915 9,441 1,596 29,671 36,158 12,20 48,60 

% de linfocitos Tc 
(CD3+CD8+) 

27,988 17,286 2,922 22,050 33,926 4,64 83,43 

% de linfocitos B 
(CD21+) 

14,058 7,852 1,327 11,361 16,756 1,16 35,08 

% de linfocitos 
CMHII+ 

91,906 5,197 0,891 90,092 93,719 77,15 98,85 

% de linfocitos CD3-
CD21- 

14,9071 14,634 2,509 9,800 20,013 1,71 70,87 

Cociente CD4/CD8 1,827 1,776 0,300 1,217 2,438 0,14 10,46 

 

Intervalo de confianza para 
la media al 95% B: Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico Límite 

inferior 
Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Linfocitos T 
(CD3+)/µl 

2139,391 1379,878 240,206 1650,107 2628,674 289,390 6856,730 

Linfocitos Th 
(CD3+CD4+)/µl 

1006,826 919,786 155,472 690,868 1322,784 132,260 5668,620 

Linfocitos Tc 
(CD3+CD8+)/µl 

1117,546 1450,164 245,122 619,397 1615,695 50,000 6264,090 

Linfocitos B 
(CD21+)/µl 

355,417 239,291 40,447 273,217 437,617 26,000 1206,500 

Linfocitos  
CMHII+/ µl 

2971,204 2537,878 435,242 2085,696 3856,711 370,320 14353,34 

Linfocitos 
CD3-CD21-/µl 

309,756 197,240 33,826 240,935 378,577 1,150 868,940 



Resultados 

 

177 

5.3.2.3. Concentración plasmática de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α 

 

Al  igual que en el caso de los perros sanos, no pudo llevarse a cabo la medición de 

la concentración de las citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-10 en la totalidad de los perros 

con EMC del estudio. Por ello, en la tabla 36 se muestran los resultados obtenidos 

mediante ELISA de las concentraciones plasmáticas de dichas citocinas especificando el 

número de perros (N) en el que se ha podido hallar cada valor. 

 
Tabla 36: Valores de la concentración de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α en la población de perros 

con EMC del estudio 

 

Intervalo de confianza 

para la media al 95% 
 Media N 

Desviación 

típica 

Error 

típico Límite 

inferior 

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 

Concentración 

IFN-γ (pg/ml) 
95,51 34 223,907 38,399 17,387 173,635 0 1119,18 

Concentración  

IL-6 (pg/ml) 
36,019 31 41,344 7,425 20,854 51,184 0 191,929 

Concentración  

IL-10 (pg/ml) 
19,96 32 68,868 12,174 0 44,79 0 370 

Concentración 

TNF-α (pg/ml) 
24,275 34 51,935 8,906 6,154 42,397 0 215,374 

 

 

5.3.3. ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DE LA FASE DE LA EMC SOBRE 

LAS VARIABLES ANALIZADAS EN LA POBLACIÓN DE PERROS CON EMC  

 
En un intento de buscar la existencia de relaciones estadísticamente significativas 

entre la existencia de manifestaciones clínicas de la enfermedad y las diferentes variables 

analizadas, se llevó a cabo un estudio estadístico comparativo a partir de los resultados de 

los perros con EMC de nuestro estudio según su fase (subclínica o clínica).  

 

Así, se ha observado que existen diferencias estadísticamente significativas para un 

nivel de confianza del 95% entre los perros con EMC en fase subclínica y clínica para los 

valores de glóbulos rojos/µl (p=0,000), hemoglobina (p=0,001), hematocrito (p=0,000), 

valores absolutos y relativos de eosinófilos (p=0,002 y p=0,002, respectivamente),  

porcentaje y valor absoluto de albúmina plasmática (p=0,000 y p=0,001 respectivamente), 

globulinas/dl (p=0,028), porcentaje de α1-globulinas (p=0,040), porcentaje de α2-

globulinas (p=0,025), porcentaje y valor absoluto de γ-globulinas (p=0,033 y p=0,048, 



Resultados 

 

178 

respectivamente) y cociente albúmina/globulinas (p=0,001). En cambio, no se han hallado 

diferencias estadísticamente significativas entre los perros con EMC en fase subclínica y 

en fase clínica para las demás variables analizadas, incluidos los parámetros del 

inmunofenotipo y la concentración de citocinas. Sin embargo, en este sentido cabe destacar 

que, a pesar de no haberse alcanzado la significación estadística para un intervalo de 

confianza del 95%, tanto el valor relativo como el valor absoluto de los linfocitos B 

sanguíneos son inferiores en los animales con sintomatología clínica de la enfermedad que 

en los animales en la fase asintomática. En las tablas 37-41 se han reflejado los valores de 

las variables estudiadas para los perros con EMC en fase clínica y en fase subclínica, 

indicando el valor de la p resultante de la comparación entre las subpoblaciones de perros 

afectados por esta enfermedad. En los casos en los que se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas, este valor aparece resaltado en color rojo. 

 

 
Tabla 37: Resultados de la hematología sanguínea en perros con EMC en función de la fase de la 
enfermedad, para un nivel de confianza del 95%. A: resultados de las series eritroide. B: resultados de la serie 
plaquetar. C: resultados de la serie leucocitaria. 

 

A: Fase de EMC Media Desviación 
típica 

Error típico de la 
media 

Valor de 
p 

Clínica 5,07 1,13 0,399 
Glóbulos rojos x106/µl 

Subclínica 6,755 1,0185 0,189 
0,000 

Clínica 11,65 3,086 1,091 
Hemoglobina (g/dl) 

Subclínica 15,44 2,295 0,426 
0,001 

Clínica 36,5 10,124 3,579 
Hematocrito (%) 

Subclínica 48,407 7,052 1,309 
0,000 

Clínica 71,45 6,93 2,45 
V.C.M. (fl) 

Subclínica 71,903 5,776 1,072 
0,852 

Clínica 22,838 1,599 0,565 
H.C.M. (pg) 

Subclínica 22,886 1,383 0,256 
0,932 

Clínica 32,15 3,154 1,115 
C.H.C.M. (g/dl) 

Subclínica 31,96 2,424 0,45 
0,851 

 

B: Fase de EMC Media 
Desviación 

típica 
Error típico de la 

media 
Valor de 

p 

Clínica 160,63 129,061 45,63 
Plaquetas x103/µl 

Subclínica 182,38 90,691 17,786 
0,595 

 

 



Resultados 

 

179 

C: Fase de EMC Media 
Desviación 

típica 
Error típico de la 

media 
Valor de 

p 

Clínica 10,721 6,123 2,164 
Leucocitos x103/µl 

Subclínica 10,549 6,688 1,242 
0,948 

Clínica 5367,832 2911,338 1029,313 
Neutrófilos/µl 

Subclínica 6508,659 5814,746 1079,771 
0,598 

Clínica 56,438 19,256 6,808 
Neutrófilos (%) 

Subclínica 60,224 13,826 2,567 
0,533 

Clínica 4167,006 4858,914 1717,885 
Linfocitos/µl 

Subclínica 2740,18 1317,817 244,712 
0,437 

Clínica 32,688 22,518 7,961 
Linfocitos (%) 

Subclínica 28,252 10,886 2,021 
0,604 

Clínica 641,56 498,609 176,285 
Monocitos/µl 

Subclínica 443,327 317,197 58,902 
0,178 

Clínica 6,45 2,862 1,011 
Monocitos (%) 

Subclínica 4,29 2,801 0,52 
0,063 

Clínica 245,66 219,104 82,813 
Eosinófilos/µl 

Subclínica 695,308 533,697 100,859 
0,002 

Clínica 2,286 2,344 0,886 
Eosinófilos (%) 

Subclínica 6,871 4,73 0,894 
0,002 

Clínica 10,11 15,525 5,489 
Basófilos/µl 

Subclínica 19,7 21,575 4,006 
0,178 

Clínica 0,09 0,125 0,044 
Basófilos (%) 

Subclínica 0,2 0,239 0,044 
0,085 

 

Tabla 38: Resultados de la bioquímica sanguínea básica en perros con EMC en función de la fase de la 

enfermedad 

 

 Fase de EMC Media 
Desviación 

típica 
Error típico de la 

media 
Valor de 

p 

Clínica 97,17 28,252 11,534 
Glucosa (mg/dl) 

Subclínica 89,41 61,09 11,344 
0,765 

Clínica 26,043 19,515 7,376 
Urea (mg/dl) 

Subclínica 25,472 14,788 2,746 
0,932 

Clínica 0,829 0,236 0,089 
Creatinina (mg/dl) 

Subclínica 0,885 0,319 0,061 
0,665 

Clínica 117,14 230,669 87,185 
GPT (U/l) 

Subclínica 38,45 25,927 4,814 
0,402 



Resultados 

 

180 

 

 

Tabla 39: Resultados del proteinograma en perros con EMC en función de la fase de la enfermedad 

 

 
Fase de 

EMC 
Media 

Desviación 

típica 
Error típico de la media 

Valor de 

p 

Clínica 8,143 1,893 0,715 
Proteínas totales (g/dl) 

Subclínica 7,066 0,942 0,174 
0,189 

Clínica 24,986 6,499 2,906 
Albúmina (%) 

Subclínica 42,598 7,823 1,534 
0,000 

Clínica 2,128 0,355 0,159 
Albúmina (g/dl) 

Subclínica 2,951 0,471 0,092 
0,001 

Clínica 6,67 1,763 0,788 
Globulinas (g/dl) 

Subclínica 4,06 0,98 0,192 
0,028 

Clínica 2,664 1,012 0,452 
α1-globulinas (%) 

Subclínica 4,104 1,421 0,278 
0,040 

Clínica 0,22 0,051 0,023 
α1-globulinas (g/dl) 

Subclínica 0,28 0,1 0,019 
0,207 

Clínica 5,86 2,082 0,931 
α2-globulinas (%) 

Subclínica 9,032 2,843 0,557 
0,025 

Clínica 0,488 0,131 0,058 
α2-globulinas (g/dl) 

Subclínica 0,623 0,193 0,037 
0,145 

Clínica 23,226 9,282 4,151 
β-globulinas (%) 

Subclínica 26,34 5,776 1,132 
0,326 

Clínica 1,942 0,486 0,217 
β-globulinas (g/dl) 

Subclínica 1,828 0,42 0,082 
0,592 

Clínica 43,228 18,132 8,109 
γ-globulinas (%) 

Subclínica 17,928 10,155 1,991 
0,033 

Clínica 4,006 2,149 0,961 
γ-globulinas (g/dl) 

Subclínica 1,318 0,963 0,189 
0,048 

Clínica 0,338 0,118 0,053 
Cociente A/G 

Subclínica 0,772 0,262 0,051 
0,001 

 

 

 

 

 



Resultados 

 

181 

 

Tabla 40: Resultados del inmunofenotipo en sangre periférica en perros con EMC en función de la fase de la 

enfermedad, para un nivel de confianza del 95%. A: resultados porcentuales del inmunofenotipo y cociente 

CD4/CD8. B: resultados absolutos del inmunofenotipo. 

 

A: Fase de EMC Media 
Desviación 

típica 

Error típico de la 

media 

Valor de 

p 

Clínica 73,278 12,54 5,119 % de linfocitos T 

(CD3+) Subclínica 71,983 8,38 1,612 
0,757 

Clínica 29,087 13,219 4,996 % de linfocitos Th 

(CD3+CD4+) Subclínica 33,871 8,287 1,566 
0,390 

Clínica 30,268 25,777 9,743 % de linfocitos Tc 

(CD3+CD8+) Subclínica 27,418 15,065 2,847 
0,703 

Clínica 10,437 10,872 3,843 % de linfocitos B 

(CD21+) Subclínica 15,131 6,6 1,27 
0,140 

Clínica 91,411 5,748 2,032 % de linfocitos 

CMH II+ Subclínica 92,058 5,128 1,005 
0,763 

Clínica 28,13 26,35 9,959 % de linfocitos 

CD3-CD21- Subclínica 11,478 7,233 1,392 
0,147 

Clínica 2,412 3,603 1,362 
Cociente CD4/CD8 

Subclínica 1,681 0,988 0,186 
0,613 

 

B: Fase de EMC Media 
Desviación 

típica 

Error típico de la 

media 

Valor de 

p 

Clínica 2332,911 2277,642 929,843 Linfocitos T 

(CD3+)/µl Subclínica 2096,386 1155,541 222,384 
0,71 

Clínica 1323,607 1934,914 731,328 Linfocitos Th 

(CD3+CD4+)/µl Subclínica 927,631 448,157 84,693 
0,610 

Clínica 1985,397 2772,097 1047,754 Linfocitos Tc 

(CD3+CD8+)/µl Subclínica 900,583 834,529 157,711 
0,344 

Clínica 251,34 221,94 78,467 Linfocitos B 

(CD21+)/µl Subclínica 386,255 239,368 46,066 
0,165 

Clínica 3993,14 4685,838 1656,694 Linfocitos CMH 

II+/ µl Subclínica 2656,762 1384,516 271,526 
0,451 

Clínica 377,811 194,45 73,495 Linfocitos 

CD3-CD21-/µl Subclínica 292,112 197,692 38,045 
0,313 

 

 



Resultados 

 

182 

 

Tabla 41: Concentración plasmática de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α en perros con EMC en 

función de la fase de la enfermedad, para un nivel de confianza del 95%. 

 

 
Fase de 
EMC 

Media Desviación típica 
Error típico de la 

media 
Valor de p 

Clínica 56,175 72,286 27,321 
IFN-γ (pg/ml) 

Subclínica 105,708 248,801 47,881 
0,610 

Clínica 12,488 11,068 4,518 
IL-6 (pg/ml) 

Subclínica 41,667 44,039 8,807 
0,122 

Clínica 54,05 139,468 52,714 
IL-10 (pg/ml) 

Subclínica 10,42 28,8 5,76 
0,441 

Clínica 32,671 80,027 32,671 
TNF-α (pg/ml) 

Subclínica 22,476 45,735 8,643 
0,669 

 

 

 

5.4. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SIN 

EMC Y CON DIFERENTES PATOLOGÍAS  

 
 

Un total de 83 perros atendidos por diversas enfermedades diferentes a la EMC 

han sido incluidos en este estudio y constituyen el Grupo 3, como se describió 

previamente. 

 

5.4.1. DESCRIPCIÓN ESTADÍSTICA DE LA POBLACIÓN DE PERROS 

SIN EMC PERO CON OTRAS PATOLOGÍAS  

 

5.4.1.1. Distribución en función del tipo de patología 

 

Como se describió en el apartado de Materiales y Métodos, siguiendo los criterios 

de inclusión establecidos, los 83 perros incluidos en el Grupo 3 de este estudio fueron 

considerados negativos frente a ehrlichiosis y leishmaniosis caninas mediante IFI y PCR y, 

en cambio, presentaban sintomatología clínica y/o alteraciones laboratoriales compatibles 

con otras enfermedades. Dichas enfermedades fueron agrupadas, para facilitar su estudio, 

en enfermedades mucocutáneas, cuando se trataba de patologías oftalmológicas, 

dermatológicas o de afectación de la cavidad oral, enfermedades oncológicas, 



Resultados 

 

183 

enfermedades digestivas y enfermedades traumatológicas. La distribución de los 83 

animales en función de estas patologías ha quedado reflejada en la tabla 42. 

 
Tabla 42: Distribución de los 83 perros del Grupo 3 en función de la patología que padecían 

 

Tipo de patología Número de animales Porcentaje de animales 

Digestiva 20 24,09 

Oncológica 28 33,73 

Mucocutánea 18 21,68 

Traumatológica 17 20,48 

 

Debido a que el objetivo inicial de este trabajo no era el estudio de ninguna 

patología digestiva, oncológica, traumatológica o mucocutánea en concreto y que sólo se 

ha empleado su caracterización para tratar de comparar las diferentes variables estudiadas 

entre los perros con EMC y con otras patologías, con las que a menudo puede asociarse, no 

se ha hecho una clasificación más concreta de patologías, agrupándose en las citadas 4 

categorías.  

 

En este sentido, cabe destacar que entre las patologías clasificadas como 

“digestivas” la amplísima mayoría eran casos de enfermedad inflamatoria crónica 

intestinal.  

 

Bajo el término de patologías “mucocutáneas” se han englobado, en su mayoría, 

enfermedades con un componente inflamatorio de afectación dermatológica, oftalmológica 

o periodontal.  

 

Entre los 17 casos clínicos de patologías “traumatológicas” se han incluido 

principalmente cuadros de displasias, fracturas, luxaciones y enfermedades degenerativas 

de diverso origen. 

 

De los 28 casos incluidos en el estudio con patologías “oncológicas”, se han 

incluido principalmente casos de tumores de mama, siendo el resto en su mayoría casos de 

masas aisladas en diferentes localizaciones. En cuanto a la malignidad de estos casos, 18 

fueron considerados tumores malignos en base a sus características histopatológicas, 

mientras que las biopsias de los restantes 10 casos oncológicos mostraron que se trataba de 

tumores benignos. 

 

 



Resultados 

 

184 

 

5.4.1.2. Distribución en función del sexo 

 

Del total de perros incluidos en el Grupo 3 del estudio, 44 eran machos y 39 

hembras (Tabla 43). 

 
Tabla 43: Distribución de los 83 animales del Grupo 3 del estudio en función del sexo 

 

Sexo 
Número de 

animales 
Porcentaje 

Macho 44 53,01 

Hembra 39 46,98 

 

En el gráfico 8 puede observarse la distribución en función del sexo de los animales 

incluidos en cada uno de los grupos de patologías. De los perros con patologías digestivas, 

8 eran hembras (40%) y 12 machos (60%). Entre los 28 perros con patologías oncológicas,  

20 eran hembras (71,42%) y 8 machos (28,57%). En la categoría de enfermedades 

mucocutáneas, 4 de los 18 perros incluidos eran hembras (22,22%) y 14 machos (77,77%). 

Finalmente, entre los 17 perros con patologías traumatológicas, 7 eran hembras (41,17%) y 

10 machos (58,82%). 

 
Gráfico 8: Distribución en función del sexo de los perros incluidos en cada uno de los subgrupos de 

patologías del Grupo 3 del estudio 

 

60%

40% 28,57%

71,42% 77,77%

22,22%

58,82%

41,17%

0

10

20

30

40

50

60

70

80

P
o

rc
en

ta
je

 d
e 

an
im

al
es

Digestiva Oncológica Mucocutánea Traumatológica

Machos

Hembras

 

 

5.4.1.3. Distribución en función de la edad 

 

Los 83 perros incluidos en el Grupo 3 del estudio fueron clasificados, al igual que 

en las poblaciones ya descritas, en 4 grupos según su edad: cachorros (aquellos animales 



Resultados 

 

185 

que tenían menos de 1 año al inicio del estudio); jóvenes (animales de más de 1 año hasta 

3,5 años); adultos (de 4 a 8 años); y geriátricos (mayores de 8 años). En la tabla 44 puede 

observarse la distribución que siguen los 83 animales de este grupo en función de su edad. 

 
Tabla 44: Distribución de los perros con patologías diferentes de la EMC en función de la edad 

 

Grupo de edad Número de perros Porcentaje 

Cachorro 13 15,66 

Joven 11 13,25 

Adulto 21 25,30 

Geriátrico 38 45,78 

 
La edad media de estos perros es de 6,83 años, siendo el mínimo de 4 meses y el 

máximo de 14 años. 

 
En la Tabla 45 puede observarse la distribución de los animales de esta población 

en función de la patología y del grupo de edad al que pertenecían. 

 
Tabla 45: Distribución en función de la edad de los perros incluidos en los grupos de patologías digestivas, 

oncológicas, mucocutáneas y traumatológicas 

 

 Cachorro Joven Adulto Geriátrico 

Digestiva 4 5 5 6 

Oncológica 0 1 4 23 

Mucocutánea 3 1 7 7 

Traumatológica 6 4 5 2 

 

 
5.4.1.4. Distribución en función de la raza 

 
Los perros del Grupo 3 mostraron una distribución en cuanto a la raza muy 

heterogénea, estando representadas en esta población un total de 28 razas (tabla 46). 
 

 
 
 



Resultados 

 

186 

Tabla 46: Distribución de los perros del Grupo 3 del estudio en función de la raza 

 

Raza Número de perros 

Alaskan Malamute 1 

Beagle 1 

Bobtail 1 

Boxer 5 

Braco Alemán 1 

Bulldog Francés 1 

Bulldog Inglés 4 

Cairn Terrier 1 

Caniche 1 

Chow Chow 2 

Cocker Spaniel Americano 2 

Cocker Spaniel Inglés 7 

Dálmata 2 

Doberman 1 

Fox Terrier 1 

Golden Retriever 3 

Husky Siberiano 3 

Labrador Retriever 3 

Lakeland Terrier 1 

Bichón Maltés 2 

Mestizo 20 

Pastor Alemán 6 

Rottweiler 1 

Schnauzer miniatura 1 

Shar Pei 2 

Spaniel Bretón 1 

West Highland White Terrier 6 

Yorkshire Terrier 3 

 

 

5.4.2. DESCRIPCIÓN DE LOS PARÁMETROS BIOPATOLÓGICOS DE LA 

POBLACIÓN DE PERROS SIN EMC PERO CON OTRAS PATOLOGÍAS 

 

Al igual que lo descrito para las poblaciones de perros sanos y con EMC de este 

estudio, a partir de las muestras de sangre de los 83 perros incluidos en el Grupo 3, o 

perros con patologías diferentes a la EMC, se realizaron hematología y bioquímica básicas, 

proteinograma e inmunofenotipaje mediante citometría de flujo. En estos animales no fue 

posible determinar la concentración plasmática de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-

α. 

 



Resultados 

 

187 

En estos 83 perros los resultados tanto serológicos como moleculares frente a E. 

canis y L. infantum fueron negativos, descartándose, por tanto, la EMC y la leishmaniosis 

canina en ellos, lo que permitió su inclusión en el Grupo 3 del estudio, siguiendo los 

criterios establecidos en el apartado 4.3.4. de la presente tesis doctoral.  

 

Los resultados obtenidos para el resto de variables analizadas a partir de las 

muestras sanguíneas de estos perros serán descritos a continuación en función del tipo de 

patología de cada animal en concreto y se compararán con los obtenidos en los animales 

sanos y en los animales con EMC. 

 

 

 

5.5. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS 

ENTRE LAS POBLACIONES DE PERROS SANOS, CON EMC Y 

CON OTRAS PATOLOGÍAS  

 
 

Con el fin de conocer la posible existencia de diferencias en los resultados 

encontrados para las variables analizadas en cada una de las poblaciones de perros (sanos, 

con EMC y con diversas patologías digestivas, mucocutáneas, oncológicas o traumáticas) 

se realizó un estudio comparativo de los mismos, empleando para ello un análisis de 

varianza (ANOVA) y, en caso de hallarse diferencias significativas entre los grupos, un 

test de Bonferroni, que permite realizar comparaciones de múltiples medias y, así, 

determinar entre qué grupos de patologías en concreto se encuentran las diferencias 

estadísticas para cada parámetro biopatológico.  

 

En las siguientes tablas (tablas 47-54) pueden observarse los resultados de cada 

variable en cada grupo, así como el valor de la p obtenido en la comparación de los grupos 

para cada variable. En los casos en los que se han encontrado diferencias estadísticamente 

significativas para un nivel de confianza del 95% (p<0,05), el valor de la p se ha remarcado 

en color rojo.  

 

Como se ha mencionado previamente, en el grupo de perros con patologías 

digestivas, mucocutáneas, oncológicas y traumatológicas (Grupo 3) no fue posible realizar 

la determinación de la concentración de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α, por lo 

que el estudio comparativo sólo ha podido realizarse para las poblaciones de perros sanos y 

de perros con EMC. 

 



Resultados 

 

188 

Tabla 47: Comparación de los valores de la serie roja de la hematología entre las poblaciones de perros con 
patologías digestivas, patologías mucocutáneas, patologías oncológicas, patologías traumatológicas, EMC y 
perros sanos. 
  

Intervalo de 
confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior  

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Digestiva 8,547 7,858 1,852 4,639 12,455 5,51 39,9 

Mucocutánea 6,976 0,844 0,199 6,556 7,396 5,57 8,9 

Oncológica 6,568 1,041 0,2 6,157 6,98 4,36 8,42 

Traumática 7,213 0,708 0,171 6,849 7,577 4,98 7,93 

Ehrlichiosis 6,391 1,245 0,204 5,975 6,806 4,00 9,32 

Glóbulos 
rojos 

x106/µl 

Sano 7,355 0,829 0,122 7,109 7,602 5,89 8,79 

0,119 

Digestiva 15,97 1,703 0,401 15,12 16,81 13,00 18,00 

Mucocutánea 16,49 1,772 0,418 15,61 17,38 14,00 21,00 

Oncológica 15,43 2,28 0,431 14,54 16,31 11,00 21,00 

Traumática 17,09 1,821 0,442 16,16 18,03 12,00 20,00 

Ehrlichiosis 14,62 2,906 0,478 13,65 15,59 8,00 21,00 

Hemoglo-
bina (g/dl) 

Sano 17,58 2,166 0,323 16,93 18,24 14,00 22,00 

0,000 

Digestiva 45,478 4,869 1,147 43,056 47,899 36,90 51,50 

Mucocutánea 48,733 6,198 1,46 45,651 51,816 36,70 63,30 

Oncológica 45,682 7,157 1,352 42,907 48,457 32,00 63,60 

Traumática 49,982 4,997 1,212 47,413 52,552 36,00 57,40 

Ehrlichiosis 45,833 9,127 1,50 42,789 48,876 24,00 62,60 

Hemato-
crito (%) 

Sano 52,404 5,74 0,855 50,68 54,129 40,90 64,00 

0,000 

Digestiva 68,689 3,954 0,932 66,722 70,655 62,90 80,50 

Mucocutánea 69,906 3,619 0,853 68,106 71,705 63,30 76,00 

Oncológica 69,615 3,745 0,72 68,133 71,097 62,80 75,50 

Traumática 69,371 3,472 0,842 67,585 71,156 62,60 74,40 

Ehrlichiosis 71,805 5,943 0,977 69,824 73,787 60,00 81,50 

V.C.M. 
(fl) 

Sano 71,028 2,232 0,329 70,365 71,691 67,00 75,00 

0,051 

Digestiva 24,144 1,293 0,304 23,501 24,788 21,70 26,50 

Mucocutánea 23,744 1,376 0,324 23,06 24,429 20,40 26,80 

Oncológica 23,548 1,294 0,249 23,036 24,06 20,90 25,60 

Traumática 23,876 1,106 0,268 23,308 24,445 22,20 25,90 

Ehrlichiosis 22,876 1,409 0,231 22,406 23,346 19,80 26,20 

H.C.M. 
(pg) 

Sano 23,898 0,82 0,125 23,645 24,15 22,40 25,60 

0,001 

Digestiva 35,16 1,253 0,295 34,54 35,78 33,00 37,00 

Mucocutánea 33,96 1,449 0,341 33,24 34,68 32,00 38,00 

Oncológica 33,84 1,179 0,227 33,38 34,31 32,00 37,00 

Traumática 34,48 1,929 0,468 33,49 35,47 32,00 38,00 

Ehrlichiosis 32,00 2,552 0,42 31,15 32,85 29,00 38,00 

C.H.C.M. 
(g/dl) 

Sano 33,55 1,205 0,178 33,20 33,91 31,00 36,00 

0,000 

 

 



Resultados 

 

189 

Como puede observarse en la tabla 47, se han hallado diferencias estadísticamente 

significativas entre los valores de algunas de las variables de la serie roja en las diferentes 

poblaciones de perros incluidas en este estudio. El empleo del test de Bonferroni ha 

permitido establecer entre qué grupos de patologías en concreto se hallan diferencias 

estadísticas en cada caso. 

 

Así, los perros con EMC y con patologías oncológicas presentan una concentración 

de hemoglobina (14,62 g/dl  y 15,43 g/dl, respectivamente) menor que los perros sanos 

(17,58 g/dl) y que los perros con patologías traumatológicas (17,09 g/dl).  

 

Del mismo modo, los perros de la población sana muestran un hematocrito mayor 

(52,40%) que los perros con patologías digestivas (45,47%), oncológicas (45,68%) y EMC 

(45,83%). 

 

Además, los perros con EMC presentan menores valores de H.C.M. (22,87 pg) que 

los perros con patologías digestivas (24,14 pg) y que los perros sanos (23,89 pg). 

Asimismo, los perros con EMC presentan un menor valor de CHCM (32 g/dl) que los 

demás grupos de perros del estudio.  
 

Tabla 48: Resultados del recuento plaquetar en los perros del estudio en función del tipo de patología que 
padecían. 
 

Intervalo de 

confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 

Error 

típico 
Límite 

inferior  

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 
Valor 

de p 

Digestiva 366,63 140,852 35,213 291,57 441,68 90 732 

Mucocutánea 308,11 89,287 21,045 263,71 352,51 188 505 

Oncológica 364,12 154,331 30,866 300,42 427,82 214 843 

Traumática 277,47 77,986 20,136 234,28 320,65 117 398 

Ehrlichiosis 169,03 88,218 15,64 137,749 200,311 5 433 

Plaquetas 

x103/µl 

Sano 246,47 75,667 11,539 223,18 269,75 132 415 

0,000 

 

 

Como puede observarse en la tabla 48, se han hallado diferencias estadísticamente 

significativas para un nivel de confianza del 95% en el recuento plaquetario entre los 

diferentes grupos caninos estudiados.  
 

En concreto, los perros con EMC presentan un menor valor del recuento de esta 

población celular que los demás grupos, mientras que los perros con patologías digestivas, 



Resultados 

 

190 

oncológicas y mucocutáneas presentan un mayor valor de esta variable que los restantes 

grupos de perros. 
 

Tabla 49: Resultados del estudio comparativo de la serie blanca entre las poblaciones de perros con 

patologías digestivas, mucocutáneas, oncológicas y traumatológicas, perros con EMC y perros sanos. 

 

Intervalo de 

confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 

Error 

típico 
Límite 

inferior  

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 
Valor 

de p 

Digestiva 10,125 4,085 0,962 8,094 12,157 5,7 19,3 

Mucocutánea 11,372 3,704 0,873 9,529 13,214 6,73 22,5 

Oncológica 9,743 3,457 0,653 8,402 11,083 3,3 18,09 

Traumática 9,101 2,135 0,518 8,003 10,199 5,6 13,91 

Ehrlichiosis 10,586 6,487 1,066 8,423 12,749 3,9 43,05 

Glóbulos 

blancos 

x103/µl 

Sano 9,578 2,869 0,432 8,705 10,45 3,81 16,76 

0,562 

Digestiva 7407,56 3664,273 888,71 5523,56 9291,561 2829 14723,2 

Mucocutánea 7367,35 3089,482 728,198 5830,99 8903,718 4071,65 16987,5 

Oncológica 7167,71 3103,403 586,488 5964,34 8371,091 3168 14761,4 

Traumática 6435,38 2065,528 500,964 5373,38 7497,377 3864 10418,5 

Ehrlichiosis 6261,99 5307,771 872,592 4492,29 8031,693 2808 35860,6 

Neutrófilos 

/µl 

Sano 5612,36 1876,994 282,967 5041,7 6183,021 2355,28 10055,7 

0,278 

Digestiva 71,871 14,111 3,422 64,615 79,126 41 89 

Mucocutánea 63,822 8,394 1,978 59,648 67,997 46,5 79,1 

Oncológica 72,986 10,637 2,01 68,861 77,11 53,1 96 

Traumática 70,176 11,426 2,771 64,302 76,051 56,7 94 

Ehrlichiosis 59,405 14,942 2,456 54,423 64,388 23,5 87 

Neutrófilos 

(%) 

Sano 59,707 8,047 1,186 57,317 62,096 44,8 73,5 

0,000 

Digestiva 2010,55 1397,962 329,502 1315,36 2705,742 594 5404 

Mucocutánea 2705,36 770,16 181,528 2322,37 3088,356 1377 4297,59 

Oncológica 1766,71 799,998 151,185 1456,5 2076,919 99 4100 

Traumática 1912,02 750,194 181,948 1526,31 2297,739 309 3103 

Ehrlichiosis 3048,68 2509,175 412,505 2212,08 3885,284 480 14960,7 

Linfocitos 

/µl 

Sano 2839,46 955,313 140,853 2555,77 3123,161 941,07 4776 

0,002 

Digestiva 20,265 13,06 3,167 13,55 26,98 7 55 

Mucocutánea 24,761 6,52 1,536 21,519 28,004 14,4 35,2 

Oncológica 18,904 8,104 1,531 15,761 22,046 3 37,2 

Traumática 20,5 8,669 2,102 16,043 24,957 3 35,1 

Ehrlichiosis 29,211 13,936 2,291 24,564 33,857 8 72,1 

Linfocitos 

(%) 

Sano 29,223 7,264 1,059 27,09 31,356 16 42,5 

0,000 



Resultados 

 

191 

Digestiva 298,946 288,741 70,03 150,489 447,403 0 925,56 

Mucocutánea 539,877 310,69 73,23 385,375 694,38 0 1327,5 

Oncológica 404,233 312,959 59,143 282,88 525,586 0 1230,12 

Traumática 312,932 234,323 56,831 192,454 433,41 0 719,25 

Ehrlichiosis 486,188 365,296 60,054 364,392 607,984 0 1830 

Monocitos 

/µl 

Sano 538,572 224,065 33,036 472,033 605,111 208 1026,72 

0,012 

Digestiva 2,959 2,573 0,624 1,636 4,282 0 9 

Mucocutánea 4,828 2,44 0,575 3,614 6,041 0 9,5 

Oncológica 3,957 2,282 0,431 3,072 4,842 0 8 

Traumática 3,371 2,518 0,61 2,076 4,665 0 7,5 

Ehrlichiosis 4,757 2,916 0,479 3,784 5,729 0 13 

Monocitos 

(%) 

Sano 5,207 1,441 0,217 4,769 5,645 2,9 9,3 

0,005 

Digestiva 382,047 386,443 93,726 183,356 580,738 0 1220 

Mucocutánea 727,952 765,839 180,509 347,109 1108,795 141 3492,06 

Oncológica 387,067 373,219 71,826 239,427 534,708 0 1525,86 

Traumática 372,841 315,344 76,482 210,706 534,977 0 1126,65 

Ehrlichiosis 605,378 517,651 87,499 427,559 783,198 39 1988 

Eosinófilos 

/µl 

Sano 459,41 346,175 52,791 352,873 565,947 22,36 1541,33 

0,064 

Digestiva 4,647 5,716 1,386 1,708 7,586 0 20 

Mucocutánea 6,194 5,434 1,28 3,492 8,897 2 24,2 

Oncológica 3,87 3,786 0,728 2,373 5,368 0 14,7 

Traumática 4,129 3,265 0,791 2,451 5,808 0 11,1 

Ehrlichiosis 5,954 4,712 0,796 4,336 7,573 0,4 15,7 

Eosinófilos 

(%) 

Sano 4,77 3,248 0,489 3,783 5,758 0,3 11,4 

0,315 

Digestiva 12,71 35,629 8,641 0 31,03 0 138 

Mucocutánea 5,01 6,926 1,632 1,57 8,45 0 20 

Oncológica 1,54 3,88 0,747 0,01 3,08 0 13 

Traumática 6,08 7,916 1,92 2,01 10,15 0 25 

Ehrlichiosis 17,63 20,614 3,389 10,75 24,5 0 62 

Basófilos 

/µl 

Sano 11,07 9,234 1,347 8,36 13,78 0 37 

0,003 

Digestiva 0,18 0,527 0,128 0 0,45 0 2 

Mucocutánea 0,04 0,062 0,015 0,01 0,08 0 0 

Oncológica 0,02 0,058 0,011 0 0,05 0 0 

Traumática 0,06 0,086 0,021 0,02 0,11 0 0 

Ehrlichiosis 0,18 0,223 0,037 0,1 0,25 0 1 

Basófilos 

(%) 

Sano 0,11 0,083 0,012 0,08 0,13 0 0 

0,027 

 

  



Resultados 

 

192 

Entre los parámetros de la serie blanca analizados en la población canina estudiada, 

se han hallado algunas diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en función del tipo de patología.  

 

En concreto, se ha observado que los perros con EMC y los perros sanos presentan 

un menor porcentaje de neutrófilos (59,40% y 59,70%, respectivamente) que los perros 

con patologías traumatológicas (70,17%), digestivas (71,87%) y oncológicas (72,98%). 

 

En cuanto a la población linfocitaria, los perros con patologías oncológicas 

presentan menores valores porcentuales y absolutos de linfocitos (18,90% y 1766,71/µl, 

respectivamente) que los perros sanos (29,22% y 2839,468/µl, respectivamente) y los 

perros con EMC (29,21% y 3048,683/µl, respectivamente). Además, el porcentaje de 

linfocitos que presentan los perros sanos es también significativamente superior al de los 

perros con patologías traumatológicas (20,50%) y digestivas (20,26%). Por otra parte, se 

ha observado que en la población de perros estudiada, el porcentaje de monocitos es 

significativamente superior en los perros sanos (5,20%) que en los que padecen patologías 

digestivas (2,95%).   

 
Tabla 50: Resultados de la bioquímica sanguínea básica en función del tipo de patología. 

 

Intervalo de 
confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 
Error 
típico 

Límite 
inferior  

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Digestiva 107,41 13,039 3,162 100,71 114,12 80 146 

Mucocutánea 99,28 13,787 3,25 92,42 106,13 66 116 

Oncológica 99,69 11,331 2,222 95,12 104,27 60 112 

Traumática 99,88 9,623 2,334 94,93 104,83 86 119 

Ehrlichiosis 90,74 56,565 9,561 71,31 110,17 62 379 

Glucosa 
(mg/dl) 

Sano 74,57 21,719 3,168 68,2 80,95 65 121 

0,000 

Digestiva 34,5 18,646 4,394 25,228 43,772 19 83 

Mucocutánea 33,594 8,762 2,065 29,237 37,952 19 47 

Oncológica 41,433 21,018 4,045 33,119 49,748 16,5 105 

Traumática 36,471 12,545 3,042 30,02 42,921 19 57 

Ehrlichiosis 25,583 15,501 2,583 20,338 30,828 7,7 70,9 

Urea 
(mg/dl) 

Sano 20,255 7,973 1,163 17,914 22,596 6,2 40 

0,000 

Digestiva 0,941 0,398 0,096 0,736 1,146 0,4 1,9 

Mucocutánea 0,9 0,224 0,053 0,788 1,012 0,5 1,4 

Oncológica 0,829 0,276 0,052 0,722 0,936 0,4 1,4 

Traumática 0,865 0,18 0,043 0,772 0,957 0,6 1,3 

Ehrlichiosis 0,874 0,301 0,051 0,768 0,979 0,4 2 

Creatinina 
(mg/dl) 

Sano 0,84 0,151 0,022 0,795 0,885 0,5 1,2 

0,717 



Resultados 

 

193 

Digestiva 40,35 52,389 12,706 13,42 67,29 14 217 

Mucocutánea 38,22 40,514 9,549 18,08 58,37 9 159 

Oncológica 41,75 29,719 5,616 30,23 53,27 15 134 

Traumática 32 38,73 9,393 12,09 51,91 9 179 

Ehrlichiosis 53,75 103,232 17,205 18,82 88,68 10 639 

GPT (U/l) 

Sano 48,63 20,412 3,01 42,57 54,69 16 108 

0,797 

 

Los resultados de la bioquímica sanguínea básica realizada a los perros del estudio 

mostrados en la tabla 50 revelan la existencia de unos valores de glucemia 

significativamente inferiores en los perros sanos (74,57 mg/dl) que en los perros con 

patologías digestivas (107,41 mg/dl) y oncológicas (99,69 mg/dl), así como un menor valor 

de urea en los perros sanos (20,25 mg/dl) que en los perros con patologías mucocutáneas 

(33,59 mg/dl), digestivas (34,5 mg/dl), traumatológicas (36,47 mg/dl), y oncológicas 

(41,43 mg/dl). Asimismo, los perros con EMC presentan un menor valor de urea (25,58 

mg/dl) que los perros con patologías oncológicas.  
 

Tabla 51: Valores del proteinograma en las diferentes poblaciones estudiadas en función de la patología 
 

Intervalo de 

confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 

Error 

típico 
Límite 

inferior 

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 
Valor 

de p 

Digestiva 6,400 1,149 0,271 5,828 6,972 3,6 8,2 

Mucocutánea 6,683 0,8 0,188 6,285 7,081 5,5 8,4 

Oncológica 6,954 1,149 0,217 6,508 7,399 5 11,8 

Traumática 6,365 0,655 0,159 6,028 6,702 5,1 7,6 

Ehrlichiosis 7,275 1,229 0,204 6,859 7,691 5,5 11 

Proteínas 

totales 

(g/dl) 

Sano 6,194 0,64 0,093 6,006 6,382 5,2 8 

0,000 

Digestiva 51,880 1,474 0,737 49,534 54,226 49,8 53,1 

Mucocutánea 47,964 6,346 1,586 44,582 51,346 33,4 53,6 

Oncológica 47,345 5,872 1,77 43,4 51,291 32,1 53,6 

Traumática 52,344 3,161 1,053 49,91 54,775 48,6 56,1 

Ehrlichiosis 39,758 10 1,796 36,09 43,426 17,6 59,5 

Albúmina 

(%) 

Sano 53,578 4,581 0,683 52,201 54,954 43 62,1 

0,000 

Digestiva 2,544 0,692 0,309 1,685 3,403 1,4 3 

Mucocutánea 3,109 0,271 0,067 2,964 3,253 2,7 3,7 

Oncológica 3,075 0,414 0,125 2,797 3,354 2 3,6 

Traumática 3,231 0,259 0,086 3,032 3,431 2,8 3,5 

Ehrlichiosis 2,818 0,544 0,097 2,618 3,018 1,5 3,9 

Albúmina 

(g/dl) 

Sano 3,276 0,285 0,042 3,19 3,362 2,7 3,7 

0,000 



Resultados 

 

194 

Digestiva 2,640 0,399 0,2 2 3,27 2 3 

Mucocutánea 3,450 0,842 0,21 3,01 3,9 3 6 

Oncológica 3,430 0,486 0,147 3,11 3,76 3 4 

Traumática 2,960 0,418 0,139 2,64 3,28 2 4 

Ehrlichiosis 4,490 1,471 0,264 3,95 5,02 3 9 

Globuli-

nas (g/dl) 

Sano 2,850 0,474 0,071 2,71 3 2 4 

0,000 

Digestiva 5,300 0,781 0,45 3,36 7,24 4,4 5,8 

Mucocutánea 4,073 0,777 0,194 3,658 4,487 2,6 5,3 

Oncológica 4,282 0,56 0,168 3,906 4,658 3,1 5,1 

Traumática 4,644 0,403 0,134 4,334 4,955 4 5,3 

Ehrlichiosis 3,872 1,452 0,26 3,339 4,404 1,7 8,5 

α1-

globulinas 

(%) 

Sano 4,584 0,74 0,113 4,355 4,813 3,3 6,4 

0,015 

Digestiva 0,283 0,049 0,028 0,1608 0,405 0,25 0,34 

Mucocutánea 0,261 0,041 0,01 0,2389 0,283 0,18 0,36 

Oncológica 0,282 0,059 0,017 0,2426 0,322 0,2 0,43 

Traumática 0,282 0,025 0,008 0,2623 0,302 0,25 0,33 

Ehrlichiosis 0,270 0,096 0,017 0,235 0,305 0,14 0,68 

α1- 

globulinas 

(g/dl) 

Sano 0,281 0,04 0,006 0,2691 0,293 0,19 0,35 

0,885 

Digestiva 8,967 1,171 0,676 6,056 11,878 8,1 10,3 

Mucocutánea 10,978 2,82 0,705 9,475 12,48 6,7 17,8 

Oncológica 10,691 3,229 0,973 8,521 12,86 6 17,8 

Traumática 9,267 1,251 0,417 8,305 10,228 6,9 10,8 

Ehrlichiosis 8,520 2,953 0,53 7,437 9,603 2,9 17,2 

α2- 

globulinas 

(%) 

Sano 12,610 2,485 0,37 11,865 13,358 7,9 17,4 

0,000 

Digestiva 0,476 0,028 0,0166 0,405 0,548 0,46 0,51 

Mucocutánea 0,718 0,211 0,052 0,6058 0,831 0,39 1,21 

Oncológica 0,686 0,197 0,059 0,5539 0,818 0,43 1,12 

Traumática 0,568 0,094 0,031 0,4961 0,641 0,43 0,75 

Ehrlichiosis 0,601 0,189 0,034 0,5324 0,671 0,31 1,16 

α2- 

globulinas 

(g/dl) 

Sano 0,771 0,186 0,028 0,715 0,828 0,41 1,11 

0,001 

Digestiva 26,700 1,113 0,642 23,934 29,466 25,7 27,9 

Mucocutánea 26,606 3,953 0,988 24,499 28,712 20,2 35,4 

Oncológica 27,382 3,923 1,183 24,746 30,018 22,3 37 

Traumática 25,756 2,374 0,791 23,93 27,581 23,4 30 

Ehrlichiosis 25,837 6,375 1,145 23,499 28,176 11,6 38,9 

β- 

globulinas 

(%) 

Sano 21,908 3,25 0,479 20,943 22,874 16,6 29,7 

0,000 

 

 



Resultados 

 

195 

Digestiva 1,460 0,281 0,162 0,7605 2,159 1,15 1,7 

Mucocutánea 1,760 0,436 0,109 1,5281 1,993 1,21 2,79 

Oncológica 1,782 0,296 0,089 1,5836 1,981 1,36 2,33 

Traumática 1,595 0,226 0,075 1,4213 1,769 1,22 1,87 

Ehrlichiosis 1,846 0,424 0,076 1,6906 2,002 1,07 2,99 

β- 
globulinas  

(g/dl) 

Sano 1,332 0,241 0,036 1,2601 1,405 0,95 1,84 

0,000 

Digestiva 7,433 2,01 1,16 2,438 12,428 5,2 9,1 

Mucocutánea 10,374 4,479 1,119 7,988 12,761 7,3 25,8 

Oncológica 10,318 3,414 1,029 8,025 12,612 6,1 16,5 

Traumática 7,967 1,99 0,663 6,437 9,496 5,7 11,2 

Ehrlichiosis 22,009 14,807 2,659 16,578 27,44 7,2 61,4 

γ- 
globulinas 

(%) 

Sano 7,325 2,213 0,333 6,652 7,997 3,8 12,4 

0,000 

Digestiva 0,410 0,157 0,09 0,0196 0,8 0,23 0,52 

Mucocutánea 0,701 0,424 0,106 0,4749 0,927 0,47 2,17 

Oncológica 0,674 0,255 0,077 0,5028 0,846 0,35 1,13 

Traumática 0,498 0,162 0,054 0,3741 0,623 0,29 0,76 

Ehrlichiosis 1,751 1,549 0,278 1,1837 2,32 0,48 6,2 

γ- 
globulinas 

(g/dl) 

Sano 0,472 0,183 0,027 0,418 0,527 0,22 1,02 

0,000 

Digestiva 1,072 0,057 0,028 0,9812 1,163 0,99 1,12 

Mucocutánea 0,940 0,206 0,051 0,8307 1,05 0,5 1,15 

Oncológica 0,911 0,184 0,055 0,7882 1,035 0,47 1,15 

Traumática 1,101 0,138 0,046 0,9943 1,207 0,94 1,27 

Ehrlichiosis 0,702 0,293 0,052 0,5951 0,81 0,21 1,47 

Cociente 

Albúmina

/Globuli-

nas 

Sano 1,162 0,201 0,03 1,1009 1,223 0,75 1,54 

0,000 

 

 

El estudio electroforético de las proteínas mostró resultados divergentes en los 

perros estudiados en función del tipo de patología que padecían.  

 

Como puede observarse en la tabla 51 los perros con EMC estudiados presentaban 

una mayor concentración de proteínas totales en plasma (7,27 g/dl) que los perros con 

patologías digestivas (6,4 g/dl) y traumatológicas (6,36 g/dl) y que los perros sanos (6,19 

g/dl). Asimismo, los perros con patologías oncológicas presentaban un mayor valor de 

proteínas totales (6,95 g/dl) que los perros sanos. 

 

Los perros con EMC presentaban un menor porcentaje de albúmina (39,75%) que 

los demás perros del estudio (51,88% en los perros con patologías gastrointestinales, 

47,96% en los perros con patologías mucocutáneas, 47,34% en los perros con patologías 



Resultados 

 

196 

oncológicas, 52,34% en los perros con patologías traumatológicas y 53,57% en los perros 

sanos). El valor absoluto de albúmina es también inferior en los perros con EMC (2,81 

g/dl), así como en los perros con patologías digestivas (2,54 g/dl), que en los perros sanos 

(3,27 g/dl). 

 
El valor absoluto de las globulinas parece estar relacionado estadísticamente con la 

infección por E. canis en el perro, mostrando los perros con EMC un mayor valor de 

globulinas (4,49 g/dl) que los perros con patologías digestivas (2,64 g/dl), mucocutáneas 

(3,45 g/dl), oncológicas (3,43 g/dl) y traumatológicas (2,85 g/dl), y que los perros sanos 

(2,85 g/dl). 

 
El porcentaje de las globulinas α1 y α2 es menor en los perros con EMC (3,87% y 

8,52%, respectivamente) que en los perros sanos (4,58% y 12,61%, respectivamente). El 

porcentaje de las α2-globulinas es también inferior en los perros con patologías 

traumatológicas (9,26%) que en los sanos.  

 
En cuanto a las β-globulinas, éstas son inferiores tanto en valor relativo como 

absoluto en los perros sanos (21,90% y 1,33 g/dl, respectivamente) que en los perros con 

EMC (25,83% y 1,84 g/dl, respectivamente), con patologías mucocutáneas (26,60% y 1,76 

g/dl) y con patologías oncológicas (27,38% y 1,78 g/dl, respectivamente).  

 
Los valores relativos y absolutos de las γ-globulinas son superiores en los perros 

con EMC (22,009% y 1,75 g/dl, respectivamente) que en los perros con patologías 

mucocutáneas (10,37% y 0,70g g/dl), oncológicas (10,31% y 0,67 g/dl) y traumatológicas 

(7,96% y 0,49 g/dl) y que en los perros sanos (7,32% y 0,47 g/dl, respectivamente). 

 
Se han encontrado también diferencias estadísticamente significativas en el valor 

del cociente albúmina/globulinas en función de la patología del perro estudiado, siendo 

este cociente inferior en los perros con EMC (0,7), en comparación con este valor en los 

perros con patologías mucocutáneas (0,94), digestivas (1,07), traumatológicas (1,10) y en 

los perros sanos (1,16). Asimismo, es superior este cociente en los perros sanos que en los 

perros con patologías oncológicas (0,91) y mucocutáneas. 

 

 

 



Resultados 

 

197 

 
Tabla 52: Comparación de los valores porcentuales de las subpoblaciones linfocitarias y del cociente 
CD4/CD8 entre las poblaciones de perros con patologías digestivas, patologías mucocutáneas, patologías 
oncológicas, patologías traumatológicas, EMC y perros sanos. 

 
Intervalo de 

confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite 
inferior  

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Digestiva 67,300 10,96 2,514 62,017 72,583 44,45 85,76 

Mucocutánea 68,719 10,52 2,551 63,31 74,128 51,79 85,7 

Oncológica 71,966 10,005 1,89 68,086 75,846 33,59 86,73 

Traumática 68,913 9,994 2,424 63,774 74,052 46,75 84,25 

Ehrlichiosis 72,218 9,049 1,575 69,009 75,427 56,79 91,32 

% de 
linfocitos 
T (CD3+) 

Sano 65,698 5,884 0,897 63,887 67,509 55,59 80,13 

0,022 

Digestiva 36,631 10,323 2,363 31,655 41,606 11,7 54,5 

Mucocutánea 35,444 8,153 1,977 31,252 39,636 20,6 51,9 

Oncológica 34,4 7,682 1,451 31,421 37,378 13,2 47,6 

Traumática 40,437 9,908 2,403 35,343 45,532 26,2 57,2 

Ehrlichiosis 32,915 9,441 1,596 29,671 36,158 12,2 48,6 

% de 
linfocitos 
Th (CD3+ 

CD4+) 

Sano 37,916 4,825 0,719 36,466 39,367 29,2 47 

0,019 

Digestiva 20,655 7,306 1,676 17,134 24,177 9,38 39,71 

Mucocutánea 21,86 9,194 2,23 17,132 26,587 10 47,76 

Oncológica 23,587 9,851 1,895 19,689 27,484 10,77 56,27 

Traumática 16,281 4,112 0,997 14,166 18,395 9,56 23,78 

Ehrlichiosis 27,988 17,286 2,922 22,05 33,926 4,64 83,43 

% de 
linfocitos 
Tc (CD3+ 

CD8+) 

Sano 19,754 7,109 1,059 17,618 21,89 7,35 35,3 

0,003 

Digestiva 15,438 8,229 1,887 11,472 19,405 4,23 36,05 

Mucocutánea 17,276 11,158 2,706 11,539 23,013 1,82 37,11 

Oncológica 13,292 11,52 2,177 8,825 17,759 2,47 62,87 

Ehrlichiosis 14,058 7,852 1,327 11,361 16,756 1,16 35,08 

Traumática 14,385 6,347 1,539 11,121 17,648 2,52 29,84 

% de 
linfocitos 

B 
(CD21+) 

Sano 18,41 6,958 1,037 16,32 20,501 4,93 31,73 

0,126 

Digestiva 85,25 12,261 3,065 78,716 91,783 54,46 96,02 

Mucocutánea 87,503 6,046 1,466 84,394 90,612 74,02 96,2 

Oncológica 87,764 9,768 1,846 83,976 91,552 60,82 98,18 

Traumática 88,536 7,493 1,817 84,683 92,389 74,6 97,39 

Ehrlichiosis 91,906 5,197 0,891 90,092 93,719 77,15 98,85 

% de 
linfocitos 
CMHII+ 

Sano 89,016 5,202 0,775 87,453 90,579 78,7 97,2 

0,065 



Resultados 

 

198 

Digestiva 20,848 10,656 2,444 15,712 25,984 8,91 48,1 

Mucocutánea 17,34 9,028 2,189 12,697 21,982 6,79 39,27 

Oncológica 15,203 7,58 1,432 12,263 18,142 5,5 33,42 

Traumática 27,493 40,914 10,228 5,691 49,295 0,55 177,49 

Ehrlichiosis 14,907 14,634 2,509 9,8 20,013 1,71 70,87 

% de 
linfocitos 

CD3-
CD21- 

Sano 15,154 4,887 0,728 13,685 16,622 6,85 27,54 

0,090 

Digestiva 1,979 0,823 0,188 1,583 2,376 0,41 3,3 

Mucocutánea 1,814 0,642 0,155 1,484 2,145 0,85 2,82 

Oncológica 1,704 0,768 0,147 1,4 2,009 0,39 3,54 

Traumática 2,681 1,223 0,296 2,052 3,31 1,66 5,98 

Ehrlichiosis 1,827 1,776 0,3 1,217 2,438 0,14 10,46 

Cociente 
CD4/CD8 

Sano 2,092 0,962 0,143 1,803 2,381 0,77 4,1 

0,110 

 

 

Como ha podido observarse en la tabla 52, se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% (p=0,022) en el valor 

porcentual de linfocitos T CD3+ entre las diferentes poblaciones estudiadas. En concreto, 

el test de Bonferroni ha mostrado que dicha diferencia se encuentra entre la población de 

perros con EMC (que poseen de media 72,21% linfocitos T CD3+) y los perros sanos 

(65,59%). Además, en nuestra población de perros estudiada, se ha observado que los 

perros con ehrlichiosis muestran el menor porcentaje de linfocitos Th CD3+CD4+ 

(32,91%) y el mayor porcentaje de linfocitos Tc CD3+CD8+ (27,98%) de todos los grupos 

estudiados. 

 
 

Tabla 53: Valores absolutos de las diferentes subpoblaciones estudiadas por citometría de flujo entre las 

diferentes poblaciones de perros incluidas en este trabajo. 

 
Intervalo de 

confianza para la 

media al 95%  Media 
Desviación 

típica 

Error 

típico 
Límite 

inferior  

Límite 

superior 

Mínimo Máximo 
Valor 

de p 

Digestiva 1359,95 822,22 199,42 937,21 1782,70 526,11 3342,01 

Mucocutánea 1860,60 586,32 142,20 1559,14 2162,06 713,14 3002,07 

Oncológica 1262,28 585,99 110,74 1035,06 1489,51 71,86 2907,72 

Traumática 1314,06 584,44 141,75 1013,58 1614,56 260,33 2524,08 

Ehrlichiosis 2139,39 1379,88 240,21 1650,10 2628,67 289,39 6856,73 

Linfocitos 

T 

(CD3+)/µl 

Sano 1869,25 547,67 81,64 1704,71 2033,79 933,62 3083,38 

0,000 



Resultados 

 

199 

Digestiva 771,96 599,65 145,44 463,66 1080,27 188,47 2358,84 

Mucocutánea 970,32 342,04 82,96 794,46 1146,18 282,97 1493,67 

Oncológica 594,07 304,80 57,60 475,88 712,26 36,83 1162,25 

Traumática 775,82 383,78 93,08 578,50 973,14 159,07 1584,70 

Ehrlichiosis 1006,82 919,79 155,47 690,87 1322,78 132,26 5668,62 

Linfocitos 

Th (CD3+ 

CD4+)/µl 

Sano 1080,14 400,13 58,36 962,67 1197,63 290,13 1986,81 

0,007 

Digestiva 387,08 174,32 42,28 297,45 476,70 126,07 739,80 

Mucocutánea 578,60 227,18 55,10 461,80 695,41 137,70 1057,36 

Oncológica 408,70 255,45 49,16 307,64 509,75 12,60 1277,15 

Traumática 309,20 151,37 36,71 231,37 387,02 73,48 643,04 

Ehrlichiosis 1117,54 1450,16 245,12 619,40 1615,70 50,00 6264,09 

Linfocitos 

Tc (CD3+ 

CD8+)/µl 

Sano 506,20 171,44 26,14 453,44 558,96 189,84 844,61 

0,000 

Digestiva 394,93 465,87 112,99 155,40 634,46 55,81 1674,63 

Mucocutánea 494,01 404,58 98,12 285,99 702,03 40,40 1339,12 

Oncológica 244,56 243,23 45,97 150,24 338,88 3,61 1065,01 

Traumática 290,33 164,13 39,81 205,94 374,72 7,78 587,50 

Ehrlichiosis 355,42 239,29 40,45 273,22 437,62 26,00 1206,50 

Linfocitos 

B 

(CD21+)/µl 

Sano 527,57 318,71 47,51 431,82 623,32 39,04 1198,29 

0,003 

Digestiva 1490,32 964,57 257,79 933,40 2047,25 487,81 3931,79 

Mucocutánea 2411,18 812,17 196,98 1993,60 2828,76 1019,25 4134,28 

Oncológica 1555,82 739,93 139,83 1268,90 1842,73 68,09 3997,09 

Traumática 1713,25 741,98 179,96 1331,75 2094,74 294,32 3022,01 

Ehrlichiosis 2971,20 2537,88 435,24 2085,69 3856,71 370,32 14353,30 

Linfocitos 

CMHII+/ µl 

Sano 2538,80 977,53 144,13 2248,51 2829,09 849,69 4642,27 

0,000 

Digestiva 406,24 309,65 75,10 247,03 565,45 90,89 1177,20 

Mucocutánea 435,54 175,62 42,59 345,25 525,84 168,50 869,40 

Oncológica 471,56 1175,11 222,07 15,90 927,22 31,06 6405,36 

Traumática 296,17 187,80 46,95 196,10 396,24 12,60 671,76 

Ehrlichiosis 309,76 197,24 33,83 240,94 378,58 1,15 868,94 

Linfocitos 

CD3-

CD21-/µl 

Sano 417,55 167,21 24,93 367,32 467,79 128,23 896,70 

0,819 

 

 

En este trabajo se ha observado que los perros con EMC presentan un mayor 

número de linfocitos T CD3+/µl en sangre periférica (2139,39/µl) que los perros con 

patologías digestivas (1359,95/µl), oncológicas (1262,28/µl) y traumatológicas 

(1314,06/µl). Asimismo, los perros sanos presentan un mayor número de estos linfocitos T 

CD3+ (1869,25/µl) que los perros con patologías oncológicas. 

 



Resultados 

 

200 

Por otra parte, los perros con patologías oncológicas presentan un menor número de 

linfocitos Th CD3+CD4+ (594,06/µl) y de linfocitos B CD21+ (244,56/µl) que los perros 

sanos de este trabajo (1080,14 linfocitos Th/µl y 527,57/µl linfocitos B/µl).  

 

Se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en el número de linfocitos Tc CD3+CD8+/µl de sangre periférica entre 

las diferentes poblaciones estudiadas, mostrando los perros con EMC un mayor número de 

estos linfocitos (1117,54/µl). 

 

Asimismo, los perros con EMC del estudio han mostrado un mayor número de 

linfocitos sanguíneos que expresan CMH de clase II en su superficie (2971,204/µl) que los 

perros con patologías digestivas (1490,32/µl), oncológicas (1555,82/µl) y traumatológicas 

(1713,25/µl).  

 
Tabla 54: Comparación de los valores de concentración de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α en sangre periférica 

en las poblaciones caninas sana y con EMC de este estudio. 

 
Intervalo de 

confianza para la 
media al 95%  Media 

Desviación 
típica 

Error 
típico 

Límite 
inferior  

Límite 
superior 

Mínimo Máximo 
Valor 
de p 

Ehrlichiosis 95,51 223,907 38,399 17,385 173,635 0,000 1119,180 Concentra-
ción IFN-γ 

(pg/ml) Sano 47,85 26,552 6,091 35,053 60,649 9,060 103,240 
0,362 

Ehrlichiosis 36,01 41,344 7,425 20,854 51,184 0,000 191,920 Concentra-
ción IL-6 
(pg/ml) Sano 47,08 35,338 8,834 28,258 65,919 0,000 117,500 

0,367 

Ehrlichiosis 19,96 68,868 12,174 0,000 44,790 0,000 370,000 Concentra-
ción IL-10 

(pg/ml) Sano 0,55 1,713 0,318 0,000 1,200 0,000 8,000 
0,135 

Ehrlichiosis 24,27 51,935 8,906 6,154 42,397 0,000 215,370 Concentra-
ción TNF-α 

(pg/ml) Sano 13,20 13,291 2,972 6,981 19,422 0,000 48,560 
0,355 

 

 

No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% entre la población de perros sanos y la población de perros con EMC 

para los valores de concentración en sangre periférica de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y 

TNF-α. 

 

 



Resultados 

 

201 

 

 

5.6. ENSAYO CLÍNICO: EVOLUCIÓN DE LAS VARIABLES 

ANALIZADAS A LO LARGO DEL TIEMPO TRAS LA 

ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA EN PERROS SANOS Y EN 

PERROS CON EMC 

 

 
Con la finalidad de evaluar el efecto a lo largo del tiempo de la doxiciclina sobre las 

diferentes variables analizadas en este trabajo, se llevaron a cabo una serie de controles 

programados tras el inicio de la administración del fármaco en un número de perros sanos 

y en los perros diagnosticados de EMC incluidos en este estudio. Para ello, se administró el 

fármaco a un total de 12 animales sanos pertenecientes al Grupo 1 y se llevaron a cabo los 

controles establecidos y descritos en el apartado de Materiales y Métodos. En el caso de los 

perros con EMC, a pesar de que se programaron los mismos controles para todos los 

animales, al final del estudio se disponía de datos de los 4 controles clínicos y 

laboratoriales establecidos de un total de 20 perros, siendo excluidos del ensayo clínico 

aquellos perros con EMC del Grupo 2 de los que se carecía de datos de seguimiento de 

alguno de los citados controles.  

 
Para evaluar el efecto del fármaco a lo largo del tiempo se han comparado los 

valores obtenidos para cada variable antes del tratamiento con doxiciclina (día 0) y en los 

diferentes controles post-tratamiento (días 30, 90 y 180), tanto en los perros sanos como en 

los perros con EMC. Además, se ha evaluado si el comportamiento de estas variables a lo 

largo del tiempo ha sido similar para los dos grupos o si, por el contrario, han seguido 

evoluciones diferentes.  

 
A continuación se describirá para cada variable, en primer lugar, si su 

comportamiento en el tiempo es similar en los dos grupos de perros o si difieren en la 

evolución que se produce, para pasar a describir, a continuación, si la variable sufre 

modificaciones estadísticamente significativas a lo largo del tiempo del estudio o si, por el 

contrario, permanece constante.  

 

 

 

 

 



Resultados 

 

202 

 

5.6.1. EVOLUCIÓN DE LOS PARÁMETROS DEL ERITROGRAMA E 

ÍNDICES ERITROCITARIOS  

 
� Glóbulos rojos

 

En la tabla 55 y en el gráfico 9 se ha reflejado la evolución del número de glóbulos 

rojos a lo largo de los 6 meses durante los que se ha hecho el seguimiento de los perros 

sanos y de los perros con EMC a los que se les administró doxiciclina.    

 
Tabla 55: Recuento de glóbulos rojos en los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con EMC) en los días 0, 30, 

90 y 180 del estudio 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media 
(x106/µl) 

Desviación 
típica 

Media 
(x106/µl) 

Desviación 
típica 

Media 
(x106/µl) 

Desviación 
típica 

Día 0 7,302 0,792 6,392 1,101 6,733 1,026 

Día 30 7,248 0,748 6,698 0,881 6,904 0,864 

Día 90 7,286 0,790 6,602 0,889 6,858 0,905 

Día 180 6,887 0,445 7,014 0,918 6,966 0,769 

 
Gráfico 9: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de glóbulos rojos/µl en los perros 

sanos (Grupo 1) y perros con EMC (Grupo 2) antes (día 0) y tras (días 30, 90 y 180) el tratamiento con 

doxiciclina. 

6,3

6,5

6,7

6,9

7,1

7,3

7,5

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

G
ló

b
u

lo
s 

ro
jo

s 
x1

0
6 /u

l  
  

Sanos

EMC

 
 

 



Resultados 

 

203 

El estudio estadístico de estos datos mediante un análisis de medidas repetidas nos 

muestra la existencia de un comportamiento diferente a lo largo del tiempo del recuento de 

glóbulos rojos entre los perros sanos a los que se les administró doxiciclina y los perros 

con EMC (p=0,004), concretamente entre los días 90 y 180 del estudio.  

 

En el caso del Grupo 1 (perros sanos), no se observan diferencias estadísticamente 

significativas entre las medias del recuento de glóbulos rojos en los diferentes controles 

realizados (p=0,190). En cambio, en el Grupo 2 (perros con EMC), se observa la existencia 

de un cambio estadísticamente significativo para un nivel de confianza del 95% para el 

recuento eritrocitario desde el momento inicial al momento final del estudio (p=0,013), 

aumentando este valor entre los días 90 y 180. 

 

 
� Hemoglobina

 

En la tabla 56 y en la gráfico 10 se muestran los valores de la concentración de 

hemoglobina en los controles realizados antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del 

Grupo 2. 

 

 
Tabla 56: Concentración de hemoglobina en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del 

Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina 

 
Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 

Media (g/dl) 
Desviación 

típica 
Media (g/dl) 

Desviación 
típica 

Media (g/dl) 
Desviación 

típica 

Día 0 17,500 1,467 14,675 2,397 15,677 2,499 

Día 30 17,500 1,263 15,215 1,842 16,026 1,979 

Día 90 17,600 1,654 15,315 2,079 16,126 2,210 

Día 180 16,718 0,955 16,800 2,339 16,771 1,942 

 

 

 

 

 

 
 



Resultados 

 

204 

Gráfico 10: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la concentración de hemoglobina en los 

perros del Grupo 1 y en los perros del Grupo 2  

14

14,5

15

15,5

16

16,5

17

17,5

18

18,5

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

H
e

m
o

g
lo

b
in

a
 (

g
/d

l) 
  

 

Sanos

EMC

 
Al igual que en el caso del recuento eritrocitario, y como puede observarse en el 

gráfico 10 la concentración de hemoglobina muestra una evolución en el tiempo 

estadísticamente diferente entre los perros sanos a los que se les administró doxiciclina 

(Grupo 1) y los perros con EMC (Grupo 2) (p=0,000), concretamente entre los días 90 y 

180. 

 

La concentración de hemoglobina en los perros sanos no muestra variaciones a lo 

largo del tiempo tras la administración del fármaco (p=0,276). En cambio, en los perros 

con EMC del Grupo 2 de este estudio se observa la existencia de cambios estadísticamente 

significativos en la concentración de hemoglobina a lo largo de los controles realizados 

(p=0,000) y estos cambios se reflejan en un aumento gradual de esta variable, como puede 

observarse en el gráfico 10. 

 
� Hematocrito

 

A continuación puede observarse en la tabla 57 y gráfico 11 la evolución a lo largo 

del tiempo del valor del hematocrito en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con 

EMC del Grupo 2. 

 

 

 

 



Resultados 

 

205 

Tabla 57: Valores del hematocrito en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) desde el día 0 hasta 

el día 180 del estudio 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 52,54 5,83 47,27 7,53 49,25 7,32 

Día 30 51,88 5,81 46,90 5,56 48,77 6,08 

Día 90 51,83 5,20 47,22 5,79 48,95 5,94 

Día 180 50,22 3,70 49,87 6,45 50,00 5,51 

 

 
Gráfico 11: Evolución del hematocrito en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) desde el día 0 

hasta el día 180 del estudio 

 

46

47

48

49

50

51

52

53

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

H
e

m
a

to
cr

it
o

 (
%

) 
   

Sanos

EMC

 
 

En los resultados del hematocrito de los perros de los grupos 1 (perros sanos) y 2 

(perros con EMC) obtenidos en los controles realizados antes (día 0) y después (días 30, 90 

y 180) de la administración de doxiciclina, se observa un comportamiento similar en la 

evolución de esta variable a lo largo del tiempo para ambos grupos, no existiendo 

diferencias estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% (p=0,072). 

 

Además, no se ha encontrado la existencia de cambios estadísticamente 

significativos para esta variable a lo largo del tiempo (p=0,877). 

 

 



Resultados 

 

206 

� V.C.M.

 

En la tabla 58 y en el gráfico 12 se puede observar la evolución que ha seguido a lo 

largo del tiempo del estudio el valor del V.C.M. de los perros tratados con doxiciclina 

(grupos 1 y 2). 

 
Tabla 58: V.C.M. de los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con EMC) desde el día 0 hasta el día 180 del 

estudio 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media (fl) 
Desviación 

típica 
Media (fl) 

Desviación 
típica 

Media (fl) 
Desviación 

típica 

Día 0 71,93 2,25 73,73 5,49 73,03 4,55 

Día 30 71,55 3,53 69,89 3,91 70,54 3,79 

Día 90 71,27 2,85 71,39 2,70 71,34 2,71 

Día 180 72,93 3,26 71,26 3,66 71,91 3,55 

 
Gráfico 12: Evolución del V.C.M. en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) desde el día 0 hasta 

el día 180 del estudio 

 

69

69,5

70

70,5

71

71,5

72

72,5

73

73,5

74

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

V
.C

.M
. (

fl)
   

 

Sanos

EMC

 
La evolución del valor del V.C.M. desde el día 0 hasta el día 180 del estudio es 

estadísticamente diferente en los perros sanos a los que se les administró doxiciclina y en 

los perros con EMC tras el tratamiento con el fármaco (p=0,013), encontrándose este 

comportamiento diferente en la evolución desde el día 0 al día 30. 

 

En el Grupo 1 (perros sanos), no existen cambios estadísticamente significativos a 

lo largo del tiempo en el valor del V.C.M. (p=0,102), mientras que en el Grupo 2 (perros 



Resultados 

 

207 

con EMC) sí se producen (p=0,001). En concreto, en los perros con EMC se observa un 

descenso inicial del V.C.M. entre el día 0 y el día 30 seguido de un incremento de esta 

variable entre el día 30 y el día 90.  

 
� H.C. . 

 
Tabla 59: H.C.M. en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y 

después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media (pg) 

Desviación 
típica 

Media (pg) 
Desviación 

típica 
Media (pg) 

Desviación 
típica 

Día 0 23,727 1,324 22,975 1,257 23,242 1,311 

Día 30 23,845 0,833 22,775 1,405 23,155 1,324 

Día 90 24,036 0,877 23,235 1,156 23,519 1,120 

Día 180 24,282 0,872 24,075 2,769 24,148 2,263 

 
Gráfico 13: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la H.C.M. en los perros del Grupo 1 

(sanos) y en los perros del Grupo 2 (con EMC) 

22

22,5

23

23,5

24

24,5

25

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

H
.C

.M
. (

p
g

) 
   

Sanos

EMC

 
 

En este caso, no se observan diferencias estadísticamente significativas para un 

nivel de confianza del 95% en el comportamiento de la H.C.M. a lo largo del tiempo entre 

ambos grupos (p=0,446), es decir, el valor de esta variable sigue una evolución similar en 

las dos poblaciones. 

 



Resultados 

 

208 

Esta variable sufre cambios estadísticamente significativos a lo largo del tiempo del 

estudio (p=0,046), observándose una tendencia general al alza desde el inicio del estudio 

hasta el final. 

 

� C.H.C.M.

 
Tabla 60:  C.H.C.M. en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y 

después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 

Media (g/dl) 
Desviación 

típica 
Media (g/dl) 

Desviación 
típica 

Media (g/dl) 
Desviación 

típica 

Día 0 32,655 1,112 31,100 1,870 31,652 1,788 

Día 30 32,973 0,649 32,435 1,146 32,626 1,020 

Día 90 33,545 0,623 32,466 2,002 32,849 1,715 

Día 180 33,036 1,169 33,655 3,135 33,435 2,602 

 
Gráfico 14: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la C.H.C.M. en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

31

31,5

32

32,5

33

33,5

34

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
.C

.M
.H

. (
g

/d
l)

   
 

Sanos

EMC

 
La evolución de la C.H.C.M. a lo largo del tiempo ha mostrado ser similar en los 

dos grupos estudiados (p=0,115), no observándose diferencias estadísticamente 

significativas para un nivel de confianza del 95% en el comportamiento de esta variable en 

el tiempo entre los grupos. 

 

En ambos grupos el valor de esta variable tiende a aumentar desde el día 0, siendo 

los cambios observados significativos para un nivel de confianza del 95% (p=0,029). 



Resultados 

 

209 

5.6.2.  EVOLUCIÓN DEL RECUENTO PLAQUETARIO A LO LARGO 

DEL TIEMPO  

 
Los resultados del recuento de plaquetas a partir de las muestras sanguíneas de los 

perros sanos del Grupo 1 y de los perros con EMC del Grupo 2 a lo largo de los controles 

de los días 0, 30, 90 y 180 del estudio se han reflejado en la tabla 61 y en el gráfico 15. 

 
Tabla 61: Número de plaquetas/µl en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media 

(x103/µl) 
Desviación 

típica 
Media 

(x103/µl) 
Desviación 

típica 
Media 

(x103/µl) 
Desviación 

típica 

Día 0 254,33 63,922 154,15 79,389 191,72 87,983 

Día 30 263,42 65,301 184,25 64,129 213,94 74,498 

Día 90 282,17 59,579 190,10 80,769 224,63 85,491 

Día 180 309,50 61,861 220,40 105,133 253,81 100,265 

 

 
Gráfico 15: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de plaquetas en los perros sanos 

del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

100

150

200

250

300

350

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

P
la

q
u

et
as

 x
1

03 /u
l  

  

Sanos

EMC

 
Como se observa en el gráfico 15, la evolución a lo largo del tiempo del número de 

plaquetas de los perros ha sido similar en ambos grupos, no existiendo diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en el comportamiento 

de esta variable en el tiempo entre las dos poblaciones (p=0,843).   



Resultados 

 

210 

Sin embargo, existen diferencias estadísticamente significativas entre el número de 

plaquetas por microlitro de sangre a lo largo del tiempo (p=0,003), observándose una 

tendencia a aumentar para esta variable desde el inicio del estudio hasta su finalización. 

 
5.6.3. EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DE LOS RECUENTOS 

LEUCOCITARIOS  

 

� Recuento leucocitario

 

En la tabla 62 y en el gráfico 16 se detalla el número de glóbulos blancos por 

microlitro de sangre en los perros sanos del grupo 1 y en los perros con EMC del grupo 2 

en los 4 controles realizados en el estudio. 

 
Tabla 62: Número de leucocitos/µl en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media 

(x103/µl) 
Desviación 

típica 
Media 

(x103/µl) 
Desviación 

típica 
Media 

(x103/µl) 
Desviación 

típica 

Día 0 9,103 3,550 11,202 8,229 10,415 6,859 

Día 30 8,973 2,283 10,190 3,423 9,734 3,064 

Día 90 9,485 3,058 9,790 3,622 9,676 3,373 

Día 180 9,122 2,123 9,762 3,117 9,522 2,766 

 

Gráfico 16: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de leucocitos en los perros  

sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

7

8

9

10

11

12

13

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

L
e

u
co

ci
to

s 
x1

03 /µ
l  

  

Sanos

EMC

 



Resultados 

 

211 

No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en la evolución en el tiempo del número de leucocitos en sangre entre 

los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2 (p=0,488), siguiendo, por 

tanto, esta variable un comportamiento similar en ambas poblaciones. 

 

Tampoco se han hallado diferencias estadísticamente significativas del número de 

leucocitos entre los diferentes tiempos del estudio, no mostrando este parámetro una 

evolución a lo largo del tiempo estadísticamente significativa para un nivel de confianza 

del 95% (p=0,610).  

 

 
� Neutrófilos

 

A continuación pueden observarse en las tablas 63 A y B y en el gráfico 17 los 

resultados del recuento relativo y absoluto de los neutrófilos en los controles de los días 0, 

30, 90 y 180 de los grupos 1 y 2. 

 
Tabla 63: Número de neutrófilos/µl (A) y porcentaje (B) en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con 

EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina.  

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
A: 

Media /µl 
Desviación 

típica 
Media /µl 

Desviación 
típica 

Media /µl 
Desviación 

típica 

Día 0 5412,800 2887,777 6555,010 7003,620 6126,680 5773,912 

Día 30 5049,020 1761,892 5527,010 1780,743 5347,770 1760,776 

Día 90 5495,860 2660,940 5734,300 1835,136 5644,880 2142,502 

Día 180 5541,390 1669,814 6155,900 2412,834 5925,460 2156,138 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 57,630 8,955 57,960 17,870 57,840 14,973 

Día 30 55,490 7,006 57,010 15,700 56,440 13,002 

Día 90 56,270 8,895 60,790 12,834 59,090 11,575 

Día 180 60,050 6,624 63,530 12,078 62,220 10,388 

 

 
 



Resultados 

 

212 

Gráfico 17: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de neutrófilos/µl (izquierda) y el 

porcentaje de neutrófilos (derecha) en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

 

5000

5200

5400

5600

5800

6000

6200

6400

6600

Día 0 Día
30

Día
90

Día
180

N
e
u
tr
ó
fil
o
s/
u
l  

  

 

55

56

57

58

59

60

61

62

63

64

65

Día 0 Día
30

Día
90

Día
180

N
e
u
tr
ó
fil
o
s 

(%
) 
  
 

Al igual que en el caso del recuento leucocitario, no se han encontrado diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en la evolución en el 

tiempo tanto del valor absoluto (p=0,761) como del valor relativo (p=0,604) de los 

neutrófilos en sangre entre los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2, 

siguiendo, por tanto, estas variables un comportamiento similar en ambas poblaciones. 

 

Tampoco se han hallado diferencias en el número de neutrófilos entre los diferentes 

tiempos del estudio, no mostrando este parámetro una evolución a lo largo del tiempo 

estadísticamente significativa para un nivel de confianza del 95% (p=0,577). Sin embargo, 

el valor porcentual de estas células sí ha mostrado cambios estadísticamente significativos 

a lo largo del tiempo (p=0,037), mostrando, como puede observarse en el gráfico 17, un 

incremento gradual desde el día 30 hasta el día 180. 
 
� Linfocitos

 
Tabla 64: Número de linfocitos/µl (A) y porcentaje de linfocitos (B) en los perros sanos del Grupo 1 y en los 

perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina. 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media /µl 

Desviación 
típica 

Media /µl 
Desviación 

típica 
Media /µl 

Desviación 
típica 

Día 0 2586,79 868,764 3326,25 3199,247 3048,95 2583,270 

Día 30 3014,20 697,193 3396,74 2659,183 3253,29 2131,168 

Día 90 2878,89 541,381 2873,21 1799,004 2875,34 1444,859 

Día 180 2534,59 492,109 2459,58 1489,998 2487,71 1203,327 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

213 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 29,94 8,038 30,94 17,034 30,56 14,177 

Día 30 34,32 6,238 31,28 16,697 32,42 13,672 

Día 90 31,73 6,182 28,50 12,931 29,71 10,889 

Día 180 28,70 6,445 25,18 11,768 26,50 10,131 

 

 
Gráfico 18: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de linfocitos/µl (izquierda) y el 

porcentaje de linfocitos (derecha) en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

 

2400

2600

2800

3000

3200

3400

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

Li
n
fo

ci
to

s/
u
l  

  

24

26

28

30

32

34

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

(%
) 
  
 

 

La evolución en el tiempo tanto del valor absoluto (p=0,348) como del valor 

porcentual (p=0,399) de los linfocitos en sangre no ha mostrado diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% entre los perros sanos 

del grupo 1 y los perros con EMC del grupo 2, siguiendo, por tanto, estas variables un 

comportamiento similar en ambas poblaciones. 

 

El valor absoluto de linfocitos tampoco ha mostrado cambios estadísticamente 

significativos a lo largo de los diferentes tiempos del estudio (p=0,106), mientras que en el 

caso del porcentaje, se han hallado diferencias estadísticamente significativas en los 

diferentes controles (p=0,012), produciéndose una disminución del porcentaje de linfocitos 

entre el día 90 y el día 180.  
 

 
 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

214 

 

� Monocitos

 

A continuación se muestran los resultados obtenidos para los valores absolutos y 

porcentuales de monocitos en los grupos 1 y 2 en los controles realizados a lo largo del 

estudio (tablas 65A y B y gráfico 19). 
 

Tabla 65: Valor absoluto (A) y porcentual (B) de monocitos en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros 

con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina. 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media /µl 

Desviación 
típica 

Media /µl 
Desviación 

típica 
Media /µl 

Desviación 
típica 

Día 0 430,91 215,018 426,21 272,838 428,03 248,237 

Día 30 337,89 145,902 377,22 167,642 362,00 158,262 

Día 90 369,47 111,834 384,07 177,259 378,41 153,266 

Día 180 386,54 149,128 471,90 362,396 438,86 297,891 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 4,68 1,074 3,98 1,301 4,25 1,247 

Día 30 3,67 0,876 3,82 1,753 3,76 1,460 

Día 90 3,98 0,931 4,09 2,083 4,05 1,710 

Día 180 4,18 0,998 4,65 2,451 4,47 2,007 

 
Gráfico 19: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de monocitos/µl (izquierda) y el 

porcentaje de monocitos (derecha) en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

 

200

250

300

350

400

450

500

550

600

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

M
o
n
o
ci

to
s/

u
l  

  

 

2

2,5

3

3,5

4

4,5

5

5,5

6

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

M
o
n
o
ci

to
s 

(%
) 
  
 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

215 

No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en la evolución en el tiempo de los valor absoluto (p=0,606) y relativo 

(p=0,287) de los monocitos entre los perros sanos del grupo 1 y los perros con EMC del 

grupo 2, siguiendo, por tanto, estas variables un comportamiento similar en ambas 

poblaciones. 

 

Asimismo, no se han hallado diferencias estadísticamente significativas para estas 

variables entre los diferentes tiempos del estudio (p=0,196 en el caso del valor absoluto de 

monocitos/µl y p=0,137 en el caso del porcentaje de estas células), no existiendo, por tanto, 

cambios significativos en estas variables a lo largo del tiempo.  

 
� Eosinófilos 

 
Tabla 66: Valor absoluto (A) y porcentual (B) de eosinófilos en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros 

con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina. 
 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media /µl 
Desviación 

típica 
Media /µl 

Desviación 
típica 

Media /µl 
Desviación 

típica 

Día 0 582,71 284,895 687,85 548,914 647,97 463,270 

Día 30 485,71 157,175 901,07 808,323 743,52 669,022 

Día 90 577,13 247,000 844,53 1085,906 743,10 869,001 

Día 180 557,76 215,000 649,74 496,869 614,85 410,441 

 
Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 7,15 4,143 6,83 5,302 6,95 4,819 

Día 30 5,82 2,345 7,72 5,247 7,00 4,423 

Día 90 6,75 3,080 6,86 5,638 6,82 4,764 

Día 180 6,27 1,706 6,32 4,041 6,30 3,309 

 

 
 

 



Resultados 

 

216 

 

Gráfico 20: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de eosinófilos/µl (izquierda) y el 

porcentaje de eosinófilos (derecha) en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

 

0

200

400

600

800

1000

1200

1400

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

E
o
si

n
ó
fil

o
s/

u
l  

  

3

4

5

6

7

8

9

10

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180
E

o
si

n
ó
fil

o
s 

(%
) 
  
 

 

Tanto el valor absoluto como el valor relativo de eosinófilos siguen un 

comportamiento similar a lo largo del tiempo en las dos poblaciones caninas estudiadas, no 

habiéndose encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en la evolución en el tiempo de estos parámetros entre los grupos 1 y 2 

(p=0,480 para la evolución en el tiempo del valor absoluto de los eosinófilos y p=0,588 

para la evolución en el tiempo del porcentaje de eosinófilos). 

 

Los valores absoluto y porcentual de los eosinófilos tampoco han mostrado 

cambios estadísticamente significativos a lo largo de los diferentes tiempos del estudio 

(p=0,709 y p=0,856, respectivamente), permaneciendo, por tanto en torno a unos valores 

similares en todo momento.  
 

 
� Basófilos

 

A continuación se detallan los resultados obtenidos para los valores absolutos y 

relativos de basófilos en los diferentes controles realizados a los perros del Grupo 1 y del 

Grupo 2 (tabla 67 A y B y gráfico 21). 

 

 

 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

217 

Tabla 67: Valor absoluto (A) y porcentual (B) de basófilos en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros 

con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) del tratamiento con doxiciclina. 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media /µl 
Desviación 

típica Media /µl 
Desviación 

típica Media /µl 
Desviación 

típica 

Día 0 7,28 8,871 25,05 20,906 18,39 19,293 

Día 30 1,96 3,575 5,88 7,599 4,41 6,607 

Día 90 7,61 5,353 9,91 18,186 4,46 5,155 

Día 180 11,90 10,458 2,57 4,091 10,65 15,571 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 0,08 0,087 0,24 0,228 0,18 0,203 

Día 30 0,03 0,045 0,06 0,082 0,05 0,072 

Día 90 0,08 0,045 0,03 0,047 0,05 0,051 

Día 180 0,14 0,131 0,11 0,201 0,12 0,177 

 
 

Gráfico 21: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del número de basófilos/µl (izquierda) y el 

porcentaje de basófilos (derecha) en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

 

1,9

6,9

11,9

16,9

21,9

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

B
a
só

fil
o
s/

u
l  

  

 

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

B
a
só

fil
o
s 

(%
) 
  
 

 

Tanto el valor absoluto como el valor relativo de los basófilos evolucionan en el 

tiempo de forma diferente entre los grupos 1 y 2, habiéndose encontrado diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en el comportamiento 

en el tiempo de estos parámetros entre las dos poblaciones caninas estudiadas (p=0,010 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

218 

para la evolución del número de basófilos/µl y p=0,029 para la evolución del porcentaje de 

estas células). Las pruebas de contrastes intra-sujetos realizadas muestran que la diferencia 

estadística se halla en el comportamiento de los dos parámetros entre los días 0 y 30, 

momento en el que, aunque en ambos grupos disminuyen estas variables, el descenso es 

mucho más marcado para el grupo 2, y entre los días 30 y 90, momento en el que los 

valores absolutos y relativos de los basófilos disminuyen en el grupo 2 pero tienden a 

aumentar en el grupo 1. 

 

Los valores absoluto y porcentual de los basófilos en el Grupo 1 no muestran 

cambios estadísticamente significativos para un nivel de confianza del 95% a lo largo del 

tiempo (p=0,0,08 y p=0,076, respectivamente). En cambio, en el Grupo 2 (perros con 

EMC) sí se han hallado cambios estadísticamente significativos a lo largo del tiempo en el 

valor absoluto (p=0,001) y en el valor relativo (p=0,003) de los basófilos, encontrándose 

en concreto estas diferencias entre el día 0 y el día 30.  

 

 
5.6.4. EVOLUCIÓN DE LOS PARÁMETROS DE LA BIOQUÍMICA 

SANGUÍNEA BÁSICA  

 
� Glucosa

 

En la tabla 68 y en el gráfico 22 se muestran los resultados de la concentración 

plasmática de glucosa en los perros del estudio a los que se les administró doxiciclina 

(grupos 1 y 2) a lo largo de los 6 meses de duración del estudio. 

 
Tabla 68: Valores de la glucemia de los perros incluidos en el Grupo 1 (perros sanos) y en el Grupo 2 

(perros con EMC) antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 63,25 16,799 72,55 29,486 69,06 25,572 

Día 30 51,50 33,760 72,75 21,997 64,78 28,465 

Día 90 74,83 20,297 69,90 30,594 71,75 26,940 

Día 180 62,75 26,382 77,85 26,446 72,19 27,033 

 

 

 
 



Resultados 

 

219 

 

Gráfico 22: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la glucemia en los perros de los grupos 1 

(sanos) y 2 (con EMC). 

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

G
lu

co
sa

 (
m

g
/d

l)
   

 

Sanos

EMC

 
No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en la evolución en el tiempo de la concentración plasmática de glucosa 

entre los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2 (p=0,102), siguiendo, 

por tanto, esta variable un comportamiento similar en ambas poblaciones. 

 

No existen diferencias estadísticamente significativas en el valor de la glucemia 

entre los diferentes tiempos del estudio, no observándose cambios estadísticamente 

significativos para un nivel de confianza del 95% en este parámetro a lo largo del tiempo 

(p=0,251).  

 

� Urea

 
Tabla 69: Resultados de la medición de la urea sanguínea en los perros incluidos en el Grupo 1 (perros 

sanos) y en el Grupo 2 (perros con EMC) de este estudio a lo largo del tiempo 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 16,97 11,715 22,87 16,823 20,59 15,121 

Día 30 15,98 6,629 20,68 14,360 18,86 12,052 

Día 90 15,04 8,314 17,87 11,697 16,77 10,459 

Día 180 13,14 5,204 26,53 30,997 21,35 25,107 

 



Resultados 

 

220 

 
Gráfico 23: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la uremia en los perros sanos del Grupo 1 

y en los perros con EMC del Grupo 2  

0

5

10

15

20

25

30

35

40

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

U
re

a
 (m

g
/d

l)
   

 

Sanos

EMC

 
En este caso tampoco se han hallado diferencias estadísticamente significativas para 

un nivel de confianza del 95% en la evolución en el tiempo del valor de urea en sangre 

entre los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2 (p=0,317), siguiendo, 

por tanto, esta variable un comportamiento similar en ambas poblaciones estudiadas. 

 

El valor de urea no sufre cambios estadísticamente significativos para un nivel de 

confianza del 95% entre los diferentes momentos del estudio (p=0,551).  

 
� Creatinina

 
Tabla 70: Valores de creatinina obtenidos a partir de la analítica sanguínea de los perros incluidos en los 

grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con EMC) los días 0, 30, 90 y 180 del estudio 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(mg/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 0,875 0,128 0,960 0,321 0,928 0,266 

Día 30 0,808 0,108 0,923 0,244 0,880 0,209 

Día 90 0,833 0,167 0,795 0,206 0,809 0,190 

Día 180 0,717 0,126 0,795 0,198 0,766 0,177 

 

 

 



Resultados 

 

221 

 
Gráfico 24: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del valor de la creatinina en los perros sanos 

del Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 

0,6

0,65

0,7

0,75

0,8

0,85

0,9

0,95

1

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
re

a
ti

n
in

a
 (m

g
/d

l)
   

 

Sanos

EMC

 
No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en la evolución en el tiempo del valor de creatinina sanguínea entre los 

perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2 (p=0,257), siguiendo, por 

tanto, esta variable un comportamiento similar en ambas poblaciones. 

 

En cuanto a la evolución de esta variable a lo largo de los 6 meses del estudio, se ha 

observado la existencia de cambios estadísticamente significativos en su valor (p=0,007), 

destacando la disminución que se produce entre los días 90 y 180.  

 
� GPT

 
Tabla 71: Resultados de la valoración de la GPT en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) antes 

(día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 
 

Media (U/l) 
Desviación 

típica 
Media (U/l) 

Desviación 
típica 

Media (U/l) 
Desviación 

típica 

Día 0 34,00 11,576 36,45 20,940 35,53 17,825 

Día 30 41,08 10,326 44,70 33,106 43,34 26,697 

Día 90 38,08 10,715 43,35 15,591 41,38 14,016 

Día 180 36,83 12,231 41,90 15,664 40,00 14,480 

 

 



Resultados 

 

222 

 
Gráfico 25: Representación gráfica de la evolución a lo largo del tiempo del valor de la GPT en los perros 

incluidos en los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) del estudio 

20

25

30

35

40

45

50

55

60

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

G
P

T
 (

U
/l

) 
   

Sanos

EMC

 
El comportamiento de esta variable a lo largo del tiempo no ha mostrado 

diferencias estadísticamente significativas entre los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con 

EMC) (p=0,947). 
 

Tampoco se han hallado diferencias estadísticamente significativas para el valor de 

la GPT en los diferentes controles realizados (p=0,234), no produciéndose modificaciones 

de relevancia estadística en este valor a lo largo del tiempo.  

 
5.6.5. EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DE LOS PARÁMETROS DEL 

PROTEINOGRAMA  

 
� Proteínas totales

 
Tabla 72: Valores de las proteínas plasmáticas totales en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) 

en los diferentes controles realizados en el estudio 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 

Media (g/dl) Desviación 
típica 

Media (g/dl) Desviación 
típica 

Media (g/dl) Desviación 
típica 

Día 0 6,083 0,567 7,310 1,215 6,850 1,176 

Día 30 6,375 0,433 7,055 1,230 6,800 1,052 

Día 90 6,408 0,433 7,100 0,955 6,841 0,861 

Día 180 6,325 0,400 7,010 0,775 6,753 0,734 



Resultados 

 

223 

Gráfico 26: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la concentración plasmática de proteínas 
totales en los perros incluidos en los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con EMC) del estudio 

6

6,2

6,4

6,6

6,8

7

7,2

7,4

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

P
ro

te
ín

a
s 

to
ta

le
s 

(g
/d

l)
   

 

Sanos

EMC

 

A pesar de que se observa un ligero descenso de la concentración plasmática de 

proteínas totales entre el día 0 y el día 30 en los perros con EMC y, en cambio, un aumento 

de este parámetro en los perros sanos en el mismo período de tiempo (gráfico 26), su 

evolución no ha mostrado diferencias que sean estadísticamente significativas para un 

nivel de confianza del 95% entre los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con EMC) del 

estudio (p=0,100). 
 

Tampoco se ha observado la existencia de cambios estadísticamente significativos 

en esta variable a lo largo del tiempo (p=0,861). 
 

Sin embargo, cabe destacar que sí se ha hallado una diferencia estadísticamente 

significativa en la concentración de proteínas totales entre ambos grupos de perros 

(p=0,008), siendo superior este valor en los perros con EMC. 
 

� Albúmin   
 

Tabla 73: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de albúmina plasmática en los perros sanos del Grupo 1 
y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de 
doxiciclina 
 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 51,141 3,505 38,791 8,669 43,571 9,327 

Día 30 52,291 2,930 40,037 10,214 44,781 10,127 

Día 90 48,700 3,699 43,048 7,624 45,236 6,908 

Día 180 50,183 5,284 41,384 8,279 44,790 8,387 
 



Resultados 

 

224 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 3,155 0,283 2,791 0,453 2,924 0,432 

Día 30 3,391 0,284 2,891 0,492 3,075 0,488 

Día 90 3,133 0,286 3,066 0,443 3,091 0,388 

Día 180 3,221 0,264 2,889 0,521 3,011 0,468 
 

 
Gráfico 27: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de albúmina plasmática en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) 

 

35

37

39

41

43

45

47

49

51

53

55

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

A
lb

ú
m

in
a
 (
%

) 
  
 

 

2

2,2

2,4

2,6

2,8

3

3,2

3,4

3,6

3,8

4

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

A
lb

ú
m

in
a
 (
g
/d

l)
  
  

 

 

 

El porcentaje de albúmina plasmática ha mostrado una evolución en el tiempo 

estadísticamente diferente entre los grupos 1 y 2 (p=0,032). Más concretamente, la 

diferencia se encuentra en la evolución de esta variable entre el día 30 y el 90, 

produciéndose en el caso del Grupo 1 (perros sanos) un descenso del porcentaje de 

albúmina y en el Grupo 2 (perros con EMC) un incremento.  

 

Además, en el Grupo 1 se han encontrado cambios a lo largo del tiempo en el valor 

porcentual de la albúmina plasmática que han resultado ser estadísticamente significativos 

para un nivel de confianza del 95% (p=0,027), produciéndose principalmente dichas 

variaciones en el porcentaje de albúmina entre el día 30 y el día 90. Este porcentaje no 

muestra diferencias estadísticamente significativas a lo largo del tiempo en el Grupo 2 

(perros con EMC).  

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

225 

En cuanto a la evolución en el tiempo de la concentración plasmática de albúmina, 

no se han hallado diferencias estadísticamente significativas en su comportamiento entre 

las dos poblaciones canina estudiadas (p=0,060) y dicha concentración no muestra cambios 

estadísticamente significativos en los controles realizados a lo largo del estudio en los 

grupos 1 y 3 (p=0,177). 
 
� Globulinas

 
Tabla 74: Concentración plasmática de globulinas en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) antes 

(día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media (g/dl) Desviación 

típica 
Media (g/dl) Desviación 

típica 
Media (g/dl) Desviación 

típica 

Día 0 2,974 0,379 4,605 1,359 3,973 1,346 

Día 30 3,024 0,194 4,235 1,346 3,766 1,208 

Día 90 3,288 0,370 4,162 1,023 3,824 0,930 

Día 180 3,071 0,518 4,162 0,901 3,740 0,936 

 
Gráfico 28: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de la concentración plasmática de 

globulinas en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) del estudio 

2,7

2,9

3,1

3,3

3,5

3,7

3,9

4,1

4,3

4,5

4,7

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

G
lo

b
u

lin
a

s 
(g

/d
l)

   
 

Sanos

EMC

 
 El estudio estadístico de los datos ha mostrado que no existen diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en la evolución en el 

tiempo de la concentración plasmática de globulinas entre los grupos 1 y 2 del trabajo 

(p=0,060). 



Resultados 

 

226 

  

Del mismo modo, no se han hallado diferencias estadísticamente significativas 

entre los valores de la concentración de globulinas en los diferentes momentos del estudio 

(p=0,463). 
 

 Sin embargo, cabe destacar que sí existen diferencias estadísticamente 

significativas en el valor de esta variable entre los dos grupos de perros (1 y 2) (p=0,001), 

siendo la concentración plasmática de globulinas estadísticamente superior en los perros 

con EMC del Grupo 2 en todos los controles realizados, como puede observarse en la tabla 

74 y en el gráfico 28.  

 

 
� α1-globulinas

 
Tabla 75: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de α1-globulinas plasmáticas en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 5,473 0,605 3,913 1,719 4,485 1,595 

Día 30 4,972 0,490 3,971 1,087 4,338 1,028 

Día 90 5,109 0,784 3,835 0,860 4,302 1,030 

Día 180 4,854 0,653 4,295 2,430 4,500 1,972 

 
Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 0,328 0,021 0,275 0,118 0,294 0,097 

Día 30 0,314 0,040 0,279 0,073 0,292 0,064 

Día 90 0,319 0,042 0,271 0,055 0,289 0,055 

Día 180 0,299 0,035 0,295 0,155 0,296 0,124 

 
 

 

 

 



Resultados 

 

227 

Gráfico 29: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de α1-globulinas plasmáticas en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) 

 

3,5

3,7

3,9

4,1

4,3

4,5

4,7

4,9

5,1

5,3

5,5

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

α
1
-g

lo
b
u
lin

a
s 

(%
) 
  
 

 

0,25

0,26

0,27

0,28

0,29

0,3

0,31

0,32

0,33

0,34

0,35

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

α
1
-g

lo
b
u
lin

a
s 

(g
/d

l)
  
  

  

Se ha observado que los valores porcentual y absoluto de α1-globulinas en plasma 

de los perros sanos a los que se les administró doxiciclina (Grupo 1) y los perros con EMC 

que fueron tratados con este fármaco (Grupo 2) evolucionan en el tiempo de forma similar 

en ambas poblaciones, no existiendo diferencias estadísticamente significativas en el 

comportamiento de estos parámetros entre los grupos (p=0,206 y p=0,394, 

respectivamente). 

 

 Tampoco existen diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en el valor porcentual (p=0,631) y en el valor absoluto (p=0,921) de las 

α1-globulinas entre los diferentes tiempos del estudio. 

  
� α2-globulinas

 
Tabla 76: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de α2-globulinas plasmáticas en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina 
 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 10,270 1,876 8,642 3,073 9,272 2,758 

Día 30 9,900 1,353 8,799 3,101 9,225 2,596 

Día 90 10,966 1,597 11,332 2,720 11,190 2,325 

Día 180 11,566 1,796 11,272 3,177 11,386 2,695 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

228 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media (g/dl) 
Desviación 

típica 
Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 0,625 0,158 0,621 0,201 0,622 0,183 

Día 30 0,628 0,111 0,614 0,202 0,619 0,171 

Día 90 0,700 0,132 0,815 0,205 0,771 0,187 

Día 180 0,727 0,126 0,797 0,262 0,770 0,220 

 
Gráfico 30: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de α2-globulinas plasmáticas en los perros de los grupos 1 y 2 

 

8,5

9

9,5

10

10,5

11

11,5

12

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

α
2
-g

lo
b
u
lin

as
 (
%

) 
  
 

 

0,55

0,6

0,65

0,7

0,75

0,8

0,85

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

α
2
-g

lo
b
u
lin

a
s 

(g
/d

l)
  
  

 

El comportamiento a lo largo del tiempo tanto del valor porcentual como absoluto 

de las α2-globulinas es similar en los grupos 1 y 2, no habiéndose encontrado diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% para la evolución de 

estas variables en el tiempo entre las dos poblaciones estudiadas (p=0,152 para el 

porcentaje de α2-globulinas y p=0,260 para los g/dl de α2-globulinas en plasma).  

 
Por otra parte, estos parámetros sufren cambios estadísticamente significativos para 

un nivel de confianza del 95% entre los diferentes controles realizados a lo largo del 

estudio (p=0,000 para el porcentaje de α2-globulinas y p=0,000 para los g/dl de α2-

globulinas en plasma), destacando los cambios que se producen en las α2-globulinas entre 

el día 30 y el día 90, donde tienden a aumentar.   

 

 

 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

229 

 

� β-globulinas
 

Tabla 77: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de β-globulinas plasmáticas en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 24,273 2,586 26,129 6,411 25,411 5,287 

Día 30 24,466 1,491 25,340 5,780 25,001 4,588 

Día 90 27,216 2,050 24,936 4,944 25,819 4,181 

Día 180 25,600 2,996 28,017 5,437 27,081 4,739 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 1,477 0,232 1,887 0,434 1,728 0,417 

Día 30 1,555 0,101 1,762 0,339 1,682 0,288 

Día 90 1,740 0,184 1,805 0,463 1,780 0,377 

Día 180 1,617 0,237 1,976 0,436 1,837 0,408 

 

 
Gráfico 31: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de β-globulinas plasmáticas en los perros de los grupos 1 y 2 

 

22

23

24

25

26

27

28

29

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

β
-g

lo
b
u
lin

a
s 

(%
) 
  
 

 

1,4

1,5

1,6

1,7

1,8

1,9

2

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

β
-g

lo
b
u
lin

a
s 

(g
/d

l) 
  
 

 

Tanto el valor porcentual como el valor absoluto de las β-globulinas plasmáticas 

evolucionan en el tiempo de forma diferente entre los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

230 

con EMC), habiéndose encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel 

de confianza del 95% en el comportamiento en el tiempo de estos parámetros entre las dos 

poblaciones caninas estudiadas (p=0,032 para la evolución del porcentaje de β-globulinas y 

p=0,032 para la evolución de la concentración de β-globulinas en el plasma de los perros 

estudiados). En ambos casos, la diferencia estadística se halla en la evolución que siguen 

los dos parámetros entre el día 90 y el día 180, ya que mientras en los perros sanos tienden 

a disminuir los valores porcentual y absoluto de estas globulinas, en los perros con EMC 

tienden a aumentar, como puede observarse en el gráfico 31. 
 

En el caso de los perros sanos incluidos en el Grupo 1 se ha observado que el valor 

porcentual y el valor absoluto de las β-globulinas cambian de forma estadísticamente 

significativa para un nivel de confianza del 95% a lo largo del tiempo (p=0,008 para el 

porcentaje de β-globulinas y p=0,004 para la concentración de estas globulinas). Las 

pruebas de contrastes intra-sujetos han mostrado que la diferencia estadística se encuentra 

entre los días 30 y 90, momento en el que se produce un incremento marcado de estas 

variables, como puede observarse en el gráfico 31. En cambio, los valores porcentual y 

absoluto de las β-globulinas plasmáticas no muestran diferencias estadísticamente 

significativas en función del momento del estudio en los perros con EMC del grupo 2 

(p=0,073 en cuanto al porcentaje de β-globulinas y p=0,104 en cuanto a la concentración 

de estas globulinas).  
 
� γ-globulinas

 
Tabla 78: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de γ-globulinas plasmáticas en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina 
 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 8,698 1,980 22,523 15,778 17,171 14,059 

Día 30 8,350 1,505 20,283 13,468 15,663 12,024 

Día 90 7,941 1,458 16,321 9,672 13,077 8,610 

Día 180 7,700 1,714 15,030 9,860 12,192 8,520 

 

 

 



Resultados 

 

231 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media (g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Media 
(g/dl) 

Desviación 
típica 

Día 0 0,521 0,107 1,804 1,567 1,307 1,371 

Día 30 0,525 0,073 1,577 1,402 1,170 1,205 

Día 90 0,505 0,106 1,230 0,847 0,949 0,751 

Día 180 0,485 0,136 1,091 0,822 0,857 0,708 

 
Gráfico 32: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de γ-globulinas plasmáticas en los perros de los grupos 1 y 2

 

7

9

11

13

15

17

19

21

23

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

γ-
g
lo

b
u
lin

a
s 

(%
) 
  
 

 

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

1,6

1,8

2

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

γ-
g
lo

b
u
lin

a
s 

(g
/d

l)
  
  

 

El comportamiento a lo largo del tiempo del porcentaje de γ-globulinas así como la 

concentración de estas globulinas son similares en los perros sanos incluidos en el Grupo 1 

y en los perros con EMC del Grupo 2, no habiéndose encontrado diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en la evolución de estos 

parámetros entre ambas poblaciones (p=0,078 para la evolución del valor porcentual y 

p=0,094 para el valor absoluto).  

 

El porcentaje de γ-globulinas sufre cambios estadísticamente significativos para un 

nivel de confianza del 95% a lo largo del tiempo (p=0,019), habiéndose observado que 

estos cambios se producen entre el día 30 y el día 90, descendiendo este valor de forma 

marcada en los perros con EMC. 

 

En cuanto a la evolución de la concentración de  γ-globulinas, aunque existe una 

tendencia con el paso del tiempo hacia el descenso de este valor, tendencia que es más 

marcada en los perros del Grupo 2 (perros con EMC), las diferencias no alcanzan el grado 

de significación estadística (p=0,061). 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

232 

Por otra parte, se ha comprobado la existencia de diferencias estadísticamente 

significativas para un nivel de confianza del 95% entre los grupos 1 y 2 para el valor 

porcentual (p=0,004) y para el valor absoluto (p=0,006) de las γ-globulinas, siendo 

superiores en todo momento en los perros con EMC. 

 
� Cociente Albúmina/Globulinas (A/G)

 
Tabla 79: Valores del cociente A/G en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) en los diferentes 

controles realizados en el estudio 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 

Media  Desviación 
típica 

Media  Desviación 
típica 

Media  Desviación 
típica 

Día 0 1,050 0,141 0,657 0,211 0,809 0,268 

Día 30 1,100 0,124 0,746 0,260 0,883 0,277 

Día 90 0,955 0,143 0,782 0,223 0,849 0,211 

Día 180 0,982 0,263 0,737 0,246 0,832 0,277 

 

 
Gráfico 33: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del cociente A/G en los perros de los grupos 

1 y 2

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

1,1

1,2

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
o

ci
e

n
te

 A
/G

   
 

Sanos

EMC

 
Se han encontrado diferencias estadísticamente significativas en la evolución en el 

tiempo del cociente A/G entre los perros sanos del grupo 1 y los perros con EMC del grupo 

2 (p=0,019). Las pruebas de contrastes intra-sujetos muestran que la diferencia estadística 

se halla en la evolución de esta variable entre los días 30 y 90, momento en el que en los 



Resultados 

 

233 

perros sanos se produce un descenso del cociente A/G y en los perros con EMC se produce 

un incremento. 

 

En los perros sanos del Grupo 1 no se han hallado diferencias estadísticamente 

significativas en el cociente A/G entre los diferentes momentos del estudio (p=0,122), 

mientras que en el Grupo 2 se ha encontrado la existencia de cambios estadísticamente 

significativos de esta variable a lo largo del tiempo (p=0,049), observándose un incremento 

paulatino de este valor desde el día 0.  

 

Por otra parte, existen diferencias estadísticamente significativas en el valor del 

cociente A/G entre los perros sanos y los perros con EMC, siendo superior el cociente en 

todo momento en los perros sanos (p=0,000 el día 0, p=0,010 el día 30, p=0,029 el día 90 y 

p=0,014 el día 180). 

 

 
5.6.6.  EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DEL INMUNOFENOTIPO  

 
A continuación se van a detallar los resultados obtenidos para las diferentes 

subpoblaciones linfocitarias analizadas en este estudio en los grupos 1 (perros sanos) y 2 

(perros con EMC) en los controles de los días 0, 30, 90 y 180. Las tablas 80-86 y los 

gráficos 34-40 reflejan estos resultados. 

 
� Linfocitos T (CD3+)

 
Tabla 80: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de linfocitos T (CD3+) en los perros sanos del Grupo 1 y 

en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de 

doxiciclina 

  

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 65,15 6,113 72,52 10,341 69,67 9,550 

Día 30 60,94 7,000 71,38 9,310 67,34 9,834 

Día 90 62,16 5,485 68,60 8,507 65,72 8,149 

Día 180 62,47 6,161 67,78 8,717 69,67 9,550 

 

 
 
 



Resultados 

 

234 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media/µl 
Desviación 

típica 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Media/µl 
Desviación 

típica 

Día 0 1677,173 553,227 2236,945 1609,514 2020,259 1320,365 

Día 30 1829,460 476,469 2173,663 1520,979 2040,423 1224,873 

Día 90 1784,449 338,399 1810,439 1110,787 1800,378 884,569 

Día 180 1588,790 373,812 1626,529 1231,471 1611,921 980,560 

 

 
Gráfico 34: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de los linfocitos T (CD3+) en los perros de los grupos 1 y 2

 

60

62

64

66

68

70

72

74

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

T
 C

D
3
+
 (
%

) 
  
 

 

1500

1600

1700

1800

1900

2000

2100

2200

2300

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

T
 C

D
3
+
/µl
  
  

 
No existen diferencias estadísticamente significativas al 95% en el comportamiento 

de la evolución en el tiempo del porcentaje (p=0,216) y del valor absoluto (p=0,282) de los 

linfocitos T (CD3+) en sangre periférica entre los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con 

EMC) del estudio, evolucionando estas variables de forma similar en ambas poblaciones.  
 

El porcentaje de linfocitos T (CD3+) tiende a disminuir de modo significativo a lo 

largo del tiempo (p=0,026), destacando el descenso de este valor que se produce entre el 

día 0 y el día 30. En cambio, no se han hallado diferencias estadísticamente significativas 

para un nivel de confianza del 95% en el número de linfocitos T (CD3+) por microlitro de 

sangre entre los diferentes momentos del estudio (p=0,112). Sin embargo, se observa una 

tendencia hacia el descenso también para esta variable (gráfico 34), constante desde el 

inicio hasta el día 180 en el caso del grupo de perros con EMC y desde el día 30 hasta el 

día 180 en el grupo de perros sanos, en este caso tras un leve incremento entre los días 0 y 

30. 
 

Se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en el porcentaje de linfocitos T (CD3+) entre los grupos 1 y 2 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

235 

(p=0,009), siendo mayor en todos los momentos del estudio el valor de este porcentaje en 

la población de perros con EMC. Sin embargo, en el caso del recuento absoluto de estos 

linfocitos no se encuentran diferencias estadísticamente significativas entre ambos grupos 

(p=0,511). 

 

� Linfocitos Th (CD3+CD4+)

 
Tabla 81: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de linfocitos Th (CD3+CD4+) en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 
Media (%) 

Desviación 
típica Media (%) 

Desviación 
típica Media (%) 

Desviación 
típica 

Día 0 37,914 4,940 32,875 9,252 34,764 8,201 

Día 30 35,273 6,230 35,010 8,276 35,108 7,468 

Día 90 34,444 5,121 36,725 7,071 35,870 6,419 

Día 180 35,775 4,983 36,026 7,665 35,932 6,696 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Media/µl 
Desviación 

típica 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Día 0 971,760 437,965 1141,619 1173,454 1077,922 958,649 

Día 30 1079,840 410,451 1183,791 1101,750 1144,809 897,980 

Día 90 999,945 284,487 1064,143 750,111 1040,069 612,026 

Día 180 917,961 268,599 890,644 544,677 900,888 455,645 

 

Gráfico 35: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de los linfocitos Th (CD3+CD4+) en los perros de los grupos 1 y 2 

 

32

33

34

35

36

37

38

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

T
h
 C

D
3
+
C

D
4
+
 (
%

) 
  
 

 

850

900

950

1000

1050

1100

1150

1200

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

T
h
 C

D
3
+
C

D
4
+
/µl
  
  

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

236 

 

Se ha comprobado la existencia de diferencias estadísticamente significativas al 

95% en el comportamiento en el tiempo del porcentaje de linfocitos Th (CD3+CD4+) entre 

los perros sanos (Grupo 1) y los perros con EMC (Grupo 2) (p=0,049). La diferencia 

estadística se halla en el comportamiento de esta variable entre el día 0 y el día 30: en los 

perros sanos tiende a disminuir este porcentaje en este período de tiempo mientras que en 

los perros con EMC tiende a aumentar en el mismo período (gráfico 35). 

 

Sin embargo, el valor porcentual de los linfocitos Th (CD3+CD4+) no ha mostrado 

cambios estadísticamente significativos al 95% a lo largo del tiempo ni en el grupo de 

perros sanos (p=0,112) ni en el grupo de perros con EMC (p=0,170). 

  

La evolución en el tiempo del valor absoluto de los linfocitos Th (CD3+CD4+) es, 

sin embargo, similar entre las dos poblaciones caninas estudiadas, no habiéndose 

encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% 

entre los grupos 1 y 2 (p=0,544). 

 

Tampoco se han observado diferencias estadísticamente significativas al 95% para 

el valor absoluto de linfocitos Th (CD3+CD4+) entre los controles realizados (p=0,102).  

 
� Linfocitos Tc (CD3+CD8+)

 
Tabla 82: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de linfocitos Tc (CD3+CD8+) en los perros sanos del 

Grupo 1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la 

administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media (%) 
Desviación 

típica 
Media (%) 

Desviación 
típica 

Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 18,142 6,008 29,190 20,026 25,047 16,975 

Día 30 16,780 4,947 27,588 17,962 23,535 15,320 

Día 90 17,455 4,548 22,823 12,215 20,809 10,284 

Día 180 16,882 5,532 22,184 12,385 20,196 10,567 

 

 

 

 



Resultados 

 

237 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media/µl 
Desviación 

típica 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Media/µl 
Desviación 

típica 

Día 0 440,681 111,457 1321,219 1795,963 991,017 1472,719 

Día 30 486,115 122,124 1136,236 1473,650 892,440 1199,398 

Día 90 490,037 112,660 739,001 894,010 645,639 713,698 

Día 180 421,499 144,186 677,055 1021,752 581,221 814,269 

 

 

Gráfico 36: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de los linfocitos Tc (CD3+CD8+) en los perros de los grupos 1 y 2

 

16

18

20

22

24

26

28

30

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

T
c 

C
D

3
+
C

D
8
+
 (
%

) 
  
 

 

400
500
600
700
800
900

1000
1100
1200
1300
1400

Día 0 Día 30 Día 90 Día
180

L
in

fo
ci

to
s 

T
c 

C
D

3
+
C

D
8
+
/µl
  
  

 
 

No se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en la evolución en el tiempo de los valores porcentual (p=0,149) y 

absoluto (p=0,161) de los linfocitos Tc (CD3+CD8+) entre los perros sanos del Grupo 1 y 

los perros con EMC del Grupo 2, siguiendo, por tanto, estas variables un comportamiento 

similar en ambas poblaciones. 

 

Asimismo, no se han hallado diferencias estadísticamente significativas para estas 

variables entre los diferentes tiempos del estudio (p=0,088 en el caso del porcentaje de 

linfocitos Tc y p=0,156 en el caso del valor absoluto de estas células), no existiendo, por 

tanto, cambios significativos en estas variables a lo largo del tiempo. A pesar de no haberse 

encontrado una asociación estadística, en las tablas 82 A y B y el gráfico 36 puede 

observarse que tanto el valor relativo como el valor absoluto de los linfocitos Tc tienden a 

disminuir desde el comienzo del estudio, siendo más marcada esta tendencia en la 

población de perros con EMC. 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

238 

� Cociente CD4/CD8

 
Tabla 83: Valores del cociente CD4/CD8 en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del 

Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 

Media  Desviación 
típica 

Media  Desviación 
típica 

Media  Desviación 
típica 

Día 0 2,358 0,972 1,698 1,072 1,945 1,070 

Día 30 2,365 1,068 1,815 1,117 2,021 1,115 

Día 90 2,186 0,945 2,024 1,139 2,085 1,058 

Día 180 2,435 1,137 1,918 0,705 2,112 0,910 

 

 
Gráfico 37: Representación gráfica de la evolución en el tiempo del cociente CD4/CD8 en los perros de los 

grupos 1 y 2

1,5

1,6

1,7

1,8

1,9

2

2,1

2,2

2,3

2,4

2,5

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
D

4
/C

D
8

  
  

Sanos

EMC

 
El estudio estadístico de los datos no ha mostrado la existencia de diferencias 

estadísticamente significativas en el comportamiento en el tiempo del valor del cociente 

CD4/CD8 entre los perros sanos y los perros con EMC (p=0,135).  

 

Tampoco se han hallado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en el cociente CD4/CD8 entre los diferentes momentos del estudio 

(p=0,561), aunque parece tender a aumentar este valor en el caso de los perros con EMC 

(tabla 83 y gráfico 37). 

 

 



Resultados 

 

239 

� Linfocitos B (CD21+)

 
Tabla 84: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de linfocitos B (CD21+) en los perros sanos del Grupo 1 

y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de 

doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 20,823 5,432 13,636 8,568 16,331 8,244 

Día 30 24,504 6,956 12,722 7,237 17,140 9,102 

Día 90 23,289 4,638 15,831 6,572 18,627 6,896 

Día 180 17,911 4,362 14,365 6,734 15,695 6,131 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media/µl 
Desviación 

típica 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Media/µl 
Desviación 

típica 

Día 0 559,002 289,775 318,219 189,426 408,513 256,543 

Día 30 762,418 327,173 338,942 176,484 497,745 316,953 

Día 90 679,365 211,655 398,951 217,649 504,106 252,891 

Día 180 463,478 179,316 304,652 165,669 364,212 185,295 

 
 
Gráfico 38: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de los linfocitos B (CD21+) en los perros de los grupos 1 y 2 

 

12

14

16

18

20

22

24

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

L
in

fo
ci

to
s 

B
 C

D
2
1
+
 (
%

) 
  
 

 

250

350

450

550

650

750

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

L
in

fo
ci

to
s 

B
 C

D
2
1
+
/µl
  
  

 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

240 

 

 

El comportamiento a lo largo del tiempo del porcentaje de linfocitos B (CD21+) y 

del número de estas células por microlitro de sangre periférica presenta diferencias 

estadísticamente significativas al 95% entre los perros sanos del Grupo 1 y los perros con 

EMC del Grupo 2 (p=0,001 para la evolución del valor porcentual y p=0,001 para la 

evolución del valor absoluto).  

 

En el caso de la evolución del porcentaje de linfocitos B, las pruebas de contrastes 

intra-sujetos muestran que la diferencia estadística se encuentra en la evolución de esta 

variable entre los días 30 y 90, momento en el que este porcentaje tiende a disminuir en los 

perros sanos y a aumentar en los perros con EMC, y entre los días 90 y 180, período de 

tiempo en el que se produce un descenso de este valor en ambos grupos, pero es mucho 

más marcado en los perros sanos.  

 

En cuanto a la evolución del valor absoluto de los linfocitos B, la diferencia 

estadística se halla entre los días 0 y 30, período en el que se produce un incremento muy 

marcado del número de linfocitos B en sangre en los perros sanos y muy leve en los perros 

con EMC, y entre el día 30 y el día 90, donde se produce un descenso de este parámetro en 

el caso de los perros sanos y un incremento en los perros con EMC.  

 

En el caso de los perros del Grupo 1 (perros sanos) se ha encontrado la existencia 

de diferencias estadísticamente significativas al 95% tanto en el valor porcentual (p=0,002) 

como en el valor absoluto (p=0,002) de los linfocitos B (CD21+) en los diferentes 

momentos del estudio, encontrándose un aumento del mismo entre los días 0 y 30, y un 

descenso posterior hasta el día 180. 

 

En los perros con EMC del Grupo 2 no se han hallado diferencias estadísticamente 

significativas para un nivel de confianza del 95% en el porcentaje de linfocitos B (CD21+) 

en los diferentes momentos del estudio (p=0,079). Sin embargo, el número de estas células 

por microlitro de sangre periférica sí ha mostrado cambios a lo largo del tiempo que son 

estadísticamente significativos al 95% (p=0,036), produciéndose un incremento de este 

valor hasta el día 90 y un descenso entre los días 90 y 180. 

 

 

 

 

 

 



Resultados 

 

241 

� Linfocitos CMHII+

 
Tabla 85: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de linfocitos CMHII+ en los perros sanos del Grupo 1 y 

en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de 

doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 88,56 5,442 91,29 5,891 90,23 5,788 

Día 30 88,98 3,433 90,36 6,533 89,83 5,513 

Día 90 86,70 6,437 89,70 4,430 88,54 5,402 

Día 180 87,23 4,917 85,72 7,362 86,31 6,476 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media/µl 
Desviación 

típica 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Media/µl 
Desviación 

típica 

Día 0 2323,603 911,220 3343,222 3177,837 2948,531 2572,648 

Día 30 2701,418 731,488 3153,339 2736,136 2978,402 2176,724 

Día 90 2499,143 533,598 2582,799 1752,809 2550,416 1396,252 

Día 180 2220,797 494,360 2130,823 1457,980 2165,652 1169,195 

 

 
Gráfico 39: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de los linfocitos CMHII+ en los perros de los grupos 1 y 2

 

85

86

87

88

89

90

91

92

93

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

L
in

fo
ci

to
s 

C
M

H
II
+
 (
%

) 
  
 

 

2000

2200

2400

2600

2800

3000

3200

3400

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

L
in

fo
ci

to
s 

C
M

H
II
+
/µ

l  
  

 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

242 

 

No existen diferencias estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 

95% en el comportamiento de los valores porcentual (p=0,259) y absoluto (p=0,180) de los 

linfocitos CMHII+ a lo largo del tiempo entre los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con 

EMC) del estudio.  

 

Se han encontrado cambios estadísticamente significativos al 95% en el porcentaje 

de linfocitos CMHII+ a lo largo del tiempo (p=0,035), produciéndose un descenso 

estadísticamente significativo entre el día 0 y el día 180, de forma progresiva. El valor 

absoluto de linfocitos CMHII+ no presenta cambios a lo largo del tiempo estadísticamente 

significativos para un nivel de confianza del 95% (p=0,055), si bien las diferencias que se 

encuentran en este parámetro entre los diferentes momentos del estudio son cercanas a la 

significación, observándose, al igual que para el valor porcentual, una tendencia hacia el 

descenso en esta variable. 

 
� Linfocitos CD3-CD21-

 
Tabla 86: Valores porcentuales (A) y absolutos (B) de linfocitos CD3-CD21- en los perros sanos del Grupo 

1 y en los perros con EMC del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de 

doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

A: 

Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica Media (%) 
Desviación 

típica 

Día 0 15,559 6,027 14,053 15,703 14,636 12,721 

Día 30 15,534 5,707 16,553 14,770 16,158 11,962 

Día 90 13,944 4,841 13,773 5,332 13,839 5,065 

Día 180 18,057 8,510 14,820 5,984 16,073 7,114 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

B: 

Media/µl 
Desviación 

típica 
Media/µl 

Desviación 
típica 

Media/µl 
Desviación 

típica 

Día 0 392,515 187,687 283,631 164,797 325,780 179,214 

Día 30 462,360 199,106 356,477 184,613 397,464 194,252 

Día 90 400,698 153,224 345,519 111,645 366,879 129,745 

Día 180 438,972 201,929 342,148 148,152 379,629 174,409 

 



Resultados 

 

243 

 

 
Gráfico 40: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores porcentuales (izquierda) y 

absolutos (derecha) de los linfocitos CD3-CD21- en los perros de los grupos 1 y 2

 

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

L
in

fo
ci

to
s 

C
D

3
-C

D
2
1
- 
(%

) 
  
 

 

200

250

300

350

400

450

500

550

600

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180
L
in

fo
ci

to
s 

C
D

3
-C

D
2
1
-/µ
l  

  

No se han hallado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95% en el comportamiento a lo largo del tiempo del porcentaje y del valor 

absoluto de los linfocitos CD3-CD21- entre los grupos 1 (perros sanos) y 2 (perros con 

EMC) del estudio (p=0,650 en el caso de la evolución del valor porcentual y p=0,829 en el 

caso de la evolución del valor absoluto de los linfocitos CD3-CD21-).  

 
Tampoco se han producido cambios estadísticamente significativos al 95% ni del 

porcentaje (p=0,520) ni del número de linfocitos CD3-CD21-/µl (p=0,239) a lo largo del 

tiempo. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

----- Sanos   ----- EMC 
 



Resultados 

 

244 

5.6.7. EVOLUCIÓN EN EL TIEMPO DE LA CONCENTRACIÓN 

PLASMÁTICA DE IFN- Γ, IL-6, IL-10 Y TNF- Α 

 
En las tablas 87-90 y en los gráficos 41-44 se muestran los resultados obtenidos de 

la concentración de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α. 

 
� IFN-γ

 
Tabla 87: Valores de la concentración de IFN-γ en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del 

Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Día 0 55,440 37,351 135,678 284,372 107,206 230,660 

Día 30 95,881 90,697 139,073 416,732 123,747 336,410 

Día 90 38,885 42,560 124,738 290,554 94,274 236,251 

Día 180 70,454 70,140 123,427 231,985 104,630 190,756 

 

 
Gráfico 41: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores de la concentración de IFN-γ 

en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC)

 

35

55

75

95

115

135

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
o

n
ce

n
tr

a
ci

ó
n

 I
F

N
-γ 
(p

g
/m

l)
  

  
  

Sanos

EMC

 
 

 



Resultados 

 

245 

El valor de la concentración de IFN-γ en el plasma sigue un comportamiento 

similar a lo largo del tiempo en las dos poblaciones caninas estudiadas, no habiéndose 

encontrado diferencias estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% 

en la evolución en el tiempo de este parámetro entre los grupos 1 y 2 (p=0,945). 
 

Los valores de la concentración de IFN-γ tampoco han mostrado cambios 

estadísticamente significativos a lo largo de los diferentes tiempos del estudio (p=0,892), 

observándose escasas modificaciones de esta variable a lo largo del tiempo.  

 
� IL-6
 

Tabla 88: Valores de la concentración de IL-6 en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del 

Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina  

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Día 0 69,041 27,571 31,078 33,792 44,219 36,240 

Día 30 99,285 112,604 31,479 28,228 54,951 75,164 

Día 90 78,421 56,035 51,713 57,578 60,958 57,397 

Día 180 71,481 29,913 38,053 54,419 49,624 49,444 

 

 
Gráfico 42: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores de la concentración de IL-6 

en los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2

 

0

20

40

60

80

100

120

140

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
o

n
ce

n
tr

a
ci

ó
n

 IL
-6

 (
p

g
/m

l) 
   

   
  

Sanos

EMC

 



Resultados 

 

246 

El estudio estadístico de los datos ha revelado que no existen diferencias 

estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en el comportamiento 

de la evolución de la concentración de IL-6 entre los grupos 1 y 2 del estudio (p=0,462).  
 

Tampoco se han encontrado cambios en la concentración de IL-6 a lo largo del 

tiempo que sean estadísticamente significativos al 95% (p=0,584). 

 
� IL-10

 
Tabla 89: Valores de la concentración de IL-10 en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC del 

Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Día 0 40,78 140,357 4,40 9,188 19,99 91,700 

Día 30 112,03 388,072 1,57 3,811 48,91 253,893 

Día 90 107,32 370,651 3,84 13,999 48,19 242,485 

Día 180 43,71 151,412 4,50 13,229 21,31 99,135 

 

Gráfico 43: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores de la concentración de IL-10 

en los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo  

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
o

n
ce

n
tr

a
ci

ó
n

 IL
-1

0
 (

p
g

/m
l) 

   
   

  

Sanos

EMC

 
A pesar de las diferencias que pueden observarse en la tabla 89 y en el gráfico 43 

en cuanto a la evolución en el tiempo de la concentración plasmática de IL-10 entre los 

perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC del Grupo 2 (p=0,245), dichas diferencias 

no han resultado ser estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95%, 



Resultados 

 

247 

siguiendo, por tanto, estas variables un comportamiento estadísticamente similar en ambas 

poblaciones. 
 

Asimismo, no se han hallado diferencias estadísticamente significativas para esta 

variable entre los diferentes tiempos del estudio (p=0,270), no existiendo, por tanto, 

cambios significativos a lo largo del tiempo.  

 
� TNF-α

 

Tabla 90: Valores de la concentración de TNF-α en los perros sanos del Grupo 1 y en los perros con EMC 

del Grupo 2 antes (día 0) y después (días 30, 90 y 180) de la administración de doxiciclina 

 

Grupo 1 (sanos) Grupo 2 (EMC) Total 

 
Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Media 
(pg/ml) 

Desviación 
típica 

Día 0 11,818 15,523 30,105 54,682 23,168 44,532 

Día 30 387,394 417,146 30,564 46,474 165,914 307,418 

Día 90 7,459 17,286 33,553 39,653 23,656 35,0348 

Día 180 56,533 84,338 0,100 0,293 21,506 57,592 

 

 

Gráfico 44: Representación gráfica de la evolución en el tiempo de los valores de la concentración de TNF-α 

en los perros de los grupos 1 (sanos) y 2 (con EMC) 

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

Día 0 Día 30 Día 90 Día 180

C
o

n
ce

n
tr

a
ci

ó
n

T
N

F
-α (

p
g

/m
l) 

   
   

   

Sanos

EMC

    
 

El comportamiento de la evolución de la concentración de TNF-α en el tiempo es 

estadísticamente diferente al 95% entre los perros sanos del Grupo 1 y los perros con EMC 



Resultados 

 

248 

del Grupo 2 (p=0,001). En concreto, las pruebas de contraste intra-sujeto han mostrado que 

las diferencias se encuentran en el comportamiento de la concentración de esta citocina 

entre los días: 0 y 30 (p=0,001), momento en el que en los perros sanos se produce un 

incremento muy marcado de este valor, permaneciendo en los perros con EMC casi sin 

variación; 30 y 90 (p=0,001), período en el que desciende de forma marcada en los perros 

sanos y permanece, de nuevo, prácticamente sin variación en los perros con EMC; y 90 y 

180 (p=0,002), momento en el que este valor aumenta en los perros sanos y desciende en 

los perros con EMC. 

 

En la población de perros sanos del Grupo 1 del estudio se producen cambios 

estadísticamente significativos para un nivel de confianza del 95% en la concentración de 

TNF-α a lo largo del tiempo (p=0,013), siendo estos cambios más marcados entre los días 

0 y 30 y entre los días 30 y 90, como puede observarse en la tabla 90 y en el gráfico 44. 

  

En la población de perros con EMC del Grupo 2 no se producen cambios 

estadísticamente significativos al 95% en el valor de la concentración de TNF-α a lo largo 

del tiempo (p=0,061). 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

249 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6. DISCUSIÓN 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

250 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Discusión 

 

251 

 

6.1. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS 

 
  

Como se ha comentado previamente, los objetivos de este trabajo requerían 

comenzar llevando a cabo una caracterización de las poblaciones linfocitarias caninas, 

estableciendo unos valores de referencia propios para esta especie que nos pudiesen servir 

de orientación en la posterior evaluación del inmunofenotipo en los perros con EMC y con 

otras patologías. Para ello, se ha contado con un total de 47 perros considerados sanos en 

base a la ausencia de sintomatología clínica, de anomalías en la exploración física y de 

alteraciones en la analítica sanguínea completa, unido a la negatividad mediante IFI y PCR 

frente a E. canis y L. infantum, dos de los patógenos más habituales en la especie canina en 

nuestro entorno (Sainz et al. 1998, Miró et al. 2007). 

 

La población estudiada es homogénea desde el punto de vista del sexo, siendo 

aproximadamente la mitad de los animales machos y la otra mitad hembras. En cuanto a su 

edad, se decidió establecer tres grupos basados en las descripciones de otros autores en la 

bibliografía  (Byrne et al. 2000, Strasser et al. 2000, Faldyna et al. 2001, HogenEsch et al. 

2004, Blount et al. 2005, Horiuchi et al. 2007b). Más de la mitad de los animales sanos (26 

perros) fueron considerados adultos (de 4 a 8 años de edad), siendo los restantes 21 

animales en un 23,40% menores de 1 año y en un 21,27% perros jóvenes (de más de 1 año 

hasta 3,5 años). Desafortunadamente no se han podido incluir perros geriátricos en esta 

población de perros sanos, ya que la mayoría de los perros de edad avanzada atendidos 

presentaban alteraciones en la exploración física y/o en la analítica sanguínea. Como se 

describió en el apartado de resultados, las razas más representadas en nuestra población 

canina sana han sido Beagle (13 perros), Galgo Español (13 perros) y Pastor Alemán (11 

perros). 

 

6.1.1. DATOS ANALÍTICOS DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS 

 

6.1.1.1. Analítica sanguínea  

 

Los resultados medios e intervalos de confianza obtenidos en el estudio 

hematológico, en la bioquímica sanguínea básica y en el proteinograma de la población de 

perros sanos muestran unos valores dentro del rango de referencia para la especie canina. 

Aún teniendo en cuenta las limitaciones derivadas del tamaño muestral, consideramos que 

nuestra población canina sana presenta unas características respecto a estas variables que 

son extrapolables a otras poblaciones de perros sanos y que nos sirven de referencia en 



Discusión 

 

252 

nuestros estudios posteriores de comparación de las poblaciones de perros con EMC y con 

otras patologías, así como en la evaluación del efecto de la administración de doxiciclina 

en la especie canina. Dichas comparaciones se realizaron empleando métodos paramétricos 

siempre que los valores se adaptasen a una distribución normal y métodos no paramétricos 

en caso contrario. 

 

6.1.1.2. Inmunofenotipo  

 

El empleo de la citometría de flujo en el inmunofenotipado en la medicina clínica 

(tanto humana como veterinaria) permite determinar los porcentajes de las subpoblaciones 

de linfocitos y, así, analizar el impacto de las enfermedades sobre el sistema inmunitario, 

definir clínicamente los estados de enfermedad y establecer el pronóstico (Byrne et al. 

2000, Reis et al. 2005). Sin embargo, para que esto sea posible, es imprescindible disponer 

de una técnica estandarizada que permita establecer unos valores fisiológicos que sirvan de 

referencia para poder identificar alteraciones en la distribución de estas poblaciones 

celulares.  

 

Uno de los objetivos descritos al inicio de este proyecto fue el establecimiento de 

unos valores porcentuales y absolutos de referencia para el inmunofenotipo en la especie 

canina mediante el empleo de citometría de flujo a través del marcaje con anticuerpos 

monoclonales anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-células B y anti-CMH de clase II. Con 

esta finalidad, se llevó a cabo un estudio del fenotipo de las subpoblaciones linfocitarias en 

sangre periférica de un total de 47 perros sanos, obteniéndose los resultados descritos en el 

apartado anterior. Dichos resultados nos han permitido disponer de unos rangos de 

referencia para la posterior comparación con los valores obtenidos para los perros con 

EMC y con otras patologías. 

 

Mientras en medicina humana la citometría de flujo se emplea en muchos 

laboratorios de análisis clínicos de forma rutinaria, habiéndose establecido una 

metodología claramente definida para determinar de forma rápida diversas poblaciones 

celulares en una gran variedad de fluidos biológicos (Reis et al. 2005), en medicina 

veterinaria la aplicación de la citometría de flujo ha sido mucho menos difundida. Esto se 

debe en parte a que el desarrollo de esta técnica en la especie canina se ha visto limitado 

por la escasa disponibilidad comercial de reactivos, debiendo llevarse a cabo los estudios 

de inmunofenotipado durante mucho tiempo mediante el empleo de anticuerpos 

monoclonales cedidos por otros investigadores (Byrne et al. 2000) o bien mediante el 

empleo de los anticuerpos disponibles frente a antígenos de otras especies animales y del 

hombre con los que presentaban reactividad cruzada (Williams 1997, Schuberth et al. 

1998, Sinkora et al. 2007). Un evento clave en la evaluación de las subpoblaciones 



Discusión 

 

253 

linfocitarias caninas por citometría de flujo fue el encuentro del “Canine Leukocyte 

Antigen Workshop” (CLAW) en julio de 1993, cuyos hallazgos fueron publicados en 1994 

por Cobbold y Metcalfe y que permitió la identificación de moléculas CD de perro y el 

desarrollo por parte de diversos investigadores de anticuerpos monoclonales específicos 

para la especie canina (Cobbold & Metcalfe 1994). Esto ha hecho que en la actualidad se 

disponga de una amplia batería de anticuerpos monoclonales frente a diversos antígenos 

caninos, aunque aún es muy inferior a la existente para otras especies, como el hombre o el 

ratón. Por otra parte, la aplicación de la citometría de flujo al inmunofenotipado en el 

diagnóstico veterinario se ha visto limitada por la falta de una estandarización de la técnica 

y por la ausencia de unos rangos de referencia para las diferentes subpoblaciones 

linfocitarias (Byrne et al. 2000). 

  

El número de estudios con los que se han tratado de solucionar estos problemas 

mediante la descripción de protocolos y el establecimiento de unos valores de referencia en 

perros sanos para los valores porcentuales y/o absolutos de las subpoblaciones linfocitarias 

en sangre periférica es aún muy escaso (Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Reis et al. 

2005). Son más numerosos los trabajos en los que se describen los valores del 

inmunofenotipo obtenidos en un grupo reducido de perros sanos (o grupo control) 

únicamente para poder compararlos con los resultados del estudio llevado a cabo en 

diversas patologías o en diferentes tejidos (Chabanne et al. 1995, Caswell et al. 1997, 

Winnicka et al. 2002, Sakai et al. 2003). Los anticuerpos monoclonales empleados en estos 

estudios para el marcaje de linfocitos T han sido anti-CD3, anti-CD5 y/o anti-Thy-1, entre 

otros, según el trabajo. En el caso del marcaje de linfocitos Th, se ha utilizado, al igual que 

en nuestro trabajo, el anticuerpo anti-CD4, usándose el anti-CD8 para la identificación de 

linfocitos Tc. La caracterización de los linfocitos B se ha realizado habitualmente mediante 

el marcaje con el anticuerpo monoclonal anti-CD21 y, en algunos casos, se ha determinado 

el porcentaje de linfocitos sanguíneos que expresaban en su superficie CMH de clase II, 

como en nuestro estudio. En la Tabla 91 se muestran, a modo de resumen, los resultados de 

la distribución de las subpoblaciones linfocitarias encontradas en nuestro trabajo y en los 

diferentes estudios publicados previamente.  

 

Tal y como se describió en el apartado de resultados de la presente memoria, en 

nuestra población de perros sanos de diferentes razas y edades, se obtuvieron unos 

resultados medios de 65,69% de linfocitos T y de 1869,25 de estas células por microlitro 

de sangre periférica. Los valores porcentuales de esta población linfocitaria en sangre 

periférica en perros sanos recogidos en la bibliografía varían entre un 61,56% y un 85,4% 

(Tabla 91), resultando nuestro valor inferior al obtenido en la mayoría de los estudios 

(Chabanne et al. 1995, Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Sakai et al. 2003,  Reis et al.  



 

 

 

Tabla 91: Resultados obtenidos en nuestro estudio y en trabajos relacionados para las subpoblaciones linfocitarias sanguíneas caninas. Se indica el antígeno leucocitario 

empleado así como ciertas características de la población canina estudiada en cada caso, como el número de animales y su raza. 

 

 
Antígeno 

leucocitario 

Nuestros 

resultados 

Chabanne et 

al., 1995 

Caswell et al., 

1997 

Byrne et 

al, 2000 

Faldyna et 

al., 2001 

Winnicka et 

al., 2002 

Sakai et 

al., 2003 

Reis et al., 

2005 

CD3 
65,69% 

(1869,25/µl) 

 

 

 

 

 

 
80%  

 

 
85,4% 

 

 

CD5 
 

 
82,8% (1670/µl) 

 

 
83,3% 

 

 

61,56% 

(1220/µl) 

 

 
81,7% 

Linfocitos 

T 

Thy-1 u 

otros 

 

 

63,5 % 

(1440/µl) 

69,6% 

(1720/µl) 

 

 

 

 

 

 

 

 
84,9% 

Linfocitos 

Th 
CD4 

37,91% 

(1080,14/µl) 
47,5% (950/µl) 35% (840/µl) 45% 43,2% 

40,77% 

(810/µl) 
42,3% 46,04% 

Linfocitos 

Tc 
CD8 

19,75% 

(506,19/µl) 
19,3% (380/µl) 14,6% (380/µl) 28,8% 19,1% 

26,44% 

(540/µl) 
26,3% 32,08% 

Cociente 

CD4/CD8 
CD4 y CD8 2,09 2,6 2,8 1,87 2,5 1,73 1,64 

 

 

Linfocitos 

B 
CD21 

18,41% 

(527,57/µl) 
12,2% (240/µl) 28,7% (730/µl) 12,9% 14,4% 

5,12% 

(100/µl) 
9,3% 19,8% 

CMH clase 

II 
CMHII 

89,01% 

(2538,80/µl) 

 

 

 

 
76,5% 

 

 

 

 

 

 

 

 

Número de perros 
47 (varias 

razas) 

12 (Pastores 

alemanes) 

5 

(desconocido) 

28 

(Beagles) 

54 (varias 

razas) 

24 (varias 

razas) 
11 (Beagle) 

40 

(mestizos) 



Discusión 

 

255 

2005). Sin embargo, no en todos los trabajos se han reflejado los valores absolutos 

obtenidos para las diferentes subpoblaciones linfocitarias, variando en los que se han 

descrito entre 1220 y 1720 linfocitos T/µl (Tabla 91), lo que resulta inferior a lo hallado en 

esta tesis doctoral. En este punto consideramos importante recalcar que, tal y como 

apuntaron Blount y colaboradores en 2005, sería recomendable calcular en todos los casos 

los valores absolutos de las poblaciones celulares y evitar hacer comparaciones únicamente 

de los valores porcentuales, ya que estos porcentajes se encuentran influenciados por los 

resultados de las demás poblaciones celulares de la muestra (Blount et al. 2005). Por otra 

parte, sería importante tener en cuenta que en nuestro estudio, en la caracterización de la 

población de células T, se ha empleado un anticuerpo monoclonal que reconoce de forma 

específica el antígeno canino CD3, mientras que en otros de los trabajos se ha empleado 

como antígeno leucocitario a identificar para caracterizar los linfocitos T CD5 o Thy-1 

(Chabanne et al. 1995, Caswell et al. 1997, Byrne et al. 2000, Winnicka et al. 2002, Reis et 

al.2005), a lo que se puede achacar, al menos en parte, algunas de las diferencias que 

hemos observado con nuestros resultados. Se ha descrito que los anticuerpos monoclonales 

anti-CD5 identifican en el hombre y en el ratón una subpoblación de células B, además de 

los linfocitos T. En el caso del perro, la expresión de la molécula CD5 de 67kDa se limita, 

según algunos autores, a las células T, y es posible que a algunas células NK (Williams 

1997), aunque otros autores consideran que también se expresa en algunas células B 

(Byrne et al. 2000). El antígeno denominado Thy-1 se expresa, además de sobre la 

superficie de los linfocitos T, sobre otros tipos celulares, como monocitos y granulocitos, y 

resulta ser mucho menos específico que los demás antígenos empleados en la 

identificación de esta población (Williams 1997). En cambio, el antígeno de superficie 

CD3 es considerado la molécula de reconocimiento de células T más específica (Williams 

1997), por lo que se decidió su empleo en esta tesis doctoral. Además, el menor porcentaje 

de linfocitos T CD3+ obtenido en nuestro estudio en comparación con el obtenido en otros 

trabajos en los que se han empleado anticuerpos monoclonales anti-CD3 puede deberse a 

diferencias en el clon y/o fuente de los anticuerpos, a diferencias en la raza o edad de los 

animales evaluados y a la metodología empleada en cada uno de los estudios. 

 

 En cuanto a la supoblación linfocitaria Th, tanto en nuestro trabajo como en la 

mayoría de los estudios realizados al respecto (Dirscherl et al. 1995, Chabanne et al. 1995, 

Caswell et al. 1997, Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Winnicka et al. 2002, Sakai et 

al. 2003, HogenEsch et al. 2004, Blount et al. 2005, Reis et al. 2005), se han empleado 

anticuerpos monoclonales capaces de identificar la molécula de superficie CD4. En la 

población de perros sanos de nuestro estudio se han obtenido unas medias similares a las 

de los trabajos previos (Tabla 91), aunque cabe destacar que, de la misma forma que se 

describió en el caso de los linfocitos T, nuestros resultados porcentuales para la población 

linfocitaria Th (37,91%) son algo inferiores a los obtenidos en la mayoría de los citados 



Discusión 

 

256 

trabajos (Chabanne et al. 1995, Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Winnicka et al. 

2002, Sakai et al. 2003, Reis et al. 2005), en los que este porcentaje varía entre 35 y 47,5%, 

siendo, en cambio, los valores absolutos algo superiores en este estudio (1080,14 linfocitos 

Th/µl) en comparación con los resultados reflejados en la bibliografía, variando este valor 

medio en los trabajos de otros autores entre 810 y 950/µl (Chabanne et al. 1995, Caswell et 

al. 1997, Winnicka et al. 2002). 

 

Las medias del porcentaje y del valor absoluto de las células Tc CD8+ en sangre 

periférica de los perros sanos incluidos en nuestro estudio también mostraron resultados 

similares a los descritos previamente en la bibliografía por algunos autores (Chabanne et 

al. 1995, Caswell et al. 1997, Faldyna et al. 2001), como se puede comprobar en la Tabla 

91. Sin embargo, otros grupos de investigación han obtenido valores porcentuales para esta 

población linfocitaria que son superiores a los hallados en nuestro estudio, de 26,3% a 

32,08% (Byrne et al. 2000, Winnicka et al. 2002, Sakai et al. 2003, Reis et al. 2005), si 

bien el recuento absoluto descrito por aquellos autores que lo han incluido en su trabajo es 

sólo ligeramente superior al obtenido por nosotros en este trabajo (Winnicka et al. 2002). 

La molécula de superficie identificada en todos los casos para la caracterización de la 

subpoblación de linfocitos Tc ha sido CD8, por lo que las diferencias observadas en la 

bibliografía y en esta tesis doctoral pueden venir dadas por diferencias en el clon y la 

fuente de los anticuerpos empleados, la metodología y/o a las características propias de las 

poblaciones caninas estudiadas en cada trabajo. 

 

El cociente CD4/CD8 ofrece información sobre la relación de las dos 

subpoblaciones linfocitarias T anteriormente mencionadas: Th y Tc. Los valores de este 

cociente descritos en la bibliografía varían entre 1,73 y 2,8 (Chabanne et al. 1995, Caswell 

et al. 1997, Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Winnicka et al. 2002, Sakai et al. 2003, 

Reis et al. 2005). Nuestro resultado (de 2,09, como se describió en el apartado anterior) se 

encuentra dentro de este rango y representa aproximadamente el valor medio obtenido en 

dichos estudios. 

 

La población linfocitaria B CD21+ es la que presenta una mayor variabilidad de 

resultados en los estudios publicados, habiéndose descrito valores porcentuales y absolutos 

de linfocitos B CD21+ en poblaciones caninas sanas desde 5,12 hasta 28,7% y desde 100 

hasta 730/µl, respectivamente (Chabanne et al. 1995, Caswell et al. 1997, Byrne et al. 

2000, Faldyna et al. 2001, Winnicka et al. 2002, Sakai et al. 2003, Reis et al. 2005). En los 

47 perros sanos de este estudio los valores medios obtenidos para esta población 

linfocitaria son de 18,41% y 527,57/µl, encontrándose en un término medio entre los 

resultados publicados en la bibliografía. Una vez más, las diferencias encontradas para esta 

población linfocitaria entre los diversos trabajos pueden venir dadas por diferencias en la 



Discusión 

 

257 

metodología empleada, en las características de los anticuerpos utilizados o en las 

características de las propias muestras analizadas.  

 

A diferencia de lo descrito en el hombre, la expresión de CMH de clase II en los 

linfocitos caninos se produce en un elevado número de células sin necesidad de la 

existencia de una activación previa (Cobbold & Metcalfe 1994, Dirscherl et al. 1995, 

Williams 1997, Schuberth et al. 1998, Byrne et al. 2000). En nuestro estudio, 2538,80 

linfocitos/µl de media expresan estas moléculas del complejo mayor de 

histocompatibilidad en los perros sanos, lo que representa el 89,01% de los linfocitos 

sanguíneos. Byrne y colaboradores en 2000 describieron una media de 76,5% de linfocitos 

CMHII+ en una de las poblaciones de perros sanos de su estudio, aunque los autores 

destacaban la existencia de una elevada variabilidad, con un rango entre 46,5% y 98,6%, 

una desviación estándar de 17,2 y un intervalo de confianza para el 95% de 70,2-82,9%, 

existiendo una clara división en función de la procedencia de los animales. En nuestro 

estudio, la desviación típica es de 5,20 y los límites inferior y superior para un intervalo de 

confianza para la media al 95% son 87,45% y 90,57%, respectivamente, para los valores 

porcentuales de linfocitos CMHII+, lo que refleja una variabilidad muy inferior a la hallada 

por Byrne y colaboradores. Estudios previos al publicado por Byrne y colaboradores 

muestran medias semejantes a la obtenida por nosotros, que varían entre el 80 y el 94% 

(Dirscherl et al. 1995, Schuberth et al. 1998).  

 

En resumen, las diferencias observadas en los recuentos de las diferentes 

subpoblaciones linfocitarias en las poblaciones caninas sanas de nuestro trabajo y de los 

trabajos que han sido publicados en la bibliografía pueden deberse a varios factores, como 

se ha descrito brevemente en el caso de los linfocitos T y B. Entre estos factores que 

conducen a la existencia de diferencias en los resultados del inmunofenotipado obtenidos 

por diversos autores se encuentran: diferencias en los clones de los anticuerpos 

monoclonales empleados y las fuentes de los mismos, la raza y edad de los perros cuya 

sangre se ha analizado, el manejo de las muestras sanguíneas, la metodología empleada en 

el procesado de las muestras para su posterior análisis en el citómetro de flujo o la 

metodología empleada en los análisis de los resultados (Byrne et al. 2000). 

 
6.1.1.3. Concentración plasmática de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α 

 

Para mejorar el conocimiento de la respuesta inmunitaria desarrollada en la EMC 

era esencial llevar a cabo una evaluación de los niveles de expresión de ciertas citocinas. 

Estas moléculas polipeptídicas son las encargadas de establecer una comunicación entre 

las células del sistema inmunitario para coordinar sus efectos, lo que hace que en el 



Discusión 

 

258 

estudio de las respuestas inmunitarias, como la que se produce en el curso de la infección 

por E. canis, sea importante valorar no sólo qué poblaciones celulares proliferan y 

predominan, sino también qué citocinas son secretadas principalmente. Además, y como 

se describió previamente, se ha sugerido en la bibliografía que algunos de los efectos 

inmunomoduladores de la doxiciclina podrían venir determinados por su capacidad para 

actuar sobre la síntesis de algunas citocinas. 

 

Teniendo en cuenta todo esto, en nuestro estudio se ha evaluado la concentración 

de cuatro de estas citocinas (IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α) en sangre de perros con 

infección natural por E. canis, antes y después del tratamiento con doxiciclina. Sin 

embargo, al igual que ocurre en el caso del inmunofenotipaje y determinación de las 

subpoblaciones linfocitarias, los estudios existentes por el momento en medicina 

veterinaria y, más concretamente, en la especie canina, son muy escasos y no se 

encuentran publicados unos valores de referencia para la concentración de estos 

mediadores en sangre periférica de perros sanos. Este hecho nos condujo a la evaluación 

de la concentración en sangre de IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α en la población de perros 

sanos incluida en nuestro trabajo, para poder así comparar posteriormente los resultados 

obtenidos en los perros con EMC con los resultados de los perros sanos.  

 

En la evaluación de los resultados obtenidos de la concentración plasmática de 

estas citocinas es importante recordar una serie de propiedades de estos mediadores que 

pueden influir en nuestras observaciones: las citocinas son unas moléculas de vida corta y 

su secreción es un fenómeno breve y autolimitado, lo que puede hacer variar las 

concentraciones que hallemos en plasma en función del momento. Incluso se ha descrito la 

influencia de los ciclos circadianos sobre la concentración en sangre de algunas de estas 

moléculas, como la IL-6 (Kanabrocki et al. 1999), pudiendo variar su concentración en 

función de la hora del día en la que se obtuvo la muestra sanguínea. Además, es 

importante tener en cuenta que la mayoría de las citocinas actúan cerca del lugar donde 

han sido secretadas (acciones autocrinas y paracrinas), por lo que no siempre podremos 

detectarlas en sangre circulante (Tizard 2009f).  

 

En la bibliografía se describen diversos métodos de estudio de la concentración de 

estas moléculas en sangre periférica, a partir del sobrenadante de cultivos de células 

sanguíneas y en diferentes tejidos y fluidos biológicos. Destacan la medición de la 

concentración mediante ELISA (Engelberts et al. 1991, Helle et al. 1991, Mohamed et al. 

1997, Baggio et al. 2005, Quaranta et al. 2006, Kjelgaard-Hansen et al. 2007, de Lima et 

al. 2007, Keppel et al. 2008, de Lima et al. 2010), la determinación de la expresión de 

ARNm en las células mediante RT-PCR, QRT-PCR o por hibridación in situ (Navikas et 

al. 1994, Navikas et al. 1995, Netea et al. 1996, Grone et al. 1998, Pinelli et al. 1999, 



Discusión 

 

259 

Chamizo et al. 2005, Breathnach et al. 2006, Carrillo et al. 2008, Manna et al. 2008) y los 

bioensayos empleando líneas celulares específicas (Yamashita et al. 1994, Pinelli et al. 

1994, Bohnhorst et al. 2002). En este caso se emplearon unos kits ELISA comercialmente 

disponibles para la medición de la concentración de las citocinas mencionadas a partir de 

las muestras sanguíneas de los perros del estudio.  

 

La concentración plasmática media obtenida para el IFN-γ en 19 perros sanos de 

diferentes razas, edades y sexos de nuestro estudio fue de 47,85 pg/ml. No se han hallado 

valores de referencia para la concentración plasmática de este mediador en perros sanos en 

la bibliografía. Sin embargo, cabe destacar los resultados obtenidos por Gröne y 

colaboradores en un estudio en le que se evaluaba la expresión de ARNm de diferentes 

citocinas en sangre periférica de 14 perros con moquillo, 3 perros con otras patologías 

diferentes al moquillo y 3 perros sanos (Grone et al. 1998). Estos autores no detectaron 

ARNm de IFN-γ en las muestras sanguíneas de ninguno de los 20 perros del estudio, lo 

que contrasta con los hallazgos del presente trabajo, ya que en los 19 perros sanos de 

diferentes razas, sexos y edades a partir de cuyas muestras sanguíneas se ha podido 

determinar la concentración plasmática de esta citocina, el menor valor obtenido ha sido 

de 9,06 pg/ml y el mayor de 103,24 pg/ml, con lo que se podría deducir una expresión de 

ARNm de este mediador en las células sanguíneas de todos los perros. Estos resultados 

contradictorios pueden deberse muy probablemente al protocolo laboratorial empleado en 

la determinación de esta citocina en cada uno de los estudios. La expresión de mRNA no 

puede igualarse a la producción de la glicoproteína (Navikas et al. 1994, Baggio et al. 

2005) y más si tenemos en cuenta la característica de las citocinas de ser secretadas de 

forma breve y autolimitada tras la estimulación de las células. Por otra parte, no puede 

descartarse que las diferencias obtenidas en nuestro trabajo y el de Gröne y colaboradores 

se deban a las características particulares de las poblaciones estudiadas en cada trabajo.  

 

En el caso de la IL-6, la concentración plasmática de los perros sanos de este 

estudio fue de 47,08 pg/ml, muy superior a lo descrito por de Lima y colaboradores en 

2007 en 8 perros sanos (7,4±3,8 pg/ml). En este estudio se empleó una técnica ELISA 

comercial, al igual que en nuestro trabajo. Sin embargo, de Lima y colaboradores 

emplearon un kit para la detección de IL-6 humana, aprovechando la reactividad cruzada 

de esta citocina y la canina, por lo que las diferencias obtenidas pueden deberse, al menos 

en parte, a la diferente sensibilidad de las técnicas ELISA empleadas. 

 

Existen en la bibliografía estudios que reflejan la detección de IL-10 mediante 

técnicas ELISA y que muestran resultados muy similares para diferentes poblaciones 

caninas sanas: 14 pg/ml (Quaranta et al. 2006), 18,9 pg/ml (Kjelgaard-Hansen et al. 2007), 

19,06 pg/ml (Keppel et al. 2008). Sin embargo, nuestros resultados muestran una media 



Discusión 

 

260 

muy inferior a las descritas en estos estudios (0,55 pg/ml), no habiéndose detectado esta 

citocina en sangre periférica en 25 de los 29 perros analizados, y variando su 

concentración en los restantes 4 perros entre 2,87 y 8,38 pg/ml. Todos los estudios 

mencionados fueron realizados empleando el mismo kit comercial que hemos empleado en 

nuestro trabajo, por lo que el menor valor observado en nuestra población canina sana 

podría deberse a diferencias en las características de esta población en comparación con 

las de los demás estudios. No puede descartarse la posibilidad de la existencia de errores 

en el procesado de las muestras de nuestro estudio, si bien este punto es altamente 

improbable teniendo en cuenta que el procesado se ha llevado a cabo de la misma forma 

para el resto de las citocinas, se han seguido las indicaciones del fabricante, todas las 

muestras han sido analizadas por duplicado y los controles positivos, así como las curvas 

patrón incluidas en cada kit, han dado los resultados esperados. 

 

El TNF-α en la sangre de los perros sanos de nuestro estudio se encuentra en una 

concentración media de 13,20 pg/ml. Este valor es inferior al descrito por Strasser y 

colaboradores en 2000 en un trabajo en el que comparan, entre otras variables, la 

concentración de esta citocina en sangre periférica de perros sanos de raza Pastor Alemán 

en función de su edad. Sus resultados varían entre 51,19 pg/ml en los perros de 4,5 a 7,5 

años a 81,86 pg/ml en los perros de 8 a 13 años de edad, existiendo una concentración 

intermedia (de 58,41 pg/ml) en los perros jóvenes, de 2 a 4 años de edad. La concentración 

media de TNF-α en los Pastores Alemanes de nuestro estudio (de una edad media de 5,77 

años) es de 16,75 pg/ml y no se han hallado diferencias estadísticamente significativas en 

este valor en función de su edad (p=0,178). Por lo tanto, el menor valor de la 

concentración media de esta citocina en nuestro trabajo en comparación con el del estudio 

de Strasser y colaboradores no podría achacarse a diferencias en las razas estudiadas. Sin 

embargo, estos autores no emplearon un ELISA en esta determinación, sino que utilizaron 

un bioensayo citolítico con el subclon de sarcoma murino WEHI 13 VAR (ATCC. Nr. 

CRL-2148;ATCC), por lo que, al menos parcialmente, las diferencias observadas pueden 

deberse a las técnicas laboratoriales utilizadas en cada trabajo. 

 

En cualquier caso, los resultados obtenidos de las concentraciones plasmáticas de 

las citocinas estudiadas en nuestra población muestran, en general, una gran variabilidad, 

con unos valores de desviación típica elevados. Ello puede explicar la ausencia de unos 

resultados homogéneos entre los escasos estudios publicados en los que se describen las 

concentraciones de citocinas en sangre periférica de perros sanos o de perros con 

patologías. Por ello, se hace necesario desarrollar en un futuro estudios con un mayor 

número de animales y con una técnica estandarizada. Por el momento, es necesario contar 

con una población control propia cuando se precise evaluar la concentración de estas 

citocinas en poblaciones caninas con alguna patología.    



Discusión 

 

261 

6.1.2. ESTUDIO DE LA INFLUENCIA DEL SEXO, LA EDAD Y LA RAZA 

SOBRE LAS VARIABLES ANALIZADAS EN LA POBLACIÓN DE PERROS 

SANOS 

 
6.1.2.1. Sexo  

 

No hemos hallado diferencias estadísticamente significativas en ninguna de las 

variables analizadas en los perros sanos de nuestro estudio en función del género. En 

cambio, otros estudios en la especie canina han mostrado la existencia de un mayor 

porcentaje de linfocitos T en sangre periférica en hembras que en machos (Greeley et al. 

1996, Greeley et al. 2001), una mayor actividad de las células NK en los machos (Greeley 

et al. 2001) y mayores actividades linfoproliferativas en las hembras (Strasser et al. 2000). 

Asimismo, Faldyna y colaboradores en 2001 describieron la presencia de un mayor 

porcentaje de linfocitos, linfocitos CD3+ y linfocitos CD4+ y un menor porcentaje de 

células CD21+ en las hembras que en los machos de las razas Beagle y Teckel, aunque las 

diferencias no fueron estadísticamente significativas. 

 

Algunas de las variables para las que estos autores describen diferencias en función 

del sexo del animal no han sido evaluadas en este estudio, principalmente aquellas 

relacionadas con las actividades linfoproliferativas. Para el resto de las variables, el hecho 

de que en nuestro estudio no se hayan hallado diferencias estadísticamente significativas 

en función del sexo, existiendo, sin embargo, descripciones en la bibliografía de la 

existencia de dichas diferencias, puede deberse a las características de las poblaciones 

estudiadas. Así, los trabajos mencionados han sido llevados a cabo en una sola raza 

(Pastor Alemán en el caso de Strasser y colaboradores y Labrador Retriever en el caso de 

Greeley y colaboradores en 1996 y 2001) o en dos razas (Faldyna et al. 2001), mientras 

que en nuestro trabajo se han incluido perros de diferentes razas, como se describió 

previamente.  

 
6.1.2.2. Edad 

 

Se ha descrito que el envejecimiento conduce a la aparición de una serie de 

cambios en el sistema inmunitario tanto en el hombre como en diversas especies animales, 

destacando la existencia de variaciones en la actividad de las células NK, en la 

distribución de las subpoblaciones linfocitarias, en la síntesis de anticuerpos y en las 

respuestas linfoproliferativas inducidas por mitógenos (Greeley et al. 1996, Castle 2000). 

Así, la inmunosenescencia se define como el estado de desequilibrio de la función 

inmunitaria que contribuye a la existencia de una susceptibilidad incrementada en la vejez 



Discusión 

 

262 

frente a las infecciones y, posiblemente, frente a las enfermedades autoinmunes o 

neoplásicas (Castle 2000). Sin embargo, es importante tener en cuenta que los cambios en 

los componentes del sistema inmunitario y en sus funciones no se observan solamente en 

la vejez, sino que van produciéndose de forma progresiva a lo largo de la vida de los 

animales. 

 

En nuestro estudio, hemos hallado la existencia de una serie de cambios 

relacionados con la edad en varios de los parámetros inmunológicos analizados. Aunque el 

número y la distribución de los leucocitos en sangre periférica no reflejan de forma 

específica las características del sistema inmunológico, su evaluación nos sirve de ayuda 

en la comprensión de la maquinaria inmunitaria, al ser unos indicadores útiles de su 

situación. En cuanto al recuento de leucocitos, nuestros resultados reflejan que, al 

aumentar la edad, se produce un incremento significativo del porcentaje de neutrófilos y 

un descenso del porcentaje y del número absoluto de linfocitos. En este mismo sentido, 

otros autores han descrito la existencia de una disminución a lo largo del tiempo de la 

población linfocitaria en sangre periférica en la especie canina (Faldyna et al. 2001, 

Greeley et al. 2001, Blount et al. 2005, Reis et al. 2005, Lawler et al. 2008). Estos 

resultados parecen sugerir una menor influencia de la edad sobre las células del sistema 

inmunitario innato que sobre las células del adaptativo, aunque esta afirmación se refiere 

únicamente al recuento celular y no a la funcionalidad. Cabe destacar la descripción en la 

bibliografía de la ausencia de cambios con la edad en la capacidad fagocítica y bactericida 

de los neutrófilos (Strasser et al. 2000, Greeley et al. 2001), así como la descripción de la 

existencia de una activación no específica por parte del sistema inmunitario innato de 

ciertas sustancias proinflamatorias (Castle 2000) o un incremento de la actividad funcional 

del sistema del complemento a medida que se produce el envejecimiento (Strasser et al. 

2000). Se ha sugerido que estos efectos de la edad sobre la funcionalidad de los 

componentes del sistema inmunitario innato podrían constituir un mecanismo 

compensatorio de un descenso de la funcionalidad de las respuestas adaptativas (Castle 

2000), aunque para la confirmación de este punto se requeriría la realización de una serie 

de estudios centrados en el efecto de la edad sobre los componentes del sistema 

inmunitario innato. A diferencia del incremento de la actividad de las respuestas innatas, 

se ha descrito la existencia de un descenso en la actividad linfoproliferativa con la edad, 

siendo éste uno de los cambios más constantes descritos en los estudios de envejecimiento 

(Greeley et al. 1996, Strasser et al. 2000, Greeley et al. 2001, HogenEsch et al. 2004, 

Lawler et al. 2008). En cuanto al mayor porcentaje de neutrófilos observado en los perros 

adultos en comparación con los cachorros en la población canina sana de nuestro estudio, 

probablemente se deba al descenso observado en el recuento linfocitario, y no a un 

aumento real del número de neutrófilos, lo que se confirmaría por la ausencia de 



Discusión 

 

263 

diferencias estadísticamente significativas en el número absoluto de neutrófilos entre los 

diferentes grupos de edad (p=0,960).  

 

Por otra parte, en este estudio se ha observado que algunos de los parámetros del 

estudio electroforético de las proteínas plasmáticas sufren cambios a lo largo de la vida del 

perro. Concretamente, se han hallado diferencias estadísticamente significativas para un 

nivel de confianza del 95% entre los grupos de edad analizados en el porcentaje y en el 

valor absoluto de las γ-globulinas (p=0,000 y p=0,001, respectivamente), presentando los 

cachorros menores valores tanto absolutos como relativos de esta fracción proteica 

(0,3009 g/dl y 5,191%) que los jóvenes (0,4944 g/dl y 8,078%) y los adultos (0,5277 g/dl 

y 8,020%). De la misma forma, otros trabajos han mostrado un incremento con la edad de 

la concentración de γ-globulinas (Strasser et al. 2000). Asimismo, se ha descrito que la 

concentración de IgA va aumentando con la edad del perro (HogenEsch et al. 2004, 

Blount et al. 2005), no habiéndose observado este efecto sobre otras inmunoglobulinas, 

como la IgM y la IgG (HogenEsch et al. 2004). 

 

Dentro de la población linfocitaria, hemos observado en nuestro trabajo una serie 

de cambios con la edad en las diferentes subpoblaciones analizadas. En concreto, se ha 

hallado una tendencia hacia el descenso con el paso del tiempo en el número absoluto de 

linfocitos T (CD3+), células Th (CD3+CD4+), células B (CD21+) y linfocitos que 

expresan CMHII en su superficie. Además, se ha observado un descenso con la edad del 

porcentaje de los linfocitos Th CD3+CD4+ unido a un incremento del porcentaje de los 

linfocitos Tc CD3+CD8+, lo que conduce a un descenso con la edad del cociente 

CD4/CD8. Diversos autores han analizado, al igual que nosotros, el efecto que tiene la 

edad sobre el inmunofenotipo en el perro, habiendo hallado, por lo general, resultados 

similares a los nuestros, con pequeñas diferencias que pueden venir dadas tanto por las 

características de las poblaciones estudiadas como por el protocolo y la técnica empleados 

en cada trabajo.  

 

Al igual que en esta tesis doctoral, el número de linfocitos T parece disminuir con 

la edad en las poblaciones de perros sanos estudiadas por diversos autores (Greeley et al. 

2001, Blount et al. 2005, Reis et al. 2005, Lawler et al. 2008, Hogenesch & Thompson 

2009). Se ha sugerido que en el descenso del número de linfocitos y de células T podría 

estar implicada de forma clave la involución tímica (Strasser et al. 2000). Además, se ha 

demostrado que con la edad se producen una disminución del número de linfocitos T 

vírgenes (Hogenesch & Thompson 2009) así como una serie de cambios en la capacidad 

mitótica de las células (Strasser et al. 2000). Estos cambios podrían ser responsables, al 

menos en parte, de este descenso del número de linfocitos y células T observados en la 

mayoría de los estudios. Algunos autores han sugerido, además, que con el envejecimiento 



Discusión 

 

264 

se producen cambios en la secreción de citocinas que podrían conducir a una disminución 

en la capacidad de comunicación y cooperación entre las diferentes subpoblaciones 

linfocitarias, lo que llevaría a un descenso en la activación y proliferación linfocitaria 

(Strasser et al. 2000).  

 

A pesar del descenso del número de linfocitos T con la edad del perro, el efecto del 

envejecimiento sobre el porcentaje de estas células en sangre periférica está menos claro, 

habiéndose descrito tanto la ausencia de cambios (Faldyna et al. 2001, HogenEsch et al. 

2004) como la existencia de un incremento de este porcentaje con la edad del animal 

(Greeley et al. 1996, Greeley et al. 2001, Reis et al. 2005). Así, a pesar de que no se han 

alcanzado diferencias que sean estadísticamente significativas para un nivel de confianza 

del 95% entre los diferentes grupos de edad en nuestro trabajo (p=0,065), cabe destacar 

que el valor de p obtenido está cercano a la significación estadística, y se ha observado que 

los cachorros sanos muestran un menor porcentaje de linfocitos T (61,89%) que los 

jóvenes (65,48%) y que los adultos (67,21%). Del mismo modo, Greeley y colaboradores 

en 2001 describieron un descenso con la edad del recuento de linfocitos T en sangre 

periférica, mientras que el porcentaje de dichas células tendía a aumentar con la edad del 

animal. Debe tenerse en cuenta que, como se ha comentado previamente, los valores 

porcentuales deben ser analizados siempre teniendo en cuenta que se encuentran 

influenciados por los recuentos de las demás poblaciones celulares.  

 

Por otra parte, nuestros resultados han mostrado que la población de linfocitos Th 

tiende a descender a lo largo del tiempo, tanto en su valor relativo como en su valor 

absoluto. Diversos autores han descrito también una disminución con la edad de los 

linfocitos Th en el perro (Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Greeley et al. 2001, 

HogenEsch et al. 2004, Blount et al. 2005, Reis et al. 2005, Lawler et al. 2008). Horiuchi y 

colaboradores describieron en 2007 un incremento con la edad de la relación Th1/Th2 en 

el perro (Horiuchi et al. 2007b). En nuestro trabajo no se ha analizado la síntesis de 

citocinas por los linfocitos de forma específica, por lo que no se ha podido determinar qué 

proporción de linfocitos Th eran fenotípicamente Th1 y cuántos eran Th2.  

 

En el gato se ha descrito que la timopoyesis postnatal parece preferir la maduración 

de linfocitos T CD8+ frente a la maduración de los linfocitos T CD4+, lo que conduce a 

que con la edad vaya aumentando la proporción de linfocitos Tc en sangre periférica 

(Bortnick et al. 1999). Esto podría explicar el mayor porcentaje de linfocitos Tc en sangre 

de los perros sanos de nuestro estudio incluidos en el grupo de los adultos (23,73%) en 

comparación con los jóvenes (18,08%) y con los cachorros (12,59%). Este incremento ha 

sido descrito también por otros autores (Greeley et al. 1996, Faldyna et al. 2001, Greeley 

et al. 2001, HogenEsch et al. 2004, Blount et al. 2005). 



Discusión 

 

265 

De forma estrechamente relacionada, el incremento de la proporción de linfocitos 

Tc y el descenso de los linfocitos Th conducen a un descenso con la edad aún mayor en el 

cociente CD4:CD8 en la población canina estudiada, lo que ha sido descrito con 

anterioridad en la bibliografía (Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, HogenEsch et al. 

2004, Blount et al. 2005). Cabe destacar que diversos estudios de envejecimiento han 

mostrado que los descensos en el ratio CD4:CD8 se asocian con un incremento en la 

mortalidad en las personas ancianas (Wikby et al. 1998). 

 

El efecto de la edad sobre el sistema inmunitario canino no se limita a las 

subpoblaciones de linfocitos T, sino que también se han descrito alteraciones de la 

población de células B. Se ha descrito un descenso del porcentaje (Greeley et al. 1996, 

Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001, Greeley et al. 2001, Reis et al. 2005) y del número 

absoluto (Blount et al. 2005, Reis et al. 2005) de linfocitos B en sangre en el perro a 

medida que va a aumentando la edad de los animales. En el presente trabajo se han hallado 

diferencias estadísticamente significativas (p=0,039) en el valor absoluto de linfocitos B 

(CD21+) entre los perros sanos adultos (441,61 linfocitos B/µl) y los cachorros (749,56 

linfocitos B/µl), lo que, sin embargo, no se refleja en el valor relativo en función de la 

edad del animal (p=0,216). A pesar del descenso en la población de linfocitos B con la 

edad, las respuestas humorales que se desencadenan en los perros ancianos parecen ser 

adecuadas, como sugieren los resultados de HogenEsch y colaboradores (2004) y Schultz 

y colaboradores (2009) que muestran que, tras la inmunización con vacunas 

comercialmente disponibles y de uso común, se alcanzan niveles de anticuerpos similares 

en los perros de edad avanzada y en los perros jóvenes. 

 

En la especie canina la expresión de CMH de clase II en la superficie linfocitaria 

ha sido menos estudiada que la expresión de otras moléculas de superficie. En este trabajo 

se ha observado, de forma similar a lo descrito por Reis y colaboradores en 2005, un 

descenso del número de linfocitos que expresan CMHII en su superficie con la edad. Se ha 

sugerido que este efecto de la edad podría deberse al desarrollo de mecanismos de 

tolerancia inmunitaria adquirida como una consecuencia de la continua exposición 

antigénica ambiental a la que es sometido el perro a lo largo de su vida (Reis et al. 2005). 

Esto parece reflejarse en un incremento de la tolerancia a lo extraño y una disminución de 

la auto-tolerancia en la vejez, con el consiguiente desarrollo de enfermedades autoinmunes 

(Strasser et al. 2000). 

 

La concentración plasmática de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α no ha 

mostrado diferencias estadísticamente significativas entre los diferentes grupos de edad de 

nuestro trabajo. De la misma forma, Strasser y colaboradores (2000) no hallaron cambios 

con la edad en la actividad sérica de TNF-α en una población de perros de raza Pastor 



Discusión 

 

266 

Alemán. Sin embargo, estos autores observaron que la concentración sérica de IL-2 tendía 

a disminuir con la edad y, únicamente en las hembras del estudio, la actividad de IL-1 

tendía a aumentar con la edad. Se ha sugerido que el descenso en la concentración de IL-2 

en sangre puede deberse al descenso de la movilización del calcio y de las actividades de 

los mensajeros secundarios de la protein quinasa C (Greeley et al. 1996) y que esta 

disminución de la producción de IL-2, unida a un descenso en la síntesis de ADN y a 

cambios en la fluidez de la membrana plasmática, puede participar en los complejos 

mecanismos que conducen al descenso en las respuestas linfoproliferativas a mitógenos 

(Strasser et al. 2000). 

 

Todos estos cambios asociados con la edad en el sistema inmunitario canino 

pueden ser responsables de la aparición de múltiples enfermedades en la vejez y pueden 

afectar a las expectativas de vida del mismo animal, por lo que deberían ser tenidas en 

cuenta por el veterinario clínico (Strasser et al. 2000). 

 
6.1.2.3. Raza 

 

Se ha descrito en la bibliografía la existencia de ciertas diferencias en el sistema 

inmunitario de los perros en función de su raza, si bien los estudios al respecto son muy 

escasos (Byrne et al. 2000, Faldyna et al. 2001). Estas diferencias podrían ser las 

responsables de la predisposición de algunas razas a padecer determinadas enfermedades, 

autoinmunes o no. Así, en la revisión bibliográfica de esta memoria se ha descrito la 

posible influencia de la raza en el curso de la EMC, habiéndose sugerido que los Pastores 

Alemanes son más susceptibles a padecer una ehrlichiosis más grave y de peor pronóstico 

que los Beagles, probablemente por el desarrollo de una respuesta inmunitaria celular 

disminuida en los primeros en comparación con los segundos (Nyindo et al. 1980). 

 

En nuestro trabajo se han clasificado los 47 perros sanos en 4 grupos de razas: 

Pastor Alemán, Galgo Español, Beagle y Otras razas. Se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas entre las razas estudiadas para algunos de los parámetros 

del sistema inmunitario que han sido evaluados en nuestro trabajo. Curiosamente, en 

muchos de los casos el test de Bonferroni ha determinado que la diferencia se halla 

precisamente entre las razas Pastor Alemán y Beagle. 

 

Entre las poblaciones leucocitarias en sangre periférica, los valores relativo y 

absoluto de los neutrófilos (p=0,001 y p=0,021, respectivamente) y de los eosinófilos 

(p=0,000 y p=0,000, respectivamente) y el valor porcentual de los linfocitos (p=0,003) 

parecen estar afectados por la raza. Los Beagles sanos del estudio han mostrado poseer 



Discusión 

 

267 

menores porcentajes y valores absolutos de neutrófilos en sangre periférica (52,70% y 

4626,155/µl, respectivamente) que los Pastores Alemanes (64,182% y 7005,91/µl) y el 

porcentaje de estas células en los Beagles es también inferior al observado en los Galgos 

(62,86%). Probablemente debido a este menor número de neutrófilos en sangre periférica 

en los Beagles se ha hallado un mayor porcentaje de linfocitos en sangre en esta raza 

(34,04%) que en los Pastores Alemanes (24,34%). En los Beagles y Pastores Alemanes el 

porcentaje y el valor absoluto de los eosinófilos en sangre periférica son superiores a los 

de los Galgos, siendo, además, el porcentaje de estas células superior en los Beagles que 

en los perros de Otras razas. Algunas de las diferencias descritas podrían venir dadas por 

las características de las poblaciones caninas estudiadas, ya que los 13 Beagles sanos del 

estudio pertenecen al animalario del Hospital Clínico Veterinario Complutense, con unas 

condiciones ambientales controladas, sin acceso a la calle en ningún momento y con una 

alimentación a base de pienso comercial, mientras que los 11 Pastores Alemanes sanos del 

estudio pertenecen a la Policía Nacional, son perros de trabajo y salen a la calle de forma 

regular. Asimismo, los Galgos incluidos en el grupo de perros sanos del estudio 

pertenecen a un propietario particular que los emplea en la caza y los 10 perros de Otras 

razas son animales de compañía pertenecientes a propietarios particulares. Por lo tanto, 

debido a la influencia de diversos factores, como la alimentación (Lawler et al. 2008, 

Cotman & Head 2008), sobre el sistema inmunitario, no podemos descartar que las 

diferencias halladas en nuestro estudio entre las razas analizadas no se deban realmente a 

la influencia de otras variables. 

 

Entre dichas variables que pueden afectar a nuestros resultados de la influencia de 

la raza sobre el sistema inmunitario canino cabe destacar la edad de los animales, factor 

cuya influencia en la inmunidad ha sido demostrada en la bibliografía tanto en la especie 

canina como en otras especies animales y en el hombre y como se comprueba en nuestros 

propios resultados. Debido a que la distribución en cuanto a la edad en los distintos grupos 

de razas no es homogénea (Tabla 92), no hemos podido descartar que las diferencias 

halladas para algunas variables entre los grupos de razas no se deban realmente a la edad.  

 

Tabla 92: Edad media de los grupos de razas incluidos en la población de perros sanos de este estudio 

 
 Edad media (años) 

Beagle 1,24  

Pastor Alemán 5,77 

Galgo Español 3,8 

Otras razas 3,12 

 



Discusión 

 

268 

En concreto, los mayores valores porcentual y absoluto de los neutrófilos y el 

menor porcentaje de linfocitos hallados en la población canina sana de Beagles de nuestro 

estudio en comparación con los Pastores Alemanes puede deberse a que estas variables 

tienden a aumentar en el caso de los neutrófilos y a disminuir en el caso de los linfocitos 

con la edad del perro, y los perros de la raza Pastor Alemán (5,77 años de media) son 

mayores que los perros de la raza Beagle (1,24 años de media) del estudio (Tabla 92). En 

el caso de los valores porcentual y absoluto de eosinófilos en sangre periférica de los 

perros sanos, no hemos hallado diferencias estadísticamente significativas en relación con 

la edad de los animales, por lo que las diferencias halladas entre los grupos raciales 

pueden venir dadas por la raza, aunque, como se ha comentado previamente, no puede 

descartarse la influencia de otros factores que no han sido analizados en este estudio.  

 

Por otra parte, en este trabajo se ha observado que algunos de los parámetros del 

estudio electroforético de las proteínas plasmáticas muestran diferencias en función de la 

raza del animal. En concreto se ha observado que los Pastores Alemanes presentan 

mayores valores relativos y absolutos de γ-globulinas (9,26% y 0,69 g/dl, 

respectivamente) que los Beagles (6,21% y 0,37 g/dl, respectivamente), lo que podría 

venir dado, una vez más, por la edad media de estos grupos raciales, ya que, como se 

describió previamente, parece existir un incremento de esta fracción proteica con el 

envejecimiento y los Pastores Alemanes son mayores que los Beagles del estudio (Tabla 

92). Sin embargo, también son superiores estos valores en los Pastores Alemanes que en 

los Galgos del estudio (6,45% y 0,37 g/dl), a pesar de que la edad media de ambos grupos 

raciales haría clasificarlos a ambos en el grupo de perros adultos de nuestros trabajo. Por 

lo tanto, en este caso podría existir una influencia racial para la concentración plasmática 

de γ-globulinas, sin que podamos descartar la influencia de otros factores, como la 

alimentación y el hábitat, en estos resultados. En este mismo sentido, el hallazgo en este 

estudio de que los Galgos presentan un mayor cociente Albúmina/Globulinas (1,33) que 

los Beagles (1,13) y que los Pastores Alemanes (1,00), no parece deberse a diferencias en 

la edad de los animales, por lo que sería necesario llevar a cabo nuevos estudios con un 

mayor número de animales de diferentes razas para poder comprobar si estos resultados se 

deben a diferencias raciales o a la influencia de otros factores. 

 

Entre las subpoblaciones linfocitarias analizadas, se ha observado que existen 

diferencias estadísticamente significativas entre los grupos de razas en el valor porcentual 

de los linfocitos T (CD3+) y B (CD21+) así como sobre los valores porcentual y absoluto 

de linfocitos Tc (CD3+CD8+) y sobre el cociente CD4:CD8. Faldyna y colaboradores 

describieron en 2001 resultados que son, por lo general, similares a los nuestros al estudiar 

las diferencias existentes en el inmunofenotipo de 56 perros pertenecientes a 4 razas 

(Beagle, Pastor Alemán, Dálmata y Dachshund). En nuestro trabajo hemos observado que 



Discusión 

 

269 

los Pastores Alemanes muestran un mayor porcentaje de linfocitos T (CD3+) (69,86%) 

que los Beagles (62,38%), lo que concuerda con los hallazgos de Faldyna y colaboradores 

(2001). Sin embargo, Byrne y colaboradores publicaron en 2000 un estudio en el que 

también analizaron las diferencias entre varias razas de perros para ciertas variables del 

sistema inmunitario canino y no encontraron diferencias significativas en el porcentaje de 

linfocitos T entre ellas. En nuestro trabajo no se puede descartar que las diferencias 

encontradas en la población de linfocitos T (CD3+) entre las razas estudiadas se puedan 

deber a una influencia de la edad, ya que, aunque se había hallado una tendencia hacia el 

descenso en el valor absoluto de esta población de linfocitos T con la edad, nuestros 

resultados muestran que, aunque de forma no significativa estadísticamente, el valor 

porcentual parece ir aumentando con el tiempo, pasando de 61,89% en los cachorros a 

65,48% en los perros jóvenes y a 67,21% en los adultos y, precisamente, los Pastores 

Alemanes (el grupo de mayor edad de nuestro estudio) muestran un mayor porcentaje de 

estas células que los Beagles (el grupo de menor edad). Además, no podemos descartar 

que otras características de los grupos estudiados, como son el hábitat, la actividad física o 

la alimentación, puedan haber influido en nuestros resultados. 

 

En cuanto a la subpoblación de linfocitos Tc, los Pastores Alemanes muestran 

mayores valores porcentual y absoluto (25,54% y 648,55/µl, respectivamente) que los 

Beagles (13,21% y 384,01/µl, respectivamente) y mayor porcentaje únicamente que los 

perros de Otras razas (18,45%). Los Galgos poseen también un mayor porcentaje de 

linfocitos Tc (23,10%) que los Beagles. Algunos estudios previos muestran la ausencia de 

diferencias estadísticamente significativas entre los Beagles y los perros de otras razas en 

la población de linfocitos Tc (Byrne et al. 2000). Faldyna y colaboradores (2001) hallaron 

un mayor porcentaje de linfocitos Tc (CD8+) en los Dálmatas (24,5%) que en los 

Dachthunds (20,7%), los Beagles (18,3%) y los Pastores Alemanes (17%). Estos hallazgos 

son diferentes a los observados en nuestro estudio, tanto por los valores porcentuales 

obtenidos en los Beagles y Pastores Alemanes en comparación con nuestros resultados 

para las mismas razas, como por ser inferior este porcentaje en los Pastores Alemanes que 

en las demás razas estudiadas. Las diferencias entre nuestro estudio y los trabajos de otros 

investigadores pueden deberse a las técnicas laboratoriales empleadas en cada caso o a las 

características de las poblaciones caninas. En cuanto a las diferencias observadas en 

nuestro estudio en la subpoblación linfocitaria Tc entre las razas estudiadas, éstas pueden 

deberse a las propias características de los cuatro grupos raciales comparados o a 

diferencias reales en función de la raza del perro. Sin embargo, tampoco puede descartarse 

en este caso que estas diferencias se deban realmente al efecto de la edad sobre esta 

población celular, ya que en el presente estudio se ha hallado un aumento del porcentaje 

de linfocitos Tc con la edad de los perros, lo que podría justificar el que se haya 

encontrado unos mayores porcentaje y valor absoluto de estas células en el grupo de raza 



Discusión 

 

270 

cuya edad media es superior a los demás grupos (el Pastor Alemán) y unos menores 

valores en los perros de raza Beagle, que son además los más jóvenes del estudio (Tabla 

92). 

 

El hecho de que en los Beagles de nuestro estudio se hayan encontrado los menores 

valores porcentuales y absolutos de la población de linfocitos Tc (CD8+) en comparación 

con las demás razas estudiadas ha conducido a que el cociente CD4:CD8 sea superior en 

esta raza (3,00) que en los Galgos (1,69) y en los Pastores Alemanes (1,40). En estos 

últimos, este cociente es inferior, a su vez, al encontrado en los perros de Otras razas 

(2,35). Coincidiendo con nuestros resultados, Byrne y colaboradores obtuvieron también 

un mayor cociente CD4:CD8 en los Beagles que en otras razas de perro. Sin embargo, 

Faldyna y colaboradores, aunque obtuvieron un mayor cociente CD4:CD8 en los Beagles 

en comparación con los Dálmatas y los Dachthunds, describieron un mayor valor de esta 

variable en los Pastores Alemanes en comparación con las demás razas. Debido a que este 

parámetro depende de modo directo de las poblaciones CD4+ y CD8+, los factores que 

han podido influir en nuestros resultados son los mismos que los descritos previamente 

para la población linfocitaria Tc. 

 

El porcentaje de linfocitos B CD21+ de los perros sanos incluidos en este estudio 

ha resultado ser superior en el grupo de raza Beagle (22,89%) que en los Pastores 

Alemanes (14,30%). Faldyna y colaboradores obtuvieron del mismo modo un mayor 

porcentaje de estas células en los Beagles que en los Pastores Alemanes de su trabajo, si 

bien la mayor diferencia en su estudio se encuentra entre los Dálmatas (21,2% de 

linfocitos B) y las demás razas. El hecho de que los Beagles de nuestro estudio hayan 

mostrado un porcentaje superior de células B en sangre periférica al de los Pastores 

Alemanes podría deberse a diferencias raciales o a diferencias en las características de los 

grupos, no pudiendo descartarse la influencia de la edad para esta variable, ya que se había 

descrito un descenso de esta población con la edad y es precisamente en los perros de 

mayor edad de nuestro trabajo (los Pastores Alemanes) donde se ha encontrado el menor 

porcentaje de estas células.  

 

A la vista de estos resultados, sería recomendable llevar a cabo nuevos estudios 

tratando de establecer subgrupos de edades más homogéneos y procurando que las 

condiciones ambientales de las diferentes poblaciones caninas sean semejantes.  

 

En cuanto a la concentración plasmática de las citocinas IFN-γ, IL-10 y TNF-α, no 

se han hallado diferencias estadísticamente significativas entre los diferentes grupos de 

razas del estudio. Sin embargo, en el caso de la concentración plasmática de IL-6, se han 

hallado diferencias estadísticamente significativas (p=0,009), destacando la existencia de 



Discusión 

 

271 

una menor concentración de este mediador en los perros de raza Pastor Alemán (10,24 

pg/ml) que en los Beagles (58,54 pg/ml) y que en los perros de Otras razas (71,57 pg/ml). 

En este caso, no parece que la influencia de la edad sobre el sistema inmunitario canino 

sea responsable de esta diferencia en función de la raza. Sin embargo, no puede 

descartarse que otras variables diferentes a la raza, como el hábitat, la alimentación o la 

aptitud, puedan haber influido sobre este parámetro, por lo que sería necesario llevar a 

cabo estudios con un mayor número de animales. 

    

 

 

6.2. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS 

ENTRE LAS POBLACIONES DE PERROS SANOS, CON EMC Y 

CON OTRAS PATOLOGÍAS 

 
 

La anemia es una de las alteraciones hematológicas más frecuentes en el curso de 

la EMC (Reardon & Pierce 1981a, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 1997b, Frank & 

Breitschwerdt 1999). Por esta razón, no resulta sorprendente que en este estudio se hayan 

hallado diferencias estadísticamente significativas en el valor del hematocrito, de la 

concentración de hemoglobina y H.C.M. entre los perros con EMC y los perros sanos, 

siendo superiores estos valores en los perros sanos. Por otra parte, los perros con 

patologías oncológicas muestran unos valores de hemoglobina y de hematocrito sólo 

ligeramente superiores a los observados en los perros con EMC, inferiores también 

estadísticamente a los de los perros sanos, lo que confirma lo descrito por diversos autores 

en la bibliografía que han hallado frecuentemente en la analítica sanguínea de perros con 

neoplasias de distintos orígenes la existencia de anemia (Vernau & Moore 1999, 

McDonough & Moore 2000, Weiss 2001, Tasca et al. 2009, Ameri et al. 2010). También 

se ha descrito en la bibliografía la posible existencia de anemia en perros afectados por 

enfermedad inflamatoria intestinal (Ristic & Stidworthy 2002) y en este trabajo se ha 

hallado, precisamente, un menor hematoctrito en los perros con patologías 

gastrointestinales en comparación con los perros sanos.  

 

La trombocitopenia es un hallazgo laboratorial que se asocia tradicionalmente a la 

EMC (Huxsoll et al. 1970, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 1997b, Frank & 

Breitschwerdt 1999, Mylonakis et al. 2004, Neer & Harrus 2006). De acuerdo con esta 

afirmación, nuestro trabajo ha mostrado que los perros con EMC presentan los menores 

valores de plaquetas por microlitro de sangre periférica de todos los grupos de perros 

estudiados. A pesar de ello, debe recordarse que nunca debe descartarse una EMC por la 



Discusión 

 

272 

existencia de recuentos plaquetarios dentro del rango de la normalidad, ya que, como se ha 

reflejado en la tabla 32A del apartado de resultados de esta tesis doctoral, dentro del grupo 

de perros con EMC los valores de este parámetro han variado desde 5000 hasta un 

máximo de 433000 plaquetas/µl de sangre, muy por encima del límite superior establecido 

para la especie canina, y, en cambio, algunos de los perros con otras patologías han 

presentado trombocitopenia. En este sentido, cabe destacar que se ha sugerido que, debido 

a que el hallazgo de bajos recuentos plaquetarios en la analítica sanguínea es a menudo 

uno de los indicadores que hacen sospechar de EMC a los veterinarios clínicos y, por 

tanto, conduce a realizar pruebas específicas frente a la enfermedad, la frecuencia de 

presentación de trombocitopenia que ha sido reportada en la bibliografía puede estar 

sobrevalorada (Neer & Harrus 2006). 

 

En la EMC los hallazgos del leucograma pueden ser muy variables (Mylonakis et 

al. 2004), pudiendo encontrarse desde leucocitosis hasta leucopenia y diversas alteraciones 

de las subpoblaciones leucocitarias. En nuestro trabajo, no se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas en el recuento leucocitario total entre los perros sanos y los 

perros con EMC, así como con las demás poblaciones caninas estudiadas. Asimismo, los 

perros con infección por E. canis no presentan diferencias estadísticamente significativas 

en los recuentos de neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos en 

comparación con los perros sanos y los valores medios de estas variables se encuentran 

dentro de los rangos fisiológicos para la especie canina. En cambio, el valor porcentual de 

los neutrófilos es significativamente superior en los perros con patologías traumatológicas, 

digestivas y oncológicas que en los perros sanos y en los perros con EMC. Este 

incremento puede deberse a la puesta en funcionamiento de una respuesta inmunitaria 

innata temprana o a respuestas inflamatorias que se reflejan en la hematología en algunos 

de los casos, si bien es importante recalcar que la media de este porcentaje se encuentra en 

todos los grupos dentro del rango fisiológico para la especie canina. En diversas patologías 

oncológicas se ha descrito la existencia de neutropenia (Vernau & Moore 1999, Tasca et 

al. 2009), pero también es frecuente la aparición de neutrofilia en patologías como la 

leucemia aguda con linfocitosis granular grande, por ejemplo (Vernau & Moore 1999, 

McDonough & Moore 2000), por lo que el mayor porcentaje de estas células encontrado 

en los perros con patologías oncológicas no es un hallazgo sorprendente. También en los 

perros con patologías oncológicas se han encontrado unos menores valores absoluto y 

relativo de linfocitos que en los perros sanos y que en los perros con EMC, permaneciendo 

dichos valores dentro de los rangos de referencia para el perro. La diversidad de orígenes 

de las neoplasias de los perros de este grupo probablemente se encuentre detrás de este 

resultado. Además, se ha observado que el porcentaje de monocitos es menor en los perros 

con patologías digestivas que en los perros sanos. En todos los casos, estos parámetros 



Discusión 

 

273 

medios se encuentran dentro de los rangos de referencia y no parece que estas diferencias 

encontradas tengan una significación clínica importante. 

 

En cuanto a la bioquímica sanguínea básica, no se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas para los valores medios de glucosa, urea, creatinina y GPT 

entre los perros con EMC y los perros sanos, encontrándose además los valores medios de 

estos parámetros dentro de los rangos fisiológicos para la especie canina. Sin embargo, 

destaca la existencia de un mayor valor medio de urea en todos los perros del Grupo 3 

(tanto con patologías mucocutáneas como digestivas, traumatológicas y oncológicas) que 

en los perros sanos. Además, estos valores medios son algo mayores que el límite superior 

establecido para la especie canina. En este sentido, cabe destacar que, aunque no se ha 

mostrado en el apartado de resultados de esta tesis doctoral, se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas (p=0,011) en el valor de urea en función de la edad del 

animal, aumentando en los perros adultos en comparación con los jóvenes. Por lo tanto, al 

menos en parte, la diferencia encontrada en este valor puede deberse a que la edad media 

de los perros del Grupo 3 es de 6,83 años, en comparación con la edad media de 3,41 años 

en los perros sanos. 

 

Como se describió previamente, el hallazgo más frecuente de la bioquímica 

sanguínea en los perros con EMC es la hiperproteinemia por hiperglobulinemia, que se 

asocia a menudo con hipoalbuminemia (Greene 1986, Woody & Hoskins 1991, Hibler et 

al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 1999, Neer et al. 2002, Mylonakis et al. 2004, Harrus & 

Waner 2010). De acuerdo con esta afirmación, en este trabajo se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas en la concentración plasmática de proteínas totales y en el 

porcentaje de albúmina entre los perros con EMC y los perros sanos. El valor medio de las 

proteínas plasmáticas totales en los perros con EMC se encuentra por encima del límite 

superior establecido para la especie canina y es superior, a su vez, al valor medio de los 

perros sanos de este estudio. El valor porcentual de albúmina plasmática en los perros con 

EMC se encuentra por debajo del límite inferior fisiológico en el perro y es menor que en 

los perros sanos y que en los perros con patologías mucocutáneas. La concentración 

plasmática de esta fracción proteica es inferior al de los demás grupos estudiados en los 

perros con EMC y en los perros con patologías gastrointestinales, en los cuales se describe 

igualmente con frecuencia la presencia de hipoproteinemia (Rodríguez-Franco et al. 

1999). 

 

De forma relacionada con la hiperproteinemia y con el menor porcentaje y valor 

absoluto de albúmina plasmática, en los perros con EMC se ha encontrado una mayor 

concentración plasmática de globulinas que en los perros sanos y que en los demás perros 

del estudio. En todas las fracciones de globulinas se han encontrado diferencias 



Discusión 

 

274 

estadísticamente significativas entre los perros con EMC y los perros sanos, mostrando los 

perros con infección por E. canis menores valores de α1- y α2-globulinas y cociente A/G y 

mayores valores de β- y γ-globulinas. La hiperglobulinemia en estos animales se debe, por 

tanto, a una hipergammaglobulinemia, con participación asimismo de un aumento de las 

β-globulinas. En este sentido, cabe destacar que se ha descrito a menudo en la bibliografía 

que la hiperproteinemia en los perros con infección por E. canis se debe a una gammapatía 

policlonal o, de forma menos frecuente, a una gammapatía monoclonal (Breitschwerdt et 

al. 1987, Neer et al. 2002). En este aumento de globulinas puede participar la síntesis de 

anticuerpos específicos frente al agente causal de la EMC, pero también la síntesis de 

anticuerpos no específicos (Reardon & Pierce 1981a, Harrus et al. 1996a, Harrus et al. 

1999, Frank & Breitschwerdt 1999, Waner et al. 2000a).  

 

La respuesta inmunitaria desarrollada en el curso de la EMC es de una gran 

importancia, tanto desde el punto de vista de la resolución de la infección como desde el 

punto de vista de la inmunopatogenia de la enfermedad. El estudio inmunofenotípico en 

sangre periférica realizado en los perros con EMC del presente trabajo ha mostrado que 

estos animales muestran un mayor porcentaje de linfocitos T (CD3+) que los perros sanos, 

siendo superior también el valor absoluto de estas células en los perros con EMC, aunque 

la diferencia no es estadísticamente significativa en este caso. Las respuestas inmunitarias 

desarrolladas frente a las infecciones por agentes intracelulares son, por lo general, 

mediadas por células T (Akkoyunlu & Fikrig 2000, Tizard 2009h), por lo que este 

resultado parece indicar que en los perros con EMC de este estudio se ha desarrollado una 

respuesta característica de este tipo de infecciones. Como se describió en la revisión 

bibliográfica de esta tesis doctoral, los conocimientos actuales sobre la inmunidad en la 

infección por Ehrlichia spp. señalan la importancia protectora de las células Th (CD4+) 

productoras de citocinas de tipo 1 y que conducen a una respuesta inmunitaria de base 

celular, aunque sugieren que los linfocitos Tc (CD8+) y las células B participan también 

en la defensa del organismo frente a estos agentes. En relación con los linfocitos Th 

(CD4+), no se han encontrado diferencias estadísticamente significativas ni en el valor 

absoluto ni en el relativo entre los perros con EMC y los perros sanos del estudio, mientras 

que los linfocitos Tc (CD8+) se encuentran aumentados en los perros con infección por E. 

canis en comparación con los sanos. Se ha descrito previamente en la bibliografía que en 

los perros con infección por este agente se desarrolla una alteración en las subpoblaciones 

de linfocitos sanguíneos que conducen a una inversión del índice CD4:CD8 (Frank & 

Breitschwerdt 1999, Heeb et al. 2003, Lorente et al. 2008) y, aunque en este trabajo no se 

han alcanzado diferencias que sean estadísticamente significativas para un nivel de 

confianza del 95%, se observa un menor cociente CD4:CD8 en los perros con EMC en 

comparación con los perros sanos, lo que, unido al aumento de la subpoblación TCD8+ en 

nuestro estudio, concuerda con lo descrito por estos autores. Hess y colaboradores en 2005 



Discusión 

 

275 

describieron la ausencia de inmunosupresión en perros con infección experimental por E. 

canis, aunque describieron la existencia de una linfocitosis TCD8+. En este punto cabe 

destacar que en la infección natural en el perro por el protozoo intracelular L. chagasi se 

ha descrito que una de las claves para el desarrollo de una respuesta inmunitaria efectiva 

es la existencia de unos niveles elevados de linfocitos T, tanto CD4+ como CD8+, y que la 

principal característica inmunofenotípica de una enfermedad asintomática y baja carga 

parasitaria es precisamente el incremento del número de linfocitos T CD8+ en sangre 

periférica (Reis et al. 2006). No se han encontrado otras alteraciones en las demás 

subpoblaciones linfocitarias de los perros con EMC de este estudio en comparación con 

los perros sanos. Sin embargo, se han hallado diferencias estadísticamente significativas 

entre algunas de las variables del inmunofenotipo en los perros con patologías oncológicas 

en comparación con la población canina sana. Entre estas diferencias destaca la existencia 

de menores valores absolutos de linfocitos T, Th y B, por lo que el menor valor absoluto 

de linfocitos hallado en estos perros se debe a un descenso de estas subpoblaciones.  

 

A pesar de la descripción de un papel esencial de diversas citocinas en la 

resolución de la infección por Ehrlichia spp. (Feng et al. 1994, Akkoyunlu & Fikrig 2000, 

Waner et al. 2001, Bitsaktsis et al. 2004, Feng & Walker 2004) no se han hallado 

diferencias estadísticamente significativas en la concentración plasmática de IFN-γ, IL-6, 

IL-10 y TNF-α entre los perros con EMC y los perros sanos incluidos en el estudio. Al 

menos en parte la ausencia de diferencias puede deberse a la actuación a nivel local de 

estos mediadores y a su actuación y liberación en espacios breves de tiempo, lo que puede 

dificultar en ocasiones su medición en sangre periférica. Además, es importante recalcar 

que la mayoría de los estudios consultados referentes a la actuación de las citocinas en las 

infecciones causadas por Ehrlichia spp. se han llevado a cabo en modelos experimentales 

murinos (Akkoyunlu & Fikrig 2000, Feng & Walker 2004, Bitsaktsis et al. 2004), por lo 

que no puede descartarse que la ausencia de diferencias en la concentración plasmática de 

las citocinas evaluadas en nuestro estudio entre los perros con EMC y los perros sanos se 

deban a las características propias de la infección natural. Sin embargo, en la infección 

natural activa por L. chagasi en el perro se han observado mayores niveles de IL-6 sérica 

que en los perros sanos, sugiriéndose que la determinación de esta citocina podría ser 

empleada como un marcador de enfermedad activa durante la leishmaniosis (de Lima et al. 

2007). Sería necesario llevar a cabo nuevos estudios con un mayor número de animales 

para determinar el papel de las diferentes citocinas en la infección natural por E. canis en 

el perro. 

 

 

 



Discusión 

 

276 

 

6.3. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS 

ENTRE LOS PERROS CON EMC EN FASE SUBCLÍNICA Y LOS 

PERROS CON EMC EN FASE CLÍNICA 

 

 

Debido a las dificultades ya descritas para distinguir las fases aguda y crónica de la 

enfermedad en la infección natural (Woody & Hoskins 1991), se clasificaron los animales 

con EMC como sintomáticos o asintomáticos. Atendiendo a esta clasificación, los 

resultados de este trabajo muestran que los perros con EMC presentan diferencias 

estadísticamente significativas en algunas de las variables analizadas en función de la fase 

de la enfermedad en la que se encuentren.  

 

La trombocitopenia existente en muchos perros con EMC puede aparecer a partir de 

los 15 días tras la infección y puede mantenerse durante todas las fases de la enfermedad 

(Huxsoll et al. 1970, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 

1999, Mylonakis et al. 2004, Neer & Harrus 2006). De acuerdo con esta afirmación, no 

hemos hallado en nuestro trabajo diferencias estadísticamente significativas entre los 

perros con EMC en fase clínica y en fase subclínica (p=0,595), manteniéndose en ambos 

grupos una media inferior a 200.000 plaquetas por microlitro de sangre periférica y siendo 

sólo ligeramente inferior este valor en los perros con EMC sintomática (160,63 x103 

plaquetas/µl en los perros en fase clínica y 182,38 x103 plaquetas/µl en los perros en la fase 

subclínica). 

 

En cambio, se han hallado diferencias estadísticamente significativas entre los 

perros sintomáticos y los perros asintomáticos para otras variables de la hematología. En 

concreto, los perros en una fase clínica han mostrado menores recuentos eritrocitarios, 

concentración de hemoglobina y hematocrito que los perros en fase subclínica. Cabe 

destacar, además, que en la fase clínica, los perros han presentado para estas variables 

valores medios por debajo del límite inferior establecido para la especie canina. Estos 

hallazgos vienen dados probablemente por las tendencias hemorrágicas descritas en las 

fases aguda y, con mayor frecuencia, crónica de la EMC (Harrus et al. 1997b, Frank & 

Breitschwerdt 1999, Mylonakis et al. 2004, Neer & Harrus 2006). Entre los 8 perros con 

sintomatología clínica de EMC, 5 presentaban signos hemorrágicos, principalmente 

epistaxis (en 3 de los casos), otro de los animales presentaba petequias y equimosis en el 

momento del diagnóstico y en el otro se describió la presencia de un abundante sangrado 

durante el celo, de un tiempo de duración excesivamente largo. A pesar de la ausencia 



Discusión 

 

277 

aparente de signos hemorrágicos en los otros tres animales con sintomatología clínica de 

EMC, todos ellos presentaban anemia en el momento del diagnóstico.  

 

Por otra parte, los perros con EMC en fase clínica presentaban unos menores 

valores medios relativos y absolutos de eosinófilos que los perros en fase subclínica, 

aunque estos valores se encontraban en ambos grupos dentro de los rangos de referencia en 

el perro. En este sentido, diversos autores han descrito la existencia en el curso de la EMC 

de una eosinopenia (Woody & Hoskins 1991, Sainz 1996a), aunque, como se describió 

previamente, las alteraciones de la serie blanca sanguínea pueden ser muy variables 

(Mylonakis et al. 2004). 

 

Además de las diferencias descritas entre los perros con EMC del estudio en fase 

clínica y en fase subclínica para las variables de la hematología, se han encontrado 

diferencias estadísticamente significativas entre estos grupos para prácticamente todas las 

variables del proteinograma. La EMC se caracteriza por conducir en muchos de los casos a 

la aparición de hiperproteinemia por hipergammaglobulinemia (Harrus et al. 1997b, Frank 

& Breitschwerdt 1999, Neer et al. 2002, Mylonakis et al. 2004, Harrus & Waner 2010) y, 

en este estudio, no se han encontrado diferencias estadísticamente significativas para el 

valor medio de la concentración plasmática de proteínas totales entre los perros 

sintomáticos y los perros asintomáticos (p=0,189), existiendo, sin embargo, diferencias 

significativas para este valor entre los perros sanos y los perros con EMC, como se discutió 

previamente. No obstante, a pesar de que la diferencia no es estadísticamente significativa, 

es de destacar que la concentración de proteínas es superior en los perros con 

sintomatología clínica (8,143 g/dl) en comparación con los perros asintomáticos (7,066 

g/dl). Además, la concentración de albúmina plasmática es significativamente inferior y la 

concentración de globulinas es significativamente superior en los perros en fase clínica, 

por lo que el cociente A/G es marcadamente inferior en estos perros en comparación con 

los que se encuentran en la fase subclínica. Entre las fracciones de globulinas, destaca la 

menor concentración de α2 y la mayor concentración de γ en los perros sintomáticos. Por 

lo tanto, los perros que se encuentran en fase clínica de la EMC parecen mostrar mayores 

alteraciones hematológicas y del proteinograma que los perros asintomáticos. Por otra 

parte, las alteraciones laboratoriales observadas parecen indicar que, probablemente, la 

mayoría de los animales con EMC con sintomatología clínica incluidos en este estudio se 

encontraban en la fase crónica de la enfermedad. En dicha fase crónica la anemia 

observada suele ser no regenerativa y se ha descrito que, frecuentemente, los animales 

sufren un incremento marcado de las γ-globulinas y un descenso de la albúmina, pudiendo 

correlacionarse la magnitud de la elevación de los niveles de globulinas con la duración de 

la enfermedad (Woody & Hoskins 1991). Precisamente en este trabajo, los perros en fase 

clínica de la enfermedad presentaban anemia normocítica y normocrómica, características 



Discusión 

 

278 

que sugieren la ausencia de regeneración, e hiperproteinemia por hiperglobulinemia con 

hipergammaglobulinemia junto con hipoalbuminemia.  

 

A pesar de que se podría esperar la existencia de diferencias entre los perros con 

sintomatología clínica de EMC y los perros en fase subclínica para algunos de los 

parámetros del inmunofenotipo evaluados y para la concentración plasmática de algunas 

citocinas, los resultados de nuestro estudio no han puesto de manifiesto diferencias 

significativas para un nivel de confianza del 95% en ninguna de estas variables. En la 

leishmaniosis canina, con la que la EMC comparte ciertas características, se ha asociado la 

presencia de una elevada proporción de linfocitos T CD8+ en sangre periférica con una 

enfermedad asintomática y con una baja carga parasitaria (Reis et al. 2006). Asimismo, los 

perros con leishmaniosis que carecen de síntomas clínicos parecen presentar mayores 

niveles de TNF-α que los sintomáticos (Pinelli et al. 1995). En nuestro estudio cabe 

destacar que, aunque no se han alcanzado valores de p que sean estadísticamente 

significativos en la comparación de los valores relativo y absoluto de linfocitos B 

sanguíneos entre los perros en fase subclínica y los perros en fase clínica de la EMC, 

pueden observarse diferencias próximas a la significación (p=0,140 en el caso del valor 

relativo de estas células y p=0,165 en el caso del valor absoluto). Los animales con 

sintomatología clínica muestran menores valores medios relativo (10,43%) y absoluto 

(251,34 linfocitos B/µl) que aquellos en fase subclínica (15,13% y 386,25 linfocitos B/µl, 

respectivamente). Si estos resultados de recuentos de linfocitos B sanguíneos superiores en 

los animales que no muestran sintomatología fuesen confirmados mediante nuevos 

estudios, podrían corroborar el que esta población celular ejerza en el curso de la infección 

por Ehrlichia spp. importantes labores defensivas, probablemente mediante la secreción de 

citocinas y la estimulación de subpoblaciones linfocitarias de tipo T CD4+ específicas 

frente al agente infeccioso (Yager et al. 2005, Bitsaktsis et al. 2007). Sin embargo, este 

mismo hallazgo también podría venir dado por la circulación de las células inmunitarias 

entre los diferentes órganos y tejidos del animal, que podrían conducir a una mayor 

presencia de linfocitos B y células plasmáticas en riñón, bazo o médula ósea en las fases 

clínicas de la EMC, reflejándose en menores recuentos sanguíneos de estas células, que 

podrían encontrarse sintetizando elevadas cantidades de inmunoglobulinas responsables de 

la inmunopatogenia de la enfermedad (Reardon & Pierce 1981a, Harrus et al. 1996a, 

Harrus et al. 1998c, Codner et al. 1992a, Codner & Maslin 1992b, Harrus et al. 1999, Neer 

& Harrus 2006).  

 

 

 

 

 



Discusión 

 

279 

 

6.4. ENSAYO CLÍNICO: EVOLUCIÓN DE LAS VARIABLES 

ANALIZADAS A LO LARGO DEL TIEMPO TRAS LA 

ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA EN PERROS SANOS Y EN 

PERROS CON EMC 

 

 
La realización de una serie de controles programados en los perros con EMC tras el 

tratamiento con doxiciclina ha permitido evaluar la evolución de los parámetros 

estudiados, valorando, por una parte, la capacidad de la doxiciclina, fármaco de elección en 

la infección por E. canis en el perro, para resolver las alteraciones laboratoriales 

desarrolladas en los animales con EMC y, por otra parte, para conocer si este fármaco es 

capaz de inducir cambios en las respuestas inmunitarias que, al menos potencialmente, 

contribuyan a la resolución de la infección. Además, el hecho de que se haya administrado 

doxiciclina a perros sanos siguiendo el mismo protocolo que en los perros con EMC ha 

permitido evaluar el efecto de este fármaco sobre el sistema inmunitario canino, 

confirmando que esta sustancia es capaz de actuar sobre algunas de las poblaciones 

celulares estudiadas no sólo en los animales enfermos, sino también en perros sanos. 

 

Algunos de los cambios más frecuentemente descritos en el curso de la EMC son 

aquellos que se producen en la hematología, destacando la aparición de anemia 

(regenerativa o no regenerativa) y trombocitopenia (Huxsoll et al. 1970, Reardon & Pierce 

1981a, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 1999, 

Mylonakis et al. 2004, Neer & Harrus 2006). Así, se ha observado que los perros con EMC 

de este estudio muestran menores valores de hematocrito, concentración de hemoglobina y 

recuento plaquetar que los perros sanos. Se ha evaluado el efecto que sobre dichos 

parámetros puede ejercer la doxiciclina, tanto en el caso de los perros sanos como en el 

caso de los perros con EMC. En los perros con EMC del estudio se ha observado que la 

administración de doxiciclina conduce a un incremento tanto del  número de eritrocitos y 

de plaquetas, como de la concentración de hemoglobina y de los valores de H.C.M. y 

C.H.C.M. Este rápido efecto del tratamiento con doxiciclina sobre los parámetros de la 

serie roja en el curso de la EMC ha sido descrito con anterioridad (Sainz 1996a). El hecho 

de que en los perros sanos no se produzcan cambios a lo largo del tiempo ni en el recuento 

eritrocitario, ni en la concentración de hemoglobina, ni en el V.C.M. conduce a pensar que 

la evolución favorable de dichos parámetros en los perros con infección por E. canis se 

debe al efecto antimicrobiano del fármaco, es decir, a su efecto sobre el agente patógeno, y 

no a un efecto directo de la doxiciclina sobre la serie roja sanguínea. Estos resultados 

apoyan lo descrito por Van den Bogert y Kroon en 1982 en un estudio de la influencia de 



Discusión 

 

280 

la oxitetraciclina sobre la recuperación de anemia grave en ratas, no habiendo observado 

estos autores efecto alguno sobre la proliferación eritroide de esta tetraciclina (Van den 

Bogert & Kroon 1982). Sin embargo, los valores de H.C.M., C.H.C.M. y de recuento 

plaquetar van aumentando progresivamente no sólo en los perros con EMC, sino también 

en aquellos perros sanos del estudio a los que se les administró doxiciclina, lo que podría 

indicar que este fármaco puede inducir un cierto efecto proliferativo sobre la serie 

plaquetar y conducir a un incremento de la concentración de hemoglobina corpuscular en 

la serie eritroide. No se han hallado en la bibliografía estudios previos del efecto de la 

doxiciclina u otras tetraciclinas sobre estos parámetros. El mecanismo por el que este 

fármaco puede inducir estos cambios podría implicar a sus efectos sobre la síntesis de 

citocinas, ya que, como se describió en la revisión bibliográfica, algunas de ellas, como el 

Factor de Células Progenitoras, la IL-3 y la IL-7, son mediadores de la hematopoyesis 

(Abbas et al. 2008d). Sería necesario llevar a cabo nuevos estudios que permitan esclarecer 

este punto. 

 

En cuanto a la serie blanca sanguínea, en el curso de la EMC se ha descrito tanto 

leucopenia como leucocitosis, siendo ésta última menos frecuente (Reardon & Pierce 

1981a), así como neutropenia, linfocitosis o linfopenia y monocitosis (Mylonakis et al. 

2004). Sin embargo, estas alteraciones de los glóbulos blancos pueden ser muy variables 

en la infección por E. canis en el perro y, de hecho, en este trabajo no se han hallado 

diferencias estadísticamente significativas para un nivel de confianza del 95% en los 

recuentos leucocitarios entre los perros sanos y los perros con EMC. En cambio, 

frecuentemente se ha descrito en la bibliografía la existencia de una serie de efectos de las 

tetraciclinas sobre algunas poblaciones celulares de la línea blanca (Forsgren et al. 1974, 

Thong & Ferrante 1979, Thong & Ferrante 1980, Welch et al. 1981, Van den Bogert & 

Kroon 1982, Gabler & Creamer 1991). En concreto, se ha descrito que estos fármacos son 

capaces de afectar a la actividad de los neutrófilos mediante la inhibición de la 

quimiotaxis, fagocitosis, degranulación y generación de radicales libres de oxígeno 

(Forsgren et al. 1974, Welch et al. 1981, Forsgren & Schmeling 1977, Gabler & Creamer 

1991). No se han hallado referencias bibliográficas del efecto de las tetraciclinas sobre la 

proliferación de los neutrófilos y, sin embargo, en este trabajo se han observado ciertos 

cambios en esta población tanto en los perros sanos como en los perros con EMC. 

Concretamente, estas células tienden a disminuir durante el tratamiento con doxiciclina, no 

resultando estadísticamente significativo este descenso, y, posteriormente, tienden a 

aumentar progresivamente. 

 

Sin duda, la mayor parte de los estudios llevados a cabo para tratar de esclarecer el 

potencial efecto inmunomodulador (o inmunosupresor) de las tetraciclinas se han realizado 

sobre poblaciones linfocitarias, habiéndose descrito la existencia de una inhibición de las 



Discusión 

 

281 

respuestas linfoproliferativas bajo el efecto de la doxiciclina, tetraciclina y oxitetraciclina 

(Thong & Ferrante 1979, Thong & Ferrante 1980). La principal población que resulta 

afectada por una inhibición de su proliferación  por el efecto de las tetraciclinas parece ser 

la constituida por las células T (Van den Bogert & Kroon 1982, Kloppenburg et al. 1995b), 

como se discutirá más adelante. Los resultados de nuestro trabajo apoyan la posible 

existencia de un efecto inhibidor de la doxiciclina sobre la proliferación de los linfocitos 

sanguíneos, células que, aunque tienden a aumentar inicialmente durante el tratamiento, 

disminuyen posteriormente de modo paulatino. 

 

Se ha sugerido que, al contrario que para los linfocitos, las tetraciclinas pueden 

ejercer efectos inmunoestimulantes sobre los monocitos/macrófagos, siendo capaces de 

estimular su síntesis de citocinas (Kloppenburg et al. 1996). Sin embargo, no hemos 

hallado cambios estadísticamente significativos ni en el valor absoluto ni en el valor 

relativo de los monocitos sanguíneos a lo largo del tiempo tras la administración de 

doxiciclina en los perros sanos ni en los perros con EMC. Sería interesante completar este 

estudio evaluando los posibles efectos de este fármaco sobre los macrófagos y sobre la 

síntesis de citocinas por estas células. 

 

No se ha descrito en la bibliografía ningún efecto sobre los basófilos sanguíneos de 

la infección por E. canis ni de la administración de tetraciclinas. Sin embargo, en nuestro 

estudio los perros con EMC presentan mayores valores de basófilos en sangre que los 

perros sanos, tanto en valor absoluto como en valor relativo, si bien siempre se han 

encontrado dentro de los rangos de referencia para la especie canina. Además, aunque en 

los perros sanos no se han encontrado cambios significativos en el tiempo para estas 

células, en el caso de los perros con EMC se ha observado que se produce un brusco 

descenso de estas células entre el día 0 y el día 30. Al no producirse este efecto en los 

perros sanos tratados con doxiciclina, parece que dicho efecto se debe a la acción del 

fármaco sobre el agente patógeno, y no a un efecto directo sobre esta población celular. En 

este sentido, cabe destacar el hecho de que los basófilos parecen ejercer papeles esenciales 

en múltiples modelos de inmunidad e inflamación dependientes de citocinas de tipo 2, 

tanto agudos como crónicos, habiéndose establecido que se trata de importantes células 

presentadoras de antígeno que inducen la diferenciación de los linfocitos T hacia la 

subpoblación Th2 y que poseen importantes funciones en la defensa del hospedador frente 

a diversas parasitosis, entre las que destacan las producidas por helmintos (Mitre et al. 

2004, Cadman & Lawrence 2010, Maddur et al. 2010, Yoshimoto 2010).  Por lo tanto, y 

aunque sería necesario llevar a cabo nuevos estudios que permitan profundizar en el papel 

de los basófilos en las infecciones por Ehrlichia spp., es posible que el descenso en el 

número de estas células que se ha observado tras el tratamiento con doxiciclina en los 

perros con EMC de este estudio disminuya la diferenciación de los linfocitos T hacia la 



Discusión 

 

282 

subpoblación Th2, favoreciendo en  cambio la diferenciación hacia Th1, y disminuya, 

asimismo, la síntesis de citocinas clásicamente consideradas de tipo 2, especialmente la IL-

4, por parte de los basófilos sanguíneos. El desarrollo de una respuesta inmunitaria de tipo 

1 favorecería la eliminación de E. canis del organismo. 

 

La EMC puede conducir a la aparición de una serie de cambios en la bioquímica 

sanguínea, entre los que destacan la hiperglobulinemia, generalmente debida a una 

gammapatía policlonal, aunque también puede ser monoclonal, hipoalbuminemia e 

incremento de las enzimas hepáticas y/o de la creatinina (Hibler et al. 1986, Breitschwerdt 

et al. 1987, Woody & Hoskins 1991, Harrus et al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 1999, 

Neer et al. 2002, Mylonakis et al. 2004). En este trabajo no se han hallado diferencias 

estadísticamente significativas en los valores plasmáticos de glucosa, urea, creatinina y 

GPT entre los perros sanos y los perros con EMC, probablemente debido a la baja 

frecuencia de presentación de alteración en estos parámetros. Además, no se han observado 

cambios en el tiempo ni en los perros sanos a los que se les administró doxiciclina ni en los 

perros con EMC que fueron tratados con este fármaco para los valores de glucosa, urea y 

GPT. Sin embargo, la creatinina plasmática tiende a disminuir en ambas poblaciones 

caninas desde el inicio del tratamiento, siendo más marcado este descenso entre los días 90 

y 180. En el caso de los perros con EMC, aunque el valor de la creatinina se encuentra 

dentro del rango fisiológico para la especie, es probable que se estuviese produciendo una 

cierta proteinuria, de acuerdo con lo descrito por Codner y Maslin en 1992 en un trabajo 

que mostraba la existencia de proteinuria de forma temprana en el curso de la EMC debida 

a la existencia de infiltrados periglomerulares y perivasculares de células plasmáticas 

(Codner & Maslin 1992b). El tratamiento con doxiciclina podría haber disminuido la 

concentración de creatinina plasmática al actuar de forma directa sobre el agente causal de 

las alteraciones que conducían a esa proteinuria y, de forma indirecta, al incremento de la 

creatinina. Por otra parte, el hecho de que se haya observado el mismo efecto sobre el valor 

de la creatinina en los perros sanos sugiere la posible existencia de un efecto directo de la 

doxiciclina sobre las células renales y, en este sentido, cabe destacar los trabajos 

publicados por Kucuk y colaboradores y por Ithiyar y colaboradores en 2009 en los que se 

describe un papel protector de la doxiciclina sobre el tejido renal en modelos 

experimentales de daño por reperfusión en isquemia renal en ratas (Kucuk et al. 2009, 

Ihtiyar et al. 2009). La isquemia renal y el daño por la reperfusión posterior parece ser una 

de las principales causas de fallo renal agudo y, probablemente, de algunas formas de 

enfermedad crónica renal. Estos investigadores sugieren que la doxiciclina es capaz de 

reducir el daño oxidativo y facilitar la reparación renal mediante la disminución de los 

niveles de citocinas pro-inflamatorias (concretamente IL-2, IL-6, IL-1β y TNF-α) y la 

inhibición de la actividad de la MMP-2 y describen la existencia de menores valores de 



Discusión 

 

283 

creatinina en los animales a los que se les administró doxiciclina en comparación con 

aquellos a los que no se les administró. 

 

De acuerdo con otros estudios previos (Harrus et al. 1997b, Frank & Breitschwerdt 

1999, Neer et al. 2002, Mylonakis et al. 2004, Harrus & Waner 2010), en nuestro trabajo 

hemos hallado en los perros con EMC hiperproteinemia debida a un incremento de las γ-

globulinas. Asimismo, se ha encontrado un menor valor de albúmina plasmática y del 

cociente A/G y una mayor concentración de globulinas en estos animales que en los perros 

sanos. Tras la administración de doxiciclina, se observa que las γ-globulinas tienden a 

disminuir de forma progresiva hasta finalizar el estudio, y este descenso es mucho más 

marcado en el caso de los perros con EMC. De forma estrechamente relacionada con este 

descenso de las γ-globulinas se produce en los perros con EMC un incremento paulatino 

del cociente A/G. Se ha descrito en la bibliografía que los valores de albúmina y globulinas 

suelen normalizarse en unos 3 a 9 meses tras el inicio del tratamiento (Neer & Harrus 

2006). En este descenso de las globulinas probablemente influye el descenso de la 

producción de anticuerpos específicos frente a E. canis, pero debe tenerse en cuenta que 

intervienen además otros factores, ya que la hiperglobulinemia no se debe únicamente a los 

anticuerpos específicos frente al agente (Reardon & Pierce 1981a, Harrus et al. 1996a, 

Harrus et al. 1999, Neer & Harrus 2006). En cuanto a los perros sanos, destaca el hallazgo 

en este estudio de un descenso y de un incremento estadísticamente significativos en el 

porcentaje de albúmina plasmática y de β-globulinas, respectivamente, entre los días 30 y 

90 en los perros sanos. En el caso de las β-globulinas, la concentración también aumenta 

en este período, por lo que probablemente el descenso del porcentaje de albúmina se deba 

realmente a un aumento de esta fracción de globulinas. A su vez, en el aumento de la 

fracción de las β-globulinas puede influir el incremento que se produce en la subpoblación 

de linfocitos B en los perros sanos del estudio, hecho que será discutido más adelante.  

 
Algunas de las subpoblaciones linfocitarias estudiadas han sufrido modificaciones 

a lo largo del tiempo que ha durado el estudio, bien en el grupo de perros sanos, bien en el 

grupo de perros con EMC o bien en ambos. Se han observado cambios estadísticamente 

significativos en el porcentaje de linfocitos T (CD3+) en los diferentes controles 

realizados, destacando el descenso que se produce entre los días 0 y 30 del estudio tanto en 

los perros sanos como en los perros con EMC. De forma global, se puede observar una 

disminución progresiva en esta población linfocitaria tras el inicio del tratamiento con 

doxiciclina. Este descenso, sobre todo en el valor absoluto, se produce de manera más 

marcada en los perros con EMC, que partían de valores significativamente superiores a los 

de los perros sanos. El hecho de que se produzca el mismo efecto en todos los perros a los 

que se les administró doxiciclina, sean sanos o con infección por E. canis, sugiere que el 

descenso de esta población de linfocitos T se debe a un efecto directo del fármaco sobre 



Discusión 

 

284 

esta población celular. Estos hallazgos corroboran lo descrito previamente por otros 

autores que establecían que la oxitetraciclina, la minociclina y la doxiciclina son capaces 

de inhibir la proliferación de células T (Van den Bogert & Kroon 1982, Kloppenburg et al. 

1995b) o, incluso, de inducir su eliminación mediante la interacción Fas/Fas ligando (Liu 

et al. 1999). Nuestros estudios no permiten determinar el mecanismo por el que se produce 

este descenso en la población de linfocitos T sanguíneos, pero ofrecen una confirmación in 

vivo del efecto de la doxiciclina en un modelo animal en el que la faramacocinética es 

similar a la descrita en el hombre.  

 

En el caso del recuento absoluto de los linfocitos Th (CD3+CD4+) en sangre 

periférica, su comportamiento es similar en ambas poblaciones caninas estudiadas, con un 

leve incremento entre el día 0 y el 30 y un descenso progresivo posterior hasta finalizar el 

estudio. No obstante, debe tenerse en cuenta que ni el valor porcentual ni el valor absoluto 

de estas células han mostrado cambios que sean estadísticamente significativos. Como se 

describió en la revisión bibliográfica de esta tesis doctoral, en general, en la respuesta 

inmunitaria protectora desarrollada en el curso de la infección por Ehrlichia spp. y otras 

bacterias de la familia Anaplasmataceae parecen jugar un papel dominante las células T 

CD4+ productoras de citocinas de tipo 1, que conducen al desarrollo de una inmunidad de 

base celular. Por este motivo, se podría pensar que el hecho de que la doxiciclina induzca 

un descenso de la población de linfocitos T (CD3+) podría ir en detrimento de la 

eliminación de este agente patógeno. Sin embargo, aunque sea de una forma discreta, se 

observa que dentro de la población de células T, los linfocitos Th aumentan en el primer 

mes de tratamiento. Además, es importante recalcar que en nuestro estudio no se ha 

establecido el tipo concreto de linfocitos Th, sino que se ha medido la cantidad de 

linfocitos T que expresan CD4 en su superficie. Esto hace que no sea posible descartar ni 

confirmar con nuestros resultados que la doxiciclina sea capaz de inducir una proliferación 

selectiva de los linfocitos Th1, hecho que favorecería la eliminación de E. canis del 

organismo. No se ha hallado en la bibliografía ningún estudio que haya evaluado el efecto 

de la doxiciclina ni otras tetraciclinas sobre las subpoblaciones de linfocitos Th. 

 

Como se discutió previamente, los perros con EMC muestran mayores porcentajes 

y valores absolutos de linfocitos Tc (CD8+) que los perros sanos. Tras la administración 

de doxiciclina y la realización de los controles pertinentes, el estudio estadístico de los 

datos ha mostrado que esta variable se comporta a lo largo del tiempo de forma similar en 

el grupo de perros con EMC y en el grupo de perros sanos, sin hallarse, además, cambios 

en el tiempo en el valor porcentual ni en el valor absoluto. Sin embargo, si se observan las 

tablas 82A y 82B y el gráfico 36 del apartado de resultados de esta tesis, se puede 

comprobar que en los perros sanos hay una tendencia a mantenerse constante estos valores 

de linfocitos Tc, mientras que en los perros con EMC, esta población sufre un descenso 



Discusión 

 

285 

progresivo, aunque no llega a ser estadísticamente significativo. Debido a que en los 

perros sanos a los que se les administró doxiciclina los cambios en esta población celular 

son casi inexistentes, podría deducirse que el descenso de los linfocitos Tc en sangre 

periférica de los perros con EMC tras el tratamiento con este fármaco se debe a su efecto 

antimicrobiano. De hecho, se ha sugerido que, aunque las células T CD8+ juegan un cierto 

papel en la protección frente a las infecciones ehrlichiales (Feng & Walker 2004, 

Thirumalapura et al. 2008, Thirumalapura et al. 2009), estas células son también 

responsables en parte de la inmunopatogenia de la enfermedad (Bitsaktsis & Winslow 

2006, Ismail et al. 2007). En este sentido, una evolución favorable post-tratamiento con la 

eliminación del agente causal podría asociarse con una modulación de la respuesta 

inmunitaria, con una ligera disminución de este tipo celular. En este sentido, cabe destacar 

el estudio de Lindeman y colaboradores publicado en 2009 en el que se evaluó el efecto de 

la administración de doxiciclina durante 2 semanas a dosis baja, media y alta a pacientes 

humanos con aneurismas aórticos abdominales avanzados. Se observó que el tratamiento 

con este fármaco resultaba en una reducción de la inflamación vascular, concretamente en 

un descenso del contenido de la pared aórtica en neutrófilos y linfocitos Tc. A este efecto 

se añadía un descenso en la concentración de IL-6 e IL-8, entre otros mediadores 

proteicos, así como a un descenso en los niveles de MMP-9 (Lindeman et al. 2009). 

 

De forma estrechamente relacionada con lo descrito hasta ahora, no se han hallado 

diferencias estadísticamente significativas en el comportamiento del cociente CD4/CD8 

entre los perros sanos y los perros con EMC del estudio, ni tampoco se han encontrado 

cambios estadísticamente significativos a lo largo del tiempo para esta variable. Sin 

embargo, en los perros con EMC, tras la administración de doxiciclina se observa una 

tendencia al alza en este cociente, lo que estaría relacionado principalmente con el 

descenso de la subpoblación de linfocitos Tc en estos animales. De hecho, se ha descrito 

en la bibliografía la existencia de una inversión del índice CD4/CD8 en perros con 

infección por E. canis debida a un descenso de los linfocitos Th (CD4+) y a un incremento 

de los linfocitos Tc (CD8+) (Frank & Breitschwerdt 1999, Heeb et al. 2003, Lorente et al. 

2008).  

 

Durante mucho tiempo se había asumido que los anticuerpos y los linfocitos B 

carecían de un papel protector en la infección por Ehrlichia spp. y, sin embargo, cada vez 

más autores consideran que es necesario que las defensas que se pongan en marcha en 

estas infecciones sean una combinación de respuestas celulares y humorales (Kaylor et al. 

1991, Messick & Rikihisa 1994, Lee & Rikihisa 1997, Sun et al. 1997, Winslow et al. 

2000, Feng & Walker 2004, Yager et al. 2005, Bitsaktsis et al. 2007). En este trabajo se ha 

observado que, tras la administración de doxiciclina a los perros con EMC, se produce un 

incremento progresivo del valor absoluto de estas células en sangre periférica desde el día 



Discusión 

 

286 

0 hasta el día 90, siendo más marcado este incremento durante el primer mes post-

tratamiento, para posteriormente disminuir a los valores iniciales el día 180. Este aumento 

inicial de los linfocitos B en perros con EMC podría encontrarse relacionado con la 

eficacia terapeútica de la doxiciclina en la lucha frente a esta infección, lo que podría 

asociarse con una liberación masiva de antígenos ehrlichiales y la consiguiente 

proliferación de clones linfocitarios específicos. 

 

En cuanto a los perros sanos, se produce un incremento marcado de esta población 

linfocitaria en sangre periférica entre los días 0 y 30 del estudio. El incremento inicial de 

los linfocitos B podría relacionarse, a su vez, con el aumento de las β-globulinas 

plasmáticas en los perros sanos entre los días 30 y 90 del estudio, ya que en esta fracción 

proteica pueden incluirse algunos subtipos de inmunoglobulinas. El hecho de que los 

linfocitos B se vean afectados tras la administración de doxiciclina no sólo en los perros 

con EMC, sino también en los perros sanos, conduce a pensar que la doxiciclina ejerce un 

efecto directo sobre esta población, estimulando su proliferación. No se han hallado en la 

bibliografía estudios previos del efecto de este fármaco sobre los linfocitos B in vivo en la 

especie canina. En 1982, Van den Bogert y Kroon describieron un efecto inhibidor de la 

oxitetraciclina sobre la proliferación de linfocitos T en ratas, no hallando efecto alguno 

sobre los linfocitos B. Otros estudios han mostrado que la doxiciclina es capaz de inhibir 

la síntesis de inmunoglobulinas y el cambio de clase en las células B de ratón in vitro 

(Kuzin et al. 2001). Se hace necesario llevar a cabo nuevos estudios sobre el efecto de las 

tetraciclinas en los linfocitos B en la especie canina, tanto in vitro como in vivo, para tratar 

de esclarecer el efecto de estas sustancias sobre esta población celular.  

 

Por otra parte, se han encontrado cambios estadísticamente significativos en la 

expresión de CMH de clase II en la superficie linfocitaria de los perros de nuestro estudio 

a lo largo del tiempo, produciéndose una disminución del porcentaje de linfocitos CMHII+ 

desde el día 0 hasta el día 180 tanto en los perros con EMC como en los perros sanos tras 

la administración de doxiciclina. Además, aunque no se han encontrado cambios 

estadísticamente significativos, el valor absoluto de estos linfocitos también disminuye 

progresivamente. Estos resultados sugieren una influencia directa de la doxiciclina sobre 

la expresión de estas moléculas por parte de los linfocitos sanguíneos. En este sentido, 

cabe destacar la descripción por parte de Nikodemova y colaboradores en 2007 de un 

efecto inhibidor de la minociclina de la expresión de CMHII sobre la superficie de la 

microglia del sistema nervioso central en encefalomielitis alérgica experimental (EAE) en 

ratas, un modelo animal de esclerosis múltiple. La administración de minociclina 

disminuye significativamente la gravedad del curso clínico de la  EAE y se ha sugerido 

que este efecto puede estar mediado, al menos en parte, por la inhibición de la minociclina 

de la expresión de CMHII en la microglia (Nikodemova et al. 2007). El hecho de que la 



Discusión 

 

287 

minociclina, una tetraciclina estrechamente relacionada con la doxiciclina, sea capaz de 

ejercer este efecto sobre células inmunitarias del sistema nervioso central, unido a la 

observación en este trabajo de un descenso del porcentaje de linfocitos que expresan 

CMHII en su superficie tras la administración de doxiciclina, apuntan a un posible efecto 

de esta familia de fármacos sobre las moléculas del complejo mayor de 

histocompatibilidad. 

 

Entre los linfocitos CD3-CD21- se incluyen las células NK aunque, como se 

comentó previamente, pueden estar incluidos también restos celulares que no sean 

realmente linfocitos. Aunque no se han hallado cambios estadísticamente significativos en 

el tiempo para los valores porcentual y absoluto en esta población de células no T no B, se 

observa una tendencia a incrementarse desde el día 0 al día 30 en ambos grupos de perros. 

Parece, por tanto, que la doxiciclina es capaz de ejercer un cierto efecto estimulante de la 

proliferación de estas células en sangre periférica en los primeros días tras su 

administración, lo que podría ser beneficioso en la lucha del hospedador frente a E. canis, 

ya que estas células NK son productoras de diferentes citocinas, entre ellas IFN-γ 

(Schroder et al. 2004, Abbas et al. 2008d, Chen & Liu 2009), que está implicado en la 

respuesta protectora en las infecciones ehrlichiales (Feng et al. 1994, Akkoyunlu & Fikrig 

2000, Waner et al. 2001, Martin et al. 2001, Bitsaktsis et al. 2004). Además, estos 

linfocitos son importantes reguladores de las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas 

(Lunemann et al. 2009), por lo que su actuación en las infecciones ehrlichiales podría 

contribuir a la resolución de las alteraciones del sistema inmunitario producidas como 

consecuencia de la propia infección. 

 

A pesar de la descripción en la bibliografía de un efecto inhibidor de la síntesis de 

las citocinas TNF-α (Kloppenburg et al. 1995b, Chung et al. 2008), IFN-γ (Kloppenburg et 

al. 1995b, Chung et al. 2008), IL-6 (Zanjani et al. 2006) e IL-10 (Chung et al. 2008), entre 

otras, por parte de las tetraciclinas, no hemos observado este efecto en los perros sanos ni 

el los perros con EMC a los que se les administró doxiciclina. No se han encontrado 

cambios estadísticamente significativos de la concentración de estas citocinas a lo largo 

del tiempo del estudio, salvo por un marcado incremento de la concentración plasmática 

de TNF-α el día 30, para disminuir bruscamente a los valores iniciales el día 90, 

únicamente en los perros sanos. Además, y aunque de un modo no significativo 

estadísticamente, se ha observado que las demás citocinas evaluadas (IFN-γ, IL-6 e IL-10) 

también tienden a aumentar en los perros sanos durante el primer mes del estudio. Este 

incremento podría deberse a un efecto de la doxiciclina no descrito, si bien no se pueden 

descartar otros factores ambientales que hayan afectado a la síntesis de citocinas, ya que 

los cambios más marcados, sobre todo en el caso de la evolución de la concentración 

plasmática de TNF-α, se han producido en el grupo de perros sanos de raza Beagle que 



Discusión 

 

288 

convivían en el animalario del HCVC, no observándose en cambio, en los perros sanos de 

otras razas y otros hábitats. Tampoco puede descartarse que la doxiciclina produzca un 

incremento del TNF-α únicamente en los perros de raza Beagle por sus características 

inmunitarias. 

 

Por otra parte, debe recordarse que las citocinas actúan principalmente de forma 

local, por lo que el hecho de que no se haya observado un descenso en sus concentraciones 

plasmáticas tras la administración de doxiciclina no permite descartar que se haya 

producido un efecto de este fármaco en la síntesis de estos mediadores que no se haya 

reflejado en sus niveles sanguíneos.  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

289 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7. CONCLUSIONES 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

290 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Conclusiones 

 

291 

 

 

 

A partir del análisis y discusión de los resultados obtenidos y atendiendo a los 

objetivos planteados al inicio de este trabajo de investigación, se han obtenido las 

siguientes conclusiones: 

 

1ª. Quedan estimados como valores de referencia del inmunofenotipo para la 

población canina sana, con un intervalo de confianza del 95%:  

• con respecto al total de linfocitos sanguíneos, unos porcentajes medios de  

89,01 ± 1,55% para los linfocitos que expresan CMH de clase II en su 

superficie, de 65,69 ± 1,79% para los linfocitos T, de 37,91 ± 1,43% para los 

linfocitos Th, de 19,75 ± 2,11% para los linfocitos Tc, de 18,41 ± 2,07% para 

los linfocitos B y de 15,15 ± 1,45% para los linfocitos no T/no B. 

• unos recuentos medios por microlitro de sangre periférica de 2538,80 ± 288,25 

para los linfocitos que expresan CMH de clase II en su superficie, de 1869,25 ± 

163,28 para los linfocitos T, de 1080,14 ± 116,72 para los linfocitos Th, de 

506,19 ± 52,28 para los linfocitos Tc, de 527,57 ± 95,02 para los linfocitos B y 

de 417,55 ± 49,85 para los linfocitos no T/no B. 

• un valor medio del cociente de linfocitos sanguíneos Th/Tc (CD4+/CD8+) de 

2,09 ± 0,28. 

 

2ª Las concentraciones plasmáticas de las citocinas IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α en 

la población canina sana presentan unos valores medios de 47,85 pg/ml, 47,08 pg/ml, 0,55 

pg/ml y 13,2 pg/ml, respectivamente. Las importantes desviaciones estadísticas 

encontradas, unidas a la existencia de valores nulos en algunos casos, confirman la elevada 

variabilidad de dichas concentraciones en perros sanos. 

 

3ª. En la población canina sana existen variaciones en el inmunofenotipo en 

función de la edad del animal, comprobándose descensos significativos a partir del primer 

año en los valores absolutos de linfocitos T, linfocitos Th, linfocitos B y linfocitos que 

expresan CMHII en su superficie, así como en el valor porcentual de linfocitos Th y en el 

cociente CD4/CD8. Por el contrario, el porcentaje de linfocitos Tc aumenta a partir del 

primer año de vida.  

 

4ª. En la población canina sana estudiada existen variaciones en el inmunofenotipo 

y en la concentración plasmática de algunas citocinas en función de la raza, destacando un 

mayor porcentaje de linfocitos T, un mayor valor porcentual y absoluto de linfocitos Tc, 

un menor porcentaje de linfocitos B, un menor cociente CD4/CD8 y una menor 



Conclusiones 

 

292 

concentración plasmática de IL-6 en los perros de raza Pastor Alemán que en los perros de 

raza Beagle, si bien la influencia de otras variables, como la edad, el hábitat, la 

alimentación o la aptitud, sobre estos resultados no puede descartarse totalmente. 

 

5ª. En el curso de la ehrlichiosis monocítica canina se observan cambios en el 

inmunofenotipo en comparación con los animales sanos, destacando la existencia en los 

perros con infección por Ehrlichia canis de un mayor valor relativo de linfocitos T y 

mayores valores relativo y absoluto de linfocitos Tc y, en cambio, un menor valor relativo 

de linfocitos Th. Del mismo modo, los valores porcentual y absoluto de linfocitos Tc son 

superiores y el valor porcentual de linfocitos Th es inferior en los perros con ehrlichiosis 

en comparación con los perros afectados de patologías gastrointestinales, mucocutáneas, 

oncológicas y traumatológicas. Además, los perros con dichas patologías presentan 

menores recuentos absolutos de linfocitos T y de linfocitos que expresan CMH de clase II 

en su superficie que los perros con ehrlichiosis. Por otro lado, los perros afectados de 

patologías oncológicas presentan menores recuentos absolutos de linfocitos Th y B que los 

perros sanos. 

 

6ª. Los perros con ehrlichiosis monocítica canina en una fase clínica (fase aguda o 

fase crónica de la enfermedad) presentan mayores alteraciones hematológicas y del 

proteinograma que los perros con ehrlichiosis monocítica canina que se encuentran en la 

fase subclínica. En este sentido, destacan la existencia de un menor recuento eritrocitario, 

valor hematocrito, concentración de hemoglobina, recuento porcentual y absoluto de 

eosinófilos, concentración plasmática de albúmina y de α1- y α2-globulinas y cociente 

Albúmina/Globulinas y, por el contrario, una mayor concentración de globulinas totales y 

de γ-globulinas en la ehrlichiosis sintomática que en la ehrlichiosis asintomática. Sin 

embargo, las diferencias observadas en el inmunofenotipo y en la concentración 

plasmática de las citocinas estudiadas no han alcanzado el grado de significación 

estadística en función de la fase de la enfermedad. 

 

 

7ª. Tras la administración de doxiciclina, tanto a perros sanos como a perros con 

ehrlichiosis monocítica, a una dosis de 10 miligramos por kilogramo de peso cada 24 

horas durante 28 días por vía oral se produce una serie de modificaciones, similares para 

ambos grupos, en varios parámetros hematológicos y bioquímicos, en algunas poblaciones 

linfocitarias y en la concentración plasmática de citocinas, lo que sugiere un efecto del 

fármaco en la especie canina independiente de sus efectos antimicrobianos. En concreto, 

se comprueba en ambas poblaciones la existencia de un incremento de los valores de 

H.C.M. y C.H.C.M., recuento plaquetar, valor porcentual de neutrófilos, concentración 

plasmática de α2-globulinas y valor absoluto de linfocitos B. Además, tras la 



Conclusiones 

 

293 

administración del fármaco se induce un descenso en el valor de la creatinina plasmática, 

en el porcentaje de linfocitos sanguíneos y en los valores relativos de linfocitos T y de 

aquellos que expresan CMH de clase II en su superficie. 

 

8ª. El efecto antimicrobiano de la doxiciclina en el tratamiento de la ehrlichiosis 

monocítica canina a dosis de 10 miligramos por kilogramo de peso cada 24 horas durante 

28 días por vía oral conduce a una normalización de los parámetros biopatológicos 

alterados, confirmándose dentro de los 6 primeros meses tras el inicio del tratamiento un 

incremento del recuento eritrocitario y de concentración de hemoglobina, un descenso del 

recuento relativo y absoluto de basófilos sanguíneos y un incremento del cociente 

Albúmina/Globulinas. Estos efectos no se presentan en los perros sanos tratados con 

doxiciclina. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

294 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

295 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8. RESUMEN 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

296 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Resumen 

 

297 

 

 

 

La ehrlichiosis monocítica canina (EMC) es una patología causada por la bacteria 

Ehrlichia canis, cuyo vector es la garrapata Rhipicephalus sanguineus. A pesar de que la 

respuesta inmunitaria desarrollada por el hospedador en el curso de la infección parece 

influir de manera decisiva en el cuadro clínico y en las alteraciones laboratoriales y 

anatomopatológicas que se presentan, los conocimientos existentes por el momento sobre 

la inmunopatogenia de la enfermedad son escasos. Este hecho condujo, al inicio de este 

trabajo de investigación, a tratar de evaluar el inmunofenotipo y el patrón de secreción de 

citocinas en perros con infección natural por E. canis.  

 

Con el fin de evaluar las posibles alteraciones existentes en los perros afectados por 

esta patología, en primer lugar fue necesario caracterizar el inmunofenotipo mediante 

citometría de flujo (considerando las poblaciones linfocitarias T, Th, Tc, B, noT/noB y 

aquellas que expresan CMH de clase II en su superficie) y el patrón de secreción de 

citocinas (IFN-γ, IL-6, IL-10 y TNF-α) mediante ELISA en 47 perros sanos de distintas 

edades, sexos y razas, lo que nos permitió disponer de nuestros propios valores de 

referencia. El estudio de estos parámetros directamente relacionados con el sistema 

inmunitario canino mostró que ciertas variables fisiológicas, como la edad y la raza del 

animal, influyen sobre dichos parámetros. Entre los cambios observados cabe destacar la 

existencia de un descenso estadísticamente significativo para un nivel de confianza del 

95% en el número total de linfocitos sanguíneos y en los recuentos absolutos de linfocitos 

T, Th, B y linfocitos que expresan CMH de clase II en su superficie, así como una 

disminución del porcentaje de linfocitos Th y del cociente CD4/CD8 con la edad del perro. 

Por el contrario, el porcentaje de linfocitos Tc tiende a aumentar con la edad en la especie 

canina.   

 

 Una vez establecidos los valores de referencia para estos parámetros en la especie 

canina, nos propusimos evaluar las posibles alteraciones existentes en los perros con 

infección natural por E. canis (en concreto en 37 animales) y en perros con otras patologías 

(en 83 animales), comprobándose que en los perros con EMC se produce un incremento 

significativo para un nivel de confianza del 95% con respecto a los valores medios de los 

perros sanos en los porcentajes de linfocitos T y Tc y en el valor absoluto de linfocitos Tc, 

siendo menor, en cambio, el porcentaje de linfocitos Th. Además de estos cambios en el 

inmunofenotipo, se confirmó que los perros con EMC presentan menores valores de 

hematocrito, concentración de hemoglobina, H.C.M., C.H.C.M. y recuento plaquetario que 

los perros sanos, así como mayores concentraciones plasmáticas de proteínas totales, 

menores concentraciones de albúmina y mayores de globulinas (principalmente β- y γ-



Resumen 

 

298 

globulinas) y menores cocientes Albúmina/Globulinas. Por otra parte, estas alteraciones de 

la analítica sanguínea básica fueron más marcadas en los perros con EMC en fase clínica 

(sintomáticos) que en aquellos que se encontraban en la fase subclínica (asintomáticos). 

Sin embargo, las diferencias observadas en los valores del inmunofenotipo y de 

concentración plasmática de citocinas entre los animales en fase clínica y los animales en 

fase subclínica no alcanzaron valores estadísticamente significativos. 

 

 El tratamiento de elección de la EMC es doxiciclina a dosis de 10 miligramos por 

kilogramo de peso cada 24 horas durante 28 días. La doxiciclina es un miembro de la 

familia de las tetraciclinas y su uso en el tratamiento de ésta y otras enfermedades 

infecciosas se basa en sus propiedades antimicrobianas. No obstante, parece que esta 

sustancia puede ejercer otra serie de efectos, entre los que destacan un efecto 

inmunomodulador y un efecto inhibidor de ciertas metaloproteinasas, por lo que su acción 

en el curso de la infección por E. canis en el perro podría deberse en realidad a dichos 

efectos sobre el sistema inmunitario, más que a sus propiedades directamente 

antimicrobianas. En esta tesis doctoral, a través de un ensayo clínico, se ha tratado de 

evaluar a corto y medio plazo (mediante controles los días 0, 30, 90 y 180) los cambios que 

se producen en una serie de parámetros biopatológicos (hematología, bioquímica 

sanguínea básica, proteinograma, inmunofenotipo y concentración de citocinas) tras el 

tratamiento con doxiciclina, tanto en perros con infección natural por E. canis (n=20), 

como en animales sanos (n=12) a los que se administró el fármaco siguiendo el mismo 

protocolo. En ambos grupos, perros sanos y perros con EMC, se observó un incremento de 

los valores de H.C.M. y C.H.C.M., recuento plaquetario, valor porcentual de neutrófilos, 

α2-globulinas plasmáticas y recuento de linfocitos B sanguíneos y un descenso en el valor 

de creatinina plasmática y en los valores porcentuales de linfocitos totales y, en concreto, 

de los linfocitos T y de aquellos que expresan CMH de clase II en su superficie. Estos 

resultados permiten sugerir que estos efectos observados en ambas poblaciones caninas son 

mediados por propiedades no antimicrobianas de la doxiciclina, relacionados con su efecto 

sobre las poblaciones celulares sanguíneas. En cambio, otra serie de modificaciones de 

varios parámetros observadas en este estudio sólo se han producido en los perros con 

infección por E. canis, lo que sugiere un efecto derivado de forma directa de la actividad 

antimicrobiana del fármaco. Entre estos cambios destaca el aumento del recuento 

eritrocitario y de la concentración de hemoglobina, el descenso de los valores relativo y 

absoluto de basófilos y el aumento del cociente Albúmina/Globulinas, detectados 

únicamente tras el tratamiento en perros con EMC.  

 

 

 

 



 

299 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

9. SUMMARY 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

300 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



Summary 

 

301 

 

 

 

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by Ehrlichia 

canis, which is transmitted by the tick Rhipicephalus sanguineus. Although the immune 

response developed by the host during the infection appears to influence the clinical signs 

and laboratory and pathological findings, the immunopathogenesis of the disease remains 

poorly understood. In the present study, the immunophenotype and cytokine secretion 

pattern in blood samples of dogs naturally infected by E. canis are assessed. 

 

In order to evaluate the potential alterations in dogs affected by this disease, first of 

all it was necessary to characterize the immunophenotype by the use of flow cytometry 

(studying the lymphocyte subsets T, Th, Tc, B, CD3-CD21- and the lymphocyte 

population that expresses MHC class II) and the cytokine secretion pattern (IFN-γ, IL-6, 

IL-10 and TNF-α) using ELISA tests in 47 healthy dogs of different age, sex and breed. 

These data allowed us to have our own reference ranges. Some physiological variables, 

like the age and breed, influence on these parameters. An age-related decline statistically 

significant (p<0,05) in absolute numbers of lymphocythes, T-cells, Th-cells, B-cells and 

lymphocythes that express MHC class II  and in the percentage of Th cells and the ratio 

CD4/CD8 has been found, while the percentage of Tc increase with the age. 

 

The knowledge of physiological values for normal canine blood lymphocytes and 

plasmatic concentration of IFN-γ, IL-6, IL-10 and TNF-α enabled to assess the potential 

alterations developed in dogs naturally infected by E. canis (in 37 animals) and in dogs 

with other diseases (in 83 animals). The dogs with CME showed an increase in relative 

values of T cells and Tc cells, and in absolute number of Tc cells, while the percentage of 

Th cells decreased. In addition to these changes in the immunophenotype, dogs with CME 

showed lower values of PCV, hemoglobin concentration, mean corpuscular hemoglobin, 

mean corpuscular hemoglobin concentration, platelet count, albumin concentration and 

ratio Albumin/Globulins than healthy dogs. The values of plasmatic protein concentrations 

and globulins (β- and γ-globulins) were higher in dogs with ehrlichiosis than in healthy 

dogs. On the other hand, these alterations of the hematology and blood biochemistry were 

higher in dogs with CME in a clinical phase (symptomatic dogs) than in animals in the 

subclinical phase of the disease (asymptomatic dogs). However, statistically significant 

differences between symptomatic and asymptomatic dogs were not detected when 

evaluating lymphocyte subsets and cytokine concentrations.  

 

Treatment of choice of CME consists of doxycycline at a dosage regimen of 10 

mg/kg daily for 28 days. Doxycycline is a member of the tetracyclines family and it is used 



Summary 

 

302 

in the therapy of this and other infectious diseases because of its antimicrobial properties. 

However, it is suggested that this drug can exert another kind of effects, like an inhibition 

of some metalloproteinases and an immunomodulating effect. The effectiveness of the 

doxycycline in the treatment of E. canis infection may be due to these effects in the host 

immune system, and not only to its antimicrobial properties. In this study it has been tried 

to assess in short and medium term (days 0, 30, 90 and 180) the changes developed in 

some parameters of the hematology, biochemistry, protein concentrations, 

immunophenotype and cytokine concentrations after treatment with doxycycline in dogs 

with naturally occurring CME (20 dogs) and in a group of healthy animals (12 dogs) that 

received the same drug regimen. Both canine populations showed an increase in mean 

corpuscular hemoglobin and mean corpuscular hemoglobin concentration, platelet count, 

neutrophil percentage, α2-globulins plasmatic concentration and B cells absolute number. 

A decrease in creatinine value and in the percentages of total lymphocytes, T cells and 

those lymphocytes that express MHC class II was also detected in both groups. These data 

suggest that the effects described in the two canine populations of this clinical assay are 

due to non antimicrobial properties of doxycycline that are closely related with its effects 

on blood cellular populations. On the other hand, there were other changes in some 

parameters that only were present in E. canis infected dogs. It is suggested that these 

modifications can be related with the antimicrobial properties of the doxycycline. In this 

sense, an increase in erythrocyte count, hemoglobin concentration and albumin/globulins 

ratio and a decline in basophils relative and absolute numbers were detected after therapy 

in dogs with CME.  

 

 

 

 

 

 

 

 



 

303 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10. BIBLIOGRAFÍA  
 

 

 

 
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

304 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



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	Dedicatoria
	AGRADECIMIENTOS
	ABREVIATURAS
	ÍNDICE
	1. INTRODUCCIÓN
	2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
	2.1. LA RESPUESTA INMUNITARIA EN LA ESPECIE CANINA
	2.2. CITOMETRÍA DE FLUJO
	2.3. EHRLICHIOSIS CANINA
	2.4. LA DOXICICLINA

	3. OBJETIVOS
	4. MATERIALES Y MÉTODOS
	4.1. PLAN DE TRABAJO
	4.2. ANIMALES
	4.3. PROTOCOLO DIAGNÓSTICO Y CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES
	4.4. ENSAYO CLÍNICO: ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA
	4.5. TÉCNICAS LABORATORIALES EMPLEADAS
	4.6. ESTUDIO ESTADÍSTICO

	5. RESULTADOS
	5.1. CLASIFICACIÓN DE LOS ANIMALES
	5.2. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS
	5.3. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS CON EMC
	5.4. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SIN EMC Y CON DIFERENTES PATOLOGÍAS
	5.5. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS ENTRE LAS POBLACIONES DE PERROS SANOS, CON EMC Y CON OTRAS PATOLOGÍAS
	5.6. ENSAYO CLÍNICO: EVOLUCIÓN DE LAS VARIABLES ANALIZADAS A LO LARGO DEL TIEMPO TRAS LA ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA EN PERROS SANOS Y EN PERROS CON EMC

	6. DISCUSIÓN
	6.1. CARACTERIZACIÓN DE LA POBLACIÓN DE PERROS SANOS
	6.2. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS ENTRE LAS POBLACIONES DE PERROS SANOS, CON EMC YCON OTRAS PATOLOGÍAS
	6.3. ESTUDIO COMPARATIVO DE LAS VARIABLES ANALIZADAS ENTRE LOS PERROS CON EMC EN FASE SUBCLÍNICA Y LOS PERROS CON EMC EN FASE CLÍNICA
	6.4. ENSAYO CLÍNICO: EVOLUCIÓN DE LAS VARIABLES ANALIZADAS A LO LARGO DEL TIEMPO TRAS LA ADMINISTRACIÓN DE DOXICICLINA EN PERROS SANOS Y ENPERROS CON EMC

	7. CONCLUSIONES
	8. RESUMEN
	9. SUMMARY
	10. BIBLIOGRAFÍA