%0 Thesis
%A SALGADO CRESPO, IRENE
%T DEVELOPMENT OF A LENTIVIRAL TRANSDUCTION TOOL FOR THE STUDY OF miR-28 THERAPEUTIC POTENTIAL IN DIFFUSE LARGE B CELL LYMPHOMA
%D 2022
%U https://hdl.handle.net/20.500.14352/92130
%X - FundamentalsR-CHOP is the standard therapeutic regimen for aggressive B-cell lymphomas, whichinclude DLBCL. However, aside from being highly toxic, a fraction of patients -about 40%with DLBCL- are refractory or relapse after treatment with this scheme, making thedevelopment of alternative therapies a necessity. Potential approaches include theadministration of tumor-suppressor miRNAs, such as miR-28, in combination with targetedtherapies,among which is the BTK inhibitor ibrutinib. As the study of miR-28-ibrutinibtherapeutic suitability involves preclinical testing in PDX models, we sought to develop anefficient PDX miR-28 transduction tool.- Material and methodspCDH plasmid was modified to encode for the pre-miR-28 sequence. High titerlentiviral supernatants were used to transduce the MD901 and SUDHL4 ABC-DLBCL celllines as well as the U2932 GC-DLBCL cell line in the presence or absence of ibrutinib tosubsequently perform miR-28 antitumoral and miR-28-ibrutinib synergy assays.- ResultsThe pCDH plasmid allows the generation of high titer lentiviral supernatants whichefficiently transduce DLBCL cell lines. However, pCDH-miR-28 reexpression does notreproduce previous MD901 miR-28-ibrutib synergy results from the laboratory obtained afterinducible lentiviral transduction of miR-28, as pCDH-transduced miR-28 reexpression onlyslightly potentiates ibrutinib effect in preventing MD901 cell growth and does not exert anyeffect of synergy with ibrutinib in SUDLH4 and U2932 cell growth impairment.5- ConclusionsResults from this work discard pCDH as a suitable vector for miR-28 reexpression inDLBCL therapeutic assays and raise the need to develop new strategies for this purpose.Keywords: B cell lymphoma, chemotherapy, ibrutinib, microRNAs, plasmids6RESUMEN- FundamentosR-CHOP es el régimen terapéutico estándar de los linfomas B agresivos, incluyendoDLBCL. Sin embargo, además de acarrear elevada toxicidad, una fracción de pacientes -el40% en DLBCL- son refractarios o recaen tras este tratamiento, siendo necesario desarrollaralternativas terapéuticas más eficaces y seguras. Entre los potenciales candidatos destacanlos miRNAs oncosupresores, como miR-28, administrados en combinación con terapiasdirigidas, como el inhibidor de BTK ibrutinib. Dado que el estudio de la idoneidad terapéuticade ibrutinib-miR-28 implica ensayos preclínicos en modelos PDX, hemos buscado desarrollaruna herramienta de transducción eficiente de miR-28 para PDX.- Material y métodosSe introdujo la secuencia pre-miR-28 en el plásmido pCDH. Los sobrenadanteslentivirales de alto título se emplearon para transducir las líneas celulares de ABC-DLBCLMD901 y SUDHL4 y la línea de GC-DLBCL U2932 en presencia o ausencia de ibrutinib paraposteriormente realizar experimentos de actividad antitumoral y sinergia.- ResultadosEl plásmido pCDH permite la generación de sobrenadantes lentivirales de alto títuloque transducen con eficiencia líneas celulares de DLBCL. Sin embargo, los resultados desinergia con ibrutinib obtenidos previamente tras la transducción lentiviral inducible de miR-28 no se reproducen con pCDH. La reexpresión de miR-28 mediada por pCDH potencialigeramente la prevención de proliferación celular de ibrutinib en MD901, pero no sinergizacon ibrutinib en la limitación de la proliferación en SUDHL4 o U2932.7- ConclusionesEstos resultados descartan la utilización de pCDH como vector de reexpresión de miR-28 en ensayos de actividad terapéutica en DLBCL, siendo preciso desarrollar nuevasestrategias para este propósito.Palabras clave: linfomas B, quimioterapia, ibrutinib, microRNAs, plásmidos8Abbreviation list from the abstract:- R-CHOP: rituximab, cychophosphamide, doxorubicin, vincristine, prednisone- DLBCL: diffuse large B cell lymphoma- miRNAs: microRNAs- BTK: Bruton’s tyrosine kinase- PDX: patient-derived xenograftsLista de abreviaturas del resumen:- R-CHOP: rituximab, ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina, prednisona- DLBCL: linfoma B difuso de célula grande- miRNAs: microRNAs- BTK: tirosina quinasa de Bruton- PDX: xenografts derivados de pacientes
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