%0 Thesis
%A Fuertes Vázquez, Lucía
%T Producción, purificación y caracterización de la esticolisina I: estudio del papel de la fosfatidilserina en su interacción con membranas modelo.
%D 2026
%U https://hdl.handle.net/20.500.14352/141116
%X Las actinoporinas son proteínas solubles capaces de formar poros en membranas biológicas que contienen esfingomielina (SM). Entre ellas destaca la esticolisina I (Stn I), una toxina producida por Stichodactyla helianthus con potencial actividad senolítica. Dado el papel fundamental de los lípidos en el reconocimiento y la actividad de estas proteínas y el hecho de que las células senescentes tienen mayor proporción de fosfatidilserina (PS) expuesta en la monocapa externa de la membrana plasmática, el objetivo de este trabajo fue analizar la influencia de la PS en la interacción de Stn I con membranas modelo. Para ello, se produjo y purificó Stn I recombinante en Escherichia coli y se confirmó que la proteína conservaba su conformación nativa mediante su caracterización estructural. Posteriormente, se estudió su interacción con vesículas de DOPC:SM:DOPS mediante calorimetría de titulación isotérmica (ITC) y ensayos de liberación de calceína para evaluar, respectivamente, la afinidad de unión a membrana y la actividad formadora de poros. Los resultados mostraron que la incorporación de PS en las proporciones estudiadas no alteraba significativamente ninguna de estas propiedades, sugiriendo que otros factores podrían contribuir a la selectividad descrita de Stn I frente a células senescentes.
%X Actinoporins are soluble proteins capable of forming pores in biological membranes containing sphingomyelin (SM). Among them, sticholysin I (Stn I), a toxin produced by Stichodactyla helianthus, has attracted attention because of its potential senolytic activity. Given the fundamental role of lipids in the recognition and activity of these proteins and the fact that senescent cells expose a higher proportion of phosphatidylserine (PS) on the outer leaflet of their plasma membrane, the aim of this work was to investigate the influence of PS on the interaction of Stn I with model membranes. To this end, recombinant Stn I was produced and purified from Escherichia coli, and its structural characterization confirmed that the purified protein retained its native conformation. Subsequently, its interaction with DOPC:SM:DOPS lipid vesicles was studied by isothermal titration calorimetry (ITC) and calcein leakage assays to evaluate membrane-binding affinity and pore-forming activity, respectively. The results showed that the incorporation of PS at the proportions studied did not significantly affect either of these properties, suggesting that other factors may contribute to the reported selectivity of Stn I toward senescent cells.
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