2026-05-28T01:37:16Zhttps://docta.ucm.es/rest/oai/requestoai:docta.ucm.es:20.500.14352/1334732026-02-28T01:18:56Zcom_20.500.14352_14col_20.500.14352_22
Docta Complutense
advisor
Sanz Alonso, Mariano
advisor
Figuero Ruiz, Elena
author
La Rosa, Martina
2026-02-27T10:34:05Z
2026-02-27T10:34:05Z
2026-02-27
https://hdl.handle.net/20.500.14352/133473
Objetivo: El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de la infección in vitro de macrófagos humanos con Porphyromonas gingivalis W83, caracterizando tanto la interacción huésped-patógeno como los mecanismos asociados a la respuesta inmune innata frente a esta cepa virulenta. Materiales y Métodos: Se evaluó la cinética de proliferación de P. gingivalis W83 mediante la generación de una curva de crecimiento utilizando unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/mL) y densidad óptica (DO). Adicionalmente, se construyó una curva estándar para la cuantificación del ADN bacteriano mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (PCRc). Los monocitosTHP-1 se diferencian a macrófagos mediante incubación con acetato de forbol miristato (PMA)durante 48 horas, seguidas de un reposo de 24 horas, y posteriormente se polarizaron hacia el fenotipo M1 mediante estimulación con interferón gamma (IFN-γ) y lipopolisacárido (LPS). La polarización hacia M1 fue validada mediante la cuantificación de citoquinas proinflamatorias clave (interleuquina-1 beta, IL-1β; factor de necrosis tumoral alfa, TNF-α; e interleuquina-6, IL-6) utilizando la metodología Luminex®. Finalmente, los macrófagos M1 fueron infectados con P. gingivalis en fase exponencial, y se cuantificó el ADN bacteriano presente en sobrenadantes y macrófagos lisados tras una hora de infección mediante PCRc..Objective: The objective of this study was to evaluate the effects of Porphyromonas gingivalis W83 infection on human macrophages in vitro, characterizing both the host-pathogen interaction and the mechanisms associated with the innate immune response to this virulent strain. Materials and Methods: The proliferation kinetics of P. gingivalis W83 were evaluated by generating a growth curve using colony-forming units per milliliter (CFU/mL) and optical density (OD). Additionally, a standard curve for the precise quantification of bacterial DNA was constructed using quantitative polymerase chain reaction (qPCR). THP-1 monocytes were differentiated into macrophages by incubation with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) for 48 hours, followedby a 24-hour resting period, and were subsequently polarized to the M1 phenotype through stimulation with interferon-gamma (IFN-γ) and lipopolysaccharide (LPS). Polarization to M1 was validated by quantifying key proinflammatory cytokines (interleukin-1 beta, IL-1β; tumor necrosis factor-alpha, TNF-α; and interleukin-6, IL-6) using the Luminex® methodology. Finally, M1 macrophages were infected with P. gingivalis in the exponential growth phase, and bacterial DNA present in supernatants and lysed macrophages was quantified after one hour of infection using qPCR...
spa
Optimización de un modelo experimental de infección in vitro con Porphyromonas gingivalis W83 y macrófagos M1 para análisis s genómicos y transcriptómicos
doctoral thesis
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