Inmunoproteómica de ligandos virales de HLA

Abstract

Los linfocitos T CD8+ reconocen péptidos patogénicos presentados por las moléculas de HLA I en la superficie celular. La mayoría de estos péptidos son generados en el citosol por el proteasoma y transportados al retículo endoplásmico por TAP, donde se pueden unir a las moléculas de HLA I. Se han descrito complejos de TAP no funcionales que pueden generarse por mutaciones en el gen de TAP. Los pacientes con esta deficiencia de HLA I tienen una población de CD8+ reducida pero funcional y pueden permanecer asintomáticos durante largos periodos de tiempo, con solo una cierta susceptibilidad a infecciones bacterianas crónicas de las vías respiratorias. En el presente trabajo se llevó a cabo la identificación de los ligandos virales y endógenos presentados por varios antígenos HLA en células deficientes en TAP infectadas con un vaccinia recombinante y la caracterización de sus vías de procesamiento antigénico. En total se describen 334 ligandos derivados de 182 proteínas humanas, 13 ligandos de diez proteínas de vaccinia diferentes y 1 de la gp160 del VIH, presentados por seis moléculas de HLA I distintas. El repertorio peptídico endógeno identificado reveló un incremento en la longitud y unos motivos de anclaje más laxos respecto a los generados en células con TAP. Además, muchos de ellos presentan extensiones en los extremos amino y carboxilo respecto al núcleo peptídico mínimo identificado o se encuentran ubicados en el extremo carboxilo terminal de la proteína parental. La comparación entre el peptidoma independiente de TAP y el proteoma presente en varias localizaciones subcelulares sugiere que orgánulos similares a las vesículas secretorias podrían ser una fuente importante de proteínas parentales de los ligandos de HLA I independientes de TAP.Las vías de procesamiento independientes de TAP responsables de la generación del repertorio endógeno implican a distintas proteasas en función del alelo analizado: el proteasoma y SP para HLA A*02 y B*51 y proteasas lisosomales para HLA B*27, además de aminopeptidasas inhibibles por leucintiol para todos los alelos estudiados a excepción de HLA C*01. Todos los ligandos de vaccinia presentados por HLA A*02 generaron respuesta de linfocitos T CD8+ en ratones transgénicos. En células TAP competentes, el proteasoma y/o una o varias metaloendopeptidasas no identificadas intervienen en la generación de los 4 epítopos caracterizados, mientras que distintas aminopeptidasas y una carboxipeptidasa estarían también implicadas en el procesamiento de algunos de estos epítopos virales.En el presente estudio se ha identificado una elevada diversidad de ligandos independientes de TAP en todos los alelos de HLA clase I estudiados en células infectadas con vaccinia. Esta gran variedad de complejos MHC péptido viral podría ayudar a explicar por qué los pacientes deficientes en TAP no parecen particularmente susceptibles a las infecciones virales y se muestran asintomáticos durante largos períodos de sus vidas