Caracterización de las actividades de RepB y su implicación en el proceso replicativo del plásmido promiscuo pMV158

Abstract

El plásmido pMV158 es el prototipo de una amplia familia de plásmidos que emplean el mecanismo de replicación por círculo rodante (RCR) para duplicar su DNA. pMV158 es un plásmido movilizable, que determina resistencia a tetraciclina y exhibe una enorme promiscuidad, como queda demostrado por su capacidad para colonizar una gran variedad de especies bacterianas de diversos filos. Por esta razón, el estudio de sus características replicativas tiene un evidente interés tanto desde el punto de vista clínico como por el conocimiento de las bases moleculares que subyacen en este proceso. Esta promiscuidad debe estar estrechamente relacionada con las características de la proteína iniciadora de la replicación, RepB, codificada por el propio plásmido, la cual presenta una conformación hexamérica singular entre las proteínas iniciadoras de RCR de plásmidos y bacteriófagos, y que la asemeja a las proteínas Rep de virus de animales y plantas. Por todo ello, la presente tesis pretende ahondar en el conocimiento de RepB, así como en el de su papel en el proceso replicativo de pMV158. Con este fin se establecieron los siguientes objetivos: caracterización de la actividad enzimática de RepB, análisis de la interacción de RepB con el origen de replicación de doble cadena de pMV158 (dso), estudio de la posible interacción entre RepB y PcrA de Streptococcus pneumoniae, y elaboración de un modelo para el proceso replicativo de pMV158...

The plasmid pMV158 is the prototype of a vast family of plasmids replicating by the rolling-circle mechanism (RCR). PMV158 is a mobilizable plasmid that determines tetracycline resistance and exhibits an enormous promiscuity, as shown by its ability to colonize a great diversity of bacterial species from different philos. For this reason, the study of its replicative characteristics has an obvious interest from both clinical and scientific points of view, as it can contribute to unveil of the underlying molecular bases of promiscuous replication. The high promiscuity of pMV158 should be closely related to the features of the plasmid-encoded replication initiator RepB protein, which exhibits a hexameric conformation that is unique among initiator proteins of RCR plasmids and bacteriophages and rather resembles that of Rep proteins from animal and plant viruses. Therefore, this thesis aims to delve into the knowledge of RepB as well as into its role in the replicative process of pMV158. In this respect, the following objectives were established: characterization of the enzymatic activity of RepB, analysis of the interaction between RepB and the double-strand origin (dso) of pMV158, study of the hypothetical interaction between RepB and PcrA from Streptococcus pneumoniae, and development of a model for the replicative process of pMV158...