Papel de la ϒ-glutamil-cistein ligasa en modelos de daño vascular y fibrótico e implicación de miR-433 en la síntesis de glutatión

Abstract

El glutatión es un tripéptido formado por glutamil cisteinil glicina GSH cuya función principal es como agente detoxificante y regulador del tono nucleofílico. La síntesis del GSH requiere dos etapas. La primera está catalizada por la gamma glutamil cistein ligasa GCL , enzima heterodimérica compuesta por una subunidad catalítica y una reguladora. La regulación de la expresión de GCL se da tanto a nivel transcripcional como post transcripcional. La mayor parte de la regulación sobre ambas subunidades de GCL la lleva a cabo el factor de transcripción Nrf2. Los microRNAs son RNAs de cadena sencilla, 22 26 nt que fueron recientemente descubiertos como mecanismo de regulación de la expresión génica. En el caso de GCL existe muy pocas referencias sobre regulación mediada por microRNAs. El análisis de los 3 UTR de los genes humanos de GCLc y GCLm proporcionó una lista de microRNAs candidatos, entre los que se selecciono miR 433. La sobreexpresión de miR 433 reflejó una disminución significativa de ambas subunidades de GCL disminuyendo los niveles de GSH favoreciendo el aumento en la S glutationilaciónis de proteínas. Para evaluar el efecto de la propia depleción de GSH sobre los niveles de miR 433 utilizamos el inhibidor químico L BSO, que mostró una disminución significativa de miR 433, que también se observó cuando generamos estrés celular mediante otros métodos. Analizamos modelos de fibrosis renal y hepática observamos que tanto GCLc y GCLm se ven alteradas, mientras que miR 433 aumenta significativamente. El tratamiento con TGFß1 indujo una disminución de la enzima, que pudo ser revertida usando un inhibidor del microRNA. Para completar esta serie de resultados se está trabajando en la generación de un ratón GCLc delecionado de forma específica en el endotelio. Estudios preliminares con este ratón muestran, que los ratones heterocigotos haploinsuficientes para GCLc exhiben una relajación dependiente de endotelio alterada respecto a los ratones control.