Antioxidant properties and protective effects of a standardized extract of Hypericum perforatum on hydrogen peroxide-induced oxidative damage in PC12 cells
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2004
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Elsevier
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Benedí J, Arroyo R, Romero C, Martín-Aragón S, Villar AM. Antioxidant properties and protective effects of a standardized extract of Hypericum perforatum on hydrogen peroxide-induced oxidative damage in PC12 cells. Life Sci. 2004;75(10):1263-76.
Abstract
Free radical scavenging and antioxidant activities of a standardized extract of Hypericum perforatum (SHP) were examined for inhibition of lipid peroxidation, for hydroxyl radical scavenging activity and interaction with 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl stable free radical (DPPH). Concentrations between 1 and 50 microg/ml of SHP effectively inhibited lipid peroxidation of rat brain cortex mitochondria induced by Fe2+/ascorbate or NADPH system. The results showed that SHP scavenged DPPH radical in a dose-dependent manner and also presented inhibitory effects on the activity of xanthine oxidase. In contrast, hydroxyl radical scavenging occurs at high doses. The protective effect of the standardized extract against H2O2-induced oxidative damage on the pheochromocytoma cell line PC 12 was investigated by measuring cell viability via 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), lactate dehydrogenase (LDH) assays, caspase-3-enzyme activity and accumulation of reactive oxygen species [2',7'-dichlorofluorescin (DCF) assay]. Following 8-h cell exposure to H2O2 (300 microM), a marked reduction in cell survival was observed, which was significantly prevented by SHP (pre-incubated for 24 h) at 1-100 microg/ml. In a separate experiment, different concentrations of the standardized extract (0.1-100 microg/ml) also attenuated the increase in caspase-3 activity and suppressed the H2O2 -induced reactive oxygen species generation. Taken together, these results suggest that SHP shows relevant antioxidant activity both in vitro and in a cell system, by means of inhibiting free radical generation and lipid peroxidation.
Description
Se examinaron las actividades de barrido de radicales libres y antioxidantes de un extracto estandarizado de Hypericum perforatum (HP) para la inhibición de la peroxidación lipídica, para la actividad de barrido de radicales hidroxilo y la interacción con el radical libre estable 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH). Las concentraciones entre 1 y 50 microg/ml de HP inhibieron eficazmente la peroxidación lipídica de las mitocondrias de la corteza cerebral de rata inducida por el sistema Fe2+/ascorbato o NADPH. Los resultados mostraron que el HP eliminó el radical DPPH de una manera dependiente de la dosis y también presentó efectos inhibitorios sobre la actividad de la xantina oxidasa. Por el contrario, el barrido del radical hidroxilo se produce a dosis elevadas. El efecto protector del extracto estandarizado frente al daño oxidativo inducido por H2O2 en la línea celular de feocromocitoma PC12 se investigó midiendo la viabilidad celular mediante bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT), ensayos de lactato deshidrogenasa (LDH), actividad de la enzima caspasa-3 y acumulación de especies reactivas de oxígeno [ensayo de 2',7'-diclorofluorescina (DCF)]. Tras 8 h de exposición celular al H2O2 (300 microM), se observó una marcada reducción de la supervivencia celular, que se evitó significativamente con HP (preincubado durante 24 h) a 1-100 microg/ml. En otro experimento, diferentes concentraciones del extracto estandarizado (0,1-100 microg/ml) también atenuaron el aumento de la actividad de la caspasa-3 y suprimieron la generación de especies reactivas del oxígeno inducida por el H2O2. En conjunto, estos resultados sugieren que el HP muestra una actividad antioxidante relevante tanto in vitro como en un sistema celular, mediante la inhibición de la generación de radicales libres y la peroxidación lipídica.