Recombinación del VIH-1 in vitro

Abstract

Este trabajo se ha centrado en el estudio de la influencia que ejerce la recombinación en la evolución de virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), ya que se trata del principal mecanismo de variaciones este virus. En primer lugar se realizaron una serie de infecciones dobles con diferencias combinaciones de dos cepas del VIH-1, en células MT4 (línea linfocítica humana), que se mantuvieron en cultivo durante 22 días. Los ADNs procedentes de varios días a lo largo de los cultivos se analizaron mediante vrios técnicas puestas a punto previamente. Los resultados pusieron de manifiesto la influencia de varios factores como el tiempo, la multiplicidad de infección y la distancia genética sobre la proporción de recombinantes en las progenies virales obtenidas. La utilización de una PCR cuantitativa específica para la determinación de la proporción de recombinantes en los ADNs resultantes de las infecciones dobles, permitió determinar una relación inversamente proporcional entre la distancia genética entre los virus parentales y la proporción de virus recombinantes que origienan. Al mismo tiempo se observó un aumento progresivo de esta proporción a lo largo del tiempo, en dos de estas infecciones. Por otro lado, se llevó a cabo un estudio filogenético sobre una serie de clones biológicos recombinantes aislados a partir de los sobrenadantes de dos días diferentes de un cultivo. Los resultados de este estudio ponen de manifiesto las consecuencias evolutivas que introduce la recombinación en una población dada: selección de la combinación de proteínas más favorables, numerosos eventos de recombinación independientes, y selección positiva de algunos clones. La población viral obtenida tras 22 días de cultivo, se caracterizó por ser más heterogénea y disminuyó la distancia genética del conjunto. Por último, se realizó un estudio sobre la naturaleza diploide o pseudodiploide del VIH, o sobre el origen de algunas placas de infección que aparecieron a lo largo del estudio de recombinación, y que presentaban dos secuencias diferentes para un fragmento del genoma viral