Adaptación de Toxoplasma gondii durante el cultivo in vitro : efecto en rasgos fenotípicos asociados a la virulencia

Abstract

A lo largo de los años y en numerosos estudios se ha recurrido al uso de aislados y cepas de Toxoplasma gondii mantenidas en el laboratorio por largos periodos de tiempo. No obstante, existen evidencias de que dicho mantenimiento a largo plazo puede producir cambios importantes en las características fenotípicas del parásito, incluyendo la virulencia, lo que podría enmascarar los resultados obtenidos (Lindsay et al., 1991; Buxton & Innes, 1995; Dubey et al., 1999). Los mecanismos implicados en esta adaptación están poco estudiados y, por tanto, es interesante profundizar en su investigación. El objetivo general de esta tesis doctoral fue estudiar el efecto de la adaptación en el cultivo celular a corto plazo en aislados de T. gondii recientemente obtenidos, del tipo II y III atendiendo a dos aspectos clave de su biología como son las capacidades de formación de quistes y proliferativas, así como los efectos sobre la virulencia en un modelo armonizado de ratón. Para ello, los aislados utilizados procedían de: i) cerebro de fetos abortados de ovejas (tipo II-PRU - TgShSp1 y TgShSp3- genotipo ToxoDB #3 por un lado, y tipo II TgShSp2 (#1) por el otro); ii) miocardio de oveja adulta (tipo II-PRU -TgShSp16 (#3) y tipo III - TgShSp24 (#2)); y iii) miocardio de cerdo adulto tipo III - TgPigSp1 (#2). Este panel de aislados se seleccionó por su representación de los tipos II y III, en función de: (a) predominio de estos en la población europea, (b) por su perfil de virulencia determinado en estudios previos, y (c) el conocimiento del historial de mantenimiento en cultivo celular desde su aislamiento (Fernández-Escobar et al., 2020a, 2020b, 2021)...Over the years numerous studies have used Toxoplasma gondii isolates and strains maintained in the laboratory for long periods of time. However, there is evidence that such long-term maintenance can lead to significant changes in the phenotypic characteristics of the parasite, including virulence, which may mask the results obtained (Lindsay et al., 1991; Buxton & Innes, 1995; Dubey et al., 1999). The mechanisms involved in this adaptation are poorly understood, and it is therefore of interest to investigate them further.The overall aim of this doctoral thesis was to study the effect of short-term cell culture adaptation on newly obtained T. gondii isolates of type II and III, focusing on two key aspects of their biology: cyst-forming and proliferative capacities, as well as the effects on virulence in a harmonised mouse model.For this purpose, the isolates used were from: (i) aborted sheep foetal brain (type II-PRU - TgShSp1 and TgShSp3 - ToxoDB genotype #3 on the one hand, and type II - TgShSp2 (#1) on the other); (ii) adult sheep myocardium (type II-PRU - TgShSp16 (#3) and type III - TgShSp24 (#2)); and (iii) adult pig myocardium type III - TgPigSp1 (#2). This panel of isolates was selected for their representation of types II and III, based on: (a) predominance of these genotypes in the European population, (b) their virulence profile as determined in previous studies, and (c) knowledge of the history of maintenance in cell culture since isolation (Fernández-Escobar et al., 2020a, 2020b, 2021)...