Caracterización bioquímica y genética de enterocinas producidas por cepas de "Enterococcus faecium" de origen cárnico : optimización de la producción molecular de acción de la enterocina P de "Enterococcus faecium" P13

Abstract

En primer lugar, se identificaron las bacteriocinas producidas por Enterococcus faecium AA13, E. faecium G16 y E. faecium P21, tres cepas aisladas de chorizos españoles artesanos. Tras purificar a homogeneidad las bacteriocinas, se determinó su secuencia aminoacídica mediante degradación de Edman y, seguidamente, la secuencia nucleotídica de sus determinantes genéticos mediante clonación, PCR y secuenciación nucleotídica. Los resultados obtenidos indicaron que E. faecium AA13 y E. faecium G16 producen la enterocina P y que E. faecium P21 produce las enterocinas A y B. A continuación, se determinaron las condiciones óptimas para la producción de enterocina P por E. faecium P13 en un fermentador de mesa que contenía medio MRS a 32ºC y a un pH constante de 4,7; 5,0; 5,3; 5,7; 6,0; 6,2; 7,0 y 8,5. La producción máxima de enterocina P se obtuvo a pH 6,0 y representó un incremento de cuatro veces con respecto a la obtenida en un cultivo control desarrollado sin control del pH. Seguidamente, se estudió el mecanismo molecular de acción de la enterocina P en células del microorganismo sensible E, faecium T136, en liposomas derivados de éste y en liposomas sintéticos compuestos de dioleilfosfoglicerol (DOPG) y dioleilfosfocolina(DOPC) en proporción equimolar. La enterocina P ejerce una acción bactericida no lítica en este microorganismo, y, a nivel molecular, produce la disminución del ATP intracelular, el movimiento transmembrana de cationes K+ y la disiupación del potencial de membrana de la fuerza promotriz (PMF) sin afectar a su gradiente de pH. La enterocina P altera la permeabilidad de liposomas derivados del microorganismo sensible, pero no la de liposomas sintéticos con la composición mencionada. Finalmente. se evaluó la eficacia de la Ruta General de Secreción de Escherichia coli en el transporte y procesamiento de la enterocina P. Los resultados obtenidos sugieren que dicho sistema es ineficaz en la secreción de la enterocina P.