Optimización de un modelo experimental de infección in vitro con Porphyromonas gingivalis W83 y macrófagos M1 para análisis s genómicos y transcriptómicos

Abstract

Objetivo: El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de la infección in vitro de macrófagos humanos con Porphyromonas gingivalis W83, caracterizando tanto la interacción huésped-patógeno como los mecanismos asociados a la respuesta inmune innata frente a esta cepa virulenta. Materiales y Métodos: Se evaluó la cinética de proliferación de P. gingivalis W83 mediante la generación de una curva de crecimiento utilizando unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/mL) y densidad óptica (DO). Adicionalmente, se construyó una curva estándar para la cuantificación del ADN bacteriano mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (PCRc). Los monocitosTHP-1 se diferencian a macrófagos mediante incubación con acetato de forbol miristato (PMA)durante 48 horas, seguidas de un reposo de 24 horas, y posteriormente se polarizaron hacia el fenotipo M1 mediante estimulación con interferón gamma (IFN-γ) y lipopolisacárido (LPS). La polarización hacia M1 fue validada mediante la cuantificación de citoquinas proinflamatorias clave (interleuquina-1 beta, IL-1β; factor de necrosis tumoral alfa, TNF-α; e interleuquina-6, IL-6) utilizando la metodología Luminex®. Finalmente, los macrófagos M1 fueron infectados con P. gingivalis en fase exponencial, y se cuantificó el ADN bacteriano presente en sobrenadantes y macrófagos lisados tras una hora de infección mediante PCRc..

Objective: The objective of this study was to evaluate the effects of Porphyromonas gingivalis W83 infection on human macrophages in vitro, characterizing both the host-pathogen interaction and the mechanisms associated with the innate immune response to this virulent strain. Materials and Methods: The proliferation kinetics of P. gingivalis W83 were evaluated by generating a growth curve using colony-forming units per milliliter (CFU/mL) and optical density (OD). Additionally, a standard curve for the precise quantification of bacterial DNA was constructed using quantitative polymerase chain reaction (qPCR). THP-1 monocytes were differentiated into macrophages by incubation with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) for 48 hours, followedby a 24-hour resting period, and were subsequently polarized to the M1 phenotype through stimulation with interferon-gamma (IFN-γ) and lipopolysaccharide (LPS). Polarization to M1 was validated by quantifying key proinflammatory cytokines (interleukin-1 beta, IL-1β; tumor necrosis factor-alpha, TNF-α; and interleukin-6, IL-6) using the Luminex® methodology. Finally, M1 macrophages were infected with P. gingivalis in the exponential growth phase, and bacterial DNA present in supernatants and lysed macrophages was quantified after one hour of infection using qPCR...