Organización y reorganización del ADN y cromatina macronuclear durante el proceso de enquistamiento en "Colpoda inflata"

Abstract

El estudio de este proceso de diferenciación celular (enquistamiento), fue abordado a distintos niveles: 1- naturaleza del adn macronuclear vegetativo y quistico, por electroforesis convencional y electroforesis de campo pulsado. 2- cambios en el patrón de metilación durante el enquistamiento, utilizando endonucleasas de restricción y el inhibidor 5-azacitidina. 3- análisis estructural del macronucleo y cromatina por microscopia electrónica de transmisión (tem), microscopia confocal y citometria de flujo. Con los datos obtenidos, concluimos: 1-el adn macronuclear esta organizado por moléculas de tamaño subcromosomico, solo visualizables por electroforesis de campo pulsado, donde los genes ribosómicos se localizan en una banda discreta dentro del patrón electroforetico. El patrón electroforetico de colpoda inflata, es similar al de paramecium (población heterogénea y continua de moléculas de amplio rango de tamaños) y se aleja del mostrado por tetrahymena sp. Sin embargo, el tamaño promedio de las moléculas macronucleares es similar al de tetrahymena. 2- el genoma macronuclear parece presentar 5-metilcitosina y no 6-metiladenina. La desmetilacion de determinadas secuencias del adn macronuclear, supondría un mecanismo de apertura de los genes involucrados en el enquistamiento. Además, existiría una metilación selectiva de genes ribosomales macronucleares. 3- la cromatina macronuclear vegetativa es de naturaleza nucleosomal y esta constituida por numerosos cuerpos discretos de cromatina condensada. Presenta un nucleolo compuesto constituido por varias masas nucleolares, que en el enquistamiento se fusionan, originando una única masa nucleolar. También en el enquistamiento se produce una perdida de adn macronuclear en forma de cuerpo de extrusión, como un mecanismo para mantener la razón núcleo/citoplasma. Por otro lado, hemos observado fenómenos de oligotenia en la cromatina vegetativa. La cromatina macronuclear quistita esta constituida por cuerpos de estructura poligonal (hexagonal), que se componen de fibras nucleosomales y representan un estado de cromatina muy condensado. La cromatina macronuclear quística es transcripcionalmente inerte y el quiste de resistencia o estado criptobiotico es una forma genéticamente inactiva.