Estudio fenotípico y genotípico de la resistencia a quinolonas en "Haemophilus influenzae"

Abstract

Antecedentes: "Haemophilus influenzae" es un patógeno comunitario que causa infecciones agudas y crónicas, invasivas y no invasivas en el ser humano.La resistencia a diversas familias de antibióticos es un problema común en cepas clínicas españolas de "Haemophilus"; la reciente aparición de cepas resistentes a fluorquinolonas, los antibióticos más potentes conocidos frente a "Haemophilus" y otros patógenos, plantea nuevos problemas desde el punto de vista clínico, epidemiológico y científico. Objetivo: Determinar los patrones de resistencia microbiológica y/o clínica a fluorquinolonas y otros antibióticos, la distribución poblacional de las cepas resistentes y los mecanismos de resistencia de cepas clínicas de "Haemophilus influenzae" con sensibilidad disminuída a ciprofloxacina. Metodología: Estudio de laboratorio de cepas activamente estudiadas para descartar pérdida de sensibilidad a ciprofloxacina y/o ácido nalidíxico por el Laboratorio de Referencia de Haemophilus (LRH) del Centro Nacional de Microbiología en los últimos 7 años. Las cepas de origen clínico, han sido bien caracterizadas por el LRH, y proceden de diferentes hospitales colaboradores de toda la geografía española en general. El grupo de cepas de estudio comprende 34 cepas resistentes a quinolonas mas un número equivalente de controles sensibles, seleccionados según la patología y la procedencia geográfica. Métodos utilizados: (a) epidemiología molecular de todas las cepas mediante marcadores poblaciones (PFGE,); (b) fenotipos y patrones de resistencia a 12 quinolonas de diferentes generaciones mediante diluciones de los antibióticos y obtención de CMIs y análisis estadísticos; (c), amplificación de las regiones asociadas a resistencias en "gyrA, parC, gyrB y parE" de acuerdo con la literatura y datos de la secuencia completa del genoma de Haemophilus; (d) transformación genética con las secuencias modificadas; (e) secuenciación automática de genes salvajes y transformantes y comparación y alineamiento informático de los mismos; (f) búsqueda de otros mecanismos posiblemente implicados (bombas de flujo modificadas).