Variabilidad adaptativa y patogénica en "Neospora caninum"

Abstract

Neospora caninum es un protozoo parásito que infecta principalmente al perro y al ganado bovino, con estrechas semejanzas biológicas y estructurales con Toxoplasma gondii. Evidencias recientes sugieren la existencia de una marcada variación de las propiedades genéticas y biológicas entre los diferentes aislados del parásito, similar a las observadas en T. gondii. En el primer experimento de esta tesis doctoral, se ha comparado la adaptación de tres aislados de N. caninum a nuevos ambientes, cultivando al parásito en una nueva línea celular, usando un modelo experimental similar al propuesto por Travisano et al. (Science, 267:87-90, 1995). El parámetro maltusiano del fitness se determinó en cada aislado en 10 réplicas diferentes, de taquizoítos de cada uno de ellos antes y después de realizar 38 pases en la línea celular Marc-145. El valor medio y la varianza de este rasgo se comparó para cada aislado con la medida de las réplicas de los ancestros. Se comparó la variabilidad entre los tres aislados al inicio y al final del experimento. En el segundo experimento, los objetivos fueron comparar la patogenicidad, durante las fases aguda y crónica de la neosporosis, de tres aislados de N. caninum en un modelo de ratón, antes y después del paso del parásito por el cultivo celular durante aproximadamente 250 generaciones. Para ello, 15 ratones hembra BALB/c fueron inoculados con 5x106 taquizoítos de cada aislado y pase por cultivo celular o solo con PBS (nueve grupos de ratones en total). La mortalidad y los signos clínicos de enfermedad se recogieron diariamente durante todo el periodo experimental. Se sacrificaron tres ratones de cada grupo en diferentes días postinfección de los que se extrajo sangre y se procedió a la recogida de muestras de los diversos órganos diana. Las muestras de suero se alicuotaron y se guardaron a - 80ºC hasta la determinación de la IgG anti-N. caninum por IFI. Secciones múltiples de cerebro, SNC y porciones del corazón, pulmón, hígado, riñón y bazo fueron fijadas en formol al 10% y procesadas utilizando técnicas histológicas de rutina, o se guardaron a -80ºC hasta ser procesadas para la cuantificación del ADN de N. caninum mediante PCR-cuantitativa.