Caracterización inmunoquímica de la enterocina P y evaluación de su clonación, producción y expresión funcional en "Escherichia coli, Methylobacterium extorquens, Lactococcus lactis y Pichia pastoris"

Abstract

Las bacterias lácticas (BAL) son microorganismos que intervienen en la fermentación de alimentos ricos en nutrientes, lo que permite la obtención de un producto final con unas características organolépticas deseables. Además, dichas bacterias se caracterizan por la producción de metabolitos antimicrobianos, entre los que destacan las bacteriocinas. Las bacteriocinas de las BAL son péptidos que impiden el crecimiento de bacterias alterantes y patógenas de los alimentos, por lo que se ha propuesto que se utilicen como bioconservantes de los alimentos. En este contexto, la enterocina P (EntP) es una bacteriocina producida por E. faecium P13, una BAL aislada de un chorizo elaborado artesanalmente, y que muestra una potente actividad antimicrobiana frente a Listeria monocytogenes. A pesar de su innegable potencial como conservante natural de los alimentos, dicha bacteriocina está producida por una cepa de Enterococcus, un género que se ha asociado, en algunas ocasiones, a problemas de tipo sanitario. Por tanto, la selección de la EntP como bioconservante alimentario pasaría por su producción en hospedadores más seguros o en otros microorganismos de interés en la industria alimentaria. Por otro lado, la disponibilidad de métodos analíticos fiables de detección de bacteriocinas, como por ejemplo las técnicas inmunoenzimáticas, potenciaría su empleo en los alimentos. En consecuencia, en este trabajo de investigación se procedió a la realización de los siguientes objetivos: en primer lugar, la caracterización inmunoquímica de la EntP, y en segundo lugar, la evaluación de su producción en Escherichia coli, Methylobacterium extorquens, Lactococcus lactis y Pichia pastoris. Por un lado, la obtención de anticuerpos específicos frente a la EntP permitió su detección y cuantificación en diferentes tipos de sustratos, mientras que la construcción de vectores de expresión que portaban el gen estructural de la EntP, el cual se encarga de codificar a la enterocina como una prebacteriocina con un péptido señal cuyo procesado permite el transporte y secreción de la bacteriocina a través de la Ruta General de Secreción, permitió la producción de EntP en los sobrenadantes de los hospedadores seleccionados.